定量PCR检测黄芪A6组分与无环鸟苷联合抗1型单纯疱疹病毒的协同作用

目的 :探讨抗疱疹病毒药物黄芪A6 组分(A6)和无环鸟苷(ACV)联合抗 1型单纯疱疹病毒(HSV1 )的作用机制。方法 :利用竞争PCR检测A6 和ACV联合抗HSV1 的协同作用 ,并与细胞病变(CPE)抑制法进行比较。结果 :竞争PCR测定A6、ACV和A6 ACV对HSV1 的最小抑制浓度(MIC)分别为 1 88mg/ml、3 3 7μg/ml和 0 47mg/ml 0 84μg/ml;CPE抑制法测定A6、ACV和A6 ACV对HSV1 的MIC分别为 6 2 5mg/ml、5 0 μg/ml和 0 94mg/ml 1 2 5 μg/ml;联合抑制指数的分数(FICI)均小于 0 5 ;显示明显的联合协同抑制作用。结论 :定量PCR是筛选抗病毒药物的有效方法 ;结果还表明A6 和ACV对HSV1 的抑制作用主要表现在病毒增殖周期的复制阶段。     

八个中药复方对2215细胞HBsAg和HBeAg分泌的影响

目的 :观察复方黄根片等8个中药复方的体外抗乙型病毒性肝炎病毒作用。方法 :采用2215细胞为模型 ,应用MTT法对8个中药复方进行细胞毒性实验 ,在无毒浓度下分别检测8个中药复方对细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的抑制作用。结果 :复方黄根片最大无毒浓度(TC0)为1375μg/ml,对2215细胞分泌的HBsAg,HBeAg抑制率分别为29 85% ,89 99% ;复方三姐妹片的TC0为1250μg/ml,对2215细胞分泌的HBsAg,HBeAg抑制率分别为1 69% ,80 78 % ;复肝汤的TC0 为730 05μg/ml,对2215细胞分泌的HBsAg,HBeAg抑制率分别为33 09% ,40 98% ;护肝解毒丸的TC0 为2700μg/ml,对2215细胞分泌的HBsAg没有作用 ,对2215细胞分泌的HBeAg抑制率为64 16% ;达肝清颗粒的TC0 为626 2μg/ml,对2215细胞分泌的HBsAg,HBeAg抑制率分别为3 70 % ,43 83 % ;柴胡四草汤的TC0 为278 91μg/ml;壮肝散的TC0为3281 25μg/ml;健脾利湿方的TC0 为976 56μg/ml。结论 :复方黄根片、复方三姐妹片、护肝解毒丸、复肝汤对HBeAg有较强的抑制作用 ,治疗指数分别为20 55,11 78,4 68,4 48 ,对HBsAg的抑制作用比较弱 ;达肝清颗粒对HBeAg有一定的抑制作用 ,对HBsAg的抑制作用比较弱 ;柴胡四草汤、壮肝散、健脾利湿方对HBeAg,HBsAg几乎?     

Chinonin抗HSV-Ⅱ及对HSV-Ⅱ DNA影响的实验研究

目的:观察知母宁(Chinonin)对单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用途径及对HSV-Ⅱ DNA的影响,探讨Chinonin抗HSV-Ⅱ的作用机理。方法:通过Chinonin对HSV-Ⅱ所致细胞病变(CPE)的抑制作用及其对病毒感染的预防、治疗、直接杀伤作用,阻止病毒复制的动态观察,探讨Chinonin抗HSV-Ⅱ的作用途径;通过HSV-Ⅱ DNA荧光定量PCR观察Chinonin对HSV-Ⅱ DNA的影响,探讨Chinonin对HSV-Ⅱ的作用机理。结果:Chinonin预先用药,对CPE没有明显的抑制作用;治疗用药,在6.25 mg/ml浓度能完全抑制CPE。药物与病毒直接作用后感染细胞,与对照组没有显著的差异。对Chinonin抑制HSV的动态观察发现,Chinonin能明显抑制病毒的增殖。荧光定量PCR结果显示,Chinonin浓度大于6.25 mg/ml时HSV DNA为阴性,浓度为3.125 mg/ml、1.56 mg/ml时DNA拷贝量显著低于病毒对照组。结论:Chinonin抗HSV的作用可能主要不是通过影响HSV与病毒的吸附,而是通过影响病毒的复制,与抑制HSV DNA合成有关。     

