儿童急性淋巴细胞白血病染色体及融合基因表达的临床研究

目的 研究儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞遗传学改变和预后的关系.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测103例儿童ALL患者常见的融合基因、染色体数和结构,分析染色体和融合基因的变化对治疗反应及生存时间的影响.结果 103例患儿中,52例染色体数正常,未检出融合基因.51例检出融合基因,其中TEL-AML1阳性22例,bcr-abl阳性10例,E2A-PBX1阳性11例,MLL-AF4阳性2例,HOX11阳性3例,SIL-TAL1 1例,dupMLL 1例,TLS-ERG 1例.bcr-abl组平均生存时间短于未检出异常基因组、TEL-AML1组、E2A-PBX1组,差异均有统计学意义[(16.5±3.8)个月比(34.6±1.7)个月、(31.6±1.4)个月、(34.5±3.3)个月,均P＜0.05],与其他异常基因组[(12.8±1.5)个月]差异无统计学意义(P＞0.05).未检出异常基因组平均生存时间与TEL-AML1组及E2A-PBX1组比较,差异均无统计学意义(均P＞ 0.05),与其他异常基因组间差异有统计学意义(P＜0.05).染色体数异常18例,其中亚二倍体4例,超二倍体14例.亚二倍体患儿平均生存时间短于超二倍体患儿[(19.8±4.8)个月比(37.5±2.2)个月,x 2=7.375,P=0.007],易复发.初诊时不同白细胞计数和乳酸脱氢酶水平的患儿平均生存时间差异有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 融合基因及染色体数等细胞遗传学指标的检测可用于判断儿童ALL的预后和转归,对实现个体化治疗有重要指导意义.     

儿童急性淋巴细胞白血病TEL-AML1融合基因检测

 目的　检测儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）中TEL-AML1融合基因的阳性率,探讨TEL-AML1融合基因的检测方法及其临床应用价值。方法　在形态学、免疫分型、细胞遗传学基础上,采用巢式反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和荧光原位杂交技术（FISH）检测31例ALL患儿骨髓单核细胞中TEL-AML1融合基因。结果　巢式RT-PCR技术和FISH技术均可以显著提高TEL-AML1融合基因的检出率,应用上述两种方法,31例患儿中检测出7例TEL-AML1阳性,占儿童初发ALL的22.6 %（7／31）,在B系ALL中的阳性率为25.9 %（7／27）。结论　t(12;21)形成TEL-AML1融合基因是儿童ALL最常见的染色体易位,常规染色体核型分析极难发现,需用巢式RT-PCR或FISH等分子检测方法加以证实。     

多重巢式RT-PCR技术在急性髓系白血病中的应用

 目的　探讨急性髓系白血病（AML）染色体畸变所形成的融合基因与MICM分型及临床诊断、治疗、预后的关系。方法　采用多重巢式RT-PCR方法对60例AML患者的融合基因联合染色体核型、免疫表型、临床资料进行研究。结果　60例AML中有37例（61.67 %）具有5种融合基因：MLL-AF9、TLS-ERG、CBFβ-MYH1、AML1-ETO、PML-RARα。13例患者有HOX11原癌基因活化,10例为单纯表达HOX11原癌基因活化,3例同时伴有其他融合基因表达。伴AML1-ETO、PML-RARα的31例患者中接受化疗的23例全部达完全缓解（CR）,且无复发。结论　基因分型是AML最精确的分型方法,可为临床化疗提供指导。采用多重巢式RT-PCR方法可快速同时检测急性白血病29种染色体畸变所形成的融合基因,完善白血病的MICM分型,指导临床个体化治疗。     

急性白血病MLL基因重排检测的临床意义

 目的　研究混合谱系白血病（MLL）基因重排在急性白血病（AL）中的发生率、产生融合基因的常见类型及其临床意义。方法　采用多重巢式RT-PCR法对109例AL患者进行免疫表型检测,分析MLL基因重排阳性患者的临床特征。结果　109例AL中7例发生MLL基因重排,发生率为6.4 %,其中AML 4例（1例为M2,1例为M4,2例为M5）, ALL 3例,均为B-ALL。多重巢式RT-PCR检测到的融合类型为MLL-AF4、MLL-AF6、MLL-AF9、MLL-AF10、MLL-ENL。MLL基因重排阳性患者外周血WBC高于MLL基因重排阴性患者,差异有统计学意义（P＝0.019）。结论　多重巢式RT-PCR是检测MLL基因重排快速有效的方法。伴MLL基因重排的AL患者WBC较高,预后差。     

