TROP2 shRNA真核表达载体转染胃癌BGC-823细胞的沉默作用

目的:构建TROP2特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体, 抑制人胃癌BGC-823细胞TROP2基因的表达.方法:构建TROP2短发夹环RNA, 产生重组质粒转染胃癌BGC-823细胞, 转染24 h后用G418(浓度400 mg/L)筛选, 待细胞稳定后收集, 分别命名为W组(未处理组), HK组(随机阴性对照质粒组), KB组(空质粒组), T1组, T2组, T3组. 并运用实时荧光定量PCR和Western blot检测TROP2的表达.结果:TROP2特异性shRNA片段被成功克隆进pGensil1.1质粒中, 重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致. 与未转染细胞组、随机阴性对照组、空质粒组相比, 转染shRNA重组质粒的人胃癌BGC-823细胞TROP2表达在mRNA和蛋白水平都受到抑制.与T1、T2组相比, T3组对TROP2 mRNA和蛋白抑制作用最明显, 差异具统计学意义(8.79±0.23 vs 9.54±0.20, 9.57±0.23; 3.66±0.11vs 6.46±0.36, 9.31±0.11, 均P<0.05).结论:成功构建了针对TROP2 的特异性shRNA真核表达载体并抑制了TROP2的表达,为进一步研究其基因功能打下了基础.     

小鼠TRAF6基因shRNA真核表达载体的构建与表达

目的:构建并筛选肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法:针对小鼠TRAF6 mRNA设计4条理论上最佳的siRNA序列,经退火成互补双链,将相应双链DNA插入pGCsi-U6/GFP/Hygro质粒中,构建重组表达质粒pGCsi-TRAF6 -shRNA1,2,3,4,并以不同比例DNA质粒/脂质体转染重组质粒(1∶2、2∶5、1∶3和1∶4)至RAW 264.7细胞中,观察转染效果.结果:靶向TRAF6 mRNA的4个shRNA重组质粒载体pGCsi-TRAF6 shRNA1,2,3,4,经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,证实载体构建成功.应用荧光显微镜分析转染效率显示,DNA(g)/脂质体转染重组质粒(L)按1∶2、2∶5、1∶3和1∶4比例转染细胞的效率分别为13.7%±1.2%、24.5%±2.1%、19.3%±1.7%、16.3%±2.8%,以2∶5为最佳比例.只加了脂质体未加质粒(试剂对照)的细胞无荧光表达.结论:TRAF6靶向RNA干扰重组表达质粒构建成功,为进一步研究阻断TRAF6表达对急性肝衰竭过度炎症反应的基因治疗奠定基础.     

TLR4 shRNA质粒的构建及稳定转染人胰腺癌PANC1细胞株的筛选

目的 构建靶向人TLR4基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,转染胰腺癌细胞,并筛选出稳定转染的克隆细胞株.方法 采用小分子干扰RNA(siRNA)软件设计3个靶向TLR4基因的shRNA,构建3个质粒表达载体,分别命名为TLR4-1、TLR4-2、TLR4-3;选取抑制效率最高的shRNA质粒,采用脂质体法转染胰腺癌PANC1细胞;实时定量PCR和流式细胞技术检测细胞TLR4 shRNA基因沉默效率和转染效率;G418抗性筛选和有限稀释单克隆形成法挑选培育稳定转染TLR4 shRNA的单克隆细胞系.结果 转染48 h后PANC1细胞瞬时转染效率为(46.72±5.06)％.转染TLR4-1、TLR4-2、TLR4-3的细胞的TLR4mRNA表达水平分别为0.025±0.004、0.027±0.003、0.019±0.006,均显著低于未转染组的0.061±0.018和阴性对照转染组的0.057±0.015(P值均＜0.05).以沉默效果最佳的TLR4-3转染细胞所获得的稳转细胞的转染效率为(82.79 ±8.16)％,较瞬转细胞显著提高(P=0.001);TLR4 mRNA表达水平为0.010±0.002,较瞬转细胞显著下调(P=0.001);TLR4蛋白表达率为(0.54±0.32)％,显著低于未转染细胞的(87.42±5.00)％和转染阴性对照细胞的(82.90±5.00)％(P=0.000).结论 成功筛选到TLR4基因沉默的稳转PANC1细胞.     

