舒林酸抑制结肠癌LOVO细胞增殖作用机制研究

目的 研究舒林酸对结肠癌细胞株LOVO生长的影响,并探讨其作用机制。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测舒林酸对结肠癌细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪（FCM）分析其对细胞凋亡及细胞周期的影响,放免法分析其对前列腺素E2（PGE2）的影响。结果 MTT比色显示舒林酸能抑制LOVO细胞增殖,呈剂量和浓度依赖性;FCM显示舒林酸能促进细胞凋亡,使G0／G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低;PGE2表达水平呈剂量依赖性下调。结论 舒林酸可抑制结肠癌细胞株LOVO生长,促进其凋亡;其作用机制可能与阻止细胞周期进展、抑制COX-2活性及PGE2合成有关。     

尼美舒利抑制结肠癌侵袭和转移的作用机制研究

目的观察选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对结肠癌细胞Caco-2同质性黏附能力,E-钙黏蛋白和CD44v6表达的影响.探讨其在抑制肿瘤侵袭和转移中的作用机制.方法培养结肠癌细胞细胞株Caco-2,用不同浓度的尼美舒利进行干预,观察细胞同质性黏附能力的变化.用Western blot检测E-钙黏蛋白表达的变化,用免疫细胞化学法检测CD44v6的变化.结果尼美舒利能增加Caco-2细胞的同质性黏附能力,增加E-钙黏蛋的表达,并呈剂量依赖性.结论尼美舒利可以通过增强结肠癌细胞的同质性黏附能力,增加E-钙黏蛋白的表达,减少CD44v6的表达来抑制肿瘤细胞的侵袭和转移.     

尼美舒利抑制人结肠癌细胞增殖及诱导凋亡

目的　研究尼美舒利对结肠癌细胞株 (HT 2 9)增殖的影响 ,探讨其可能的使用机制。方法　以人结肠癌细胞株作为研究对象 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、流式细胞仪 (FCM)、电镜和细胞免疫组化等技术 ,研究尼美舒利对结肠癌细胞增殖的抑制和促进凋亡的可能机制。结果　MTT显示尼美舒利对Eca 10 9有细胞毒作用 ,且与药物浓度和作用时间有相关性 (r=0 .9760 ,P <0 .0 5。FCM显示DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰” ,凋亡率在 6.2 8%～ 3 9.3 % ,使S期、G2 /M期细胞比例升高 ,G1期比例下降 ,呈一定剂量效应关系。电镜下见典型的细胞凋亡形态学特征 :细胞核染色质致密浓缩 ,凋亡小体形成等。并能在体外抑制结肠癌细胞的COX 2和Bcl 2表达。结论　体外尼美舒利能抑制人结肠癌细胞的增殖 ,可能与诱导细胞凋亡和阻止细胞周期的进展 ,抑制COX 2和Bcl 2的表达有关     

塞莱昔布对结肠癌细胞生长及肝转移瘤血管生长因子表达的影响

目的:探讨塞莱昔布对体外培养的结肠癌细胞生长及肝转移瘤模型血管生长因子(VEGF)表达的影响.方法:以人结肠癌细胞株HT-29,HCT-116为对象,体外药物敏感实验(MTT)法检测塞莱昔布对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞各细胞周期分布变化情况,肿瘤细胞接种裸鼠,观察肝转移瘤VEGF表达情况.结果:塞莱昔布对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,且对HT-29细胞作用强于HCT-116细胞(P<0.01);塞莱昔布可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布,明显降低增殖指数(P<0.05).塞莱昔布具有明显的抑制肝转移瘤VEGF表达的作用(P=0.00).结论:塞莱昔布可通过抑制COX-2酶活性而抑制肿瘤细胞的分裂和增殖,诱导其凋亡,并抑制肿瘤血管生成,干预结肠癌的转移与复发.     

