含AB型血清培养体系人角质形成细胞培养

目的：探讨人体角质形成细胞的培养技术，观察人角质形成细胞生长的过程，为培养角质形成细胞膜片提供新的方法。方法：采用改良后的含胎牛和人AB型血清培养体系进行人角质形成细胞的培养。结果：含人AB型血清培养体系培养的角质形成细胞5d融合达70％，9d达90％，11d完全融合，细胞分裂指数高峰在9d左右，可达1．1％，而不合AB型血清组培养的细胞5d后即出现退化样生长，不形成细胞膜片。进一步对含A13型血清的不同培养系统进行培养，将增殖高峰期培养的角质形成细胞应用MTT比色法测细胞增殖活性，进行比较，P〉0．05，表明添加F12、TC199、1640后对培养的角质形成细胞增殖作用无差异。结论：人AB型血清能够对体外培养的角质形成细胞生长起到刺激作用。     

猪蛔虫幼虫体外培养的初步研究

目的研究适合猪蛔虫幼虫体外培养的最佳条件。方法将猪蛔虫幼虫在不同培养液（KW-2、RPMI-1640、DMEM（含酚红）、DMEM（不含酚红））中进行培养,并观察其存活、生长以及发育情况。结果幼虫在KW-2培养液中生长情况最好,虫体活力很强,3d后成活率最高达87.67%,其次是在RPMI-1640培养液中。在培养液DMEM（含酚红）、DMEM（不含酚红）中生长情况较差,存活不超过7d。其中KW-2培养液中在4～5d出现虫体头端有松动的鞘出现,在RPMI-1640培养液中7～8d出现鞘松动,DMEM（含酚红）、DMEM（不含酚红）中未发现有脱鞘现象出现。结论猪蛔虫的体外培养的最佳条件还需要进一步探索,从而为研究寄生线虫的发育生物学以及特异性发育的功能基因组学奠定基础。     

周期型马来丝虫感染期幼虫在人卵巢癌细胞系中的体外培养

周期型马来丝虫感染期幼虫(L_3)在三种添加10％小牛血清和含人卵巢粘液性囊腺癌细胞系(OMC_(685))的RPMI1640培养系统中均能蜕皮发育为L_4。在添加葡萄糖的上述培养系统中,幼虫最长存活66d,蜕皮率和完成蜕皮率分别达57.1％和89.3％,幼虫的长宽度增长率分别达216.4％和194.9％。在不含细胞系的培养液中,幼虫最长存活14d,基本上不蜕皮。本实验结果表明OMC68细胞系所产生的某些物质有利于周期型马来丝虫L_3体外的生存和发育,能使L_3在存活时间、蜕皮及发育等方面有明显改善。本实验还进一步证实了葡萄糖对丝虫L3体外培养的促进作用。     

人类中脑神经祖细胞的体外扩增及诱导分化

目的：探讨人类中脑祖细胞体外分离、培养及向多巴胺能神经元诱导分化的方法。方法：利用neurosphere法，在低氧分压的情况下建立中脑祖细胞克隆，并用纹状体培养上清对其进行诱导分化，观察TH阳性神经元的分化比率及成熟度。结果：中脑来源的神经祖细胞克隆，能以neurosphere形式生长，低氧分压对其克隆生长具有促进作用；纹状体培养上清可增加TH阳性神经元的分化比率，并能使TH阳性细胞具有更成熟的多巴胺能神经元的形态特征。结论：低氧分压更适于中脑神经祖细胞的体外扩增，纹状体培养上清对中脑祖细胞向多巴胺能神经元的分化及成熟具有促进作用。     

天然细胞生长调控因子对原代培养神经细胞生长影响的实验研究

目的：观察天然细胞生长调控因子（NCGCF）对原代培养的神经细胞生长的影响，探讨其作用机理。方法：取Wistar大鼠乳鼠的大脑皮层神经细胞作原代细胞培养，将培养皿编号后分别在奇数孔加入NCGCF，偶 孔加入对照剂，倒置相差显微镜下观察两组神经细胞的生长情况。结果：加入NCGCF的实验组的神经细胞其突起长度较对照组长，生存时间也较对照组延长，差别均有显著性意义（均P＜0．01）。结论：NCGCF具有促进神经细胞突起的生长并延长神经细胞生存时间的作用。     