结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1shRNA表达质粒对肝星状细胞细胞因子表达及细胞外基质分泌的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的短发夹RNA(shRNA)表达质粒分别及共转染肝星状细胞(HSC)对CTGF、TIMP-1、I型前胶原(PCI)mRNA表达及细胞外基质(ECM)分泌的影响. 方法 筛选并成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1有效RNA干扰靶位的shRNA表达质粒,分别及共转染转化生长因子β1刺激活化的大鼠HSC-T6细胞,荧光定量PCR检测各组细胞中CTGF、TIMP-1、PCI mRNA的表达;放射免疫法分析细胞上清液中Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)的含量.组间比较采取方差分析;多组间两两比较采用SNK-q检验. 结果 CTGFshRNA转染和双质粒共转染HSC-T6的CTGFmRNA相对表达量分别为0.59±0.03、0.62±0.01,与空白对照组、CTGFshRNA转染组的1和1.00±0.07比较,CTGF mRNA表达量均明显下降,F=66.515,P值均＜0.05,差异有统计学意义;而TIMP-1 shRNA组和双质粒共转染组的TIMP-1 mRNA相对表达量分别为0.66±0.04、0.68±0.03,与空白对照组、CTGFshRNA转染组的1和1.05±0.03比较,TIMP-1 mRNA表达量均明显下降,F=83.835,P值均＜0.05,差异有统计学意义;CTGFshRNA转染、TIMP-1shRNA转染和共转染组的PCI rnRNA相对表达量分别为0.55±0.02、0.57±0.02和0.41±0.01与空白对照组的1比较,PC I mRNA表达量均明显下降,F=709.905,P值均＜0.05,差异有统计学意义;双质粒联合转染对CTGF、TIMP-1、PC I的mRNA表达量抑制作用优于单质粒转染.CTGF shRNA转染、CIGF shRNA转染和双质粒共转染组的PCⅢ含量分别为(78.02±6.50) ng/ml、(79.03±5.47) ng/ml、(53.91±4.01)ng/ml,与空白对照组的(113.79±15.88)比较,PCⅢ含量均明显下降,P值均＜0.05,差异有统计学意义; CTGF shRNA转染、CTGF shRNA转染和双质粒共转染组的HA含量分别为(127.36±8.33)ng/ml、(116.55±3.37) ng/ml、(82.84±9.03) ng/ml,与空白对照组的(163.10±7.01)ng/ml比较,HA含量均明显下降,P值均＜0.05,差异有统计学意义CTGFshRNA转染、CTGF shRNA转染和双质粒共转染组的LN含量分别为(55.41±9.37)ng/ml、(49.77±6.70) ng/ml、(30.72±1.22) ng/ml,与空白对照组的(83.99±4.67) ng/ml比较,LN含量均明显下降,P值均＜0.05,差异有统计学意义.CTGF shRNA与TIMP-1 shRNA双质粒联合转染对PCⅢ、HA、HA分泌的抑制作用优于单质粒转染.结论 CTGF shRNA.TIMP-1 shRNA可明显抑制HSC的CTGF、TIMP-1、PCI基因表达及ECM的分泌,且shRNA联合干扰效果更显著,有望成为抗肝纤维化基因治疗的有效方法.     

