CD81与HCV关系研究进展

CD81属于四次跨膜蛋白超家族成员,是相对分子量26kD的一种膜表面粘附分子.CD81分布广泛,具有多种功能.1998年意大利科学家Pileri等首次报道了CD81是与HCV特异结合的蛋白质分子,以后大量的实验表明CD81是HCV感染的最初受体,但也有部分实验不支持这一观点.本文就CD81与HCV关系研究进展做一综述.     

人CD81分子的肝组织特异性稳定表达

目的：用肝组织特异性启动子，实现人CD81分子在小鼠肝癌细胞Hepa 1—6中的稳定表达。方法：从能感染丙型肝炎病毒(HCV)的人肝癌细胞系HepG2中提取RNA，用随机引物合成cDNA的第1条链，然后用人CD81基因的特异性引物进行PCR扩增，克隆PCR扩增片段。将经测序证明为人CD81基因的正确序列，连接到肝特异性启动子的下游，使CD81基因的3′端与SV40polyA加尾序列融合，得到肝组织特异性表达的人CD81融合基因片段。将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3中，转染小鼠肝癌细胞系Hepa 1—6。经G418加压筛选后，分别用RT—PCR检测人CD81 mRNA的转录，用FACS检测人CD81蛋白的表达。结果：克隆序列的测序结果与GenBank中登录的序列进行对比表明，得到了人CD81 cDNA的正确序列。构建的人CD81肝特异性融合基因片段可稳定转染Hepa 1-6细胞，并可检测到人CD81在mRNA水平上的转录和在蛋白质水平上的稳定表达。结论：由于CD81是HCV的感染受体，稳定表达HCV感染受体-人CD81分子的小鼠肝癌细胞克隆的获得，为今后研究HCV包膜蛋白与CD81的相互作用、筛选感染阻断药物，以及发展HCV感染的小鼠动物模型奠定了基础。     

CD81外显子6、7、8在中国人丙型肝炎病毒感染中单核苷酸多态性的研究

目的 探讨CD81在中国人丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV)感染中是否存在遗传易感性。方法 针对人和非洲绿猴的CD81有4个氨基酸位点（163、186、188、196）不同，而非洲绿猴不感染HCV，以正常人群和HCV感染阳性患者的基因组DNA为研究对象，用PCR结合DNA测序的方法对以上4个氨基酸对应的CD81基因位点进行分析。结果 在CD81外显子6、7、8没有发现单核苷酸多态性；尽管在一部分内含子6和3′端调控区发现了3个多态位点：11028G／T、11860C／T、11960G／A，但它们与HCV的感染无关（P＞0．05）。结论 未见CD81外显子6、7、8与HCV感染的易感性相关；由于CD81蛋白的其它位点在种间是高度保守的，因此在中国人群中CD81蛋白的多态性稀少或不存在。     

CD81的分子生物学研究进展

CD81是一种分子量为26kD的四跨膜蛋白分子。在细胞膜上可与CD4、CD8、CD19、CD21、CD82、Leu13、HLA-DR和α3β1整合素等结合,调节跨膜信号转导。最近又证实CD81可与丙型肝炎病毒(HCV)包膜糖蛋白E2结合,可能是HCV感染靶细胞的受体蛋白。     

一种截短的丙型肝炎病毒E2糖蛋白胞内型及分泌型的功能定性

丙型肝炎病毒 ( HCV)包膜蛋白 E2是一种可作为HCV疫苗侯选抗原的病毒体表面糖蛋白。E2蛋白生物活性形式的鉴定将有助于 HCV疫苗的研制。作者对胞内型及分泌型 HCV E2糖蛋白的功能特征进行了研究。将编码 E2 661蛋白的真核表达载体 p14.t E2 . 661.hiv转染 HEK- 2 93细胞 ,分别从培养上清及细胞中获得分泌型 E2 661和胞内型 E2 661。结果表明 ,胞内型 E2 661不与鼠 CD81结合 ,而与人 CD81( h CD81)有较高的亲和力 ,且大多数分泌型 E2 661与 h CD81的结合是一种低亲合、高解离反应 ,故认为胞内型 E2 661及分泌型 E2 661蛋白的不…     

丙型肝炎病毒受体的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)受体一直是HCV研究的热点之一，但至今仍无定论，已经提出的可能受体有：CD81、低密度脂蛋白受体、粘多糖、清道夫受体及C型(钙离子依赖型)凝集素DC／L—SIGN等，本文就上述与HCV相关分子的研究进展作一综述。     

