灵芝多糖肽对自由基所致的腹腔巨噬细胞早期损伤的影响

目的　以膜电位方法进一步研究灵芝多糖肽(GLPP)对自由基损伤的巨噬细胞线粒体的影响。方法　以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂,建立小鼠巨噬细胞体外氧化损伤模型,以罗丹明1 2 3(Rh1 2 3 )为荧光染色剂,以激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位改变。结果　tBOOH氧化剂可损伤线粒体膜,使线粒体膜电位降低,GLPP体内( 1 0 0mg·kg- 1 ig 5d)及体外给药(GLPP 1 0mg·L- 1)均可对抗tBOOH自由基损伤,可使因自由基损伤而降低的巨噬细胞线粒体膜电位恢复。结论　GLPP体内体外给药可减轻自由基损伤,使损伤的线粒体膜电位恢复     

七叶皂苷精氨酸盐抗炎作用的量效、时效关系及对NO合成的影响

目的研究七叶皂苷精氨酸盐(Aescine-Arginine,ACA)抗炎作用的量效关系及时效关系,并探讨ACA对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞一氧化氮(NO)合成的影响。方法70只♂小鼠随机分成7组,即生理盐水组、双氯芬酸钠(10mg·kg-1)组、ACA(0.5、1、2、4和8mg·kg-1)组,采用小鼠腹腔毛细血管通透性模型,以小鼠腹腔渗出液中伊文思兰的渗出量为指标,观察ACA抗炎作用的量效关系;90只♂小鼠随机分成9组,即生理盐水组、双氯芬酸钠(10mg·kg-1)组及ACA(2mg·kg-1)给药,1、2、4、8、12、16和24h组,采用小鼠腹腔毛细血管通透性模型,以小鼠腹腔渗出液中伊文思兰的渗出量为指标,观察ACA抗炎作用的时效关系;用脂多糖(LPS)作为巨噬细胞(RAW264.7)的NO合成诱导剂,加入不同浓度的ACA,培养后取上清液,用Griess试剂测定NO产生量。结果ACA的2,4和8mg·kg-13个剂量皆能明显降低腹腔渗出液中伊文思兰的渗出量,且具有明显的剂量依赖关系;ACA在给药后4,8,12,16和24h能够明显降低腹腔渗出液中伊文思兰的渗出量;LPS在1mg·L-1浓度作用于RAW 264.7细胞,可诱导大量NO合成。ACA对LPS诱导的NO合成有明显的抑制作用,其抑制作用具有明显的量效关系。结论ACA的抗炎作用在4h起效,药效可持续24h,且具有明显的剂量依赖性;ACA降低LPS诱导的炎性因子NO的产生,可能是ACA减轻炎症反应机制之一。     

芦荟大黄素对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS表达的影响

目的观察芦荟大黄素(aloe-emodin)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的作用。方法采用LPS诱导的RAW264.7细胞株建立细胞炎症反应模型。采用Griess试剂法测定NO释放量;采用硝普钠释放NO法测定NO自由基含量的变化;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达改变。结果芦荟大黄素在0.69～2.50mg·L-1剂量范围内可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放,并呈剂量和时间依赖关系;芦荟大黄素在0.63～5.00mg·L-1剂量范围内可下调LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS mRNA含量;而此范围内芦荟大黄素无直接清除NO自由基作用,不影响iNOS活性。结论芦荟大黄素可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放,呈时间和剂量依赖关系,此作用并非通过捕捉NO或抑制iNOS活性来实现,而是通过抑制iNOS mRNA表达发挥作用的。     

香菇多糖对巨噬细胞一氧化氮和一氧化氮合酶活性的影响

目的研究香菇多糖(LTN)诱导巨噬细胞的一氧化氮(NO)生成和一氧化氮合酶(iNOS)的活性,探讨LTN的免疫调节作用机理.方法采用Griess反应和荧光法测定不同剂量的LTN作用小鼠腹腔巨噬细胞后NO的生成量和iNOS活性.观察mRNA转录抑制剂、蛋白质合成抑制剂和iNOS抑制剂对巨噬细胞NO的生成和iNOS活性的影响.结果LTN能使小鼠腹腔巨噬细胞NO生成增加,iNOS活性增高,并呈作用剂量依赖关系.3种抑制剂均能抑制LTN诱导的小鼠腹腔巨噬细胞N0的生成和iNOS活性.结论LTN能刺激小鼠腹腔巨噬细胞提高iNOS活性和NO的生成.提示LTN的免疫调节作用机制可能与LTN刺激巨噬细胞NO生成有关.     