一例骨髓瘤患者骨髓细胞体外长期培养

本文对1例骨髓瘤患者的骨髓细胞在体外进行了长期传代培养,探讨了各种白血病细胞系培养上清液对细胞生长的调控作用。对培养的细胞进行了形态学、生物化学、免疫学特征和超微结构研究及药敏试验。结果证明6种细胞培养上清液均对细胞的生长有促进作用。培养的骨髓细胞具有恶性细胞的生物学特征,可能为B细胞系恶性细胞。     

人皮肤瘢痕成纤维细胞原代培养及其生长曲线的研究

目的 建立可靠的人皮肤瘢痕成纤维细胞培养方法,探索细胞的生长规律,为皮肤瘢痕体外研究提供平台.方法 采用组织块贴壁法原代培养瘢痕成纤维细胞,波形蛋白免疫细胞化学法鉴定成纤维细胞,CCK-8测定细胞生长曲线.结果 人皮肤瘢痕原代成纤维细胞培养成功,细胞形态为长梭形,波形蛋白表达阳性,16～18天可传第1代,以后每7～8天可传1代,传代后5～6天时为活跃期,第7天进入停滞期.结论 培养出的人皮肤瘢痕成纤维细胞在传代后第5～6天最适于于体外实验研究.     

日本血吸虫肝门型童虫在体外培养中的生长、发育和产卵

本文报导在不同培养基中日本血吸虫肝门型童虫的生理活动、生长、生殖器官的发育和产卵。结果表明:在培养35d 内,不同培养基中童虫雌雄合抱率均有随培养时间延长而升高的趋势;M-841培养基、M-841+影细胞培养基中童虫生长速度快于841培养基,但三种培养基中睾丸、卵巢的生长速度差异无显著性(P>0.05)。培养35 d 时,在以上三种培养基中童虫卵黄腺均可发育成熟。最早于培养10d 时,在 M-841+影细胞培养基中查见体外产出的虫卵。提示 M-841影细胞培养基比较适合于肝门型童虫的体外培养。     

培养基对兔骨髓间充质干细胞体外扩增的影响

目的考察含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基(DMEM HG, 10％FBS)、10％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG,10％FBS)、15％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG, 15％FBS)、20％胎牛血清的低糖DMEM培养基(DMEM LG, 20％FBS)对兔骨髓间充质干细胞体外贴壁、扩增的影响。方法① 选2月龄的新西兰大白兔,股骨转子间区抽取骨髓利用密度梯度离心贴壁法分离纯化细胞,体外培养。选取传代第一代骨髓间充质干细胞 (passenger one, P1)分别用以上4种细胞培养基培养,测细胞扩增倍数;② 选取传代第二代骨髓间充质干细胞(passenger two, P2)分别将以上4种细胞培养基混悬液接种于24孔板中,观察细胞生长状态并测生长曲线;③ 选取4种培养基中培养效果最好的一组细胞,以密度0.5×104/mL接种于24孔板中,成骨诱导,茜素红染色测其矿化能力。结果DMEM LG(15％FBS) 组中细胞扩增倍数为(16.20±1.60)倍,细胞集落形成数为6.11±1.17,与其它组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,并矿化能力最强。结论DMEM LG (15%FBS)培养基较其他3种培养基更符合兔骨髓间充质干细胞体外扩增培养的条件,且更好的保持了细胞的正常形态和生物活性。     

Serum-free media for articular chondrocytes in-vitro expansion

Background In vitro chondrocyte expansion is a major challenge in cell-based therapy for human articular cartilage repair.Classical culture conditions usually use animal serum as a medium supplement,wh...     

发菜人工培养途径初探

目的 本实验通过对不同培养方式和不同培养基发菜的生长情况进行分析，以探索发菜人工培养的途径。方法 以不同的培养基以及培养基加营养物质对发菜的藻体、藻丝及细胞在昼夜温度和光照变化中进行培养，以观察、分析发菜的生长情况。结果 发菜在液体培养方式下的生长情况好于固体培养方式。结论 水份在发菜的生长繁殖中具有首要作用。此外，干燥条件可以影响细菌和真菌对发菜结构的破坏。     

IN VITRO TISSUE CUL,TURE STUDY ON GIANT CELL TUMOR OF BONE

In vitro tissue culture of 22 giant cell tumors (GCTs) of the bone in 19 cases was undertaken. Primary growth was successful in all. 11 were Grade I tumors, 10 Grade n and l Grade III. The average survival of the 3 grades of GCTs was in order 167.3, 219 and 625 days. Of these, 6 were postoperative recurrent GCTs, their life span ranging from 198 t0 6.25 days. It is apparent that the higher the pathologic grade of GCT, the longer the survival of cultured cells. Recurring tumors also manifested more active growth po- tential. This lends support to the view that the existing pathologic grading remains valuable for clinical reference. Multinucleated giant cell usually survived 3 weeks, occasionally 3 months. Growth of the stromal cells maint.ained from 5 weeks t0 8 months. The circumstantial evidence indicates that the stromal cells, not the giant cells, should be considered as the offending neoplastic invader.     