重组人脂联素基因在L02细胞中的表达及其对肝脂肪变的预防作用

目的 观察携带人脂联素(AdipoQ)基因真核表达载体是否能在人正常肝细胞株L02中表达,并探讨其对体外诱导肝细胞脂肪变的预防作用及其意义,为AdipoQ在非酒精性脂肪肝病的基因治疗中奠定基础.方法 将构建含人AdipoQ重组载体pEGFP-N1-AdipoQ转染L02细胞(L02/pEGFP-N1-AdipoQ组,n=10),与pEGFP-N1空质粒转染L02细胞(L02/pEGFP-N1组,n=10)以及L02正常细胞株(L02组,n=10)为对照,分别加入浓度为20 μg/ml的油酸进行培养72h,用油红O染色观察细胞内脂滴,并检测细胞内甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)和甘油的含量.采用SAS8.2软件进行统计分析,3组之间总体差异的检验采用单因素方差分析,3组之间两两比较采用SNK-q检验.结果 含人AdipoQ重组载体pEGFP-N1-AdipoQ能够在L02细胞株中表达,油红O染色显示72 h L02组和L02/pEGFP-N1组分别比L02/pEGFP-N1-AdipoQ组脂肪变性更为明显.L02组,L02/pEGFP-N1组和L02/pEGFP-N1-AdipoQ组,TG含量分别为(89.23±18.45)μmol/L、(78.66±16.38)μmol/L和(26.58±7.65)μmol/L,FFA含量分别为(85.39±17.26)μmol/L、(75.63±12.25)μmol/L和(25.37±8.73)μmol/L,甘油含量分别为(62.29±13.59)μmol/L、(57.35±18.43)μmol/L和(15.37±7.53)μmol/L,F值分别为50.58、59.37、34.32,P值均<0.01.在L02/pEGFP-N1组中TG、FFA和甘油含量均明显高于L02/pEGFPN1-AdipoQ组,t值分别为7.81、8.50、6.75,P值均<0.01.在L02组中TG、FFA和甘油含量均显著高于L02/pEGFP-N1-AdipoQ组,t值分别为9.39、10.15、7.54,P值均<0.01.TG、FFA和甘油含量在L02/pEGFP-N1组和L02组之间,差异无统计学意义.结论 携带人脂联素基因真核表达载体能够在L02细胞株中表达,而且具有预防肝脂肪变性的作用.     

短发夹RNA对胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因表达的影响

目的:研究短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人胰腺癌细胞PANC-1中突变型K-ras基因表达的抑制作用.方法:构建特异性针对胰腺癌PANC-1细胞突变型K-ras基因的重组质粒pGensil-1-P1,阴性对照质粒pGensil-1-HK并采用脂质体介导的方法转染胰腺癌细胞.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测K-ras基因mRNA和蛋白的表达,CCK-8方法测量细胞生长曲线.并建立人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠皮下移植瘤模型,分别注射Pgenesil-1-P1、Pgenesil-1-HK质粒,动态观察并处死裸鼠计算肿瘤体积.结果:测序证实质粒表达载体构建成功,短发夹RNA(shRNA)使胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因的mRNA较未治疗组、阴性对照组相比明显减少(P=0.01);未治疗组、阴性对照组及治疗组的K-ras蛋白表达率分别为100%,99.0%±0.73%,39.9%±2.1%,前两组K-ras蛋白表达差异无统计学意义,治疗组较未治疗组K-ras蛋白表达下调了约60.1%;细胞生长受到明显抑制(P=0.02);经重组质粒治疗14 d后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相较于对照组瘤体明显缩小(P=0.03).结论:shRNA对特异性转染组的胰腺癌细胞的突变K-ras基因表达有抑制作用,使细胞以及裸鼠移植瘤的生长受到抑制.     

胰岛素样生长因子基因在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中的表达及其意义

目的 研究胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)及胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)基因在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中的表达变化及其意义. 方法 用油酸诱导永生化人肝细胞(IHH)建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型,油红O染色和细胞内甘油三酯含量检测观察细胞脂肪变情况.IHH细胞分为对照组和NAFLD组,对照组细胞以DMEM/F12培养基培养,NAFLD组给予油酸0.5 mmol/L处理72 h.采用逆转录酶-聚合酶链反应及Western blot和免疫荧光染色方法检测IGF-1和IGFBP-3在两组细胞中的mRNA及蛋白质表达变化.组间均数比较采用t检验. 结果 0.5 mmol/L油酸可成功诱导IHH细胞脂肪变性,油红O染色显示细胞内脂肪滴明显增多,细胞内甘油三酯含量从对照组的(150.2±15.6)μg/ng升高到(275.7±27.2) μg/mg (t=21.67,P＜0.01).油酸诱导后,NAFLD组细胞中IGF-1和IGFBP-3的mRNA相对表达量(分.别为0.76±0.04和1.58±0.93)均较对照组(分别为4.82±1.51和5.41±1.37)明显下降,t值分别为17.915和12.893,P值均＜0.01;IGF-1和IGFBP-3的蛋白质相对表达量(分别为1.00±0.29和0.65±0.36)也较对照组(分别为2.56±0.71和1.23±0.91)明显下降,t值分别为29.17和32.12,P值均＜0.01.免疫荧光染色结果也证实NAFLD组细胞中IGF-1和IGFBP-3的蛋白质表达较对照组明显下降. 结论 非酒精性脂肪变性肝细胞模型的IGF-1和IGFBP-3表达下降,为深入研究临床上部分非酒精性脂肪肝病儿童身高受限的机制提供了实验基础.     

