Hsp70/CD80嵌合DNA疫苗对结核杆菌的治疗作用

目的　研究结核病Hsp70 /CD80嵌合DNA疫苗结核杆菌感染小鼠的治疗作用。 方法用结核杆菌强毒株攻击小鼠后 ,接种Hsp70 /CD80嵌合DNA疫苗 ,观察该疫苗对结核杆菌感染的治疗作用。结果　疫苗接种后 14d ,测得卡介苗组、注射 pcDNA3组、注射 pcDNA3 hsp70组及Hsp70 /CD80嵌合DNA疫苗免疫小鼠的血清IFN γ分别为 (12 1.5 4 5 6 .39) pg/ml、(192 .0 0 6 4 .36 )pg/ml、(5 4 2 .33 99.77) pg/ml及 (1336 .98 12 9.6 4 ) pg/ml,嵌合DNA疫苗组与前三组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。肝、脾组织涂片细菌计数及组织培育菌落记数 ,嵌合DNA疫苗组与其他组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　Hsp70 /CD80嵌合DNA疫苗与卡介苗及单一hsp70DNA疫苗相比 ,具有更好的免疫治疗效果。     

hsp70/CD80嵌合DNA疫苗对结核杆菌感染的免疫预防效果

卡介苗（BCG）虽然是全球使用最广泛的预防结核的疫苗,可预防和减轻儿童的重症结核,但对成人肺结核的保护效果不稳定.DNA疫苗为结核的防治提供了新的思路.人们试图用嵌合DNA疫苗和DNA疫苗的联合免疫来提高对结核病的免疫保护效果.分支杆菌热休克蛋白70（hsp70）包含多个T细胞和B细胞表位,免疫原性非常强,具有免疫优势抗原的特点,能诱导出特异性Th1型细胞反应,对结核杆菌的攻击可产生较强的保护性免疫效应,但单独的hsp70 DNA疫苗的免疫保护效果不能超过BCGCD80是近年来发现的一种具有免疫活化功能的第二信号分子,与其共刺激受体CD28/CTLA-4间相互作用可提供T细胞活化所必需的协同刺激信号,本研究将结核杆菌hsp70和人CD80的编码基因进行连接重组,制备成结核病hsp70/CD80嵌合DNA疫苗,可望提高hsp70 DNA疫苗的免疫效力,获得免疫原性更强、安全可靠的新型结核病疫苗.     

嵌合DNA hsp70/CD80真核表达质粒的构建及鉴定

目的　构建hsp70 /CD80嵌合DNA真核表达质粒 ,并对其进行鉴定。方法　采用基因工程技术 ,分别以pBR32 2-hsp70和 pcDNA3-CD80质粒为模板 ,经聚合酶链反应 (PCR)扩增出hsp70 /CD80嵌合目的基因 ,然后与 pcDNA3载体进行连接重组 ,构建成hsp70 /CD80嵌合DNA真核表达质粒 ,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定。结果　hsp70 /CD80嵌合DNA重组真核表达质粒经证实构建成功。 结论　hsp70 /CD80嵌合DNA重组真核表达质粒的成功构建 ,为进一步制备结核病hsp70 /CD80嵌合DNA疫苗奠定了基础。     

hsp70/CD80嵌合DNA真核表达质粒的构建及鉴定

我们将结核分支杆菌ｈｓｐ70和人ＣＤ80的编码基因进行连接重组 ,构建成ｈｓｐ70 /ＣＤ80嵌合ＤＮＡ真核表达质粒 ,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病ｈｓｐ70 /ＣＤ80嵌合ＤＮＡ疫苗奠定了基础 ,可望通过基因免疫获得免疫原性强、以低剂量即可有效刺激机体产生Ｔ细胞和Ｂ细胞应答、安全可靠的新型结核病疫苗。材料与方法　ＤＮＡ提取试剂盒购自上海华舜公司 ,连接试剂盒为大连宝生物公司产品。寡核苷酸引物由上海生工公司合成 ,Ｐ1:5′ＡＡＧＣＴＴＡＴＧＧＣＴＣＧＴＧＣＧＧＴＣＧＧＧＡＴＣ 3′(含ＨｉｎｄⅢ位点和起始密码ＡＴＧ…     

