金黄色葡萄球菌耐药相关基因及SCCmec分型研究

摘要:目的　对郑州地区分离的金黄色葡萄球菌进行耐药性研究,了解其耐药基因携带情况,为临床抗感染治疗提供依据。方法　对2013年7月-2014年7月郑州某三甲医院分离的86株金黄色葡萄球菌,测定25种药物敏感性,应用普通PCR测定10种耐药基因,同时采用多重PCR方法对28株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin Resistant S. Aureus,MRSA）进行葡萄球菌染色体mec基因盒（Staphyloccoccal Cassette Chromosome mec,SCCmec）分型。结果　菌株对抗菌药物呈多重耐药,其中青霉素耐药率最高,为95.3%。有11种抗生素的耐药率大于50%;10种耐药相关基因检测结果显示acc（6'）/aph（2"）、aph（3'）-III、ant（4',4"）、ermA、ermB、ermC、msrA、tetM、tetK阳性率分别为100%、72.1%、86.0%、95.3%、79.1%、93.0%、58.1%、97.7%、81.4%,未检测出blaTEM;28株MRSA中14株为SCCmecⅢ型,8株为SCCmecⅠ型,4株为SCCmecⅣE型,2株未能分型。结论　郑州地区分离的金黄色葡萄球菌呈多重耐药,携带较多耐药基因,本地区MRSA以SCCmecⅢ型为主。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型与耐药性研究

目的研究临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性,检测MRSA葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)基因型,并进行杀白细胞素(PVL)毒力基因检测。方法采用标准平皿两倍稀释法测定250株MRSA对多种抗菌药物最低抑菌浓度(MIC),采用多重PCR方法对MRSA进行SCCmec基因分型,单一PCR方法对MRSA菌株进行PVL毒力基因检测。结果 250株MRSA经多重PCR方法检测SCCmec基因型,SCCmecⅡ-dcs型菌株30株,占12.0%,Ⅱ型的亚型1株,占0.4%,Ⅲ型62株,占24.8%,含有342 bp(dcs)额外扩增条带的Ⅲ型菌株141株,占56.4%,Ⅳ型7株,占2.8%,Ⅳa型1株,占0.4%,Ⅴ型1株,占0.4%,7株细菌未能分型,占2.8%,未发现Ⅰ型;单一PCR方法获得PVL呈阳性的菌株共2株,占临床分离MRSA的0.8%;各基因型对多种抗菌药物呈现不同程度的耐药。结论临床分离的MRSA以SCCmecⅢ型为主;其次为SCCmecⅡ型;有少量SCCmecⅣ型,少数菌PVL毒力基因阳性。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型的研究

目的应用多重聚合酶链反应(PCR)对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的SCCmec基因型及亚型进行分型。方法收集医院2007年1月~2008年12月临床分离的65株MRSA用多重PCR检测MRSA的SCCmec的基因型及亚型。结果SCCmecⅠ型菌株5株(4.6%),SCCmecⅢ型菌株47株(72.3%),SCCmecⅣ型菌株2株(3.1%),未分型11株(16.9%),未检测到Ⅱ型。结论研究结果显示,医院分离的MRSA以SCCmecⅢ为主;多重PCR对MRSA进行SCCmec基因分型结果可靠,适合临床实验室。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型及PVL基因研究

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)SCCmec基因型的分布特征并检测杀白细胞毒素(PVL)基因。方法收集2007年10月-2008年5月临床标本中,分离的非重复金黄色葡萄球菌110株,用头孢西丁纸片扩散法对MRSA进行初筛;用多重聚合酶链反应(PCR)对MRSA进行SCCmec基因分型及PVL基因检测;用琼脂稀释法对MRSA菌株进行抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)检测。结果 64株MRSA中,63株医院获得性(HA)-MRSA,1株社区获得性(CA)-MRSA,其中SCCmecⅢ型57株(89.0%),Ⅱ型1株(1.6%),SCCmecⅣ型1株(1.6%),未分型5株(7.8%);未发现SCCmecⅠ、Ⅴ型菌株;SCCm ecⅡ型、SCCm ecⅢ型的菌株均为多药耐药株,SCCmecⅣ型的菌株除对β-内酰胺类抗菌药物耐药外,对其他类抗菌药物较敏感。结论 HA-MRSA主要以SCCmecⅢ型为主,CA-MRSA菌株为SCCmecⅣ型,携带PVL毒力基因,HA-MRSA对抗菌药物呈多药耐药性,CA-MRSA菌株耐药谱比HA-MRSA菌株耐药谱窄,加强对MRSA的监测,对指导临床合理使用抗菌药物具有重要意义。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因诊断及多重PCR SCCmec基因分型方法的建立

