HtrA 对乳牙高致龋性变异链球菌 GTFs 表达及活性的影响

目的：研究乳牙高致龋性变异链球菌（S．mutans）高温需要 A 蛋白（HtrA）基因缺陷株和 HtrA 高毒力株在体外非应激环境中的葡萄糖基转移酶（GTFs）表达能力及其生物学活性的差异。方法：选用前期已获得的乳牙高致龋性 S．mutans HtrA 基因缺陷株和高毒力株（HtrA 高毒力株和 HtrA 基因缺陷株）,在 BHI 培养基培养至指数期第10 h 后。以实时逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）方法检测2菌株 gtfB,gtfC,gtfD 的表达情况。提取蛋白,以蒽酮硫酸法检测其生物学活性,以蛋白免疫印迹（Western Blot）检测其表达量。结果：GTFs 蛋白和基因在乳牙 S．mutans HtrA 基因缺陷株中的表达高于 HtrA 高毒力株,但其生物学活性低于高毒力株。结论：HtrA 基因在乳牙 S．mutans GTFs 的分泌过程中起重要的调控作用。     

变形链球菌和远缘链球菌致龋性的研究近况

变形链球菌和远缘链球菌是人类牙齿的主要致龋菌。近年研究表明两种细菌的生物学特性存在一定差异，远缘链球菌与龋病的活跃性密切相关，本文对两种细菌的流行病学、粘附机理、多的合成产酸酸耐酸进行了综述，为今后龋病病因学研究，抗龋疫的制备提供参考。     

高温需要A蛋白与口腔变异链球菌的致龋性

变异链球菌是龋齿的主要致病菌,细菌表面多糖合成物、对牙面的黏附聚集、生物膜形成是其重要的生理学致病因子.高温需要(Htr)A是一种细菌细胞质的热休克蛋白,对于细菌耐受环境变化,特别是温度的增高,pH值和氧化还原电势的变化有重要的意义.下面就HtrA与变异链球菌致病因子相关的研究进行综述.     

HtrA对乳牙变异链球菌高毒力株gbpC表达的影响

目的:在体外非应激条件下,研究乳牙变异链球菌(streptococcus mutans,S.mutans)高温需要A蛋白(high temperature requirement serine proteinase A,HtrA)基因缺陷株和HtrA高毒力株的葡聚糖结合蛋白C(glucan-binding protein C,gbpC)表达能力的差异,探讨HtrA基因对gbpC表达的影响。方法:选用前期已获得的乳牙HtrA高毒力株和高致龋性HtrA基因缺陷株,在BHI培养基培养至指数期第12 h后进行细菌革兰染色及生化鉴定。以qPCR和Western Blot分别检测两组S.mutans菌株中gbpC基因和蛋白的表达情况。结果:HtrA高毒力株相对HtrA基因缺陷株具有更高的gbpC基因和蛋白表达量。结论:S.mutans gbpC的表达会受HtrA的影响。HtrA基因可能是S.mutans高致龋性的重要因素之一。     

变形链球菌与远缘链球菌致龋毒力因素的差异

变形链球菌与远缘链球菌均为重要的龋菌。但两者在一些生化特征和重要的毒力因素方面有所不同。本文对这两种细菌的粘附性和产酸，耐酸性等单方面的差异进行了综述，旨在解释两菌的致龋性和分布特点。     

定量聚合酶链反应检测致龋性变形链球菌

目的 创建一种临床定量检测致龋性变形链球菌的分子生物学方法。方法 采用靶基因与参照基因同步扩增法，根据变形链球菌葡聚糖酶（dexA)基因序列，设计一对特异性引物，以pET23b质粒DNA为参照基因。对196名儿童的唾液样品进行定量PCR检测并进行常规培养法的对比研究。结果 196份唾液样品定量PCR检测致龋性变形链球菌≥10^8CFU/L，唾液的检出率为91.3%。与常规培养计量法的对比符合率为94.9%。结论 变形链球菌PCR定量检测是一种早期发现龋病活性的新方法，具有快速可靠、特异性强、符合率高等特点，有广泛的临床应用前景。     

壳聚糖/姜黄素纳米复合物对变异链球菌致龋力的影响

目的:探讨壳聚糖/姜黄素纳米复合物对变异链球菌致龋力的影响。方法:将姜黄素与壳聚糖复合后形成含有不同浓度(0、0.01、0.05、0.10 mmol/L)姜黄素的壳聚糖/姜黄素纳米复合物(CS-Cur)。将CS-Cur作用于浮游态及生物膜状态下的变异链球菌,观察变异链球菌生长增殖曲线、培养物pH变化、细菌糖酵解能力,结晶紫染色评估变异链球菌生物膜的量,蒽酮法检测生物膜内非水溶性胞外多糖含量,菌落计数评估生物膜中所含细菌的量。通过以上实验评估变异链球菌在CS-Cur作用后致龋因子表达的变化。结果:CS-Cur作用于变异链球菌后,其生长增殖受到了抑制,该抑制随着Cur浓度升高而增强;变异链球菌培养物pH也无法下降至空白对照组水平;同时变异链球菌的糖酵解能力在CS-Cur作用后也有所下降;CS-Cur作用于变异链球菌后,结晶紫染色结果显示：变异链球菌所形成的生物膜的量下降(P<0.05);蒽酮检测胞外多糖结果显示：生物膜中所含的非水溶性胞外多糖显著减少(P<0.05);菌落计数结果显示：细菌数量也显著减少(P<0.05)。结论:CS-Cur纳米复合物对变异链球菌致龋因子的表...     