ShRNA靶向干扰EGFR抑制结直肠癌细胞增殖的机制

目的:从细胞周期的角度探讨RNA干扰抑制表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达对结直肠癌细胞增殖影响的机制.方法:以人结直肠癌细胞HCT-15为研究对象,构建EGFR-短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)载体,采用脂质体转染的方法转染细胞,G418筛选稳定细胞株以获得稳定的转染细胞模型,分为4组:转染shRNA-NC,转染shRNA-1组,转染shRNA-2组,转染shRNA-3组;应用半定量RT-PCR和流式细胞术检测转染细胞模型的mRNA和蛋白表达水平;应用平板克隆实验检测转染后细胞增殖能力;应用流式细胞术检测转染后细胞周期的变化.结果:正确构建了shRNA质粒表达载体,成功转染;转染shRNA-1、2、3组较转染shRNA-NC组mRNA、蛋白表达水平均有下降,以转染shRNA-1和2组的抑制效应好(40.2%±3.2%,52.8%±11.3%);转染shRNA-1、2两组较对照组增殖能力下降,G0/G1期细胞增多(63.69±2.75%,60.10±2.00%vs51.08±3.42%)、S期细胞减少(28.20%±...     

pGPU6/GFP质粒介导的表达钙网织蛋白基因的短发夹RNA的构建和鉴定

目的构建靶向钙网织蛋白(CRT)基因的短发夹RNA(shRNA)表达质粒并鉴定。方法设计并合成4对针对CRT基因的shRNA链,退火形成双链,与酶切的质粒pGPU6/GFP连接,构建4个重质粒,转化DH5а菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。脂质体法转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过荧光倒置显微镜判定转染效率,并通过Western印迹法检测细胞中CRT基因及蛋白的表达水平。结果经酶切鉴定筛出的重组质粒测序结果与目的序列相同,重组质粒pGPU6/GFP/Neo-CRT构建成功;转染MDA-MB-231细胞后,CRT基因在mRNA及蛋白水平的表达均降低,其中pGPU6/GFP/CRT1的抑制效果最好。结论成功构建了靶向CRT基因的shRNA表达质粒,并筛选出1种对CRT基因有显著抑制作用的shRNA。     

沉默SIRT1基因表达对胰腺癌细胞PANC1增殖和凋亡的影响

目的 应用RNA干扰技术沉默胰腺癌PANC1细胞的SIRT1基因表达,观察其对细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建靶向SIRT1基因表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒pGC-shRNA,转染胰腺癌细胞PANC1.设对照shRNA(shRNA-C)转染组和未转染对照组.实时定量PCR和免疫细胞化学法检测转染后细胞SIRT1 mRNA及蛋白的表达;MTT法检测细胞的增殖率;ELASA法检测细胞caspase-3和caspase-9活性;Western bloting检测细胞Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 与未转染组相比,shRNA组转染后48 h,PANC1细胞SIRT1 mRNA及蛋白表达的抑制率分别为(76.2%±10.4)%和(80.1±11.6)%;细胞增殖抑制率为(45.1±6.5)%;caspase-3和caspase-9酶活性显著增高;Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调.结论 应用RNA干扰技术能有效沉默PANC1细胞SIRT1基因的表达,其机制可能与caspasa酶活性升高及Bax表达上调、Bcl-2表达下调有关.     

Interaction of JMJD6 with single-stranded RNA

JMJD6 is a Jumonji C domain-containing hydroxylase. JMJD6 binds α-ketoglutarate and iron and has been characterized as either a histone arginine demethylase or U2AF65 lysyl hydroxylase. Here, we describe the structures of JMJD6 with and without α-ketoglutarate, which revealed a novel substrate binding groove and two positively charged surfaces. The structures also contain a stack of aromatic residues located near the active center. The side chain of one residue within this stack assumed different conformations in the two structures. Interestingly, JMJD6 bound efficiently to single-stranded RNA, but not to single-stranded DNA, double-stranded RNA, or double-stranded DNA. These structural features and truncation analysis of JMJD6 suggest that JMJD6 may bind and modify single-stand RNA rather than the previously reported peptide substrates.     

