机械力对小鼠成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响研究

目的:探讨机械力对小鼠成纤维细胞L929细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅠ、CollagenⅢ)表达的影响及其可能机制。方法:选取L929细胞为研究对象,使用四点弯曲细胞力学加载系统对细胞进行机械力干预,加力时间为4小时,加力频率为1 Hz;L929细胞分别经0、1333μ和5333μ机械力干预后,采用CCK8检测不同大小机械力对细胞活性的影响。L929细胞分别经0和5333μ机械力干预后,采用Western blot检测两组细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad蛋白(Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3)和CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达,采用实时荧光定量PCR检测两组细胞TGF-β1、Smad2、Smad3、CollagenⅠ和CollagenⅢmRNA的表达,采用细胞免疫荧光检测细胞内Smad2/3的核转移情况。结果:与对照组相比,L929细胞经1333μ机械力干预后细胞增殖活性明显上升,而5333μ机械力干预后细胞增殖活性显著下降(P0.05)。与对照组相比,5333μ组细胞TGF-β1、pSmad3、CollagenⅠ、CollagenⅢ水平及TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达均明显降低(P0.05),且Smad2/3核转移被明显抑制;而细胞Smad2、Smad3、p-Smad2蛋白及Smad2、Smad3 mRNA表达差异均无统计学意义(P0.05)。结论:5333μ机械力可降低小鼠成纤维细胞CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达,其机制可能与TGF-β1/Smads信号转导通路抑制有关。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞系SKOV3凋亡的实验研究

目的:探讨三氧化二砷对体外培养的SKOV3细胞的生物学效应和作用机制。方法:用MTT法、流式细胞术、电镜检测体外培养的SKOV3细胞在三氧化二砷作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测P53/Bcl-2/Bax的mRNA水平。结果:(1)三氧化二砷对SKOV3细胞的增殖抑制作用随浓度升高和作用时间延长而明显增强,其72hIC50约6μmol/L;(2)流式细胞术证实6μmol/L三氧化二砷作用24h能使SKOV3出现G2M阻滞,作用72h诱导细胞凋亡达高峰,凋亡率为18.60％,作用96h则趋向坏死;6μmol/L三氧化二砷作用72h用电镜术也检测到凋亡细胞存在。(3)RT-PCR法显示SKOV3细胞在6μmol/L三氧化二砷作用2h、6h、24h、48h均显示Bax上调和Bcl-2的下调,其中Bax的上调以2h最显著。而Bcl-2的表达则随作用时间延长而逐渐下降,P53则未检测到表达。结论:在体外三氧化二砷能抑制SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡,72h IC50约为6μmol/L。其诱导凋亡机制可能与Bax的上调和Bcl-2的下调相关。     

槲皮素对宫颈癌细胞SiHa增殖的影响

目的:探讨槲皮素对于人宫颈癌细胞Si Ha的作用及机制。方法:用不同浓度的槲皮素(0、20、40和80μmol/L)处理Si Ha细胞不同时间后(24 h,48 h和72 h),通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力的变化;通过流式细胞仪检测槲皮素对细胞周期的影响;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测槲皮素对细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。结果:MTT法检测结果显示,槲皮素处理Si Ha细胞24 h和48 h后,40μmol/L和80μmol/L组的细胞活力低于对照组(P0.05);槲皮素处理Si Ha细胞72 h后,20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L组的细胞活力低于对照组(P0.05);在40μmol/L和80μmol/L组,随着培养时间延长,细胞活力较24 h时降低(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,Si Ha细胞经过20、40和80μmol/L浓度的槲皮素分别处理48 h后,处于G0/G1期的细胞百分比明显高于对照组。RT-PCR和Western blotting结果显示,槲皮素可以下调Si Ha细胞中Cyclin D1蛋白的表达。结论:槲皮素通过下调Si Ha细胞中Cyclin D1蛋白的表达,可以抑制Si Ha细胞的活力和增殖。     