荔枝草提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的研究

目的探讨荔枝草醇提物体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的作用。方法体外培养HSV-Ⅰ感染兔肾细胞,给予不同浓度梯度的荔枝草醇提物,并以阿昔洛韦(ACV)为阳性对照,采用细胞病变效应(CPE)及四唑盐(MTT)比色法,观察荔枝草醇提物对兔肾细胞的毒性及对HSV-Ⅰ感染兔肾细胞的抑制作用。结果 CPE结果显示荔枝草醇提物在质量浓度为1 350μg/m L时可使细胞产生皱缩、破碎等毒性特征,在质量浓度为169μg/m L时,毒性特征消失,在半数细胞毒性质量浓度675μg/m L下能明显抑制HSV-Ⅰ。MTT法结果显示荔枝草醇提物质量浓度在21~338μg/m L范围内,细胞存活率均大于60%,当质量浓度为42、84、338μg/m L时的吸光度值均大于病毒对照组的吸光度值,差异具有统计学意义。结论荔枝草醇提物在体外对HSV-Ⅰ有一定的抑制作用。     

柴石退热颗粒对乙型脑炎感染BHK-21细胞的抑制作用

目的:研究柴石退热颗粒对乙型脑炎病毒(JEV)感染BHK-21细胞的抑制作用。方法:分别采用不同浓度的柴石退热颗粒药液(40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL及320μg/mL)及10μg/mL利巴韦林处理JEV感染的细胞,24 h后观察各组细胞的形态及蚀斑形成,比较各组的细胞病变效应抑制率(CPE抑制率)及蚀斑抑制率。结果:不同浓度的柴石退热颗粒的CPE抑制率及蚀斑抑制率的差异具有统计学意义(P0.05)。320μg/mL的柴石退热颗粒及利巴韦林的CPE抑制率及蚀斑抑制率的差异无统计学意义(P0.05),40μg/mL、80μg/mL及160μg/mL的药液的CPE抑制率及蚀斑抑制率显著低于利巴韦林(P0.05)。结论:柴石退热颗粒能抑制乙型脑炎病毒感染对BHK-21细胞造成的损伤。     

白花蛇舌草水提物对白血病多药耐药细胞株CEM/VCR抑制作用的研究

目的研究白花蛇舌草水提物对白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色实验检测白花蛇舌草对多药耐药细胞株CEM/VCR的抑制率;光镜、电镜技术观察白花蛇舌草对CEM/VCR细胞作用后的细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测白花蛇舌草诱导CEM/VCR细胞凋亡作用。结果白花蛇舌草水提物能够有效的抑制白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的生长,药物在低浓度20μg/ml作用CEM/VCR细胞24h即具有显著抑制效应,抑制率为23.66%,抑制率与药物作用浓度及作用时间呈正比关系,药物作用72h的半数抑制浓度(IC50)约为264.70±4.21μg/ml,浓度为500μg/ml时的抑制率达60.46%;光镜、电镜下见实验组细胞体积缩小,细胞膜皱缩,甚至破损,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下,有的形成胞膜完整的凋亡小体等典型的凋亡特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示,实验组各条带中出现明显的DNA梯形凋亡条带,且随着药物浓度的加大、作用时间延长,凋亡梯形条带越清晰,凋亡越明显。结论白花蛇舌草能够有效的抑制白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的生长,诱导细胞凋亡可能是其抑制机制之一。     

