蛇葡萄素对K562/ADR细胞耐药性的逆转作用及机制研究

目的:研究蛇葡萄素与阿霉素合用对人白血病多药耐药细胞株K562/ADR增殖的抑制作用及其机制.方法:MTT法测定蛇葡萄素与阿霉素合用对K562/ADR细胞的细胞毒作用,应用金正均公式进行联合用药效果分析;藻红蛋白标记抗体检测蛇葡萄素对K562/ADR细胞膜表面P-糖蛋白表达的影响;流式细胞术测定蛇葡萄素对K562/ADR细胞内阿霉素累积的影响.结果:1.25～5 mg·L~(-1)的蛇葡萄素能够明显逆转K562/ADR细胞对阿霉素的耐药性.1.25 mg·L~(-1)蛇葡萄素与低浓度阿霉素合用可表现出拮抗效应,而浓度在2.5 mg·L~(-1)以上的蛇葡萄素与阿霉素合用可表现出相加至协同效应.蛇葡萄素能够浓度依赖性减少K562/ADR细胞膜P-糖蛋白表达,增加细胞内阿霉素的浓度.结论:蛇葡萄素能通过抑制P-糖蛋白外排药物,促进抗癌药物在细胞内的累积,增强抗癌药物对耐药细胞的细胞毒作用,逆转肿瘤多药耐药.     

三根制剂对MDR细胞株逆转的研究

目的：研究三根制剂对多药耐药（MDR）细胞株的逆转作用。方法：应用MTT比色法，观察三根制剂时MDR细胞的逆转作用，运用流式细胞仪(FCM)，测定其对耐药细胞积聚和外排阿霉素（ADR）的影响。结果：三根制剂可部分恢复K562/ADR和K562/VCR耐药细胞时ADR的敏感性，而对VCR抗药性的逆转作用不明显；可增加K562/ADR和K562/VCR耐药细胞内ADR的积聚，并对外排ADR有一定影响。结论：三根制剂可部分逆转耐药细胞的抗药性。     

6种中药活性成分对K562/ADM耐药性逆转及P27和P170蛋白表达影响

目的观察中药活性成分对白血病K562/ADM耐药细胞逆转及P27和P170蛋白表达的影响,探讨其可能作用机制。方法选用补骨脂素、苦参碱、槲皮素、姜黄素、川芎嗪、大黄酸6种中药单体成分作为研究对象,MTT比色法测定6种中药成分对K562/ADM耐药细胞的增殖抑制作用,高效液相色谱法检测细胞内阿霉素的质量浓度,流式细胞术检测K562/ADM耐药细胞中P27和P170蛋白表达。结果 6种中药活性成分逆转耐药倍数在6.99~10.59之间,K562/ADM耐药细胞中阿霉素积累比率为(11.6±3.7)~(17.7±2.8);对照组P27和P210蛋白的表达率分别为(33.1±2.1)和(6.51±1.33),K562/S和K562/ADM耐药细胞的P27和P210相关蛋白表达率分别在(54.2±3.5)~(72.1±4.2)和(6.21±1.35)~(6.59±1.48)之间。结论 6种中药活性成分具有不同程度的逆转耐药细胞作用,且影响耐药细胞内化疗药物质量浓度;各中药活性成分具有不同程度抑制K562/ADM耐药细胞中P27蛋白表达作用。     

升血颗粒含药血清对人白血病K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用

目的:观察升血颗粒(PG)含药血清对人白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制。方法:采用MTT法测定细胞的药敏性及耐药逆转性,应用流式细胞仪检测非细胞毒性的含药血清处理后K562/ADR细胞内阿霉素(ADM)的浓度。结果:低、中、高剂量含药血清对K562/ADR细胞无明显细胞毒性。低、中、高剂量含药血清作用后,ADM对K562/ADR细胞的半数抑制浓度(I C50)显著下降,逆转倍数分别为1.34、1.71、1.82倍;ADM外渗试验显示,低、中、高剂量含药血清处理后K562/ADR细胞内ADM浓度显著增加,增加倍数分别为1.41、1.67、2.04倍。结论:升血颗粒含药血清对人白血病K562/ADR细胞耐药性有一定的逆转作用。     