香菇多糖对巨噬细胞一氧化氮和一氧化氮合酶活性的影响

目的研究香菇多糖(LTN)诱导巨噬细胞的一氧化氮(NO)生成和一氧化氮合酶(iNOS)的活性,探讨LTN的免疫调节作用机理.方法采用Griess反应和荧光法测定不同剂量的LTN作用小鼠腹腔巨噬细胞后NO的生成量和iNOS活性.观察mRNA转录抑制剂、蛋白质合成抑制剂和iNOS抑制剂对巨噬细胞NO的生成和iNOS活性的影响.结果LTN能使小鼠腹腔巨噬细胞NO生成增加,iNOS活性增高,并呈作用剂量依赖关系.3种抑制剂均能抑制LTN诱导的小鼠腹腔巨噬细胞N0的生成和iNOS活性.结论LTN能刺激小鼠腹腔巨噬细胞提高iNOS活性和NO的生成.提示LTN的免疫调节作用机制可能与LTN刺激巨噬细胞NO生成有关.     

褪黑素对结肠炎大鼠结肠内一氧化氮合酶和环氧合酶-2含量的影响

目的　研究褪黑素对大鼠结肠炎的抗炎作用是否与诱生性一氧化氮合酶 (iNOS)和环氧合酶 2(COX 2 )有关。方法　制备大鼠乙酸性结肠炎和2 ,4 ,6 三硝基苯磺酸 (TNBS)结肠炎模型。实验设正常对照组 ,模型对照组 ,5 氨基水杨酸对照组 (10 0mg·kg- 1) ,褪黑素组 (2 .5 ,5 .0 ,10 .0mg·kg- 1) ,每天灌肠给药一次 (乙酸模型给 7d ,TNBS模型给 2 1d)。检测大鼠结肠一氧化氮 (NO) ,前列腺素 (PG)E2 ,iNOS和COX 2含量。结果　模型组大鼠结肠粘膜损伤明显 ,NO ,PGE2 ,iNOS和COX 2含量显著增加。褪黑素可减轻大鼠结肠损伤 ,明显抑制NO ,PGE2 合成并减少iNOS ,COX 2含量。结论　大鼠结肠经TNBS和乙酸致炎后iNOS ,COX 2 ,NO及PGE2合成增强 ,褪黑素通过抑制iNOS和COX 2表达减轻结肠损伤     

香菇多糖对巨噬细胞一氧化氦和一氧化氦合酶活性的影响

目的 研究香菇多糖(LTN)诱导巨噬细胞的一氧化氮(NO)生成和一氧化氮合酶(iNOS)的活性，探讨LTN的免疫调节作用机理。方法 采用Griess反应和荧光法测定不同剂量的LTN作用小鼠腹腔巨噬细胞后NO的生成量和iNOS活性。观察mRNA转录抑制剂、蛋白质合成抑制剂和iNOS抑制剂对巨噬细胞NO的生成和iNOS活性的影响。结果 LTN能使小鼠腹腔巨噬细胞NO生成增加，iNOS活性增高，并呈作用剂量依赖关系。3种抑制剂均能抑制LTN诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NO的生成和iNOS活性。结论 LTN能刺激小鼠腹腔巨噬细胞提高iNOS活性和NO的生成。提示LTN的免疫调节作用机制可能与LTN刺激巨噬细胞NO生成有关。     