目的建立对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)基因诊断和金黄色葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)基因分型的方法。方法对临床分离的11株金黄色葡萄球菌采用双重PCR(femA和mecA)鉴定,再将鉴定为MRSA的临床菌株和3株标准株用多重PCR方法在一个反应体系(针对MRSA的8个基因)中进行SCCmec基因分型。结果临床分离株中有6株鉴定为MRSA,对其和MRSA标准株的多重PCR基因分型结果显示,两株临床株为SCCmecⅡ型,4株为Ⅲ型,标准株SA-w2为Ⅰ型,MRSA252为Ⅱ型。结论该研究可以很好地对临床MRSA进行基因诊断和分型,对MRSA的诊断和分型、耐药研究以及分子流行病学有重要意义。     

中山地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性分析及基因分型研究

目的 了解中山地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株耐药性及基因型,为MRSA治疗及感染控制提供数据及分子生物学支持。方法 收集2015年1月至2015年10月中山市7家医院临床分离到的MRSA,采用WOHONET 5.6对耐药数据进行统计分析,PCR检测MRSA耐药基因mecA携带情况,采用多重PCR对分离株进行葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)分型。结果 2015年1月至2015年10月7家医院共分离到50株MRSA,所有MRSA分离株均检出mecA基因,检出率为100%。SCCmec各分型数量依次为I型1株(2%),II型2株(4%),III型28株(56%),IV型6株(12%),V型12株(24%),有1株不能分型。中山市古镇人民医院分离MRSA株主要为SCCmecIII型,其他6家医院主要为SCCmecIV型及V型。MRSA对青霉素耐药率为100%,对红霉素(90%)、庆大霉素(86%)、左氧氟沙星(84%)、诺氟沙星(84%)、克林霉素(76%)耐药率较高,对奎奴普丁/达福普丁(4%)耐药率较低,未检出替考拉宁及万古霉素耐药株。SCCmec III型菌株对庆大霉素、利福平、左氧氟沙星、诺氟沙星、复方新诺明、克林霉素、红霉素、奎奴普丁/达福普丁及四环素耐药率高于SCCmec V型菌株。结论 mecA是MRSA携带最常见的耐药基因,中山地区分离MRSA株在规模较大的医院主要以SCCmec III型为主,基层医院以SCCmec IV及V型为主,SCCmec III型对常用抗菌药敏感性较差,耐药机制较为复杂,临床科室及医院感染控制部门应重点监控该型细菌,避免院内感染暴发。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因及耐消毒剂基因的研究

目的对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行细菌耐药性分析及耐药基因和耐消毒剂基因的试验研究。方法对临床分离47株MRSA进行菌株鉴定、药敏试验和β-内酰胺类耐药相关基因(mecA),氨基糖苷类耐药相关基因[aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ant(4′,4″)],耐消毒剂基因[qac(A/B)]等主要耐药基因和耐消毒剂基因的检测。结果47株MRSA对抗菌药物氨苄西林/舒巴坦、头孢西丁、红霉素、苯唑西林、青霉素均耐药,其他抗菌药物耐药率分别为克林霉素(87.0%)、庆大霉素(91.3%)、利福平(28.3%)、四环素(76.1%)、复方新诺明(65.2%)、左氧氟沙星(71.7%)、呋喃妥因(0.0)、万古霉素(0.0);47株MRSA共检出mecA基因46株,aac(6′)/aph(2″)基因39株,aph(3′)-Ⅲ基因30株,ant(4′,4″)基因6株,qac(A/B)基因19株。结论MRSA为多重耐药菌,对氨基糖苷类耐药和耐消毒剂分别与携带氨基糖苷类耐药基因和耐消毒剂基因有关,临床医生应重视MRSA的诊断与治疗,加强MRSA的医院感染控制。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型与同源性分析