格尔德霉素对宫颈癌HeLa细胞中bcl-2表达的影响

目的:观察格尔德霉素(geldanamycin,GA)在体外对宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2和mRNA转录、蛋白表达水平的影响。方法:分别给予宫颈癌HeLa细胞0,0.02,0.2,2,10μmol/L浓度GA处理24h,用annexin V方法检测细胞凋亡,半定量PCR检测bcl-2、Hsp90 mRNA转录水平,用10μmol/L的GA处理HeLa细胞3、12、24、48h后,Western blot检测bcl-2、Hsp90蛋白表达水平的变化。结果:宫颈癌HeLa细胞经不同浓度的GA作用24h,细胞凋亡指数呈剂量依赖性增加,bcl-2 mRNA表达呈剂量依赖性降低,bcl-2蛋白表达水平呈时间依赖性降低,处理组与对照组之间的差异有统计学意义;但GA对Hsp90 mRNA和蛋白表达水平无明显影响。结论:GA可抑制宫颈癌HeLa细胞抗凋亡基因bcl-2的转录和表达,促进凋亡。     

米非司酮可诱导人子宫内膜细胞的凋亡和坏死

目的:探讨米非司酮对人子宫内膜细胞凋亡和坏死的影响。方法:体外培养人子宫内膜细胞,采用不同浓度米非司酮处理,观察米非司酮对细胞形态的影响,MTT法检测米非司酮对细胞增殖能力的影响,检测米非司酮处理细胞后子宫内膜发育相关基因ESR1和PGR的含量、坏死途径蛋白p-MLKL、RIPK3的表达和凋亡途径蛋白Bax、procaspase3/caspase3的变化。结果:经米非司酮处理后,人子宫内膜细胞细胞形态明显变差,细胞增殖能力明显变弱,且随着米非司酮处理浓度增加,其对细胞生长的毒性作用加强;米非司酮处理的细胞中ESR1和PGR含量明显减少,而坏死途径蛋白p-MLKL、RIPK3表达和凋亡途径蛋白Bax、pro-caspase3/caspase3表达增加。结论:米非司酮可促进人子宫内膜细胞的凋亡和坏死而抑制其细胞增殖,其作用可能与调节ESR1/PGR含量、坏死途径蛋白p-MLKL/RIPK3及凋亡途径蛋白Bax/pro-caspase 3/caspase 3表达有关。     

五味子乙素对BaP致HTR8-SVneo细胞损伤的保护作用及机制

目的：研究五味子乙素（Schisandrin B,Sch B）预防苯并芘（BaP）致人绒毛膜外滋养层细胞（HTR8-SVneo）损伤的作用机制。方法：通过新型四唑化合物（MTS）法观察和测定,最终选取0.5,1,2 μmol/L Sch B分别作用HTR8-SVneo细胞24 h后再给予20 μmol/L Bap染毒处理24 h,MTS检测各组细胞生长情况;JC-1荧光染色法观察各组线粒体膜电位荧光强度变化;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组细胞内促凋亡蛋白（Bax）、细胞色素C（cytochromec,cyt-c）蛋白浓度;蛋白质印迹法（Western blotting）检测各组的凋亡蛋白（Caspase-9）。结果：①BaP染毒组OD值为1.187±0.015,0.5,1,2 μmol/L Sch B预保护24 h后的OD值分别为1.483±0.022、1.489±0.048和1.531±0.240,差异有统计学意义（P＜0.05）。②BaP染毒组线粒体荧光强度弱,0.5,1,2 μmol/L Sch B预保护24 h后的荧光强度较强,差异有统计学意义（P＜0.05）。③BaP染毒组Bax、cyt-c蛋白浓度升高,0.5,1,2 μmol/L Sch B预保护24 h后细胞内Bax、cyt-c蛋白浓度降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。④BaP染毒组细胞内caspase-9蛋白表达升高,0.5,1,2 μmol/L Sch B预保护24 h后细胞内caspase-9蛋白表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：Sch B可以预防BaP致HTR8-SVneo细胞损伤,其作用机制可能与抗线粒体途径有关。     

