炮制对附子减毒变化及氯仿致颤作用的比较研究

目的：探讨附子炮制前后生物碱变化情况与毒性变化及对小鼠氯仿致颤作用的抑制作用。方法：通过对附子生、炮品及提取生物碱急性毒性实验及相应氯仿致颤实验探讨炮制过程中附子化学成分变化的同时对其毒性和相关药效的影响作用。结果：炮制在导致化学变化的同时引起毒性下降,同时对氯仿致颤的抑制作用也相应减低。结论：附子在炮制过程中发生了化学成分的变化导致毒性下降,并且对氯仿致颤的抑制作用也相应下降。     

民族药铁棒锤炮制减毒原理初步研究

目的:研究铁棒锤不同炮制方法的炮制减毒原理。方法:采用高效液相色谱法和急性毒性试验比较铁棒锤炮制前后化学成分和毒性的变化。结果:生品中的主要毒性成分为乌头碱、去氧乌头碱和3-乙酰乌头碱,炮制品中这3种生物碱的含量降低,苯甲酰乌头原碱的含量增加,新出现了polyschistine-D,beyzoyldeoxyaconine,16-epi-pyroaconitine,16-epi-pyrodeoxya-conitine等生品中所不含的生物碱,从结构上分析,这些新增的成分由乌头碱等毒性成分转化而来。结论:铁棒锤的炮制减毒原理与乌头碱等有毒成分通过酯键水解和高温热解的方式转化成毒性小的成分有关,不同炮制方法均能够达到减毒的目的。     

市售乌头炮制品种中的乌头总碱、酯型生物碱、乌头碱的含量检查

川乌、附子、草乌[3]等均为毒性较大的中药,其毒性主要由乌头碱类生物碱引起。人口服乌头碱0.2mg可引致中毒,乌头碱的致死量为3~4mg。故临床一般不提倡服用生品,一般服用炮制品,通过炮制可以使药材中乌头碱类生物碱含量会降低十倍,毒性也明显降低(苯甲酰乌头胺毒性即降低约仅为乌头碱的1/200,而乌头胺的毒性更小,仅为乌头碱的1/2000左右)。常见的炮制品种主要有制川乌、制草乌、制附子等等。如今,市面上存在的有关乌头类炮制品种繁多,各个品种的产地,炮制工艺,品次均有不同,我们对流通于长沙药材市场的各种乌头类炮制品种中的乌头总碱、酯型…     

附子毒性研究进展

附子具有回阳救逆、散寒止痛之功效,在临床上应用广泛,在治疗重症疾病中疗效独特.但附子毒性较大,具有明显的心脏毒性和神经毒性,其毒理学机制主要是影响电压依从性Na+通道、神经递质的释放和受体的改变、促进脂质的过氧化和心脏、肝或者其他组织的细胞凋亡.附子主要通过配伍、炮制等方式降低毒性,除传统的炮制方法外,许多现代新的炮制工艺的出现,能更好的达到减毒增效的目的.为了进一步开发其药用价值,减少临床应用中的毒副反应,该文通过有关附子毒性的报道,并结合作者的实验研究,对附子的毒性特点、作用机制及减毒方法等予以综合述评.     

中药炮制与毒性(副作用)的关系研究

中药炮制是祖国医药学遗产中的一个重要组成部分。现代实验研究明确地揭示了中药炮制可使毒性成分降低或减少这一原理 ,下面就对其做一简述。1　对生物碱类药物的影响如附子、乌头所具有的有效成分为乌头碱 ,但引起中毒或死亡的成分也是乌头碱 ,尤其是对酯型乌头碱毒性最强 ,但这一成分的性质不稳定 ,遇水或遇热易水解或分解 ,转化为毒性较低的乌头次碱和乌头原碱 ,所以临床将乌头、附子经炮制和长时间的煎煮后使乌头碱水解为乌头原碱 ,毒性大大降低 ,但强心镇痛抗风湿局麻作用基本保持不变 ,取得了显著成效。2　对含挥发油药物的影响如苍术…     