结核分支杆菌Hsp70和Hsp 65 DNA疫苗免疫原性比较研究

分支杆菌热休克蛋白 (Ｈｓｐ)既有增强免疫应答的作用 ,又保持了分支杆菌本身的抗原特性。我们采用分子生物学技术 ,将结核分支杆菌Ｈｓｐ70基因克隆到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ3中 ,构成裸露ＤＮＡ疫苗 (ＤＮＡ70 )。采用英国Ｌｏｗｒｉｅ教授赠送的Ｈｓｐ65ＤＮＡ疫苗和本室构建的Ｈｓｐ70ＤＮＡ疫苗免疫ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,然后观察其对小鼠免疫应答的影响 ,探讨两种疫苗的抗感染机制及比较两种疫苗的免疫原性。材料与方法　雄性ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,购自本校实验动物学部 ;ＲＰＭＩ 164 0购于美国Ｓｉｇｍａ公司 ;白细胞介素 2 (ＩＬ 2 )和γ干…     

热休克蛋白70/CD_(80)嵌合疫苗对支气管哮喘小鼠的影响

支气管哮喘(简称哮喘)是严重威胁公众健康的一种慢性疾病,研究结果表明,Th1/Th2平衡失调是哮喘发病的重要免疫学机制.     

小鼠对乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗免疫应答

目的:探讨含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗的免疫应答.方法:以乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗pcHBV-CD80(含CMV启动子、HBV-preS2片段、HBV-C片段和CD80)、pcHBV(含CMV启动子、HBV-preS2片段、HBV-C片段),以及质粒pcDNA-CD80、pcDNA3.1和生理盐水,im免疫小鼠2次(间隔2 wk),末次接种后2 wk时检测特异性抗体、γ-IFN水平和淋巴细胞转化率.结果:质粒pcHBV-CD80和pcHBV免疫后均可检测到特异性的抗体,抗-preS2在pcHBV-CD80组和DcHBV组分别为1 5125.52 nkat/L和14463.56 nkat/L;抗-HB c在pcHBV-CD80组和DcHBV组分别为7607.35 nkat/L和7711.21 nkat/L,两组间无明显差异;但p cHBV-CD80更能增加γ-IFN的产生(1266.7 ng/L vs 986.3 ng/L,P＜0.01),并增强免疫小鼠的激淋巴细胞转化.结论:含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗可诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答.     

Ag85A/B嵌合DNA疫苗治疗小鼠敏感结核病疗效的实验研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A/B嵌合DNA疫苗治疗小鼠敏感结核病的效果。方法用结核分枝杆菌标准株H37Rv尾静脉注射50只雌性BALB/c小鼠后,将小鼠随机均匀地分为5组,感染后第3 d开始,分别用生理盐水(A组)、pVAX1载体(B组)、利福平(C组)、草分枝杆菌F.U.36注射液(D组)、Ag85A/B嵌合DNA疫苗(E组)治疗,每2周肌肉注射1次DNA疫苗,共3次。在治疗结束后2周,杀鼠,取小鼠肺和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数。结果与A组比较,D组、E组肺脏病变有不同程度减轻,病变局限,3/5区域肺泡结构完整,清晰,细胞分布均匀。与A组相比,C、D、E组肺脏菌落数依次减少2.11 log、0.76 log、0.81 log;肝脏菌落数依次减少2.11 log、0.74 log、1.11 logs(P0.01)。结论 Ag85A/B嵌合DNA对小鼠敏感结核病具有较好的治疗效果。     