目的研究襄阳地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率及金黄色葡萄球菌染色体mec(SCCmec)基因型与同源性特征。方法采用苯唑西林/头孢西丁筛选法、mecA基因单一PCR扩增对2013年4-10月间湖北省襄阳地区4所三级医院门诊及住院患者标本分离的金黄色葡萄球菌进行MRSA筛选和确认;用多重PCR扩增(m-PCR)及脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行SCCmec基因分型及同源性分析,并用单一PCR扩增法进行PVL基因的检测。结果从80株金黄色葡萄球菌菌株中分离出MRSA 43株;多重PCR分型结果显示,39株为SCCmecⅢ型,4株为SCCmecⅣa型;单一PCR法获得8株PVL阳性菌株,占18.6%,其中SCCmecⅢ型4株,SCCmecⅣa型4株;PFGE检测结果显示,43株MRSA中有A、B、C、D、E 5种类型,其中以A型为主,A型中又分为A1、A2、A3 3种亚型。结论襄阳地区MRSA以SCCmecⅢ型和A型克隆株为主,PVL基因的携带率较高,应加强感染控制,防止此类菌株的播散。     

耐万古霉素溶血葡萄球菌对抗菌药物耐药相关基因研究

目的 了解耐万古霉素溶血葡萄球菌临床分离株对β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素、红霉素以及糖肽类耐药相关基因存在情况.方法 采用PCR技术,对耐万古霉素溶血葡萄球菌WY05株分别扩增mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ant(4′,4″)、erm、tetM、vanA、vanB、vanC基因,并对van基因阳性扩增产物进行测序.结果 从WY05菌株中检出vanA、mecA、acc(6′)/aph(2″)、erm、tetM 5种耐药基因,vanA基因扩增产物经测序、BLASTn比对分析,与屎肠球菌vanA序列一致.结论 WY05株除了携带vanA基因外,还携带mecA、acc(6′)/aph(2″)、erm、tetM基因,表型与遗传学特征均支持该菌株具有多药耐药特征;该vanA基因序列与美国纽约州耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)临床分离株所携带Tn1546转座子内vanA部分序列一致.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因与毒力基因检测研究

目的调查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)6种耐药基因与4种毒力基因的携带状况,分析其阳性率及阳性模式。方法收集2011年1-12月江苏省江阴市及浙江省宁波市2所三级医院住院患者临床标本中分离到的31株金黄色葡萄球菌,用聚合酶链反应(PCR)法分析6种耐药基因(mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ermA/B/C、tetM、qacA/B)与4种毒力基因(sasX、psm-mec、pvl、tst)。结果 31株金黄色葡萄球菌mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ermA/B/C、tetM、qacA/B、sasX、psm-mec、pvl、tst阳性率分别为100.0%、96.8%、77.4%、96.8%、90.3%、38.7%、74.2%、93.5%、96.8%、0,可分为7种阳性结果模式。结论对MRSA进行6种耐药基因及4种毒力基因检测研究尚为国内外首次;MRSA携带耐药基因和毒力基因,与人体感染性疾病的种类及与病程、转归有关,值得作多中心大规模调查。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和溶血葡萄球菌耐药基因的检测