七例伴有TLS-ERG融合基因的儿童急性白血病临床和实验研究

 目的　位于染色体16p11的TLS基因与位于21q22的ERG基因融合形成TLS-ERG融合基因,分析伴有TLS-ERG融合基因的儿童急性白血病形态学、免疫学、细胞遗传学和临床特点。方法　采用巢式反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TLS-ERG融合基因转录本,联合染色体反带核型分析和流式细胞仪免疫表型进行分析。结果　TLS-ERG融合基因在急性髓细胞性白血病（AML）和急性淋巴细胞性白血病（ALL）中均有表达;未发现典型的t（16;21）（p11;q22）染色体核型;行免疫分型的7例白血病患儿中,除2例外其余均有CD34表达;3例AML和1例ALL患儿分别在确诊后1～3个月内死亡,１例临床分型为标危的ALL患儿在持续缓解28个月接受系统正规治疗中出现复发,复发时检测TLS-ERG融合基因由原来的持续阴性转为阳性。结论　伴有TLS-ERG融合基因的白血病细胞发生在造血分化的较早阶段;有该基因表达的AML患儿病情进展快;可将其作为白血病患儿治疗过程中微小残留病灶检测的一项指标。     

急性白血病患者混合谱系白血病基因重排的检测

 【摘要】　目的　探讨荧光原位杂交（FISH）技术和多重巢式RT-PCR技术对急性白血病（AL）患者混合谱系白血病（MLL）基因重排检测的价值。方法　采用MLL双色FISH基因探针,应用间期FISH和多重巢式RT-PCR技术对189例AL患者进行检测,同时进行染色体R或G显带。结果　179例AL患者行FISH检测,其中9例（5.03 %）MLL基因重排阳性[无MLL-部分串联重复（PTD）],而经多重巢式RT-PCR检测的189例中16例（8.47 %）MLL基因重排阳性,包括MLL／AF9、MLL／AF10、MLL／AF6、MLL／AF17、MLL／ELL、MLL-PTD,189例患者同时进行染色体R或G显带,其中仅5例（2.65 %）涉及11q23的相互易位。急性淋巴细胞白血病（ALL）（73例）与急性髓系白血病（AML）（116例）中6种常见MLL基因重排的发生率差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论　多重巢式RT-PCR技术是对初诊AL患者进行MLL基因重排筛检的有效方法,不仅能证实常规细胞遗传学易位,还能检测出染色体核型分析和FISH技术均不能检出的 MLL-PTD,为预后判断和治疗方案的选择提供依据。     

多重巢式RT-PCR和染色体核型分析技术在急性髓系白血病中的联合应用

背景与目的:细胞遗传学分析在白血病的诊断和预后判断中有重要价值,但常规显带不仅耗时,且难以获得良好的分裂相;而聚合酶链反应具有灵敏、快速的特点.本研究探讨联合应用多重巢式RT-PCR和染色体核型分析,对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中融合基因的表达及其在各亚型的分布和克隆性染色体异常的检出情况.方法:采用多重巢式RT-PCR技术对60例AML病例进行检测,其中37例同时进行染色体R或G显带.结果:60例AML患者中检出融合基因28例(46.7%),包括AML1/ETO、PML/RARα、CBFβ/MYH11、MLL基因异常(包括MLL/AF6、MLL/AF9、MLL/AF10、MLL/MLL)、DEK/CAN、TEL/PDGFR、AML1/MDS1(EVI-1).同时进行染色体R或G显带的37例病例中有30例可供分析,其中14例(46.7%)检出染色体结构和数目异常;联合多重RT-PCR可使AML克隆性染色体异常检出率增至59.5%(22/37).结论:联合多重巢式RT-PCR和染色体核型分析技术可以提高克隆性染色体异常的检出率.     