结核杆菌Ag85A DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应比较

目的探索增强结核杆菌DNA疫苗有效性的新方法，为研制并开发新一代高效结核杆菌DNA疫苗奠定基础。方法分别构建结核杆菌Ag85A抗原基因真核表达质粒及其与小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的真核嵌合表达质粒，体外转染COS7细胞检测两种重组质粒的表达活性后，将其分别用作DNA疫苗给BALB／c小鼠肌内注射，检测小鼠体内特异性体液免疫和细胞免疫应答相关指标，同时进行动物免疫保护性实验，比较分析两种DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应。结果结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因与小鼠粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子的嵌合DNA疫苗在小鼠体内的免疫原性明显强于Ag85A抗原基因非嵌合DNA疫苗，但两种DNA疫苗的免疫保护性无明显差异。结论粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与结核杆菌免疫保护性抗原基因嵌合DNA疫苗能显著增强结核病DNA疫苗的免疫原性。     

利福平对结核杆菌作用的方式

Ⅱ、利福平对卡介菌RNA聚合酶的抑制和草分枝杆菌摄取利福平—~(14)C的生物合成研究已有报导利福平能抑制大肠杆菌的RNA聚合酶,本文进一步采用取自卡介菌的纯化RNA聚合酶研究利福平的作用,并以草分枝杆菌研究抗利福平的机制。实验利用DEAE纤维素柱层析和硫酸铵组分法分离RNA聚合酶,继用甘油梯度密离心法纯化。正式实验是研究利福平对纯化RNA聚合酶活力的抑制作用,结果发现,仅在卡介菌纯化RNA聚合酶与药物保温30分钟后才显示抑制作用,说明利福平作用于RNA聚合酶反应的初期阶段,而不是抑制酶的聚合作     

日本血吸虫SjCTPI-Hsp70 DNA疫苗与白细胞介素12对水牛的联合免疫保护作用研究

目的 探讨中国大陆株日本血吸虫磷酸丙糖异构酶-热激蛋白（SjCTPI-Hsp70）DNA疫苗联合佐剂白细胞介素-12（IL-12）质粒DNA对水牛的免疫保护作用。 方法 实验采用双盲法，所用疫苗及制剂均在实验结束后解码。将购自非血吸虫病流行区45头8～10月龄健康水牛随机分为 A组（SjCTPI-Hsp70+IL-12，300 μg）、B组（SjCTPI+IL-12， 300 μg）和C组（空质粒pVAX+IL-12， 300 μg）等3组（每组15头），每头牛分别经肩部肌肉注射免疫3次，每次间隔28 d。末次免疫后28 d，每头牛经大腿内侧皮肤感染日本血吸虫尾蚴1 000条。解剖前2 d及当天分别收集粪便1次，用定量法计数虫卵和毛蚴。攻击感染后56 d解剖，用生理盐水经胸主动脉灌冲法收集、计数成虫，检测每克肝组织虫卵数。 结果 A、B组减虫率分别为51.2％和41.5％（χ²=1.89，P＞0.05），减雌虫率分别为48.9％和44.7％（χ²=0.35，P＞0.05），减粪卵率分别为52.1％和38.3％（χ²=3.84，P＜0.05），减毛蚴率为52.1％和33.2%（χ2=7.30，P＜0.01）及减肝卵率为61.5％和42.0％（χ²=7.61，P＜0.01）。 结论 用SjCTPI?鄄Hsp70+IL-12免疫水牛可获得一定的免疫保护性作用。     

白细胞介素-12对DNA疫苗治疗小鼠丙型肝炎病毒的增强作用

目的     

结核病DNA疫苗及其作用机制研究进展

为实现到2050年在全球范围内根除结核病(Tuberculosis,TB)这一宏伟目标,迫切需要开发新的TB疫苗和疫苗接种策略.虽然卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)在保护儿童免受粟粒性结核和结核性脑膜炎等方面获得了成功,但其对成人肺结核(Pulmonary tuberculosis,PT...     