丹皮总苷的抗炎免疫作用及部分机制研究

目的　研究丹皮总苷 (TGM)对佐剂性关节炎 (AA)大鼠抗炎免疫作用及其作用机制。方法　观察AA大鼠灌胃(ig)给药后继发性炎症反应、免疫功能及前列腺素 (PGE2 )释放水平的变化 ,并检测TGM体外给药对正常及AA大鼠免疫功能的影响。结果　TGM (2 5、5 0与 10 0mg·kg-1ig )对AA大鼠继发性炎症反应 (继发性足肿胀、多发性关节炎、继发炎症反应的踝关节病理组织学改变 )有明显治疗作用 ,且以 5 0mg·kg-1·d-1疗效最佳 ,并可使AA大鼠萎缩的胸腺器官重量恢复至正常。TGMig对AA大鼠低下的ConA诱导的增殖反应和IL 2产生以及对AA大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)过高的IL 1和PGE2 产生有明显的抑制作用。体外培养发现 ,TGM对LPS诱导正常大鼠PMΦ产生IL 1具有低浓度 (0 4～ 10mg·L-1)促进和高浓度 (5 0～ 2 5 0mg·L-1)抑制的双向作用 ,对PMΦ产生PGE2 呈浓度依赖性地升高 ,其中IL 1产生曲线的下降支与PGE2 释放曲线两线呈负相关 (r =- 0 998,P <0 0 5 ) ;同时发现TGM在 10～ 2 5 0mg·L-1范围内能显著降低AA大鼠PMΦ产生IL 1和PGE2 ,同时显著升高AA大鼠脾淋巴细胞ConA增殖反应和IL 2产生。结论　TGM具有抗炎和剂量依赖性的免疫调节作用 ,并具有双向调节免疫细胞功能的特征 ,通过抑制细胞免疫功能实现对AA大鼠的治疗作用     

花色素苷诱导小鼠巨噬细胞一氧化氮生成及其机制

目的研究花色素苷对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)合成的诱导作用及其机制。方法用CCK-8试剂检测花色素苷对小鼠脾细胞增殖的影响;硝酸盐还原酶法检测小鼠腹腔巨噬细胞NO含量;荧光法检测一氧化氮合酶(NOS)活性;RT-PCR检测iNOS mRNA的表达。结果花色素苷可促进小鼠脾细胞增殖,诱导小鼠腹腔巨噬细胞合成NO,提高NOS活性,其中矢车菊素-3-葡萄糖苷能够诱导iNOS mRNA的表达。结论花色素苷能够促进脾细胞的增殖,诱导小鼠腹腔巨噬细胞合成NO,使巨噬细胞激活,具有一定的免疫调节活性。     

吲哚硒对免疫性肝损伤小鼠一氧化氮和炎性细胞因子的影响

目的　研究吲哚硒(IND -Se)对免疫性肝损伤小鼠的影响。方法　建立BCG+LPS诱导免疫性肝损伤小鼠模型,分光光度法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotrans ferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotrans ferase,AST)活性,Griess法检测血清中NO水平,放免法检测TNF α含量, MTT法检测腹腔巨噬细胞培养上清液中IL 1水平。结果　IND Se(5、10、20mg·kg-1 )灌胃给药可明显降低血清中ALT、AST活性,减轻肝组织坏死范围及程度,减少炎细胞浸润;进一步研究发现IND Se可降低血清中升高的NO和TNF -α水平,抑制免疫性肝损伤小鼠腹腔巨噬细胞TNF -α和IL-1的产生。结论　IND Se可减轻免疫性肝损伤小鼠的病理改变,其机制与降低血清NO和TNF- α水和抑制腹腔巨噬细胞炎性细胞因子的产生有关。     

雷公藤多甙抑制小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮

雷公藤多甙（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｓｉｄｅｏｆＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍｗｉｌｆｏｒｄｉＨｏｏｋ．ｆ．,ＴＷＰ）临床广泛用于治疗类风湿性关节炎等多种自身免疫性疾病,既可抑制细胞免疫又可抑制体液免疫［１］．但其在免疫抑制过程中对一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的影响却...     

灵芝多糖肽对氧自由基损伤巨噬细胞的保护作用

目的:研究灵芝多糖肽(GLPP)在离体和整体水平对氧自由基(ROS)(tBOOH为氧化剂)损伤巨噬细胞的保护作用.方法:以tBOOH为氧化剂损伤小鼠腹腔巨噬细胞,以MTT法分析小鼠巨噬细胞存活率,在光镜和电子显微镜下观察细胞的形态改变.结果:GLPP50,100,200 mg/kg腹腔注射5天,能抑制巨噬细胞膜样变性和坏死,细胞存活率提高.在培养的巨噬细胞中加入 GLPP 3.125,12.5,50,200 mg/L,产生相似的保护作用.电镜观察发现,GLPP(100mg/kg)腹腔注射5天可保护细胞器如线粒体免受tBOOH的损伤.结论:GLPP有显著的清除氧自由基和抗氧化作用.     