目的 对医院临床标本中分离的36株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和24株耐甲氧西林溶血葡萄球菌(MRSH)进行常见耐药基因的检测,探讨MRSH与MRSA临床分离株耐药基因检出率之间的差异.方法 用MicroScan auto SCAN4仪进行细菌鉴定和药敏试验;用聚合酶链反应(PCR)法检测耐消毒剂qacA/B基因、耐氨基糖苷类药物的aac(6')/aph(2")、aph(3')-Ⅲ、ant(4',4")基因、产β-内酰胺酶基因TEM、编码PBP2a的mecA基因、耐红霉素erm、耐四环素tetM、耐万古霉素vanA等基因;用肉汤稀释法对携带了耐消毒剂qacA/B基因的葡萄球菌属进行消毒剂苯扎溴铵最低抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)测定.结果 24株MRSH耐消毒剂qacA/B基因的阳性率为37.5%;氨基糖苷类药物耐药基因aac(6')/aph(2")、aph(3')-Ⅲ和ant(4',4")阳性率分别分别为87.5%、33.3%和29.2%,TEM基因、erm基因和tetM基因的阳性率为95.8%、62.5%和20.8%;36株MRSA耐消毒剂qacA/B基因阳性率为30.6%;氨基糖苷类药物耐药基因aac(6')/aph(2")、aph(3')-Ⅲ和ant(4'、4")阳性率分别为91.7%、72.2%和8.3%;TEM基因、erm基因和tetM阳性率分别为100.0%、94.4%和91.7%;MRSH和MRSA临床株的苯扎溴铵MIC值均为32～128 mg/L,MBC值MRSH为256～512 mg/L,MRSA为512～1024 mg/L,标准菌株ATCC25923的苯扎溴铵MIC值为16 mg/L,MBC值为32 mg/L.结论 MRSA与MRSH临床分离株携带多种耐药基因且检出率非常高.     

Distribution of aminoglycoside resistance genes in recent clinical isolates of Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium and Enterococcus avium

Aminoglycoside modifying enzymes (AMEs) are major factors which confer aminoglycoside resistance on bacteria. Distribution of genes encoding seven AMEs was investigated by multiplex PCR for 279 recent clinical isolates of enterococci derived from a university hospital in Japan. The aac(6')-aph(2"), which is related to high level gentamicin resistance, was detected at higher frequency in Enterococcus faecalis (42.5%) than in Enterococcus faecium (4.3%). Almost half of E. faecalis and E. faecium isolates possessed ant(6)-Ia and aph(3')-IIIa. The profile of AME gene(s) detected most frequently in individual strains of E. faecalis was aac(6')aph(2") + ant(6)-Ia + aph(3')-IIIa, and isolates with this profile showed high level resistance to both gentamicin and streptomycin. In contrast, AME gene profiles of aac(6')-Ii+ ant(6)-Ia+aph(3')-IIIa, followed by aac(6')-Ii alone, were predominant in E. faecium. Only one AME gene profile of ant(6)-Ia+aph(3')-IIIa was found in Enterococcus avium. The ant(4')-Ia and ant(9)-Ia, which have been known to be distributed mostly among Staphylococcus aureus strains, were detected in a few enterococcal strains. An AME gene aph(2")-Ic was not detected in any isolates of the three enterococcal species. These findings indicated a variety of distribution profiles of AME genes among enterococci in our study site.     

肠球菌属耐药基因检测及耐药性分析

目的 探讨临床分离肠球菌标本的来源分布与耐药性及耐药基因.方法 选取2009年感染患者的肠球菌属分离株,采用常规方法进行菌种鉴定及药物敏感试验,并对其耐药基因进行检测.结果 粪肠球菌检出20株,占57.1％,屎肠球菌共分离到15株,占42.9％;21株多药耐药肠球菌中,阳性基因aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ant(6)-Ⅰ、ermB、tetM分别检出19、11、11、19、10株,检出率分别为90.5％、52.4％、52.4％、90.5％、47.6％.结论 临床分离的肠球菌属多药耐药严重;携带抗菌药物相关耐药基因是导致菌株对抗菌药物产生耐药的重要原因.     

多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因分子类型分析

目的探索多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)氨基糖苷类药物修饰酶基因(AMEs)分子类型。方法采用K-B药敏法测定2007～2008年临床分离的MDR-ABA对庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星的药敏表型,筛选出43株对氨基糖苷类药物耐药的菌株,以聚合酶链反应(PCR)的方法对7种AMEs进行检测和分析。结果 43株MDR-ABA对庆大霉素的耐药率为90.7%,对阿米卡星的耐药率为60.5%,对妥布霉素的耐药率为72.1%;7种AMEs检出率由高到低分别为:aac(3)-Ⅰ(65.1%)、aac(6′)-Ⅰ(60.5%),ant(3″)-Ⅰ(55.8%),aph(3′)-Ⅵ(51.2%),aac(3)-Ⅱ(34.9%),ant(2″)-Ⅰ(20.9%),aac(6′)-Ⅱ(18.6%),总检出率为90.7%。结论临床分离的MDR-ABA对氨基糖苷类抗菌药物耐药主要由AMEs引起。     