附子中乌头碱对大鼠心功能效-毒剂量关系测定

目的:动态观察乌头碱的心脏毒性与强心作用.并计算其毒理学参数与药效学参数,评价其使用的安全性,为其临床应用提供实验依据.方法:以大鼠Ⅱ导联心电图变化为指标,经大鼠股静脉缓慢恒速推注乌头碱,连续观察大鼠心电图变化,动态观察乌头碱对心脏毒性的量-毒关系;选用钙离子拮抗剂尼莫地平复制大鼠心衰模型,经大鼠股静脉缓慢恒速推注乌头碱,以心率、左心室内压最大上升速率(+ dp/dtmax)和反映心脏做功的指标率压积(RPP)为指标,动态观察乌头碱的强心作用.结果:以RPP,+dp/dtmax为指标计算乌头碱的50％最大效应量(ED50),以室性早搏(PVC),停搏(CA)为指标计算乌头碱的半数中毒量(TD50)、半数致死量(LD50),则乌头碱的治疗指数(TI,按RPP计算)分别为1.84,17.22,TI(按+dp/dtmax计算)分别为1.23,11.54.结论:乌头碱具有强心作用,但也具有心脏毒性,安全范围狭窄.     

脑心康片对大鼠脑缺血保护机制的研究

目的 观察脑心康片对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,进一步探讨其作用机制.方法 采用大鼠大脑中动脉线栓法制备不完全脑缺血模型,观察脑心康片给药前后大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠神经功能缺损导致的行为学变化;流式细胞术检测脑心康片对MCAO模型大鼠急性脑损伤细胞凋亡的影响;免疫组织化学法检测脑心康片对脑缺血后24,48,72 h脑组织COX-2蛋白表达的影响.结果 大鼠脑缺血再灌注损伤后24,48,72 h脑组织中COX-2阳性细胞平均灰度值及神经元细胞凋亡率模型组与假手术组相比,差异有显著意义(P<0.01);给药后脑心康高、中、低剂量组与银杏叶片组相比,差异有显著意义(P<0.01或P<0.05);给药后脑心康高、中、低剂量组与尼莫地平组相比,差异有显著意义(P<0.01或P<0.05).结论 脑心康片对脑缺血具有保护作用,并遵循一定的时效关系和量效关系,其机制可能与降低缺血脑组织神经元的凋亡率,抑制COX-2蛋白的表达有关.     

基于中药模拟炮制的乌头属植物水解机制及液质联用测定方法的研究进展

生物碱是大多数乌头属药用植物的主要有效成分,具有较高的药理活性和药用价值,但也是其主要的毒性成分,为便于对乌头属植物水解产物的深入研究,主要从中药模拟炮制现状、乌头属植物所含的生物碱种类、水解机制研究现状及液质联用方法几个方面进行综述。     

基于UPLC-MS/MS探讨“建昌帮”阴附片、阳附片、淡附片炮制过程化学成分差异研究

该文比较建昌帮阴附片、阳附片、淡附片3种附子炮制品在炮制过程中化学成分的变化，从成分角度为炮制减毒增效作用机制提供科学依据。分别对3种附片的炮制过程进行过程性取样，得到生附片、阴附片清水漂制(阴漂制)、阴附片姜汁润(阴姜润)、阴附片蒸制(阴蒸制、阴附片)、阳附片清水漂制(阳漂制)、阳附片砂炒(阳砂炒、阳附片)、淡附片清水漂制(淡漂制)、淡附片米泔水漂制(淡米泔水漂)、淡附片烤制(淡烤制、淡附片)样品，经UPLC-MS/MS检测提取液中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头碱、乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱、去甲猪毛菜碱、附子灵、去甲乌药碱的含量，再针对11组样品进行含量分析及聚类热图分析。3种饮片炮制过程中，漂制可大幅度降低附子中12种生物碱的含量；蒸制、炒制和烤制可显著降低双酯型生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱)含量，显著提高单酯型生物碱(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)、胺醇型生物碱(乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱)的含量。阴附片在炮制过程中，双酯型生物碱持续降低，单酯型生物碱、胺醇型生物碱呈现先降低后上升；阴附片、阳附...     

附子在炮制中主要生物碱含量变化的研究

目的比较两种不同炮制方法对附子中生物碱含量的影响,并对陕西省周至人处理附子的科学性进行证明。方法采用酸碱滴定法测定总生物碱量,并采用一阶导数光谱法测定附子中3种主要生物碱的含量。结果煎煮可以减小附子中生物碱的含量,但变化很小;但与甘草合煎后生物碱总量及乌头碱、次乌头碱及新乌头碱等3种主要生物碱含量均显著降低,其中主要毒性物质乌头碱的含量减小了约64%。结论该研究对周至人大量食用附子而不中毒的现象进行了理论解释,并为附子的临床应用提供科学依据。     