复方三根制剂对MDR细胞株K562/ADR和K562/VCR逆转作用的研究

目的：研究复方中药——复方三根制剂对多药耐药(MDR)细胞株的逆转作用。方法：应用MTT比色法，观察复方三根制剂对MDR细胞的逆转作用。运用流式细胞仪(FCM)，测定其对耐药细胞积聚和外排阿霉素(ADR)的影响，以及对耐药株细胞表达P=gp的影响。结果：复方三根制剂可部分恢复K562／ADR和K562／VCR耐药细胞对ADR的敏感性，而对VCR抗药性的逆转作用不明显；可增加K562／ADR和K562／VCR耐药细胞内ADR的积聚，并对外排ADR有一定影响；可部分下调p-gp的表达。结论：复方三根制剂可部分逆转耐药细胞的抗药性。     

秦巴硒菇提取物联合多柔比星抗白血病K562/ADR细胞多药耐药的机制研究

目的:探讨秦巴硒菇提取物FA-2-b-β联合多柔比星(Adriamycin, ADR)抗白血病K562/ADR细胞多药耐药的协同抗肿瘤机制。方法:通过转录组测序分析筛选白血病敏感细胞K562和耐药细胞K562/ADR中的差异表达基因,分析可能的信号通路;CCK-8法检测K562/ADR细胞的耐药表型及FA-2-b-β对多柔比星的增敏作用;流式细胞术检测不同药物干预后各组细胞的凋亡比例、细胞内多柔比星的荧光强度变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测耐药蛋白、凋亡相关蛋白以及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:与敏感细胞K562相比,K562/ADR细胞的耐药性明显增加,耐药倍数为26.88倍。试验结果表明,与空白对照组相比,FA-2-b-β协同多柔比星对K562/ADR细胞的增殖有明显抑制作用,可显著诱导K562/ADR细胞凋亡,并提高细胞内多柔比星的荧光强度;上调促凋亡蛋白BAD的表达,明显下调耐药蛋白P-gp、抗凋亡蛋白BCL-XL以及p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白的表达(P<0.05)。结论:秦巴硒菇提取物FA-2-b-β联合多柔...     

逆转肿瘤细胞多药耐药性的四物合剂有效组分

目的:研究四物合剂逆转人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药作用的药效活性组分。方法:用大孔吸附树脂分离四物合剂,并用体外细胞模型作药效评价,寻找发现活性部位,再用HPLCMS方法研究活性部位的化学组成,进而确定其主要活性组分。结果:熟地黄粗多糖对K562/ADM的耐药性有明显的逆转作用,其逆转倍数与对照组(无逆转剂)相比有显著差异(P<0.01),并且与主要活性部位的逆转作用无明显差异(P>0.05)。结论:熟地黄粗多糖能逆转K562/ADM细胞的多药耐药性,是四物合剂逆转K562/ADM多药耐药性的主要活性组分之一。     

欧白芷素对K562/A02细胞阿霉素耐药的逆转作用(英文)

目的:探讨欧白芷素对耐药细胞株K562/A02中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multi-drug resistance,MDR)提供新方法。方法:采用MTT法观察阿霉素对细胞活力的影响。应用流式细胞术检测欧白芷素对K562和K562/A02细胞内阿霉素累积和细胞中P-gp功能的影响。采用实时定量RT-PCR技术检测MDR1基因在mRNA表达水平的变化。结果:欧白芷素对耐药细胞株K562/A02有显著的逆转耐药活性,最大逆转倍数为7.36。在K562/A02细胞中,欧白芷素明显增加阿霉素的累积,增加了罗丹明123(rhodaminel123,Rh123)蓄积,抑制了Rh123的外排,同时欧白芷素还在mRNA水平抑制了K562/A02细胞中P-gp的表达。结论:欧白芷素能够抑制K562/A02耐药细胞株中MDR1基因表达和P-gp的功能。     