变异链球菌hit基因功能及致龋力影响的初步分析

目的:初步探讨hit基因对变异链球菌生长和致龋力的影响。方法:通过同源重组构建变异链球菌hit基因缺陷株(Δhit)、hit基因回补株(ΔhitC、ΔhitC-eGFP);观察不同pH下Smu.Δhit、Smu.ΔhitC和ATCC25175模式菌株生长曲线;通过结晶紫染色、蒽酮染色、扫描电镜等实验,比较生长、生物膜形成、粘附、菌体形态差异及耐酸特性;通过人工龋实验,在体外模拟菌株对牙釉产生龋样损坏的差异。结果:成功构建Smu.Δhit、Sum.ΔhitC和Smu.ΔhitC-eGFP菌株;观察发现Smu.Δhit较ATCC25175菌株生长迅速,随着pH值降低,Smu.Δhit生长受到部分抑制,ATCC25175则完全被抑制;Smu.Δhit菌体呈“椭圆球状平铺附着”分散在牙釉面上,胞外生物膜量较少;Smu.Δhit造成的龋样损坏明显强于ATCC25175。结论:hit基因调控变异链球菌生长繁殖,Smu.Δhit缺陷株生长速率显著高于亲本株,更耐受酸性环境,对人牙釉面破坏性更强。     

米勒氏链球菌的致龋性研究

本实验研究了米勒氏链球菌的致龋性,发现:(1)米勒氏链球菌的附着能力比变链Ingbrill低,与血链903无显著差异,(2)产酸总量,产生[H~+]量,米勒氏链球菌低于变链Ingbrill。有机酸分析发现米勒氏链球菌产生的乳酸量显著高于血链903,低于变链,Ingbrill,而其它几种有机酸各菌种之间则无显著差异,(3)米勒氏链球菌对大白鼠的致龋性能低于变链Ingbrill,高于血链903,具有中度致龋能力。     

重症婴幼儿龋及无龋儿童牙菌斑中变形链球菌的致龋性比较

目的 对比分析重症婴幼儿龋(S-ECC)儿童及无龋儿童牙菌斑中变形链球菌(简称变链菌)的致龋性,为S-ECC的早期检测及预防奠定基础.方法 按照NIH标准,将67名3～5岁儿童分为S-ECC组(n=35)、无龋组(n=32),采集牙面菌斑,经分离、鉴定获取纯化的变链菌株,接种至蔗糖浓度为20%的TYCSB液体培养基,检...     

积雪草酸抑制变异链球菌生物膜形成及致龋能力的研究

目的:研究积雪草酸对变异链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)生物膜的抑制作用及对其产酸和产胞外多糖(extracellular polysaccharides,EPS)的影响.方法:通过药敏试验测定积雪草酸对S.mutans浮游菌的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC);结晶紫试验和MTT试验分别探究积雪草酸对S.mu-tans生物膜的总量和代谢活性的影响;采用蒽酮-硫酸法,场发射扫描电镜(Field emission scanning electron micros-copy,FESEM)和激光共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscopy,CLSM)测定积雪草酸对S.mutans生物膜EPS的产生和结构形貌的影响;pH计测定积雪草酸对S.mutans产酸的影响;CCK-8法检测积雪草酸的细胞毒性.结果:积雪草酸对S.mutans的最低抑菌浓度为20μg/mL,在亚抑菌浓度(10μg/mL和5μg/mL)下均能有效抑制S.mutans生物膜形成以及产酸和产EPS.同时,积雪草酸无明显的细胞毒性.结论:积雪草酸在一定浓度下能有效抑制S.mutans生物膜形成,并能降低其产酸和产EPS等致龋毒力.     