白花蛇舌草总黄酮对BGC-823胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨白花蛇舌草总黄酮对BGC-823胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测3.125,6.25,9.375,12.5,25.0及50.0μg/m L白花蛇舌草总黄酮作用24 h及48 h对BGC-823胃癌细胞的抑制率,流式细胞仪检测白花蛇舌草总黄酮对细胞周期及细胞凋亡的影响。结果作用24 h,白花蛇舌草总黄酮3.125,6.25μg/m L对BGC-823胃癌细胞无明显抑制作用,9.375,12.5,25,50μg/m L有明显抑制作用,其中12.5μg/m L抑制率最高为51.5%,同期1μg/m L顺铂组为82.4%;作用48 h,白花蛇舌草总黄酮3.125,50μg/m L对BGC-823胃癌细胞无明显抑制作用,6.25,9.375,12.5,25μg/m L对BGC-823胃癌细胞均有明显抑制作用,其中12.5μg/m L抑制率最高为67.3%,同期1μg/m L顺铂组为85.4%。实验各组48 h抑制率均高于24 h。经白花蛇舌草总黄酮梯度药物处理的BGC-823胃癌细胞悬浮死亡,且随药物浓度的增加悬浮死亡的细胞增多,细胞呈现凋亡特征。白花蛇舌草总黄酮试验组与对照组比较,G1期细胞增加,S期细胞明显减少,凋亡细胞比例明显增高。结论白花蛇舌草总黄酮对BGC-823胃癌细胞的生长增殖有明显抑制作用,并表现出一定范围内的时-效及量-效关系,作用机制可能与抑制DNA的合成、诱导细胞凋亡有关。     

柴葛对单纯疱疹病毒的作用

用BRK细胞研究了柴葛抗单纯疱疹病毒的作用,先感染病毒后给药物、先给药后感染病毒和给药感染同时进行三种给药程序柴葛500μg/ml、250μg/ml均对HSV－Ⅱ有显抑制作用,空斑减数试验与阻止病毒复制动力学试验表明柴葛能阻止HSV-2在细胞内复制。     

吴茱萸次碱对三种肿瘤细胞体外增殖抑制作用的研究

目的:探讨吴茱萸次碱的体外抗肿瘤活性。方法:采用MTT法检测了不同浓度的吴茱萸次碱在不同的时间点对S180肉瘤细胞、H22肝癌细胞、人源Hep G2肝癌细胞的抑制情况。结果:吴茱萸次碱在浓度为64、32、16、8、4μg/ml时,对S180肉瘤细胞、H22肝癌细胞、人源Hep G2肝癌细胞均具有明显的抑制作用,随着药物浓度增加,抑制率逐渐增大,与阴性对照组比较作用极其显著。吴茱萸次碱作用细胞24h时,对三种肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为34.10、24.81和28.07μg/ml,对H22的IC50值最小(24.81μg/ml),生长抑制作用最好;作用48h时,对三种肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为19.35、20.62和27.81μg/ml,对S180的IC50值最小(19.35μg/ml),抑制作用相对最好;作用72h时,对三种肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为15.35、17.74和14.52μg/ml,对Hep G2的IC50值最小(14.52μg/ml),抑制作用最好。结论 :吴茱萸次碱对三种肿瘤细胞增殖均有明显的抑制作用。     

大叶蛇葡萄乙醇提取物对2215细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的实验研究

目的：研究大叶蛇葡萄乙醇提取物的抗乙肝病毒（HBV）作用。方法：将大叶蛇葡萄乙醇提取物作用于乙肝病毒DNA转染人肝癌细胞系2215细胞,以细胞病变（CPE）观察药物对2215细胞的毒性,用酶联免疫测定法（ELISA）检测药物对培养8天的2215细胞分泌的表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）表达的抑制作用。结果：大叶蛇葡萄乙醇提取物的半数毒性浓度（TC50）为250μg/ml,最大无毒浓度（TC0）为125μg/ml;乙醇提取物对培养8天的2215细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的半数有效浓度（IC50）分别为43.1μg/ml、54.8μg/ml,治疗指数（TI）值分别为5.8、4.7。结论：大叶蛇葡萄乙醇提取物具一定的体外抗乙肝病毒的作用,为有效物质部位。     

空心莲子草抗柯萨奇病毒B3的实验研究

本采用微量细胞培养法观察细胞病变效应测定经不同剂量空心莲子作用后的病毒滴度,用逆转录－聚合物酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测药物作用后细胞裂解液中的病毒核酸（ＣＶＢ３－ＲＮＡ）,结果药物直接作用组和药物抗病毒吸附组均不能阻止病毒感染宿主细胞,药物抗病毒生物合成组则随培养液中药物浓度加大,细胞裂解液中病毒滴度下降,但ＣＶＢ３－ＲＮＡ却一直可检出。结论：（１）空心莲子草不能直接杀灭ＣＢ３;（２）空心莲子     