昆明小鼠成熟卵母细胞体外受精及受精卵体外培养的研究

目的通过比较获能受精液成分及成熟卵母细胞的处理方法，观察对昆明小鼠体外受精(IVF)效果的影响和用于早期胚胎培养的三种发育培养液培养效果，探讨并建立起适合于昆明小鼠卵子体外受精与受精卵体外发育的实验体系。方法用T6或FM两种获能受精液对采自昆明雄鼠附睾尾的精子与成熟卵母细胞进行体外受精(IVF)，受精前对成熟卵母细胞选用透明质酸酶去除卵丘细胞和不去卵丘细胞(对照组)两种方法进行处理，受精卵分别用M16、改良的CZB液(mCZB)和改良的M16液(mM16)三种发育培养液对体外受精胚进行培养。结果选用FM获能受精液的受精率极显著高于T6液(92．3％对64．7％)，且体外受精前先用透明质酸酶处理的成熟卵母细胞比对照组成熟卵母细胞受精率要低(59．2％对64．7％)，但差异不显著；用mM16培养液进行培养时桑胚率及囊胚率(55．3％和35．6％)显著高于mCZB(13．3％和8．1％)和M16培养液(17．3％和14．7％)，后两者差异不显著。结论昆明小鼠卵子体外受精时宜选用FM受精获能液，不宜用透明质酸酶去除卵丘细胞，且宜选用mM16培养液对昆明小鼠体外受精卵进行早期培养，其中的亚硫磺酸钠可有效的克服2-细胞胚后的体外发育阻滞现象。     

溪黄草离体培养和快速繁殖

目的：探讨溪黄草Isodon serra (Maxim).Kudo离培养的过程,为优良品种的快速繁殖奠定基础。方法：以溪贡草无菌苗的带节茎为外植体,采用MT基体培养基,附加不同植物激素进行试验。结果：培养基中附加激素BA有利于芽的发生;适宜的BA浓度为1mg/L,出芽率高达100％,且出芽数量多;基本培养基以完全的MT成分为好;生根据培养选择MT＋0．2mg/L NAA,生根率为100％,试管苗移栽,成活率为90％,结论,通过溪黄草离体培养的研究,获得了较高的植株再生频率,建立了有效的组织培养再生体系。     

米诺环素对阿糖胞苷引起的离体毛囊损伤的保护作用

目的:观察米诺环素对阿糖胞苷(Ara-c)诱导的小鼠触须毛囊损伤的保护作用.方法:用离体器官培养的方法,在倒置显微镜下每日测量不同浓度米诺环素与不同浓度阿糖胞苷作用下毛囊生长长度,记录生长天数,并用MTT法测定米诺环素与阿糖胞苷对体外培养乳鼠毛囊球部细胞存活率的影响.结果:0.3×10-6 mol/L以上浓度的米诺环素能阻止阿糖胞苷对毛囊生长长度的抑制作用,延长化疗药物损伤后毛囊在体外的生长时间;米诺环素也能明显改善阿糖胞苷对体外培养乳鼠毛囊球部细胞存活率的抑制作用.结论:米诺环素在体外对阿糖胞苷诱导的毛囊损伤有保护作用,可能成为预防化疗后脱发的有效药物.     

马来丝虫微丝蚴体外培养发育到腊肠期蚴

从动物模型长爪沙鼠腹腔内获取的马来丝虫微丝蚴,在含20mMCaCl_2的HBSS缓冲液内人工脱鞘后,在28±1°C下,分别培养于添加有0,65％水解乳蛋白、10％小牛血清,含蚊细胞系或不含蚊细胞系的TC199培养液中。结果表明:微丝蚴在含中华按蚊细胞系的TC199培养液中能发育,培养12天有25.5％发育至腊肠期蚴。而在另外两种培养系统中,微丝蚴只存活不发育。     

Effect of Traditional Chinese Medicine on the Growth and Invasion of Human First Trimester Cytotrophoblasts in vitro