磷酸铝佐剂对乙型肝炎DNA疫苗抗体应答的增强作用

目的 探讨磷酸铝佐剂对乙型肝炎DNA疫苗诱导体液免疫应答的增强作用。 方法 应用基因重组技术构建乙型肝炎表面抗原(HBsAg)真核表达质粒pcDNA 3.1-S,经酶切和测序鉴定无误后,作为乙型肝炎DNA疫苗,将不同浓度的磷酸铝悬液与之混合后免疫小鼠;用酶联免疫吸附法检测重组质粒在小鼠局部肌肉中HBsAg的表达和在血清中HBsAg的含量;并于免疫小鼠6周后检测小鼠血清抗-HBs水平。 结果 与单纯使用质粒pcDNA 3.1-S相比,将质粒pcDNA 3.1-S与磷酸铝悬液混合后免疫小鼠,重组质粒在小鼠局部肌肉中HBsAg表达差异无显著性;HBsAg在血清中的浓度均为阴性。将质粒pcDNA3.1-S与磷酸铝悬液混合后免疫小鼠,6周后检测小鼠血清抗-HBs,每1μl质粒中含1、10、50、100 μg磷酸铝组,小鼠血清抗-HBs抗体的P/N值分别为11.00±6.62、20.30±10.20、49.1 8±24.40和48.68±27.78,单纯使用质粒pcDNA3.1-S组P/N值为11.54±5.60。含1μg和10μg磷酸铝组,抗-HBs抗体P/N值与单纯用质粒pcDNA3.1-S组相比,差异无显著性;50μg和100μg磷酸铝组抗-HBs抗体P/N值高于单纯用质粒pcDNA3.1-S组,但50μg和100μg磷酸铝组二者差异无显著性。 结论 磷酸铝与质粒pcDNA3.1-S混合对pcDNA3.1-S在小鼠局部肌肉中HBsAg的表达无明显增强作用,但一定含量的磷酸铝能显     

DNA疫苗治疗自身免疫病研究进展

自身免疫病(autoimmune diseases,AD)是指由机体自身产生的抗体或致敏淋巴细胞破坏、损伤自身的组织和细胞成分,导致组织损害和器官功能障碍的原发性免疫性疾病.如类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)或多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)等,这些疾病的发病机制不明,目前认为基因、表观遗传和环境因素是其主要的发病机制[1].     

结核杆菌DNA疫苗pVS84与pIL2质粒联合免疫的保护效率研究

目的用构建的人hIL-2质粒和结核杆菌DNA疫苗pVS84联合免疫后,对小鼠的细胞因子进行了测定并对抗结核分枝杆菌H37Rv攻击的能力进行了评估。方法将hil-2插入pVAX1,构建了人hIL-2的质粒pIL2。将雌性C57BL/6鼠分成6组,分别用pVS84和pIL2各50μg,pVS84,pVAX1,pIL2S和PBS免疫3次,间隔2周,加强免疫2次。另一组用BCG(105CFU)皮内免疫1次。每组10只鼠在最后一次加强后,取脾培养,检测上清细胞因子。另10只用结核菌H37Rv攻击,2周后取脾、肝和肺培养结核菌并计数。结果pVS84+pIL2联合免疫组的鼠血清hIL-2平均浓度为720.5±114.5pg/ml,显著高于其它组。pVS84+pIL2组、pVS84组的脾细胞培养上清的mIL-2和mIFN-γ平均含量显著高于3个阴性对照组(P<0.001),与BCG免疫组无显著性差异(P>0.05)。pVS84+pIL2组脾、肝和肺的平均结核菌载量分别为12471.4±2269.3,13622.6±2404.0和14742.0±2378.7CFU/g,低于pVS84组和3个阴性对照组相应器官的结核菌载量(P<0.001),与BCG对照组无显著差异。结论pIL2质粒与pVS84联合免疫能够刺激机体产生Th1型免疫应答,抵抗H37Rv攻击的能力与BCG的效果相当。     