刺五加体外逆转K562/ADR细胞多药耐药性的初步研究

目的:初步研究刺五加体外对人白血病细胞系K562/S及其多药耐药细胞系K562/ADR的影响,并进一步探讨中药在肿瘤化疗中扶正增效作用的可能途径.方法:以MTT法测定刺五加对K562/S(敏感株)和K562/ADR(耐药株)的直接细胞毒作用;测定柔红霉素(DNR)对细胞的细胞毒作用;测定细胞在不同浓度刺五加作用后DNR的细胞毒性变化;用荧光法测定细胞内药物(DNR)浓度的变化,结果:①刺五加在25μg/ml～200μg/ml～浓度之间对562/S和K562/ADR细胞均无明显的毒性,当浓度大于200μg/ml细胞毒性呈增加的趋势,因此选择50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml为实验浓度进行以下实验.②DNR对K562/S和K562/ADR的半数抑制浓度(IC50)分别为0.087μg/ml和8.36μg/ml,K562/ADR耐药细胞的耐药倍数为96倍.③K562/ADR细胞在50μg/ml、10μg/ml、200μg/ml、200μg/ml刺五加作用24h后可增加DNR对其的细胞毒作用,IC50下降分别为6.874μg/ml,4.028μg/ml及1.978μg/ml.与对照组相比P＞0.05、P＜0.05、P＜0.01);逆转倍数分别为1.22倍、2.08倍、4.23倍.3种浓度的刺五加对K562/S敏感细胞的DNRIC50,也有一定影响,但均无统计学意义(P＞0.05)④刺五加(100μg/ml和200μg/ml)可提高K562/ADR细胞内DNR的含量,从对照组的0.286μg/ml蛋白分别提高到1.045μg/mg蛋白和1.712μg/mg蛋白;与对照组相比均有统计学意义(P＜0.05);但对K562/S细胞无显著影响,且耐药细胞株内DNR的含量亦未恢复到敏感细胞的水平(2.895μg/mg蛋白,P＜0.05).结论:高浓度刺五加有一定抗肿瘤作用,对抗肿瘤化疗有扶正增效作用.     

5种生物碱胃癌多药耐药逆转剂的筛选及机制研究

目的研究骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱对肿瘤细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及机制。方法以胃癌亲本细胞系SGC-7901和MDR细胞系SGC-7901/VCR为细胞模型,采用MTT法检测上述5种生物碱的细胞毒活性及对MDR的逆转效果;用流式细胞仪检测MDR逆转效果最好的贝母素乙对肿瘤细胞内阿霉素(ADR)蓄积的影响;Western blotting法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达;Hoechst荧光染色和细胞免疫荧光法检测贝母素乙诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡情况。结果骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱均能不同程度地抑制SGC-7901和SGC-7901/VCR细胞的增殖,在非毒剂量下贝母素乙能够显著提高SGC-7901/VCR细胞对ADR的敏感性及细胞内ADR的浓度,降低P-gp表达。贝母素乙联合5-氟尿嘧啶(5-FU)给药可诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡,凋亡细胞cleaved caspase-3呈高表达。结论贝母素乙具有作为胃癌MDR逆转剂的潜力,其逆转耐药的机制可能与下调P-gp表达和诱导细胞凋亡有关。     

吴茱萸碱逆转K562/Adr细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对白血病K562细胞及其耐药株K562/Adr的增殖、细胞周期及多药耐药性(MDR)的影响。方法用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测EVO和/或柔红霉素(DNR)对细胞增殖的影响,并计算耐药指数(RI)和逆转倍数(RF);流式细胞仪检测EVO和/或DNR对K562及K562/Adr细胞周期的影响;流式细胞仪检测K562及K562/Adr细胞内DNR的荧光强度;定量PCR检测K562及K562/Adr细胞中MDR1基因的表达;Western blotting检测K562及K562/Adr细胞中MDR1、BCRP蛋白的表达。结果EVO、DNR作用于K562和K562/Adr细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈剂量和时间依赖性;与K562细胞相比,K562/Adr细胞对DNR的RI为30.54,K562/Adr细胞对EVO的RI为19.09。当EVO(0.125 gmol/L)与不同浓度DNR联合作用后,能使DNR对K562/Adr细胞的IC_(50)明显下降,DNR+EVO对K562/Adr细胞的RF为12.07;EVO、DNR单独或联合作用于K562及K562/Adr细胞后,能够使K562/Adr细胞BCRP、MDR1蛋白及mRNA表达水平均明显下降。结论EVO能有效逆转白血病K562/Adr细胞对DNR的耐药现象,而这种作用可能与EVO通过减少细胞膜上多药耐药蛋白MDR1的表达有关。     

三七总皂甙体外逆转K562/VCR细胞多药耐药的实验研究

目的:从中药中寻找安全有效的多药耐药逆转剂,并初步研究三七总皂甙(PNS)对人白血病细胞K562(敏感细胞)及K562/VCR(耐药细胞)的影响.方法:以MTT法测定三七总皂甙注射液对K562及K562/VCR的直接细胞毒作用;测定阿霉素(DOX)对两种细胞的毒性作用并计算出耐药倍数;用流式细胞仪测定PNS作用后敏感细胞和耐药细胞内阿霉素的浓度;以流式细胞仪测定敏感细胞和三七总皂甙作用的耐药细胞表达多药耐药糖蛋白P-gp(P-170)的阳性率.以上实验均用维拉帕米作为阳性对照.结果:①三七总皂甙在300μg/ml浓度以下时对两细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量.②阿霉素对敏感细胞和耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为28.7ng/ml和1141.8ng/ml,耐药倍数为39.7倍.③三七总皂甙能够增强阿霉素(DOX)对K562/VCR的细胞毒作用.④三七总皂甙能够增加耐药细胞K562/VCR细胞内的阿霉素的蓄积浓度.⑤三七总皂甙(200μg/ml)可下调多药耐药基因mdr-1表达的P-gp糖蛋白的量,而未发现维拉帕米的类似作用.结论:三七总皂甙能够部分逆转耐药细胞K562/VCR的多药耐药性.     