人CD81的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的 从人外周血淋巴细胞中克隆出CD81基因，构建真核表达质粒，并在COS－7细胞中进行表达。方法 分离外周血淋巴细胞，提取细胞总RNA，采用RT－PCR扩增CD81基因。将CD81基因克隆至载体pcDNA3.1( )中，进行酶切及测序鉴定。以质粒pcDNA3.1-CD81转染COS－7细胞进行瞬时表达，并用免疫细胞化学染色法和流式细胞术检测蛋白的表达。结果 RT－PCR产物已插入载体pcDNA3.1( )构建成真核表达质粒pcDNA3.1-CD81。经双酶切和测序鉴定表明，克隆出的人CD81全长编码序列同GenBank收录的序列一致，并且真核表达质粒的构建正确。以脂质体转染COS－7细胞后，用免疫细胞化学染色法和流式细胞术检测表明，细胞可表达人CD81。结论 成功地构建真核表达载体pcDNA3.1-CD81，为进一步研究HCV和CD81的相互作用，以及建立可能的HCV细胞感染模型打下了基础。     

丙型肝炎病毒受体的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)受体一直是HCV研究的热点之一,但至今仍无定论,已经提出的可能受体有CD81、低密度脂蛋白受体、粘多糖、清道夫受体及C型(钙离子依赖型)凝集素DC/L-SIGN等,本文就上述与HCV相关分子的研究进展作一综述.     

CD81分子与丙型肝炎病毒感染

CD8 1(TAPA 1)是一种非糖基化膜蛋白和细胞膜表面粘附分子 ,在体内分布广泛 ,是四跨膜蛋白 (TM4SF)超家族成员之一。具有影响细胞的粘附激活、形态改变、增殖分化及信号传导等生物学功能。新近研究表明 ,CD81能与HCV包膜糖蛋白E2结合 ,它可能是丙型肝炎病毒 (HCV)感染靶细胞的受体分子。     

介导HCV入胞相关分子的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)受体一直是HCV研究的热点之一,除了已经提出的可能受体:CD81、低密度脂蛋白受体、粘多糖、清道夫受体及C型(钙离子依赖型)凝集素DC/L-SIGN等,目前研究者又发现了新的受体claudin、occludin等.本文就上述HCV受体相关分子的研究进展作一综述.     

CD81分子的生物学功能

CD81分子又名抗增生抗体识别的靶抗原－1（TAPA－1）或分子量为38KD的蛋白,即M38抗原,是四跨膜蛋白（TM4SF）超家族的成员之一,CD81分子蛋白质的氨基和羧基末端皆位于细胞的膜内。从其氨基末端开始的第一、二段跨膜区和第三、四段跨膜区,分别围成膜外较小和较大的环状结构区,是细胞膜上CD81分子感知细胞外部信号的关键结构位点。CD81的特异性抗体可以导致表达CD81分子的T淋巴瘤细胞系的增殖反应,抑制人T 巴细胞白血病病毒－1（HTLV－1）感染引起的靶细胞合胞体的形成。最近的研究表明,CD81分子可能是丙型肝炎病毒（HCV）感染靶细胞的受体分子。     

CD81分子的生物学功能

CD8 1分子又名抗增生抗体识别的靶抗原 - 1(TAPA - 1)或分子量为 38KD的蛋白 ,即M38抗原 ,是四跨膜蛋白 (TM4SF)超家族的成员之一。CD81分子蛋白质的氨基和羧基末端皆位于细胞的膜内。从其氨基末端开始的第一、二段跨膜区和第三、四段跨膜区 ,分别围成膜外较小和较大的环状结构区 ,是细胞膜上CD81分子感知细胞外部信号的关键结构位点。CD81的特异性抗体可以导致表达CD81分子的T淋巴瘤细胞系的增殖反应 ,抑制人T淋巴细胞白血病病毒 - 1(HTLV - 1)感染引起的靶细胞合胞体的形成。最近的研究表明 ,CD81分子可能是丙型肝炎病毒 (HCV)感染靶细胞的受体分子     