341例儿童急性淋巴细胞白血病融合基因表达及临床特点分析

目的 探讨儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）融合基因表达情况及临床特点。方法 回顾性分析2018年1月至2021年12月河南省儿童医院收治的341例初发ALL患儿的临床资料,根据融合基因检出情况分为融合基因阳性组和阴性组,比较不同组间的临床特点、完全缓解率、复发率、死亡率等指标。结果 341例ALL患儿融合基因阳性检出率为48.1%(164/341),共检出15种融合基因,包括TEL-AML1、KMT2A重排、E2A-PBX1、BCR-ABL1、MEF2D重排、SIL-TAL1等。不同年龄组间融合基因表达差异有统计学意义（P<0.001）,其中KMT2A重排多见于<1岁组,MEF2D重排多见于>10岁组。KMT2A重排+、BCR-ABL1+、MEF2D重排+和SIL-TAL1+患儿易发生高白细胞血症,且后3类患儿更易发生中枢神经系统受累。KMT2A重排（P<0.001）、BCR-ABL1(P=0.001)、MEF2D重排（P=0.001）多见于高危患者。融合基因阳性组基因突变检出率显著低于阴性组（27.9%...     

多重巢式反转录-聚合酶链反应检测白血病相关融合基因及其临床意义

 目的　检测白血病相关29种染色体结构畸变形成的融合基因并对其在白血病MICM分型、危险度分组和微小残留病（MRD）检测中的临床价值进行分析。方法　采用多重巢式反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法对141例白血病患者进行29种染色体结构畸变形成的融合基因进行分析,并与骨髓染色体检测结果进行对比分析。结果　141例白血病患者骨髓或外周血标本中, 66例（46.8 %）阳性,具有13种染色体结构畸变产生的融合基因, 包括PML／RARα、bcr-abl p210、bcr-abl p190、AML1／ETO、TEL／AML1、E2A／PBX1、MLL／AFX、MLL／AF6、MLL／AF9、dupMLL、MLL／ENL、CBFβ／MYH11、TLS／ERG等。在78例ALL和57例AML标本中,分别有27例（47.4 %）和33例（42.3 %）为阳性,染色体结构畸变产生的融合基因分别为7种和6种。结论　采用多重巢式RT-PCR 方法,可快速分析29种染色体结构畸变产生的融合基因,可同时筛选出29种急性白血病的常见染色体易位,帮助临床诊断、疾病危险度分组、预后判断和治疗后微量残留病的检测。     

儿童急性淋巴细胞白血病遗传学特征

目的：分析儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）遗传学变化的特点.方法：以94例初发ALL患儿为研究对象,采用染色体核型分析及多重PCR技术检测患者骨髓白血病细胞的细胞遗传学和分子生物学变化.结果：63例患儿做了核型分析,有分裂象者55例,其中异常者12例（19.0%）;无分裂象者8例（12.7%）.对93例患儿进行了多重PCR检测,其中包括53例染色体有分裂象患儿和8例无分裂象的患儿,41例正常染色体核型患儿中异常者为17例（占41.5%）,12例染色体核型异常者中融合基因异常者4例（33.3%）,无分裂象患者异常2例,无分裂象检出率与有分裂象者核型分析异常检出率差异无统计学意义;93例患儿中融合基因检出率为34.4%（32/93）,其中TEL/AML1融合基因阳性20例（21.51%）,MLL重排3例（3.23%）,BCR/ABL（p190）融合基因阳性3例（3.23%）,E2A/PBX阳性5例（5.38%）,HOX11阳性1例.94例患儿通过两种检测方法共检出细胞遗传学异常46例（48.94%）.结论：儿童ALL可出现细胞遗传学改变.对于有足够分裂象的患者,常规染色体核型分析仍是可靠的方法.对分裂象质量低或无分裂象的儿童ALL患者,多重PCR检测异常克隆能提高细胞遗传学异常检出率.将染色体核型分析及多重PCR结合起来可提高细胞遗传学异常检出率.     