四物合剂对人红白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用研究

目的 :观察四物合剂对人红白血病细胞株K5 62 /ADM多药耐药性的逆转作用。方法 :以维拉帕米为阳性对照 ,MTT法观察耐药细胞株K5 62 /ADM的耐药倍数及四物合剂的逆转倍数 ;采用反相高效液相色谱法 (RP-HPLC)检测细胞内的ADM浓度 ;免疫荧光法测定细胞膜P-糖蛋白 (Pgp)表达。结果 :四物合剂和ADM合用时 ,对K562/ADM耐药性的逆转倍数及细胞内的ADM含量比ADM单独使用时明显增高 (P<0.01);但对K562/ADM细胞膜Pgp表达的影响差异不显著 (P>0.05)。结论 :四物合剂在无毒性剂量时能逆转细胞株K562/ADM对ADM的耐药性 ,但对细胞膜Pgp表达影响不大 ,其逆转作用可能与降低Pgp药物外排作用、增加细胞内药物浓度有关。     

大叶蛇葡萄提取物对SMMC-7721细胞增殖抑制作用的研究

目的:研究大叶蛇葡萄叶及嫩茎提取物对SMMC-7721细胞增殖的影响,筛选其有效抗肿瘤活性物质。方法:采用MTT法检测不同质量浓度的大叶蛇葡萄石油醚萃取物部位、乙酸乙酯萃取物部位及水溶性物部位,以及该植物中含有的蛇葡萄素、杨梅素、杨梅苷、大黄素及槲皮素分别作用24、48、72 h后对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用。结果:乙酸乙酯萃取物部位和大黄素均能不同程度地抑制SMMC-7721细胞增殖,乙酸乙酯萃取物部位对细胞的抑制作用在100μg·mL~(-1)时具有一定的时效关系,大黄素对细胞的抑制作用在40、80、160μmol·L~(-1)时也具有一定的时效关系,乙酸乙酯萃取物部位和大黄素作用SMMC-7721细胞72 h的IC_(50)分别为110.81μg·mL~(-1)和53.20μmol·L~(-1)。结论:大叶蛇葡萄提取物具有较好的体外抗肿瘤活性。     

筛选大叶蛇葡萄体外抗肿瘤活性物质

目的研究大叶蛇葡萄提取物对He La细胞增殖的影响,筛选有效抗肿瘤活性物质。方法采用MTT法检测不同质量浓度的大叶蛇葡萄石油醚、乙酸乙酯及水层萃取物和蛇葡萄素、杨梅素、杨梅苷、槲皮素及槲皮苷分别作用于He La细胞24、48、72 h后对细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测蛇葡萄素对细胞周期的影响。结果乙酸乙酯萃取物、蛇葡萄素和杨梅素均有不同程度抑制He La细胞增殖的作用,且在一定剂量范围内,具有时效或量效关系;碘化丙啶单染法显示蛇葡萄素作用He La细胞12 h,G0/G1期细胞比率降低,S期细胞比率增加。结论乙酸乙酯提取物、蛇葡萄素和杨梅素对He La细胞增殖有明显抑制作用,且蛇葡萄素可能通过阻滞He La细胞于S期而诱导细胞凋亡。     

解毒化瘀药逆转白血病K562/A02细胞多药耐药作用的研究

目的:探讨解毒化瘀中药复方含药血清对白血病K562/A02细胞的耐药逆转作用。方法:应用中药血清药理学方法制备解毒化瘀药的兔血清,以MTT法检测经含药血清、干扰素、川芎嗪处理后K562/A02细胞对化疗药物的敏感性;流式细胞仪检测K562/A02耐药细胞内柔红霉素(DNR)的潴留情况。结果:MTT结果显示,3组药物对K562/A02细胞的耐药逆转倍数分别为9.30倍、5.27倍和3.36倍,其耐药逆转率均在70%以上;流式细胞仪检测结果显示3种药物均可明显增加K562/A02细胞内DNR的浓度,解毒化瘀药含药血清作用最强,与川芎嗪组相比具有显著差异(P<0.01),但与干扰素组相比无明显差异(P>0.05)。结论:3种药物均对K562/A02细胞的耐药具有逆转作用,逆转强度依次为解毒化瘀药含药血清、干扰素、川芎嗪。     