雌、孕激素和促性腺激素对卵巢癌细胞存活率、Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究雌(E)、孕激素(P)及人绒毛膜促性腺激素(HCG)对卵巢癌细胞存活率以及Bcl-2、Bax表达的影响。方法:采集卵巢癌患者术中切除的组织标本进行细胞培养,按药物作用不同分为3组:雌激素组(E组)、孕激素组(P组)、人绒毛膜促性腺激素组(HCG组)。MTT法和流式细胞技术检测细胞凋亡率与细胞周期;药物作用48h后,荧光定量PCR法进行相对定量,检测雌、孕激素对癌细胞Bcl-2、Bax表达的影响。结果:(1)高浓度(10-4mol/L)雌、孕激素能降低癌细胞的存活率,呈时间-剂量依赖性(P0.001);低浓度(10-8mol/L)雌激素能提高卵巢癌细胞的存活率。低浓度(50U)HCG对卵巢癌细胞存活率的影响不明显。150U/ml和200U/ml HCG作用72h后,对卵巢癌细胞存活率的影响显著(P0.05)。(2)高浓度(10-4mol/L)雌、孕激素能促进卵巢癌细胞凋亡(P0.001),但当雌激素浓度为10-8mol/L时,却抑制细胞凋亡(P0.001);HCG对卵巢癌细胞凋亡率的影响无显著差异。雌、孕激素和HCG对卵巢癌的细胞周期均无显著影响。(3)高浓度雌、孕激素(10-4mol/L)能抑制卵巢癌细胞Bcl-2的表达(P0.05),促进Bax的表达(P0.001);低浓度E(10-8mol/L)上调Bcl-2的表达(P0.001),下调Bax的表达(P0.001)。结论:高浓度雌激素与孕激素对体外培养的卵巢癌细胞有促进凋亡、降低存活率的作用,这可能与下调Bcl-2的表达和促进Bax的表达有关。     

甲氧滴滴涕对人绒毛外滋养细胞的白细胞表面抗原G(HLA-G)表达的影响

目的:探讨甲氧滴滴涕(MXC)对绒毛外滋养细胞(EVCT)白细胞表面抗原G(HLA-G)表达的影响。方法:用胰蛋白酶消化加流式细胞仪分离得到人绒毛外滋养细胞,进行原代培养及鉴定。将所获细胞分为MXC(1μmol/L、3μmol/L、5μmol/L、7μmol/L)处理组及空白对照组,培养12h、24h、48h。用Western blotting检测各组各时间点HLA-G的表达,同时用RT-PCR法检测HLA-GmRNA表达。结果:MXC处理组滋养细胞HLA-G表达呈时间剂量依赖性下降,HLA-G mRNA变化与其一致。结论:MXC可从蛋白和mRNA水平降低绒毛外滋养细胞HLA-G表达,从而降低其免疫耐受功能。     

血根碱对紫杉醇耐药卵巢癌A2780/taxol细胞生长及化疗敏感性影响的研究

目的:探讨血根碱对紫杉醇耐药卵巢癌A2780/taxol细胞生长及化疗敏感性的影响和机制。方法:培养A2780/taxol细胞,分为对照组、血根碱组、紫杉醇组、血根碱+紫杉醇组,对照组加0.9%氯化钠液,血根碱组加2.0μmol/L血根碱,紫杉醇组加2μg/ml紫杉醇,血根碱+紫杉醇组同时加2.0μmol/L血根碱及2μg/ml紫杉醇。应用MTT法、流式细胞仪和Western blot法检测血根碱对A2780/taxol细胞增殖、凋亡、克隆形成及Bax、β-tubulinⅢ蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,血根碱组、紫杉醇组及血根碱+紫杉醇组均能显著抑制A2780/taxol细胞增殖,血根碱+紫杉醇组抑制率最高(P0.05);紫杉醇组、血根碱组及血根碱+紫杉醇组细胞克隆形成率[(35.67±7.37)%、(27.67±2.52)%和(8.87±3.38)%]明显降低,血根碱+紫杉醇组降低最为明显(P0.05);紫杉醇组、血根碱组及血根碱+紫杉醇组细胞凋亡率[(18.01±7.13)%、(57.03±12.91)%和(81.68±11.23)%]明显增加,血根碱+紫杉醇组细胞凋亡率最高(P0.05);紫杉醇组、血根碱组、血根碱+紫杉醇组Bax蛋白表达显著上调、β-tubulinⅢ蛋白表达显著降低,血根碱+紫杉醇组表达量变化最大(P0.05)。结论:血根碱可下调β-tubulinⅢ表达,诱导肿瘤细胞凋亡,增强紫杉醇对耐药卵巢癌细胞的生长抑制作用,从而促进其对紫杉醇药物的敏感性。     