TEL/AML1、BCR/ABL、E2A/PBX1、MLL/AF4阳性儿童急性淋巴细胞白血病的临床特点及预后

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）TEL/AML1、BCR/ABL、E2A/PBX1、MLL/AF4四种融合基因的表达及其临床诊治意义。方法用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)方法检测TEL/AML1、BCR/ABL（p190和p210两种亚型）、E2A/PBX1、MLL/AF4四种融合基因在312例ALL患儿中的表达情况,并总结融合基因阳性患儿的临床和生物学特点、治疗反应及预后情况。结果（1）融合基因阳性共120例,TEL/AML1阳性组72例(23.1%),BCR/ABL阳性组22例(7.1%),p190 16例（5.1%）、p210 6例（1.9%）,E2A/PBX1阳性组18例(5.8%),MLL/AF4阳性组8例(2.6%)。（2）TEL/AML1阳性组诊断时WBC平均值为(18.02±6.45)×109/L,诱导化疗结束完全缓解率(CR)100%,随访期间无复发;BCR/ABL阳性组发病时年龄(9.40±3.55)岁,诱导化疗结束CR 81.8%,强化治疗末仍有6例融合基因未转阴,随访中有8例（36.3%）复发,8例死亡;E2A/PBX1阳性组全部按高危标准给予化疗,诱导化疗结束CR 88.9%,强化治疗期末仍有3例基因微量表达,随访中2例复发;MLL/AF4阳性组发病时WBC(38.41±9.30)×109/L,强化治疗期末仍有2例基因呈阳性,随访中均复发死亡。结论融合基因可作为ALL危险度分层、监测微小残留病、判断预后的重要指标之一。     

表达融合基因的急性B淋巴细胞白血病患者形态学和免疫表型特点

目的:分析6种常见融合基因阳性的急性B淋巴细胞白血病患者骨髓形态学和免疫表型的特点.方法:对108例初诊的急性B淋巴细胞白血病患者,分别利用多重巢式RT-PCR技术和流式细胞术检测融合基因及其免疫表型,将BCR/ABL、TEL/AML1、E2A/PBX1、TLS/ERG、MLL/AF9、MLL/AF46种融合基因阳性者分成6组,分别与融合基因均为阴性者对比,比较形态学和免疫表型的差异.结果:108例急性B淋巴细胞白血病初诊患者中,共检出阳性43例(39.8%).与阴性组相比,BCR/ABL阳性组患者CD10和CD34抗原的表达率升高;TEL/AML1阳性组和TLS/ERG阳性组患者以儿童为主,CD20抗原表达率降低;E2A/PBX1阳性组患者L1型所占比例较高,CD34抗原的表达率降低;MLL/AF9阳性组患者均高表达CD33抗原,MLL/AF4阳性患者缺乏CD13、CD33抗原的表达.结论:6种融合基因在患者年龄构成、形态学及免疫表型中具有一定的分布特点.可结合形态学和免疫表型,提高融合基因结果判读的准确率.     

白血病和淋巴瘤常见染色体融合基因的检测分析

 目的　应用多重巢式RT PCR法 ,结合染色体核型检查分析 75例不同类型白血病观察其治疗和预后。方法　收集 4 1例AML、8例CML、1例CLL、1例PLL、6例MDS、8例NHL、4例MM、5例ALL及 1例嗜酸细胞性白血病患者骨髓标本进行RT PCR及染色体核型检查。结果　 (1)RT PCR示 :75例白血病中 30例阳性条带 ,4 5例无阳性条带。其中M 3:PML/RARA的阳性率为 5 0 % ,PLZF/RARA 8.3% ,(包括 3/ 12例门诊复查病例 ,2 / 12例为同一患者 )。M 4 :CBFB/MYH114 4 .4 % ,MLLex7/MLLex2 11.1%。M5 :MLL/AF6 33.3%。CML :BCR/ABL 87.5 %。MDS :MLLex7/AF4 16 .7% ,EVI1(3q2 6 ) 16 .7%。NHL :EVI1(3q2 6 ) 12 .5 %。MM :HOX115 0 .0 %。ALL :BCR/ABL 2 0 .0 %。 (2 )染色体核型检查多数与融合基因PCR结果相符 ,2例染色体核型检查正常而融合基因检测有阳性条带。结论　 (1)某些融...     