白花蛇舌草水提物对白血病CEM细胞抑制作用及机制研究

目的研究白花蛇舌草对CEM细胞抑制作用及机制。方法以不同浓度的白花蛇舌草水提物作用CEM细胞24,48,72h后,通过MTT比色试验,检测其对CEM细胞的抑制率;用浓度分别为166μg/ml、33.2μg/ml、6.64μg/ml的白花蛇舌草水提物作用于CEM细胞24,48,72h后,通过逆转录PCR(RT-PCR)检测P53基因的表达,探索白花蛇舌草抑制CEM细胞的可能机制。结果白花蛇舌草水提物能够抑制CEM细胞的生长;白花蛇舌草能促进CEM细胞的P53基因表达,且随用药浓度的升高及作用时间的延长,其抑制作用逐渐增强、P53基因表达也逐渐增强。结论白花蛇舌草水提物能抑制白血病CEM细胞的生长,其作用强度与时间、浓度呈正相关,其抑制机制可能与上调P53基因的表达有较大关联。     

白花蛇舌草水提取物对白血病K562细胞的抑制作用及诱导其凋亡的研究

目的研究白花蛇舌草水提取物对K562细胞的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验检测白花蛇舌草水提取物对K562细胞的抑制率;光镜、电镜技术观察细胞凋亡形态结构的改变;琼脂糖凝胶电泳法检测白花蛇舌草水提取物对K562细胞的诱导凋亡作用。结果白花蛇舌草水提取物能明显抑制K562细胞的生长,药物浓度在0.005μg/ml作用于48 h后,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为5μg/ml;光镜、电镜下见细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下呈新月形等典型的凋亡特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带,而对照组没有出现梯形条带。结论白花蛇舌草水提取物对白血病K562细胞的生长具有明显的抑制作用,诱导肿瘤细胞凋亡是其机制之一。     

广藿香醇体外抗呼吸道病毒作用研究

目的:观察广藿香醇体外抗流感病毒、腺病毒和柯萨奇病毒的效果,为抗病毒性感冒新药研发提供依据。方法:建立流感病毒感染MDCK细胞、腺病毒感染Hep-2细胞和柯萨奇病毒感染Hela细胞模型,以细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)法作为观察和检测指标,了解药物对细胞的毒性、药物体外抗病毒效果及作用机理。根据不同病毒的易感性,实验中分别以利巴韦林和阿昔洛韦作为对照药。结果:广藿香醇对MDCK、Hep-2和Hela细胞的TC50浓度均为125μg/ml,TC0浓度为31.25μg/ml。广藿香醇能抑制H1N1、CVB3和Ad-3所致的细胞病变,对H1N1的IC50为31.25μg/ml,治疗指数(TI)为4.00;对CVB3的IC50为62μg/ml,TI为2.00;对Ad-3的IC50为31.25μg/ml,TI为4.00。广藿香醇对3种病毒的直接作用效果都优于抗病毒吸附和抗病毒生物合成,同一浓度下广藿香醇对Ad-3的抑制率明显高于对H1N1和CVB3的抑制。结论:在体外抗病毒实验中,广藿香醇显示出抗柯萨奇病毒、抗腺病毒和抗甲型流感病毒的作用。     

白术挥发油对人肺癌细胞株PG细胞增殖和细胞周期的影响

目的：观察白术挥发油对人肺癌细胞株PG细胞增殖的抑制作用和对其细胞周期的影响。方法：倒置相差显微镜下观察白术挥发油对PG细胞形态和生长状态的影响，MTT法测定白术挥发油对PG细胞的生长抑制率，流式细胞术检测白术挥发油对PG细胞细胞周期的作用。结果：镜下观察，250μg／ml和125μg/ml白术挥发油处理PG细胞48小时及72小时后，PG细胞形态变差，分裂相减少；250μg／ml和125μg/ml白术挥发油处理48小时对PG细胞的生长抑制率分别为58．58％、16．84％，与对照组比较有显著性著异；250μg／ml、125μg／ml白术挥发油组G0／G1期细胞数与阴性对照组比较有显著性差异，S期细胞数亦显著低于阴性对照组。结论：白术挥发油可以抑制PG细胞增殖，其作用可能是通过阻止PG细胞通过G1／S期转换点来实现，的并呈剂量依赖性。     