对氨基苯甲酸对变形链球菌表面疏水性的影响

目的　研究血链球菌合成的生态调节因子---对氨基苯甲酸(PABA)对变形链球菌细胞表面疏水性的影响,从而进一步了解PABA影响细菌粘附的机制。方法　在不同PABA浓度(10-9g/L、10-7g/L、10-4g/L)的改良Carls- son液体培养基中厌氧培养变形链球菌,并采用微生物粘着碳氢化合物法测试细胞表面疏水性。结果　低浓度的 PABA可增强变形链球菌细胞表面疏水性,当浓度增加到一定范围则可降低其细胞表面疏水性。结论　PABA可能通过降低细菌非特异性疏水作用而抑制变形链球菌的粘附。     

白屈菜红碱对变形链球菌细胞形态学影响的透射电镜观察

目的：通过透射电镜（transmission electron microscope,TEM）观察白屈菜红碱（chelerythrine,CHE）对变形链球菌（streptococcus mutans,S.mutans）作用后的形态学影响,探讨其抑菌机制。方法：选择变形链球菌ATCC25175作为实验菌株,实验分白屈菜红碱溶液处理组（实验组）及对照组,将2组细菌在37℃厌氧环境（80%N2、20%CO2）下培养24h,透射电镜观察细菌细胞结构的变化。结果：白屈菜红碱通过抑制变形链球菌的细胞分裂而抑制其生长,并对荚膜、细胞壁、细胞膜等结构产生显著影响,使其完整性受到破坏。结论：白屈菜红碱可以改变变形链球菌超微结构,这可能是其抑制细菌生长的机制之一。     

变形链球菌表面蛋白PAc的原核表达及纯化

目的：对在大肠杆菌中表达重组变形链球菌表面蛋白抗原PAc的培养条件进行优化,制备高纯度重组蛋白rPAc。方法：载体构建原核表达载体pET20b（＋）-AP对不同培养基、诱导浓度,温度和时间等进行筛选确定最佳条件,采用亲和层析分离纯化rPAc蛋白。结果：含原核表达载体pET20b（＋）-AP的大肠杆菌在LB培养基中培养至A600—0．6时,终浓度为1mM的IPTG诱导,30℃继续振荡培养4h,可使rPAc的表达量达到最大。分离纯化的蛋白在SDSPAGE中显示为单一条带。结论：对PAcA～P区的重组质粒pET20b（＋）-AP表达的rPAc经纯化后可用于动物免疫,为探索防龋DNA疫苗pCIA—P的新型免疫策略奠定必要的物质基础。     

变异链球菌的致龋特异性与龋病的免疫学预防

对近40年来龋病研究中致病菌的致病特异性问题作了扼要的回顾,目的在于阐述利用变异链球菌作为抗原来引发机体的抗龋力的效用是否满意.根据目前的进展情况认为,免疫学防龋的前景是应该深入思考的.作者对在我国开展龋病预防提出了自己的意见.     

变异链球菌双组分信号传导系统的研究进展

龋病是一种细菌感染性疾病,变异链球菌是主要致龋菌。变异链球菌的双组分信号传导系统由膜相关组氨酸蛋白激酶和胞内反式作用因子两个基本成分组成。双组分信号传导系统可以使变异链球菌感应外界环境变化和调节内部基因表达,这对于维持细菌的生存和毒力调整有重要作用。本文就与变异链球菌应激应答密切相关的双组分信号传导系统研究现状作一综述。     

利用shotgun蛋白组学策略构建变形链球菌蛋白质表达谱

目的：建立变形链球菌蛋白质表达谱,为变形链球菌蛋白质组学研究奠定基础。方法：提取变形链球菌总蛋白,溶液内酶解,肽段混合物在色谱上分离后shotgun鉴定,并利用生物信息学软件对鉴定出的蛋白质进行分析。结果：建立了变形链球菌蛋白质表达谱,共鉴定出752种蛋白质,其中高可信度298种,并利用Gene Ontology软件对其按分子功能和生物学途径进行归类。结论：变形链球菌蛋白质表达谱的建立,为变形链球菌蛋白质组学研究提供了重要的信息和资料。     

抗变形链球菌鸡卵黄抗体对变形链球菌合成葡聚糖影响的实验研究

目的 研究抗变形链球菌鸡卵黄抗体（IgY）对变形链球菌合成葡聚糖的影响。方法 用蒽酮法测定各浓度组IgY使用后，定量菌在单位时间内合成葡聚糖的量。结果 IgY抗体对血清c型及血清g型变形链球菌合成胞外多糖均有影响，各浓度组IgY对合成胞外多糖的影响力有随着浓度升主而增强的趋势。1：16浓度组起有效，1：2浓度组的抑制作用最强（P＜0.05）。结论 IgY可以减少变链菌合成葡聚糖。     

含特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂对口腔菌斑中变形链球菌作用的临床研究

目的:评价含特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂对口腔菌斑中变形链球菌的抑制作用。方法:本试验遵照随机、双盲、对照的原则。将40名年龄在20~24岁的受试者随机分成试验组(使用含特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂)和安慰剂对照组(使用不含特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂),每天用喷雾剂喷牙面2次,连续使用3周。分别在试验前、试验后1周、3周、停止使用喷雾剂1周后取右下第1恒磨牙菌斑进行微生物学分析。结果:试验组使用特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂3周后变形链球菌计数和变形链球菌占总厌氧菌百分率与基线相比明显下降(P<0.001)。对照组所有数据在统计学上无显著差异(P>0.05)。结论:本研究提示含特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂对人群口腔菌斑中变形链球菌有明显的抑制作用。