甲胎蛋白与热休克蛋白70融合DNA疫苗抗肿瘤免疫

目的通过小鼠甲胎蛋白(AFP)与结核分枝杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因融合制备DNA疫苗,研究该种DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答及其对荷瘤小鼠的治疗作用。方法应用分子克隆技术构建AFP与HSP70的融合表达载体,免疫实验共分5组:磷酸盐缓冲液组、pcDNA3．1组、pcDNA3.1-AFP组、pcDNA3．1-HSP70组、pcDNA3．1- AFP-HSP70组(融合疫苗组),每组7只小鼠。2次免疫后分离小鼠脾细胞,体外诱导细胞毒性T淋巴细胞做杀伤实验, 以乳酸脱氢酶法检测杀伤率,以酶联免疫吸附法检测脾细胞释放的干扰素γ;体外培养小鼠肝癌细胞系Hepa1-6,以每200 μl 4×106细胞数在C57BL／6J小鼠右前腋皮下注射作荷瘤鼠模型,以融合疫苗免疫荷瘤鼠,观测肿瘤大小评价融合疫苗的治疗作用。结果AFP与HSP70的融合疫苗能诱导AFP特异性细胞毒性T淋巴细胞反应,HSP70对于该反应有增强作用(P<0．05),杀伤率在效:靶比为50:1时为32％左右;免疫后小鼠脾细胞体外刺激后分泌干扰素γ约200 pg／ml,融合疫苗组分泌高于其他组(P<0．05),融合疫苗组肿瘤小于其他组(P<0．05),生存时间长于其他组(P<0．05)。结论 AFP与HSP70的融合疫苗能激发AFP特异性细胞毒性T淋巴细胞．并且对肝癌移植瘤有治疗作用。     

CD28/CD80和CD2/CD58活化PBLs作用肝癌细胞的表型分析与TCR Vβ基因亚家族的优势取用

目的　采用抗ＣＤ２８ ,ＣＤ８０ ,ＣＤ２ 及ＣＤ５８ 分别刺激健康人ＰＢＬｓ 后作用肝癌细胞,对作用前后ＰＢＬｓ 的表型变化及ＴＣＲＶβ基因亚家族的表达水平进行探讨．方法　用ＦＡＣＳ 分析作用肝癌细胞前后ＰＢＬｓ 表型变化,并用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ 印迹分析其ＴＣＲ Ｖβ１ ～２０ 的表达水平及特征．结果　健康人ＰＢＬｓ 作用肝癌细胞后ＣＤ３ 和ＣＤ８ 分子表达比作用前明显增高,而ＣＤ４ 分子无显著变化． 健康人ＰＢＬｓ 分别加ＩＬ２ , ＰＨＡ, 抗 ＣＤ３ 和 ＣＤ３ ＋ ＣＤ２８ , ＣＤ２８ ＋ ＣＤ８０ ,ＣＤ２ ＋ ＣＤ５８ 作用肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２） 前表达水平平均约５ ％ ,作用ＢＥＬ７４０２ 后表达水平约１３ ％ ～２５ ％ ,其特征为Ｖβ７增高．结论　在癌抗原的参与下,ＭｃＡｂ 共刺激的Ｔ 细胞活化,ＴＣＲ接受ＡＰＣ 提呈的相应抗原的刺激,具有该ＴＣＲ 的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的Ｔ 细胞克隆,发挥其识别和杀伤癌细胞的作用．     

结核分枝杆菌Ag85A/HSP70 DNA疫苗的真核表达与免疫效应研究

目前卡介苗（BCG）作为临床上惟一使用的预防结核病的疫苗,效果并不稳定.同时BCG的接种会使结核菌素试验阳性,对结核病的诊断产生干扰,延误治疗时间,因此研制新疫苗成为当前结核病防治的首要任务.我们将结核分枝杆菌Ag85A和HSP70编码基因，以PCI-neo为载体，连接构建了PCI-Ag85A/HSP70 DAN疫苗，观察其免疫效应，以期用于结核病的防治工作。