应用UPLC-Orbitrap-MS分析草乌及其不同炮制品化学成分差异

草乌是有毒药之一,需经过炮制后方能使用。中药中草乌常用的炮制方法为水煮至内无白心,口尝微有麻舌感,蒙古族药中常用诃子制草乌,2种方法均能减毒。该实验利用UPLC-Orbitrap-MS对生草乌、药典法制草乌、诃子制草乌进行分析,比较炮制前后化学成分变化,为阐明诃子制草乌炮制减毒原理提供依据。通过比对生草乌与各炮制品的正负离子模式离子流出峰分析草乌炮制前后成分变化情况,并以化合物炮制前后离子峰面积比为炮制前后变化指数,将草乌主要活性成分经2种炮制方法炮制后的含量变化趋势进行对比,发现生草乌经药典法炮制后,新增14-O-anisoylneoline,dehydro-mesaconitine等14种成分,同时N-demethyl-mesaconitine,aconitine消失,且双酯型生物碱含量明显减少,单酯型和醇胺型生物碱含量明显增加,说明药典法制草乌是通过降低主要毒性成分双酯型生物碱的含量来减毒的;草乌经诃子汤炮制后,原草乌中含有的生物碱类化学成分变化较小,新增gallic acid,chebulic acid,shikimic acid等9种诃子中含有的化学成分,猜测诃子制草乌的减毒机制可能与诃子中化学成分有关。该研究结论表明药典法制草乌与诃子制草乌中化学成分有质的不同,二者具有不同的减毒原理。     

丹参酮ⅡA通过Fas/FasL途径抑制海水诱导的人肺泡上皮细胞凋亡

目的研究海水对人肺泡上皮A549细胞凋亡的影响,探讨海水诱导A549细胞凋亡的机制及丹参酮ⅡA的保护作用。方法实验分为空白对照组、海水浸泡组和丹参酮ⅡA干预(25μg/m L)组,以40%海水浸泡A549细胞6 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,利用流式细胞术检测凋亡率,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)分析Fas L、Fas和cleaved caspase-8蛋白表达。结果与对照组相比,在海水作用下A549细胞凋亡率明显增加(P<0.01),同时Fas L、Fas和cleaved caspase-8蛋白表达也显著上调,加入丹参酮ⅡA后,细胞凋亡明显减少(P<0.01),Fas L、Fas和cleaved caspase-8蛋白表达相应下调。结论海水可导致人肺泡上皮A549细胞凋亡,其诱导凋亡的机制与Fas/Fas L介导的死亡受体信号途径有关,丹参酮ⅡA可通过此途径抑制海水诱导的A549细胞凋亡。     

活血化瘀“生新层面”之“化旧生新”法干预细胞凋亡机制研究

目的：探讨活血化瘀＂生新层面＂之＂化旧生新＂干预细胞凋亡的机制。方法：清洁级SD成年雄性健康大鼠采用Oli-vette[5]方法建立AMI模型,造模24 h后存活大鼠随机分成5组,活血化瘀高剂量组：血塞通600 mg.kg-1灌胃;活血化瘀中剂量组：血塞通400 mg.kg-1灌胃;活血化瘀低剂量组：血塞通200 mg.kg-1灌胃,模型组和假手术组：生理盐水10 mL.kg-1,连续灌胃15 d,每天1次,直到每组处死动物前保证8只存活大鼠,采用免疫组化法检测梗死边沿区Bax和Bcl-2蛋白表达、蛋白caspase-3的表达和采用TUNEL染色检测梗死边沿区心肌细胞凋亡的变化。结果：活血化瘀高、中剂量组与模型组明显下调Bax蛋白表达（P〈0.05）,上调Bcl-2蛋白表达（P〈0.05）。模型组与假手术组相比Bax蛋白阳性表达有所升高,Bcl-2蛋白表达有所下降（P〈0.05）;活血化瘀高、中剂量组与假手术组和模型组比较,能明显抑制大鼠缺血后心肌细胞凋亡（P〈0.05）。模型组大鼠急性心肌梗死边沿区蛋白caspase-3呈现过度表达,活血化瘀高、中剂量组与模型组比较能明显抑制caspase-3的表达,有显著意义（P〈0.05）。结论：活血化瘀生新层面之＂化旧生新＂作用机制可能与其通过多靶点抑制心肌细胞凋亡、多途径降低细胞凋亡指数有关,从而发挥保护心肌作用。     