5-氨基水杨酸联合尼美舒利对结肠癌细胞株HT-29增殖的影响

研究表明5-氨基水杨酸（5-ASA）和非甾体抗炎药（NSAIDs）对结直肠癌具有化学预防作用，但目前关于两类药物联合应用对结直肠癌影响的文献较少。目的：研究5-ASA联合选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对人结肠癌细胞株HT-29的增殖抑制作用及其可能机制。方法：采用甲基噻唑基四唑（MTr）比色法测定5-ASA、尼美舒利单独以及联合应用抑制HT-29细胞增殖的作用，分别采用原位末端标记（TUNEL）和免疫细胞化学方法检测细胞凋亡和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：1—1000μmol／L5-ASA或尼美舒利单独应用对体外培养的HT-29细胞具有明显增殖抑制作用，呈剂量依赖性；两者在100μmol／L剂量下分别作用12—96h，抑制率逐渐增高，呈时间依赖性。20～2000μmol／L 5-ASA与尼美舒利联合应用能明显抑制HT-29细胞增殖，呈剂量和时间依赖性，且优于单独应用5-ASA或尼美舒利（P〈0．05）。10—500μmol／L 5-ASA和尼美舒利单独或联合作用于HT-29细胞，细胞凋亡率逐渐增高，PCNA表达逐渐降低，与单独应用相比，联合用药作用更强（P〈0、05）。结论：5-ASA联合尼美舒利具有抗HT-29细胞增殖的作用，其作用优于单独应用5-ASA或尼美舒利。     

尼美舒利和5-氟尿嘧啶联用对胃癌细胞的协同抑制作用及机制

目的 体外研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利和5-氯尿嘧啶（5-FU）对胃癌细胞的抑制作用及机制。方法 以胃癌细胞株MKN45、MKN28为研究对象．观察尼美舒利和5-FU单独或联合应用对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。应用MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡（FITC-Annexin-V/PI双标记）和细胞剧期，RT-PCR观察朋药前后COX-2 mRNA在两株细胞中的表达，Western免疫印迹法观察经两种药物单独和联合作用48h后细胞内凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 在MKN45和MKN28细胞中均可观察到不同水平的COX-2 mRNA表达，尼美舒利和5FU联合应用可明显抑制COX-2 mRNA表达。尼美舒利可抑制两株细胞的增殖并诱导凋亡。尼美舒利和5-FU具有协同抑制细胞增殖及诱导凋亡的作用，该作用与两种药物作用顺序无关，但在联用时作用最强。两药协同抑制增殖的作用主要通过协同杀伤和诱导凋亡而实现。5-FU增强了凋亡诱导蛋白Bax的表达，而尼美舒利则减少凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。两药联用可明显抑制胃癌细胞株生长。结论 选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利和5-FU通过抑制COX-2 mRNA的表达硬增强Bax／Bcl-2的表达比率诱导胃癌细胞凋亡．从而对胃癌细胞起到协同抑制增殖的作用。     

肼苯哒嗪对LOVO结肠癌细胞株p16基因的影响

目的 探讨DNA甲基化抑制剂肼苯哒嗪对LOVO结肠癌细胞株p16抑癌基因的转录调控作用及对细胞株生长增殖的生物学影响,寻找治疗肿瘤的新靶点.方法 用不同浓度的肼苯哒嗪作用结肠癌细胞株,四唑盐(MTT)比色法观察肼苯哒嗪对细胞生长的影响,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测对LOVO结肠癌细胞p16基因mRNA表达的影响;MSP法测LOVO结肠癌细胞启动子区CpG岛甲基化情况.结果 肼苯哒嗪能抑制LOVO结肠癌细胞的生长,且此效应与浓度相关(P<0.05);肼苯哒嗪能使LO-VO结肠癌细胞中甲基化的p16基因去甲基化重新表达;浓度越高的肼苯哒嗪作用后的LOVO结肠癌细胞p16基因mRNA表达越强.结论 肼苯哒嗪能抑制LOVO结肠癌细胞的生长,并且使甲基化失活的p16基因重新表达.     