褪黑素抑制一氧化氮生成在小鼠免疫性肝损伤中的意义

目的探讨褪黑素（ＭＴ）抑制一氧化氮生成与保护免疫性肝损伤的关系。方法用短小棒状杆菌和脂多糖诱导小鼠免疫性肝损伤模型；分离、培养肝细胞和腹腔巨噬细胞；检测一氧化氮（ＮＯ）、丙氨酸氨基转换酶（ＡＬＴ）、丙二醛（ＭＤＡ）和谷胱甘肽过氧化酶（ＧＳＨ ｐｘ）变化。结果ＭＴ在０１～１０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１浓度范围内，明显降低小鼠免疫性肝损伤中ＭＬＴ和ＭＤＡ水平，部分恢复ＧＳＨ ｐｘ活性（Ｐ＜００５～００１），同时血浆ＮＯ水平下降（Ｐ＜００５）。左旋单甲基精氨酸则在显著降低血浆ＮＯ水平（Ｐ＜００１）同时，肝损伤征象加重。体外用ＭＴ对肝细胞和巨噬细胞无明显影响。结论褪黑素抑制体内ＮＯ过度生成，有利于保护免疫性肝损伤。     

双环醇对脂多糖诱导巨噬细胞iNOS蛋白的表达和NF-κB活化的抑制作用

目的炎症是肝炎病毒或其它因素所致的肝损伤的一个共同特征,该文目的系研究抗肝炎新药双环醇对与炎症反应相关分子的调节作用。方法以无毒性浓度双环醇预先与巨噬细胞株RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞温孵1h后,加入一定量脂多糖(LPS)共同培养适当时间以诱导上述细胞的活化,培养上清中NO2-的含量和TNF-α的水平分别用Griess试剂及L929细胞株生物法测定,用Westernblot方法测定iNOS蛋白的表达和NF-κB的活化。结果双环醇在0.1～0.5mmol.L-1剂量依赖性降低1mg.L-1LPS引起的RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放以及TNF-α的分泌,双环醇0.5mmol.L-1能够明显抑制1mg.L-1LPS引起的iNOS蛋白的表达和NF-κB的活化。结论双环醇对与炎症相关的调控因子iNOS蛋白的表达和NF-     

Salvianic acid A inhibits induction of inflammatory mediators by blocking Nuclear Factor-kB activation in macrophages

Objective To investigate the anti-inflammation effect and possible mechanism of Salvianic acid A (SAA) in mouse peritoneal macrophages. Methods Peritoneal macrophages were obtained from BALB/c mice. LPS induced nitric oxide (NO), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) in supernatant, protein expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS), matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and activation of nuclear factor-kappa B (NF-kB) in the extract were measured. Results SAA strongly inhibited the excessive production of NO, TNF-α and IL-6 in LPS-induced peritoneal macrophages in a concentration-dependent manner and blocked the expression of iNOS and MMP-9. Treatment with LPS alone increased the translocation of NF-kB (1065) from cytosol to the nucleus, but the SAA inhibited the translocation of NF-kB (p65). Conclusions The results showed that SAA had strong anti-inflammatory effects in LPS-stimulated peritoneal macrophages. The important mechanism is due to its inhibition of NF-kB activation.     

草乌甲素对Balb/c小鼠的部分免疫功能的抑制作用

目的:研究草乌甲素对Balb/c小鼠部分免疫功能的影响。方法:Balb/c小鼠随机分为空白对照组、草乌甲素3个剂量(0.08、0.16、0.32 mg·kg~(-1),肌注7d)组、氢化可的松组(阳性对照药,10mg·kg~(-1))。小鼠d7处死,检测药物对小鼠胸腺指数、脾脏指数的影响;测定小鼠T、B淋巴细胞转化功能;酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清总IgG水平;中性红比色法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;硝酸还原酶法测定巨噬细胞培养上清一氧化氮(NO)水平。结果:草乌甲素0.32 mg·kg~(-1)能抑制致裂原刺激T、B淋巴细胞增殖(P<0.01),降低腹腔巨噬细胞培养上清中NO水平(P<0.05)。草乌甲素(0.16、0.32 mg·kg~(-1))降低小鼠的胸腺指数,降低小鼠血清中总IgG水平(P<0.05,P<0.01),草乌甲素还能抑制腹腔巨噬细胞吞噬功能(P<0.05,P<0.01)。结论:草乌甲素对Balb/c小鼠的免疫功能有一定的抑制作用。     