趋化因子及受体与中国HCV/HIV合并感染相关性的研究

目的：探讨趋化因子自细胞介素8（IL-8）、干扰素诱导蛋白10（IFN-inducible 10-kdaprotein，IP-10）及趋化因子受体CCR5、CXCR3，在丙肝病毒（HCV）单纯感染，艾滋病病毒（HIV）单纯感染和HCV／HIV合并感染过程中的表达及意义。方法：采用流式细胞术，检测HCV感染组（n=21）、HIV感染组（n=14）、HCV／HIV感染组（n=28）及正常对照组（n=30）人外周血CD4^＋T淋巴细胞和CD8^＋T淋巴细胞表面CCR5、CXCR3的表达。ELISA方法检测血清趋化因子IL-8、IP-10含量。结果：HCV感染组、HIV感染组和HCV／HIV合并感染组，血清IP-10水平都明显升高，而在合并感染组水平最高；血清IL-8水平在3组亦明显升高。HIV感染组及HCV／HIV合并感染组CD4^＋T细胞表面CXCR3表达显著降低（P〈0．001），CD8^＋T细胞表面CXCR3表达显著升高（P〈0．001）；HCV感染组CD4^＋及CD8^＋T细胞表面CXCR3表达轻度升高，但差异不显著。HCV感染组及HCV／HIV合并感染组CD4^＋及CD8^＋T细胞表面CCR5表达显著降低（P〈0.001）；HIV感染组CD4^＋及CD8^＋T细胞表面CCR5表达显著升高（P〈0.001）。结论：中国HCV／HIV合并感染患者中，血清IL-8和IP-10水平都明显升高；受体CXCR3在CD4^＋T细胞表面表达降低，而在CD8^＋T细胞表面表达升高；受体CCR5在CD4^＋及CD8^＋T细胞表面表达降低，提示趋化因子及受体与HCV／HIV合并感染密切相关。     

人CD81胞外区EC2基因的克隆和原核表达

CD８１是一种跨膜的非糖基化蛋白。在人类和黑猩猩中,CD８１胞外区EC２区氨基酸序列高度保守。CD８１可影响细胞的粘附、激活、增殖和分化,改变细胞形态及抑制合胞体形成等生物学功能〔１〕。近年研究发现,CD８１可能作为HCV的受体引导病毒进入细胞内〔２〕。进一步研究发现,CD８１胞外区EC２是CD８１与HCVE２相互作用的部位,是HCV感染的关键因素〔３〕。目前,CD８１的功能及作用机制尚有待进一步研究,我们采用分子生物学技术,构建了CD８１胞外区EC２原核表达载体,为今后进一步研究CD８１与HCV感染的关系奠定了基础…     

丙型肝炎患者CD4＋CD25＋调节性T细胞与HCV-RNA的相关性分析

本文通过检测丙肝阳性的患者血清中HCV—RNA，并以健康体检者血清中HCV—RNA表达分组，探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞与HCV-RNA病毒复制不同水平的相关性及临床意义。为抗丙肝病毒的免疫治疗提供了依据，     

细胞毒性T淋巴细胞增殖、分化能力对HIV/HCV重叠感染患者病情进展的影响

目的 探讨HIV/HCV重叠感染患者细胞毒性T淋巴细胞增殖能力和分化状态对病情进展的影响.方法 采用流式细胞仪检测CD57、CD27和CD28在CD8+T细胞上的表达,根据其表达差异,判断CD8+T细胞的增殖能力和不同的分化状态,比较HIV/HCV重叠感染者和单独HCV感染者增殖能力和分化状态的差异.探讨CTL功能与病情进展的关系.结果 HIV/HCV重叠感染者中CD57在CD8+T细胞上高表达28.84%±4.49%,而在HCV单独感染者中较低表达8.24%±5.05%,两组差异非常显著(P＜0.001).CD57+CD8+T细胞的百分数与HCV载量对数值间存在着正线性相关(P=0.023,R2=0.21).HIV/HCV重叠感染者的CTL细胞分化状态以晚期为主,而HCV单独感染者的CTL细胞分化状态以中期为主,两者比较差异非常显著(P＜0.001).结论 HIV/HCV重叠感染患者较HCV单独感染者CTL细胞增殖能力较低、呈终末期分化状态,进而影响CTL的免疫应答,可能是重叠感染者肝病进展的原因之一.     

慢性HCV感染状态与机体细胞免疫功能关系的探讨

目的:探讨慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染患者丙型肝炎病毒RNA(HCV RNA)增殖状态与T细胞亚群功能及血浆中IL-2和slL-2R活性的关系。方法:以间接免疫荧光法,ELISA法和RT-PCR分别检测75名慢性HCV感染患者(其中HCV RNA阳性47例,HCV RNA阴性28例)外周血T细胞亚群,IL-2及sIL-2R的水平和HCV RNA。结果:慢性HCV感染患者周围血CD3~+,CD4~+淋巴细胞亚群,CD4~+/CD8~+比值及IL-2水平均显著低于正常对照组(P<0.01),而sIL-2R明显升高(P<0.01);血清HCV RNA阳性患者T细胞亚群,CD4~+/CD8~+比值及IL-2水平显著低于HCV RNA阴性患者(p<0.01)。结论:慢性HCV感染患者的机体免疫功能紊乱。细胞免疫功能低下,HCV RNA阳性患者较阴性患者更甚,提示细胞免疫功能受抑可能是HCV持续增殖的原因。     