联合抑制环氧合酶-2与5-脂氧合酶对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的:通过单独及联合应用选择性COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861处理胃癌细胞系AGS,比较各实验组的增殖凋亡率,探讨联合抑制COX-2和5-LOX两条通路对胃癌细胞系AGS增殖凋亡的影响.方法:AGS细胞在含100 mL/L小牛血清 100kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中培养,取对数生长期细胞做为实验组.以相差显微镜观察药物处理前后的细胞形态改变;设立AA861(25,50,100 μmol/L)组,尼美舒利(50,100,200 μmol/L)组,及AA861联合尼美舒利处理组(50 μmol/L AA861 100 μmol/L尼美舒利),用四氮唑蓝(MTT)法在24,48,72 h测量细胞吸光度,以此检测单用及联用AA861与尼美舒利对细胞生长增殖的影响;实验通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡率,以DNA-LADDER法观察凋亡.结果:相差显微镜观察,药物处理组细胞与对照组相比,形态发生明显改变.MTT显示,除尼美舒利200μmol/L的24,48 h处理组及AA861 25 μmol/L的24 h处理组外,尼美舒利和AA861基本呈时间、剂量依赖性抑制AGS细胞增殖.TUNEL染色法表明,尼美舒利或AA861处理组的细胞凋亡率随着剂量的增加而升高.药物处理48 h后,MTT法表明,细胞增殖在AA861组和尼美舒利组与两药联用组间相比差异显著(0.240±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.01;0.211±0.002 vs 0.207±0.001,P＜0.05);TUNEL染色法表明,单药组与两药联用组细胞凋亡率相比差异明显(AA861组:1 8.67%±0.03%,尼美舒利组:20.94%±0.48%vs两药联用组:23.76%±0.92%,P＜0.01);AO/EB染色法也同时表明,细胞凋亡单药组与两药联用组相比差异明显(AA861组:18.17%±0.28%、尼美舒利组:19.35%±0.74% vs两药联用组:23.78%±0.04%,P＜0.01).DNA琼脂糖凝胶电泳法显示,两药联合处理AGS细胞组与单药处理组比较,癌细胞增殖被抑制,凋亡明显增加.结论:COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861对胃癌AGS细胞的增殖抑制以及促凋亡作用基本呈时间浓度依赖性.联用尼美舒利和AA861抑制COX-2与5-LOX两条通路,与单独抑制其中一条通路比较,能更有效抑制胃癌细胞增殖,促进凋亡.     

西咪替丁对人结肠癌细胞生长及凋亡的影响

目的探讨西咪替丁对体外培养的人结肠癌细胞株LoVo的抑制和诱导细胞凋亡的作用.方法采用MTT比色法、流式细胞术、形态学观察和TUNEL法检测不同浓度的西咪替丁溶液处理LoVo细胞后的生长状况、形态学、分子生物学改变.结果西咪替丁可抑制LoVo细胞的增殖,且有剂量依赖性的趋势;1×10-2M西咪替丁处理LoVo细胞48h后,在光镜、电镜检测中,可见典型的凋亡细胞;流式细胞术检测凋亡率为32.7%,bcl-2相关蛋白表达率为36.74%;TUNEL法进一步从分子生物学角度证实凋亡的发生.结论西咪替丁对结肠癌细胞LoVo有抑制作用,主要机制为诱导其发生凋亡,凋亡发生的原因与西咪替丁可下调bcl-2蛋白的表达有关.     

EGCG对结肠癌HT-29细胞生长的影响及机制

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人结肠癌细胞株HT-29生长的影响及可能作用机制.方法 采用不同浓度的EGCG处理HT-29细胞,四唑盐比色试验(MTT)法观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况;Western Blot洁检测表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的表达.结果 EGCG处理后HT-29细胞生长明显抑制,呈现时间、剂量依赖性;HT-29细胞凋亡率升高;EGFR和ERK的磷酸化水平表达下调.结论 EGCG可明显抑制结肠癌HT-29细胞的生长;其可能机制为下调EGFR和ERK的磷酸化水平,从而干预EGFR-ERK信号转导通路.     

Effect of Nimesulide on proliferation and apoptosis of human hepatoma SMMC—7721 cells