阴沟肠杆菌16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的 了解临床分离的40株阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因存在状况.方法 在2003年9月至2004年11月从解放军第98医院住院患者中分离40株阴沟肠杆菌,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析5种16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、 rmtB、rmtC和rmtD)和9种AMEs基因[aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6'')-Ⅰ b、aac(6'')-Ⅱ、ant(3'')-Ⅰ、ant(2'')-Ⅰ和aph(3'')-Ⅵ].结果 40株阴沟肠杆菌中,6种基因rmtB、aac(3)-Ⅱ、aac(6'')-Ⅰ b、ant(3'')-Ⅰ、ant(2'')-Ⅰ和aph(3'')-Ⅵ的阳性株数分别为5株(12.5%)、11株(27.5%)、29株(72.5%)、13株(32.5%)、2株(5.0%)和2株(5.0%);其余8种基因均阴性;AMEs基因总阳性率为85.0%(34/40).对29株aac(6'')-Ⅰ b基因PCR阳性产物进行测序,证实有7株(24.1%)单独携带aac(6'')-Ⅰ b-cr双功能酶基因(GenBank:EF375620、EU159121),18株(62.1%)单独携带aac(6'')-Ⅰ b-Snzhou(苏州型,EU085533),3株(10.3%)同时携带aac(6'')-Ⅰ b-Suzhou及aac(6'')-Ⅰ b-cr 2种亚型,仅1株(3.4%)为aac(6'')-Ⅰ b经典型.结论 临床分离的40株阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因阳性率较低而AMEs基因阳性率很高,至少存在5种AMEs基因.     

中国部分地区铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因型研究

目的调查中国部分地区临床分离铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因型分布。方法收集北京、浙江、江苏及湖北等地区5所医院临床分离的165株铜绿假单胞菌,PCR方法检测5种AMEs基因。结果165株铜绿假单胞菌111株检出AMEs基因,总检出率为67.27%,各种AMEs基因检出率分别为:aac(3)-Ⅱ28.48%、aac(6′)-Ⅰ24.85%、aac(6′)-Ⅱ32.12%、ant(3″)-Ⅰ26.06%和ant(2″)-Ⅰ31.52%,各地区AMEs基因型有较大差异。结论中国部分地区铜绿假单胞菌AMEs基因携带率高;各地区AMEs基因型有较大差异。     

阴沟肠杆菌16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的 了解临床分离的40株阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因存在状况.方法 在2003年9月至2004年11月从解放军第98医院住院患者中分离40株阴沟肠杆菌,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析5种16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC和rmtD)和9种AMEs基因[aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6')-Ⅰ b、aac(6')-Ⅱ、ant(3')-Ⅰ、ant(2')-Ⅰ和aph(3')-Ⅵ].结果 40株阴沟肠杆菌中,6种基因rmtB、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ b、ant(3')-Ⅰ、ant(2')-Ⅰ和aph(3')-Ⅵ的阳性株数分别为5株(12.5%)、11株(27.5%)、29株(72.5%)、13株(32.5%)、2株(5.0%)和2株(5.0%);其余8种基因均阴性;AMEs基因总阳性率为85.0%(34/40).对29株aac(6')-Ⅰ b基因PCR阳性产物进行测序,证实有7株(24.1%)单独携带aac(6')-Ⅰ b-cr双功能酶基因(GenBank:EF375620、EU159121),18株(62.1%)单独携带aac(6')-Ⅰ b-Snzhou(苏州型,EU085533),3株(10.3%)同时携带aac(6')-Ⅰ b-Suzhou及aac(6')-Ⅰ b-cr 2种亚型,仅1株(3.4%)为aac(6')-Ⅰ b经典型.结论 临床分离的40株阴沟肠杆菌中16S rRNA甲基化酶基因阳性率较低而AMEs基因阳性率很高,至少存在5种AMEs基因.