反向遗传学技术对呼吸道病毒研究的促进作用

反向遗传学技术,即病毒的全长感染性cDNA克隆技术,它解决了对RNA病毒基因组难以操作这一多年难题。由于多数呼吸道病毒属于RNA病毒,因此反向遗传学技术在深入研究呼吸道病毒基因组结构功能、研制筛选候选疫苗株等方面显示出非常好的应用前景。本文就呼吸道病毒反向遗传学技术的建立及应用进展进行了综述。     

Structural and biochemical insights into 2′-O-methylation at the 3′-terminal nucleotide of RNA by Hen1

Small RNAs of ≈20–30 nt have diverse and important biological roles in eukaryotic organisms. After being generated by Dicer or Piwi proteins, all small RNAs in plants and a subset of small RNAs in animals are further modified at their 3′-terminal nucleotides via 2′-O-methylation, carried out by the S-adenosylmethionine-dependent methyltransferase (MTase) Hen1. Methylation at the 3′ terminus is vital for biological functions of these small RNAs. Here, we report four crystal structures of the MTase domain of a bacterial homolog of Hen1 from Clostridium thermocellum and Anabaena variabilis, which are enzymatically indistinguishable from the eukaryotic Hen1 in their ability to methylate small single-stranded RNAs. The structures reveal that, in addition to the core fold of the MTase domain shared by other RNA and DNA MTases, the MTase domain of Hen1 possesses a motif and a domain that are highly conserved and are unique to Hen1. The unique motif and domain are likely to be involved in RNA substrate recognition and catalysis. The structures allowed us to construct a docking model of an RNA substrate bound to the MTase domain of bacterial Hen1, which is likely similar to that of the eukaryotic counterpart. The model, supported by mutational studies, provides insight into RNA substrate specificity and catalytic mechanism of Hen1.     

衰老人胚肺成纤维细胞核转录活性的研究

目的研究人胚肺成纤维细胞（简称２ＢＳ）核体外转录活性与代龄的关系。方法用３ＨＵＴＰ掺入法研究不同代龄２ＢＳ细胞核体外转录活性。结果衰老２ＢＳ细胞核转录活性较年轻组下降３３％（Ｐ＜００１），其催化ｒＲＮＡ和ｔＲＮＡ合成的ＲＮＡ聚合酶（ＲＮＰ）Ⅰ和Ⅲ的转录活性下降２４％（Ｐ＜００５），催化合成ｍＲＮＡ的ＲＮＰⅡ转录活性下降３８％（Ｐ＜００１）；衰老２ＢＳ细胞核内ＲＮＡ被转运至核外的量为总合成量的２９％，明显低于年轻细胞组的４５％（Ｐ＜００１）。结论衰老２ＢＳ细胞核转录活性的下降可能与其ＲＮＰ的活性与ＲＮＡ的转运水平下降有关。     

补肝养髓法对老年性痴呆海马神经元RNA和Nissl体的定量研究

目的观察补肝养髓法对自发老年性痴呆模型海马神经元内RNA和Nissl体的影响.方法用跳台实验(step-downtest)从21月龄昆明种小鼠筛选出自发老年性痴呆(记忆障碍)鼠,随机分为空白对照组、西药对照组、补肝养髓小剂量组、补肝养髓大剂量组,另设老年学习记忆正常组(老年正常组).西药对照组给以喜得镇(Hydergine)0.6mg/kg,补肝养髓小、大剂量组分别予补肝养髓方6.80 g/kg及20.41g/kg,连续60 d,正常对照和痴呆对照组均灌以等量双蒸馏水(DW);脑组织冰冻切片,细胞化学方法显示大脑皮质和海马神经元内RNA和Nissl体,全自动显微图像分析系统定量检测相关脑区RNA和Nissl体含量.结果补肝养髓法能显著增高大脑皮质和海马锥体细胞的RNA和Nissl体含量,而且其作用呈现出一定的量效关系.结论补肝养髓方可明显改善自发老年性痴呆模型的学习记忆关键脑区海马的神经元结构,并显著改善其海马神经元的RNA代谢.     