132例初发儿童急性淋巴细胞白血病免疫表型及细胞遗传学特征分析

目的：探讨儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的免疫表型及细胞遗传学特征,为其诊断及治疗提供依据。方法：采用多参数流式细胞术（FCM）对132例初发儿童 ALL 患者进行免疫表型分析,并应用荧光原位杂交（FISH）技术检测其细胞遗传学特点。结果：132例 ALL 患者中,12.9%（17/132）为 T 淋巴细胞急性淋巴细胞白血病（T - ALL）,87.1%（115/132）为 B 淋巴细胞急性淋巴细胞白血病（B - ALL）。46.2%（56/132）的ALL 患者表达髓系抗原,CD13是 ALL 中最常见的髓系抗原,其阳性率为28.0%。T - ALL 髓系相关抗原表达阳性率为47.1%,与 B - ALL 的46.1%比较,差异无统计学意义（χ2=0.006,P =0.940）。可供核型分析的96例 ALL 中,核型异常者50例（52.1%）,其中染色体数目异常26例,染色体结构异常24例。96例 ALL 患者中,TEL/ AML1融合基因阳性21例（21.8%）,BCR/ ABL 融合基因阳性14例（14.6%）,TCF3/ PBX1融合基因阳性5例（5.2%）,MLL 重排3例（3.1%）。对不同免疫分型患者细胞遗传学异常检出率进行比较,差异均无统计学意义（P >0.05）。结论：儿童 ALL 免疫表型和细胞遗传学具有一定的特点,两者联合检测对 ALL 的诊断及分型具有重要的价值。     

Myeloid antigens in childhood lymphoblastic leukemia:clinical data point to regulation of CD66c distinct from other myeloid antigens

Background  

Aberrant expression of myeloid antigens (MyAgs) on acute lymphoblastic leukemia (ALL) cells is a well-documented phenomenon, although its regulating mechanisms are unclear. MyAgs in ALL are interpreted e.g. as hallmarks of early differentiation stage and/or lineage indecisiveness. Granulocytic marker CD66c – Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 (CEACAM6) is aberrantly expressed on ALL with strong correlation to genotype (negative in TEL/AML1 and MLL/AF4, positive in BCR/ABL and hyperdiploid cases).     

Ten-year Experiences on Initial Genetic Examination in Childhood Acute Lymphoblastic Leukaemia in Hungary (1993–2002). Technical Approaches and Clinical Implementation

A nationwide study was started in 1993 to provide genetic diagnosis for all newly diagnosed childhood ALL cases in Hungary using cytogenetic examination, DNA-index determination, FISH (aneuploidy, ABL/BCR, TEL/AML1) and molecular genetic tests (ABL/BCR, MLL/AF4, TEL/AML1). Aim of the study was to assess the usefullness of different genetic methods, to study the frequency of various aberrations and their prognostic significance. Results were synthesized for genetic subgrouping of patients. To assess the prognostic value of genetic aberrations overall and event-free survival of genetic subgroups were compared using Kaplan-Meier method. Prognostic role of aberrations was investigated by multivariate analysis (Cox’s regression) as well in comparison with other factors (age, sex, major congenital abnormalities, initial WBC, therapy, immunophenotype). Five hundred eighty-eight ALL cases were diagnosed between 1993–2002. Cytogenetic examination was performed in 537 (91%) (success rate 73%), DNA-index in 265 (45%), FISH in 74 (13%), TEL/AML1 RT-PCR in 219 (37%) cases producing genetic diagnosis in 457 patients (78%). Proportion of subgroups with good prognosis in prae-B-cell ALL was lower than expected: hyperdiploidB 18% (73/400), TEL/AML1+ 9% (36/400). Univariate analysis showed significantly better 5-year EFS in TEL/AML1+ (82%) and hyperdiploidB cases (78%) than in tetraploid (44%) or pseudodiploid (52%) subgroups. By multivariate analysis main negative prognostic factors were: congenital abnormalities, high WBC, delay in therapy, specific translocations. Conclusion: Complementary use of each of genetic methods used is necessary for reliable genetic diagnosis according to the algorythm presented. Specific genetic alterations proved to be of prognostic significance.