Objective To investigate the effect of Traditional Chinese Medicine（TCM） on the growth and invasion of human first trimester cytotrophoblasts in vitro.
Methods Serum contained drug was collected from rats adiministered with herbs intragastricly. Serum collected from rats administered with saline was used as the control. Isolated from first trimester placental tissues, human cytotrophoblast cultured in media with 5%, 10%, 20% drug-containing serum for a 24 h, 48 h or 72 h period. Then cell morphology was measured by scanning electric microscope, cell viability by MTT assay, cell DNA content by flow cytomester, and cell invasion by transwell assay.
Results After a 48 h- and 72 h-culture period in media with drug-containing rat serum, cytotrophoblast showed more and longer cell pseudopodia than control cells. In addition, cytotrophoblast exhibited more cell microvillous than control cells after a 72 h culture with drug-containing serum. Cell viability cultured with drug-containing serum was higher than control cells. Cells cultured with drug-containing serum in S phase were more, by contrast, in sub-G1 and G2/M phase were less than the control. Cells cultured with drug-containing serum for 72 h showed significantly greater invasive ability than control cells.
Conclusion TCM had a beneficial role in the growth and invasion of human first trimester cytotrophoblast in vitro.     

用条件培养液代替重组因子培养小鼠高增殖潜能集落形成细胞

利用富含ＩＬ－３的ＷＥＨＩ－３细胞条件培养液（ＷＥＨＩ３－ＣＭ）和富含Ｍ－ＣＳＦ的Ｌ９２９细胞条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ）代替重组因子在体外用单层琼脂法培养小鼠ＨＰＰ－ＣＦＣ获得成功。在合用ＷＥＨＩ３－ＣＭ和Ｌ９２９－ＣＭ的基础上，联合ｒｈＩＬ－１，ｒｈＩＬ－６和ｒｍＧＭ－ＣＳＦ，ＨＰＰ－ＣＦＣ的产率有所提高。用５－ＦＵ处理小鼠２天后，骨髓细胞中ＨＰＰ－ＣＦＣ得以浓集。产生的ＨＰＰ－ＣＦＣ集落直径     

EphrinB2基因工程的骨髓间质干细胞对分化成血管内皮细胞的影响

目的 观察研究ephrinB2基因转染对体外诱导环境大鼠骨髓问质干细胞(BMSCs)分化成血管内皮细胞的促进作用.方法 采用密度梯度离心-贴壁培养法从Wistar大鼠骨髓中得到BMSCs.采用lenti-virus载体装载人ephrinB2基因转染大鼠BMSCs.采用流式细胞计数测定CD105、CD73、CD44、八因子(VWF)和血管内皮生长因子受体(KDR)等标志物在ephrinB2-BMSCs中的表达,并探讨其向成骨细胞及脂肪细胞体外分化的多向分化潜能.以2％FBS和50ng/ml血管内皮生长因子(VEGF)的培养条件,体外诱导ephrinB2-BMSCs向血管内皮细胞分化,并测定相应标志物的表达.结果 未经诱导分化的ephrinB2-BMSCs表达CD105、CD73和CD44,不表达血管内皮细胞特异性标志物VWF和KDR.转染后的ephrinB2-BMSCs依然具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的多向分化潜能.经诱导,ephrinB2-BMSCs表达VWF与KDR,并且其生成血管内皮细胞的比率及在Matrix基质上形成毛细血管样结构的比率均显著高于未转染ephrinB2的BMSCs.结论 ephrinB2基因工程的BMSCs具有极高的向血管内皮细胞分化的潜能.这种基因工程细胞为建立冠心病患者的临床治疗新方法提供了有意义的资源.     

垂体泌乳素分泌腺瘤细胞体外培养和激素分泌的研究

为研究垂体泌乳素(PRL)腺瘤体外细胞培养及激素分泌的特征,选择经临床、手术和病理证实的7例垂体PRL腺瘤和3例PRL/GH混合性腺瘤,采用细胞培养技术,观察细胞形态的改变和生长的特点,观测培养基基础激素分泌量随时间的改变.结果显示10例垂体腺瘤细胞培养成功8例,成活率为80%,贴壁后的细胞被拉长,呈椭圆形或梭形,呈团状或片状生长,培养基中PRL分泌量在1周内维持较高水平,1周后缓慢下降,而GH分泌量呈现迅速下降的趋势.提示培养基中高PRL水平预示着肿瘤的早期复发.