羟基喜树碱对A549人肺腺癌细胞增殖的影响

目的观察羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞增殖的影响。方法采用细胞培养及MTT比色法检测羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞的抑制作用。结果低浓度羟基喜树碱作用24h对A549人肺腺癌细胞没有明显影响,当药物浓度达到50μg/mL时,抑制作用明显增强,抑制率达44.17%,药物浓度达到100μg/mL时抑制率达50.28%;随着药物作用时间的延长,抑制更明显,100μg/mL药物组作用48h抑制率达70.98%。结论羟基喜树碱具有抑制A549人肺腺癌细胞增殖的作用,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性。     

白花蛇舌草醇提取物对K562细胞的生长抑制及诱导其凋亡的研究

目的研究白花蛇舌草醇提取物对人类红白血病细胞(K562细胞)的生长抑制作用及其机制。方法采用MTT比色实验检测白花蛇舌草醇提取物对K562细胞的抑制率;光镜、电镜技术观察细胞形态结构的改变;琼脂糖凝胶电泳法检测白花蛇舌草醇提取物诱导K562细胞的凋亡作用。结果白花蛇舌草醇提取物能明显抑制K562细胞的生长,药物浓度在0.32μg/ml作用于48 h后,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为1 000μg/ml;光镜、电镜下见细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩,核聚集成团块,形成凋亡小体,有的边聚于核膜下呈新月形等典型的凋亡特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带,而对照组没有出现梯形条带。结论白花蛇舌草醇提取物对K562细胞的生长具有明显的抑制作用,诱导细胞凋亡是其机制之一。     

白藜芦醇对常见肠道病毒抑制作用的实验研究

目的:观察白藜芦醇体外对多种肠道病毒的抑制药效,为进一步探讨其抗肠道病毒谱提供依据。方法:采用细胞病变抑制法（Cytopathic effect inhibition Assay,CPE）和四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,通过计算病毒抑制率、药物半数有效浓度(IC50)及选择指数（selection index,SI）,研究白藜芦醇体外对抗多种肠道病毒的作用效果。结果:肠道病毒属（EV）11、EV71、EV84、柯萨奇病毒（COX）B3和COX A10等5种病毒的TCID50分别为:2.13×10-4,1×10-4,2.13×10-6,1×10-5及4.67×10-4。白藜芦醇在Vero E6细胞的半数毒性浓度TC50为50μg/mL。白藜芦醇最大无毒浓度为25μg/mL,以此为抗病毒活性检测的起始浓度。在最大无毒浓度下,白藜芦醇与阳性对照药对5种肠道病毒均有抑制作用。除EV84病毒外,白藜芦醇的抑制率均高于阳性药物利巴韦林。结论:白藜芦醇体外具有抗多种肠道病毒作用,对于病毒性肠道传染病防治具有一定应用前景。     

珊瑚菌抗乳腺癌作用的研究

目的 探讨珊瑚菌对乳腺癌细胞的抑制作用.方法 通过对乳腺癌细胞的培养,确定细胞的生长曲线和最适检测时间,取对数生长期的细胞,用含有不同浓度珊瑚菌粗提物的细胞培养液来培养细胞,MTT法检测珊瑚菌对乳腺癌细胞的抑制率.结果 珊瑚菌的浓度在0.010 3 g/ml到0.072 1 g/ml之间时,随着珊瑚菌浓度的增大,抑制率逐渐增大.当珊瑚菌的浓度在0.082 4 g/ml时,抑制率下降.当珊瑚菌的浓度在0.0721 g/ml时有最大抑制率.结论 珊瑚菌的水煎剂对体外培养的乳腺癌细胞株有明显的抑制作用,是抗乳腺癌的良好药物.     

维药洋甘菊体外抑制宫颈癌Hela细胞增殖作用研究

目的研究洋甘菊提取物对宫颈癌Hela细胞体外增值抑制的作用。方法洋甘菊提取物95%乙醇提取并纯化,得到澄清的药物溶液后,进行细胞体外给药实验。采用CCK-8法测定不同浓度不同时间下洋甘菊提取物作用后Hela细胞存活率。结果药物浓度为670μg/m L时,Hela细胞抑制率为29.35%。当最高药物浓度达到1500μg/m L时,Hela细胞抑制率为82.18%。随着药物浓度的增加,Hela细胞抑制率呈明显上升趋势。结论维药洋甘菊提取物对宫颈癌Hela细胞的增殖有明显的抑制作用。