小干扰RNA阻断Olf-1/EBF相关锌指蛋白信号通路对狼疮抗核抗体产生的影响

目的 运用RNA干扰(RNAi)技术研究Olf-1/EBF相关锌指蛋白(OAZ)对其信号通路相关基因的干预作用及对狼疮抗核抗体(ANA)产生的影响.方法 采集并分离系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞,分为实验组、阳性对照组、阴性对照组和空白对照组进行细胞培养.实验组和阳性对照组分别用OAZ和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)小干扰RNA(siRNA)在体外对培养细胞进行干扰,阴性对照组采用无关RNA序列,空白对照组为培养基对照.72 h后分离细胞和上清液,从细胞中提取RNA,逆转录为cDNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析不同分组OAZ信号通路相关基因OAZ、分化抑制因子(Id)1、Id2、Id3、Id4 mRNA表达水平的变化.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定上清液中干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4、IL-10、IL-12、IL-21、CC趋化因子配体(CCL)2、抗核抗体(ANA)浓度,并分析这些因子分泌水平与OAZ基因表达的相关性.结果 实验组OAZ、Id1、Id2、Id3基因的mRNA表达水平(△Ct分别为12.5±1.4、8.9±1.5、4.3±0.8、8.0±1.1)较阴性对照组(△Ct分别为10.2±1.1、6.5±1.2、2.4±1.3、6.2±1.2)显著降低(P<0.05);Id4表达水平虽较阴性对照组有低表达趋势,但差异无统计学意义.实验组IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-21、ANA的水平明显低于阴性对照组;而CCL2高于阴性对照组(P<0.05).实验组与阴性对照组OAZ mRNA表达水平△△Ct值与ANA的A比值、IL-21浓度比值呈负相关;与Th1/Th2、CCL2比值呈正相关.结论 OAZ siRNA可有效降低狼疮外周血单个核细胞中OAZ信号通路相关基因表达,同时减低多种细胞因子及抗核抗体水平,推测OAZ可能通过Id基因影响细胞因子的水平并导致ANA异常表达.     

肝癌转移相关的微小RNAs在不同转移潜能肝癌细胞系的定量研究

目的 研究与转移密切相关的微小RNAs(miRNAs)在不同转移潜能肝癌细胞系的表达水平,探讨其在肿瘤转移过程中的生物学功能.方法 提取细胞系MHCC97H、MHCC97L、HepG2、L02的总RNA,通过反转录获得特异miRNA(miR-122a、miR-124a、miR-148a、miR-148b、miR-15a、miR-219、miR-30c、miR-338、miR-34a、Let-7g、miR-9)的cDNA,并应用TaqMan MGB探针法对其进行定量检测.采用AB17500系统软件V1.3.1采集Ct值,并使用miRNA内参基因RNU6B校正,相对定量计算公式RQ=2-△Ct,A Ct=CtmiRNAs-CtRNu6B.数据均经SPSS13.0统计软件包处理,采用t检验或非参数检验. 结果 转移相关的miRNAs(miR-124a除外)在MHCC97H与MHCC97L中表达,差异均有统计学意义.HepG2中miR-30c、miR-338、miR-34a和Let-g的表达水平明显高于L02,分别为miR-30c(8.41±0.40比6.82±0.29),miR-338(3.14±0.29比-2.36±0.32),miR-34a(0.71±0.40比-2.95±0.26),Let-7g(-4.07±0.55比-6.98±0.56),t值依次为2.948,12.656,7.484,3.684,P值均＜0.05,差异有统计学意义.而miR-148b,miR-9的表达则显著低于正常肝细胞,分别为miR-148b(1.96±0.51比3.76±0.28),miR-9(-4.38±0.86比-1.10±0.53),t值依次为-3.073,-3.324,P值均＜0.05,差异有统计学意义.miR-148家族中miR-48b在所测细胞系中的表达(5.46±1.21)均显著强于miR-148a的表达(1.29±0.35),Z=-5.097,P=3×10-7,差异有统计学意义.结论 可以利用肝癌细胞系列细胞平台进一步研究肝癌转移相关miRNAs在肿瘤转移过程中的生物学功能.