AIM:Cyclooxygenase-2(COX-2)has been suggested to be associated with carcinogenesis.We sought to investigate the effect of the selective COX-2 inhibitor,Nimesulide on proliferation and apoptosis of SMMC-7721 human hepatoma cells.METHODS:This study was carried out on the culture of hepatic carcinoma SMMC-7721 cell line Various concentrations of Nimesulide(0,200μmol/L,300μmol/L,400μmol/L)were added and incubated.Cell proliferation was detected with MTT colorimetric assay,cell proliferation was detected with MTT colorimetric assay,cell apoptosis by electron microscopy,flow cytometry and TUNEL.RESULTS:Nimesulide could significantly inhibit SMMC-7721 cells proliferation dose-dependent and in a dependent manner compared with that of the controla group.The duration lowerst inhibition rate produced by Nimesulide in SMMC-7721 cells was 19.06%,the highest inhibition rate was 58.49%,After incubation with Nimesulide for 72h,the most highest apotosis rate and apoptosis index of SMMC-7721 cells comparing with those of the control were 21.20%&#177;1.62%,vs2.24%&#177;0.26%and 21.23&#177;1.78vs2.01&#177;0.23(P&lt;0.05).CONCLUSION:The selective COX-2 inhibitor,Nimesulide can inhibit the proliferation of SMMC-7721 cells and increase apoptosis rate and apoptosis index of SMMC-7721 cells,The apoptosis rate and the apoptosis index are dose-dependent.Under electron microscope SMMC-7721 cells incubated with 300 μmol and 400μmol Nimesulide show apoptotic characteristics With the clarification of the mechanism of selective COX-2 inhibitors,Thtese COX-2 selective inhibitors can become the choice of prevention and treatment of cancers.     

丙泊酚通过下调BNIPL-2抑制结肠癌增殖的研究

目的观察丙泊酚在结肠癌细胞中对BNIPL-2的作用,并探讨其机制。 方法应用TCGA数据库对结直肠癌患者进行数据分析,通过CCK8实验,qRT-PCR阐明了丙泊酚对细胞活力和致肿瘤性的影响。 结果BNIPL-2在结肠癌组织中大量表达,并与预后不良、恶性阶段有关。BNIPL-2促进CRC细胞系SW480的增殖。丙泊酚抑制结肠癌细胞的增殖作用,并且下调SW480结肠癌细胞中BNIPL-2的表达。 结论丙泊酚通过下调BNIPL-2抑制结肠癌增殖,这可以促进更好地理解丙泊酚在临床环境中的使用。     

Nimesulide inhibits proliferation via induction of apoptosis and cell cycle arrest in human gastric adenocarcinoma cell line

AIM: To evaluate the potential role of Nimesulide, a selective COX-2 inhibitor, in proliferation and apoptosis of gastric adenocarcinoma cells SGC7901. METHODS: Cell counts and MTT assay were used to quantify the influence of Nimesulide in the proliferation of SGC7901 cells. Transmission electron microscopy and flow cytometry were used to observe the induction of Nimesulide the apoptosis of SGC7901 cells and influence in the distribution of cell cycle. The expression of P27(kip1) protein was observed by immunocytochemical staining. RESULTS: SGC-7901 Cells treated with Nimesulide at various concentrations exhibited a profound dose- and time-dependent reduction in the proliferation rate over the 72 h test period. The highest survival rate of the cells was 78.7 %, but the lowest being 22.7 %. Nimesulide induced apoptosis of the cells in a dose-dependent and non-linear manner and increased the proportion of cells in the G(0)/G(1) phase and decreased the proportion in the S and G(2)/M phase of the cell cycle. Meanwhile, Nimesulide could up-regulate the expression of P27(kip1) protein. CONCLUSION: The induction of apoptosis and cell cycle arrest are both anti-proliferative responses that likely contribute to the antineoplastic action of nimesulide on SGC-7901 cells. The up-regulation of P27(kip1) gene may contribute to the accumulation of these cells in the G(0)/G(1) phase following treatment with Nimesulide. Selective COX-2 inhibitor may be a new channel of the chemoprevention and chemotherapy for gastric carcinoma.     

miR-140靶向调控SOX2在结肠癌中的作用机制研究

目的 分析miR-140在结肠癌中的作用机制.方法 qRT-PCR检测miR-140在结肠癌细胞和组织中的表达;CCK8法、细胞划痕实验检测miR-140对结肠癌HT29细胞增殖和迁移的影响.TargetScan筛选miR-140的潜在靶基因并通过双荧光素酶报告基因试验进行验证;采用qRT-PCR和Western bl...     