西松烷型二萜衍生物的合成及抗肿瘤活性研究

目的基于西松烷型二萜天然产物新巴豆瑞士松酸进行结构修饰,并对得到的衍生物进行体外抗肿瘤活性评价。方法以新巴豆瑞士松酸为起始原料,通过缩合反应、点击化学反应得到目标化合物。采用噻唑蓝(MTT)法考察所合成的目标化合物对HeLa、K562和K562A/02肿瘤细胞的抗增殖活性。结果合成了11个文献未报道的新巴豆瑞士松酸衍生物,其结构经~1H-NMR、~(13)C-NMR及HR-MS确定。活性测试结果表明,部分衍生物表现出一定的抗肿瘤活性,其中,化合物2f对HeLa细胞表现出良好活性,化合物2e对K562和耐药的K562A/02细胞表现出良好活性。结论部分衍生物对耐药的K562A/02细胞表现出抗肿瘤活性,具有进一步研究价值。     

人参皂苷Rh_2抗白血病多药耐药细胞K562/VCR作用研究

目的通过观察人参皂苷Rh2对人白血病多药耐药(MDR)细胞K562/VCR生长、凋亡的作用和逆转耐药的情况,探索该药在抗人白血病MDR方面的应用价值。方法将人参皂苷Rh2与K562、K562/VCR细胞共培养48 h后采用MTT法分析其对细胞生长的抑制率;将其与K562/VCR细胞于37℃孵育30 min后,采用An-nexin V和PI双染法在流式细胞仪上检测细胞凋亡情况;并观察其对K562/VCR细胞摄取柔红霉素(DNR)能力及细胞表面P-糖蛋白(P-gp)表达的影响;在DNR与K562/VCR培养体系中加入不同质量浓度人参皂苷Rh2,孵育48 h后观察人参皂苷Rh2对K562/VCR细胞耐药的逆转情况。结果人参皂苷Rh2可明显抑制K562和K562/VCR细胞的生长,并呈量效关系,人参皂苷Rh2对K562和K562/VCR的半数抑制浓度(IC50)分别为44.5、59.4μg/mL。K562/VCR经人参皂苷Rh2在37℃作用30 min后,细胞的凋亡明显增加,随人参皂苷Rh2质量浓度的增加,凋亡细胞的比例明显增加[人参皂苷Rh2300μg/mL,Annexin V+细胞(51.5±6.9)%]。K562细胞经长春新碱(VCR)诱导耐药后,P-gp表达率明显提高(从4.28%到93.80%),DNR摄取率减少,25μg/mL以上质量浓度的人参皂苷Rh2即可明显提高K562/VCR对DNR的摄取,但P-gp的表达无明显改变。同时,它可明显提高DNR对K562/VCR的杀伤率,50μg/mL人参皂苷Rh2可使K562/VCR对DNR的敏感性提高到原来的6.30倍。结论人参皂苷Rh2能抑制K562/VCR细胞生长,诱导其凋亡,还可以逆转K562/VCR的耐药,是一种具有广阔开发前景的抗白血病药物。     

硒化壳聚糖通过下调核因子КB途径增强ST1571对耐药K562/ADM细胞敏感性

目的研究硒化壳聚糖增强ST1571对多药耐药白血病K562/ADM细胞敏感性的作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法应用MTT法检测ST1571单独和联合硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响,计算逆转倍数;应用流式细胞法检测细胞凋亡;应用免疫印迹法检测核因子КB(NF-КB)蛋白的改变。结果单独应用1μmol·L-1ST1571作用12,24,36 h,对K562/ADM细胞增殖抑制率分别为(19.15±1.64)%、(24.35±2.37)%和(26.37±2.39)。1μmol·L-1ST1571联合25~400 mg·L-1硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞,随着硒化壳聚糖浓度和作用时间的增加,对细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量时间效应关系。硒化壳聚糖能够对K562/ADM细胞耐ST1571产生一定的逆转作用,明显增强ST1571对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用(P0.05,P0.01),下调NF-КB蛋白表达(P0.01)。结论硒化壳聚糖能够增强K562/ADM细胞对ST1571的敏感性,其部分机制可能是通过诱导细胞凋亡,抑制细胞mdr-1基因表达,阻断细胞NF-КB信号通路来实现的。