HIV/HCV合并感染者淋巴细胞活化及第二受体表达的研究

目的了解中国不同疾病进展阶段人类免疫缺陷病毒和丙型肝炎病毒（HIV／HCV）合并感染者T淋巴细胞与自然杀伤细胞（natural killer cells，NK）数量变化及T淋巴细胞活化、受体表达情况，并探讨HCV感染对HIV感染免疫指标及疾病进展的影响。方法应用流式细胞术分析228例不同疾病进展阶段的HIV／HCV合并感染者及101例单纯HIV感染者外周血T淋巴细胞、NK细胞数量及T淋巴细胞活化受体（HLA-DR、CD38）、第二受体（CCR5、CXCR4）表达情况。结果（1）HIV／HCV合并感染组中，CD4^＋T淋巴细胞、NK细胞数量随疾病进展持续下降，其中艾滋病组（AIDS）明显低于无症状HIV感染组（HIV）（P〈0．05），HIV组明显低于长期不进展组（LTNP）（P〈0．01），LTNP组与健康对照组差异无统计学意义。LTNP组、HIV组及AIDS组CD4^＋、CD8^＋T细胞表面活化受体HLA-DR、CD38的表达依次升高，其中各组间CD8／CD38的升高差异均有统计学意义（P〈0．05），AIDS组CD4／HLA-DR、CD8／HLA-DR的升高明显高于LTNP组和HIV组（P〈0．01）。LTNP组、HIV组及AIDS组CD4^＋、CD3^＋T细胞表面CCR5的表达亦依次升高，各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）；CD3^＋T细胞表面CXCR4的表达依次升高，AIDS组明显高于HIV组和LTNP组（P〈0．01）。（2）HIV／HCV合并感染组与单纯HIV感染组相比，AIDS组NK细胞明显下降（P〈0．05），CD4^＋T细胞下降，但无统计学意义，CD4／HLA-DR、CD8／HLA-DR、CD4／CXCR4、CD3／CXCR4明显升高（P〈0．01）；HIV组NK细胞明显下降（P〈0．01），CD4／CXCR4明显升高（P〈0．05）；LTNP组各项指标与单纯HIV感染组相比差异无统计学意义。（3）HIV／HCV合并感染组的HIV病毒载量随疾病进展不断升高，与单纯HIV感染组相比差异无统计学意义；HCV病毒载量在疾病不同阶段差异无统计学意义（P〉0．05）。结论随疾病进展，HIV／HCV合并感染者的免疫功能逐渐下降，HIV病毒载量逐渐升高。与单纯HIV感染相比，合并HCV感染可通过破坏机体天然免疫功能、促进免疫系统活化和受体表达，加速HIV感染的疾病进展。     

外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与丙型肝炎病毒感染的相关性

CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)可抑制T细胞免疫反应,Foxp3+是Treg的主要转录因子,可调控Treg的生长发育与功能效应.本研究旨在探讨丙型肝炎病毒(HCV)感染时外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg出现的频率及其与HCV RNA含量的相关性.     

291例HIV感染者合并HCV及HSV-2感染状况及相应免疫特征分析

目的了解HIV感染者中HCV及HSV-2合并感染的情况及CD4＋T细胞免疫特征。方法用ELISA方法检测291例HIV感染者的抗HCV及HSV-2抗体,对HIV感染者进行CD4＋T淋巴细胞绝对计数和其占T淋巴细胞的百分比分析。结果 HIV合并HCV感染43例,合并HSV-2感染99例,合并HCV和HSV-2感染31例。CD4＋T淋巴细胞百分比以合并感染HCV组最高（78.4%）,合并感染HSV-2组和无合并感染次之,合并感染HCV和HSV-2组最低,组间差异无统计学意义。CD4＋T淋巴细胞绝对数以合并感染HCV和HSV-2组最低,合并感染HCV组、合并感染HSV-2组居中,无合并感染组最高,组间差异无统计学意义。结论 HIV感染者合并HCV、HSV-2感染率较高,HIV合并HCV和HSV-2感染时,CD4＋T细胞绝对数和CD4＋T淋巴细胞百分比下降,加重损害机体的免疫系统。