Fibroblast-derived CXCL12/SDF-1α promotes CXCL6 secretion and co-operatively enhances metastatic potential through the PI3K/Akt/m TOR pathway in colon cancer

AIM To investigate the underlying mechanism by which CXCL12 and CXCL6 influences the metastatic potential of colon cancer and internal relation of colon cancer and stromal cells. METHODS Western blotting was used to detect the expression of CXCL12 and CXCL6 in colon cancer cells and stromal cells. The co-operative effects of CXCL12 and CXCL6 on proliferation and invasion of colon cancer cells and human umbilical vein endothelial cells(HUVECs) were determined by enzyme-linked immunosorbent assay,and proliferation and invasion assays. The angiogenesis of HUVECs through interaction with cancer cells and stromal cells was examined by angiogenesis assay. We eventually investigated activation of PI3K/Akt/m TOR signaling by CXCL12 involved in the metastatic process of colon cancer.RESULTS CXCL12 was expressed in DLD-1 cancer cells and fibroblasts. The secretion level of CXCL6 by colon cancer cells and HUVECs were significantly promoted by fibroblasts derived from CXCL12. CXCL6 and CXCL2 could significantly enhance HUVEC proliferation and migration(P 0.01). CXCL6 and CXCL2 enhanced angiogenesis by HUVECs when cultured with fibroblast cells and colon cancer cells(P 0.01). CXCL12 also enhanced the invasion of colon cancer cells. Stromal cell-derived CXCL12 promoted the secretion level of CXCL6 and co-operatively promoted metastasis of colon carcinoma through activation of the PI3K/Akt/m TOR pathway.CONCLUSION Fibroblast-derived CXCL12 enhanced the CXCL6 secretion of colon cancer cells,and both CXCL12 and CXCL6 co-operatively regulated the metastasis via the PI3K/Akt/m TOR signaling pathway. Blocking this pathway may be a potential anti-metastatic therapeutic target for patients with colon cancer.     

siRNA沉默p28GANK对结肠癌细胞增殖的影响

背景：研究发现p28GANK表达与结肠癌恶性程度相关,其高表达提示预后不良。然而,p28GANK在结肠癌中的作用尚未完全明确。目的：探讨沉默p28GANK对结肠癌细胞增殖能力的影响。方法：以针对p28GANK基因的慢病毒携带siRNA转染人结肠癌HT29细胞,以蛋白质印迹法检测干扰效果,以MTr法检测细胞增殖,以平板克隆实验检测细胞克隆能力,以流式细胞术检测细胞周期变化。结果：与HT29、Con—HT29细胞相比,Si—HT29细胞中p28GANK蛋白表达水平显著降低;细胞增殖速度显著减缓;细胞克隆数量显著减少;G0／G1期细胞比例显著增多,S期细胞比例显著减少,PI值显著降低（P〈0．05）。结论：沉默p28GANK在结肠癌细胞中的表达可抑制细胞增殖能力,使细胞周期阻滞。p28GANK可作为治疗结肠癌的新靶点。     

PARP-1在脱氧胆酸钠促结肠癌细胞增殖中的作用

结肠癌的发生与肠腔内脱氧胆酸引起的DNA损伤有关,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）对DNA损伤具有修复作用.目的：探讨PARP-1在脱氧胆酸钠促结肠癌细胞增殖中的作用及其可能机制.方法：选用不同浓度的脱氧胆酸钠、PARP-1抑制剂5-氨基异喹啉酮（5-AIQ）或两者联合分别作用于人结肠腺癌细胞株HT-29.MTT实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,免疫细胞化学染色检测环氧合酶-2（COX-2）、caspase-3、PARP-1蛋白表达.结果：10～50 μmol/L脱氧胆酸钠能促进HT-29细胞增殖,增加COX-2、PARP-1蛋白表达,减低caspaae-3蛋自表达.100μmol/L 5-AIQ单独作用对HT-29细胞增殖无明显影响,但能减低COX-2、PARP-1蛋白表达.与单独作用相比,10μmol/L脱氧胆酸钠与100 μmol/L 5-AIQ联合能显著抑制HT-29细胞生长,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,COX-2、PARP-1蛋白表达减低,caspase-3蛋白表达无明显变化.结论：COX-2与PARP-1在脱氧胆酸钠促结肠癌细胞增殖的过程中可能存在相互作用,PARP-1抑制剂5-AIQ可能用于预防脱氧胆酸诱发的结肠癌.