熊果酸对乳腺癌细胞caspase-3和PARP表达的影响

目的:探讨三萜类中药成分熊果酸(UA)诱导乳腺癌细胞MCF-7的凋亡作用,并通过分析UA作用后MCF-7细胞的caspase-3和多聚ADP核糖多聚糖(PARP)蛋白表达的变化,探讨其诱导MCF-7细胞凋亡的分子机制。方法:采用细胞培养技术,用不同浓度的药物在一定的时间内处理细胞株,采用MTT法、活细胞原位光镜和荧光染色技术、流式细胞技术(FCM)、荧光免疫组织化学技术,图象分析技术,研究UA对caspase-3和PARP蛋白表达的影响,诱导细胞凋亡的作用。结果:UA剂量依赖性的抑制MCF-7细胞增殖,半数生长抑制剂量(IC₅₀)为(22.6±3.0)μmol.L^-1,诱导caspase-3和PARP表达增加,使细胞呈现典型的凋亡形态学特征,核质浓集,有凋亡小体。结论:UA诱导MCF-7细胞凋亡,其机制涉及到caspase-3和PARP依赖性凋亡调节信号通路。     

薯蓣皂苷的次皂苷元B（DRG）体外诱导人大肠癌HCT-15细胞凋亡的机制研究

 目的 探讨中药单体薯蓣皂苷的次皂苷元B(DRG)体外诱导HCT-15细胞凋亡的分子作用机制。方法 采用Western blotting、体外Bcl-xL蛋白竞争结合检测实验及逆转录PCR（RT-PCR）对DRG诱导细胞凋亡的机制进行了研究。结果 在HCT-15细胞中,DRG促发了线粒体调控的凋亡途径,细胞色素c呈时效性地从线粒体中释放到胞质中,同时Bax与Bcl-2蛋白表达的相对比例上调,caspase-9、caspase-3和PARP等被剪切成具有活性的片段,但是caspase-7却未见剪切,同时还不影响P53和Bcl-xL的表达;而与死亡受体途径相关的FADD表达无明显变化,caspase-8酶原也未见剪切;另外,DRG也不抑制BH3短肽与Bcl-xL的结合;RT-PCR检测结果表明,DRG诱导HCT-15细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA水平的改变,进而导致Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达水平则明显增加,说明DRG诱发的细胞凋亡中涉及到Bcl-2和Bax基因水平的变化。结论 DRG诱发HCT-15细胞凋亡的分子机制在于从基因水平影响Bax和Bcl-2靶基因的转录表达,上调Bax/Bcl-2蛋白表达水平比例,并最终通过激活经典的线粒体途径而不是死亡受体途径来发挥其HCT-15细胞凋亡诱导作用,且对P53呈非依赖型。     

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??OBJECTIVE To observe the effect of Biochanin A (Bio A) on rat hippocampal neurons injuries impaired by H₂O₂ and Bcl-2, Bax and caspase-3 protein expression. METHODS Hippocampal neurons of newly born rat were cultured in vivo and were injured by H₂O₂. Different concentration of Bio A on cell viability was measured by CCK-8; cell apoptosis rate was tested by flow cytometry analysis; Bcl-2, Bax and caspase-3 protein expression were tested by Western blot method. RESULTS Compared with the model group, Bio A significantly improved hippocampal neurons cell viability and inhibited cell apoptosis and necrosis. In addition, Bio A clearly enhanced the protein expression of Bcl-2 and decrease the protein expression of Bax and caspase-3. CONCLUSION The protective effect of Bio A on rat hippocampal neurons injuries impaired by H₂O₂ may be related to the inhibition of hippocampal neurons apoptosis. The mechanism of Bio A against cell apoptosis may involve the increased Bcl-2 protein expression and reduced Bax,caspase-3 protein expression.     

心脑舒通胶囊对大鼠缺血再灌注脑损伤后细胞凋亡的影响

目的:探讨心脑舒通胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,及其对凋亡调控因子蛋白表达的影响。方法:采用线栓法阻塞大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO),24 h后断头取脑,免疫组织化学法测定大脑皮层中Bax,Bcl-2,Fas,Fas-L以及caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测皮层区神经细胞凋亡。结果:缺血再灌注模型组大脑皮层内Bax,Fas,Fas-L和caspase-3蛋白明显升高,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax明显降低,与假手术组比较,均有显著性差异(P<0.01)。心脑舒通胶囊能明显降低缺血侧大脑皮层内Bax蛋白表达,增加皮层内Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax;减少皮层内Fas和Fas-L蛋白表达,降低皮层内caspase-3蛋白和基因表达,显著减少凋亡的神经细胞数量,与模型组比较,有统计学意义(P<0.01)。结论:心脑舒通胶囊保护受损的脑组织,其机制可能与降低脑组织神经细胞凋亡,调节凋亡调控因子的蛋白表达有关。     