Liposomal Induction of a Heat-stable Macrophage Priming Factor to Induce Nitric Oxide in Response to LPS

Purpose. The effects of liposomes on nitric oxide (NO) production from mouse peritoneal macrophages following intraperitoneal injection of liposomes were investigated. Methods. Mouse peritoneal macrophages were collected following intraperitoneal injection of liposomes and cultured with and without lipopolysaccharide (LPS). Peritoneal washing fluid was also collected from the mice injected with liposomes. NO production was evaluated by measuring the concentration of nitrite in the macrophage culture supernatant by Griess reagent. Results. NO production stimulated by LPS was observed in peritoneal macrophages obtained from the liposome-treated mice, but liposomes did not activate macrophages directly to induce NO in response to LPS. NO production was higher in the liposomes composed of phospha-tidylcholine than that of negatively charged liposomes composed of phosphatidylserine. Peritoneal washing fluid obtained from mice injected with liposomes has a capacity to induce NO production in the macrophages from naive mice. This capacity was not diminished by heat-treatment at 100°C for 5 min. Conclusions. Peritoneal macrophages were activated to produce NO in response to LPS following intraperitoneal injection of liposomes. They did not activate macrophages directly, and the induction of heat-stable macrophage priming factor, but not cytokines, is suggested.     

吡格列酮对脂多糖诱导星形胶质细胞诱导型一氧化氮合酶表达的抑制作用

目的 研究吡格列酮(Pio)对脂多糖 (LPS) 诱导星形胶质细胞(AC)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的抑制作用及其作用机制。方法 AC分别加入Pio 0.1, 1.0和10.0 μmol·L^-1, c-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125 20.0 μmol·L^-1, p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580 20.0 μmol·L^-1或过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制剂GW9662 10.0 μmol·L^-1,1 h以后加入LPS 10.0 mg·L^-1, 继续作用24 h。Griess法测定培养AC上清液中一氧化氮(NO)含量。免疫印迹法和免疫荧光法检测iNOS的表达水平。结果 与正常对照组相比,LPS 10.0 mg·L^-1组iNOS表达水平和NO分泌水平均显著增高(P<0.01)。Pio 0.1, 1.0和10.0 μmol·L^-1可明显抑制LPS诱导的iNOS表达上调及NO分泌增加(P<0.05),Pio 10.0 μmol·L^-1组iNOS蛋白表达水平由LPS组1.711±0.283下降到0.157±0.082(P<0.01),NO分泌量由LPS组(16.63±2.25)μmol·L^-1下降到(6.92±1.30)μmol·L^-1(P<0.01)。GW9662 10.0 μmol·L^-1可抑制Pio 1.0 μmol·L^-1的上述作用,iNOS蛋白表达水平由Pio 1.0 μmol·L^-1组0.562±0.100增加到0.847±0.088(P<0.01),NO分泌量由(9.27±1.23)μmol·L^-1增加到(15.54±2.30)μmol·L^-1(P<0.01)。SB203580 20.0 μmol·L^-1和SP600125 20.0 μmol·L^-1的作用与Pio作用相似,使iNOS蛋白表达水平降低到0.434±0.082和0.434±0.076,NO分泌量下降到(11.53±2.40)μmol·L^-1和(8.81±0.58)μmol·L^-1;而单独应用SB203580 20.0 μmol·L^-1和SP600125 20.0 μmol·L^-1对AC的iNOS表达和NO分泌没有影响。结论 Pio能通过抑制LPS诱导的大鼠皮质AC的iNOS表达,从而减少NO的分泌,这种抑制作用可能与其激活PPARγ和阻断JNK和p38MARK信号转导通路有关。