槲皮素对人脐静脉血管内皮细胞的OGD损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨槲皮素(Quercetin,Que)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的缺糖缺氧(OGD)损伤的保护作用及机制研究。方法:当HUVECs进行培养达到密度为80%~90%时,对HUVECs进行NO处理,时间为24h,形成OGD损伤的HUVECs模型。用不同浓度的槲皮素进行处理干预,对进行实验的HUVECs分4组,分别为空白组、OGD组、Que 5μmol/L组、Que 15μmol/L组。进行6h的HUVECs正常培养,进行噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVECs活性,用于表达药物抑制率。对HUVECs的生命力强度用荧光素双醋酸酯染色(FDA)来检测。针对HUVECs内有关凋亡的基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达量,通过Western Blot法实验得出的蛋白表达量条带,进行分析,从而得出凋亡基因的表达影响。通过荧光定量PCR法检测各组HUVECs内凋亡基因的表达,对数据进行处理,从而得出HUVECs凋亡基因在不同浓度的槲皮素干预下的表达水平。结果:槲皮素可以通过调节HUVECs上的凋亡基因的表达量,改变受损HUVECs的存活率(P<0.01),槲皮素组、空白组与OGD组进行比较得出,槲皮素对凋亡基因的影响,通过上调Bcl-2基因的表达(P<0.01),下调Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的基因活性水平,从而减少HUVECs凋亡率(P<0.01)。而且槲皮素浓度的不同,对HUVECs凋亡的保护程度也是不同的。结论:槲皮素对OGD损伤的HUVECs具有保护作用其机制可能与槲皮素可上调Bcl-2,下调Bax、Caspase-3、Caspase-9基因有关。     

赤芍总苷非受体依赖途径诱导K562肿瘤细胞凋亡及相关基因变化的实验研究

目的:研究赤芍总苷诱导K562肿瘤细胞凋亡的信号途径及相关基因变化。方法:通过MTT,流式细胞仪,实时定量PCR,Western-blot等方法研究caspase-3 mRNA,caspase-9 mRNA,caspase-8 mRNA,细胞色素C,Bcl-2,Bcl-Xl,Bax蛋白水平的表达。结果:MTT法显示赤芍总苷可抑制K562细胞生长,具有量效-时效关系,caspase-3 mRNA,caspase-9 mRNA增加,细胞色素C含量增加,caspase-8 mRNA无显著变化。调节基因蛋白表达也有所变化,Bcl-2,Bcl-Xl下调,Bax上调。结论:TGC主要通过线粒体途径,当细胞受到死亡信号刺激,与Bcl-2或Bcl-Xl蛋白相结合的Bax蛋白就会被置换出来,线粒体膜通透性增加,释放出一系列物质,导致K562肿瘤细胞凋亡。     

双氢青蒿素通过调节凋亡相关蛋白的表达及活性氧的产生而抑制胰腺癌JF-305细胞的增殖

探讨双氢青蒿素诱导人胰腺癌JF-305细胞凋亡作用及活性氧在双氢青蒿素诱导JF-305细胞凋亡中的作用。采用MTT法考察不同浓度双氢青蒿素对人胰腺癌JF-305细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期,Hochest 333258荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V荧光染色法检测JF-305细胞凋亡的变化,DCFH-DA检测凋亡过程中活性氧(ROS)的变化。Western blot检测细胞内Bax,Bcl-2,Cleaved caspase-3,Cleaved caspase-9和Cyto C蛋白表达的变化。与对照相比,双氢青蒿素作用JF-305细胞48 h,细胞增殖受到明显抑制(P0.05);细胞被阻滞于G2/M期;细胞出现核浓缩聚集、碎裂的凋亡形态,细胞凋亡比例升高(P0.05);DCFH-DA检测双氢青蒿素给药组细胞ROS明显升高(P0.05);Western blot结果显示,双氢青蒿素作用后细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,Cleaved caspase-3,Cleaved caspase-9和Cyto C蛋白表达升高。双氢青蒿素能诱导JF-305细胞凋亡,其凋亡过程可能与ROS的生成增加相关。