氯化镉(CdCl_2)对大鼠卵泡颗粒细胞中分拣蛋白1(Sort1)表达的影响

目的:探讨镉(Cd)引起卵泡细胞凋亡与分拣蛋白(Sort1)表达的关系。方法:利用流式细胞仪检测大鼠卵泡颗粒细胞的凋亡;利用免疫组织化学技术检测大鼠卵巢中Sort1的表达部位,在此基础上利用实时荧光定量PCR技术和蛋白免疫印迹技术检测CdCl2处理后大鼠卵泡中Sort1表达量的变化。结果:5μmol/L、20μmol/L和50μmol/L 3个浓度的CdCl2染毒处理均可引起大鼠卵泡颗粒细胞的凋亡;Sort1主要表达于大鼠卵巢颗粒细胞和卵泡膜细胞中;3个浓度的CdCl2均可使大鼠卵巢中Sort1的表达量显著增加(P<0.05)。结论:Sort1可能参与Cd诱导的卵泡颗粒细胞的凋亡过程。     

盐酸右美托咪定通过调控miR-223对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨盐酸右美托咪定(Dex)对子宫内膜癌细胞AN3CA增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 AN3CA 细胞分为对照组、不同浓度(1、2、5 μmol/L)Dex组、miR-223组、miR-NC组、5 μmol/L Dex+anti-miR-223组和5μmol/LDex+anti-miR-NC组.MTT法检测细胞...     

脂氧素对滋养细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的研究脂氧素(lipoxinA4,LXA4)在孕妇血清中的表达及其对滋养细胞氧化损伤的保护作用和作用机制.方法 细胞实验分为6组,对照组;脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组:10 μg/ml LPS作用24 h;干预组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4作用24 h;LXA4组:100 nmol/L LXA4作用24 h;拮抗组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4+100 μmol/L N-叔丁氧羰基吡咯烷(N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine,BOC-2)作用24 h;BOC-2组:10μg/ml LPS+100 μmol/L BOC-2 作用24 h.采用酶联免疫吸附试验检测正常孕妇与子痫前期患者血清LXA4含量;以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯为荧光探针检测滋养细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;逆转录-聚合酶链反应检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD) mRNA的表达;Western印迹分析SOD、转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor,Nrf2)的蛋白表达水平;黄嘌呤氧化酶法测定滋养细胞中SOD活性.结果 (1)子痫前期患者血清LXA4水平为(165.53±18.89) pg/L,与正常孕妇[(545.67±30.91) pg/L]相比明显下降(t=40.64,P<0.01).(2)LPS组与对照组相比,滋养细胞内二氯荧光素(dichlorofluorescein,DCF)密度值明显升高(P<0.01),DCF密度值从53.00±3.08 上升至77.00±5.83( t=8.14,P<0.01);胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA和蛋白表达均显著下降(t分别为34.11、25.61和17.93,P均<0.01);滋养细胞上清中的SOD含量明显下调(t=12.16,P<0.01).(3)干预组与LPS组相比,滋养细胞内DCF密度值明显下降,DCF密度值从77.00±5.83降至62.00±3.39(t=4.97,P<0.01),胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA表达显著上升(t分别为11.74和13.17,P均<0.01),SOD蛋白表达也有所升高(t=4.67,P<0.05),滋养细胞上清中的SOD含量明显增加,酶活力上升至(8.93±0.53) U/ml(t=14.76,P<0.01).(4)拮抗组与干预组相比,滋养细胞上清中SOD含量下降至(6.23±0.41) U/ml(t=9.03,P<0.01),但仍高于LPS组(t=6.10,P<0.01);BOC-2组SOD含量为(4.90±0.32) U/ml,与LPS组相比差异无统计学意义(t=0.79,P>0.05).结论 LXA4可明显减轻LPS引起的胎盘滋养细胞氧化损伤,且LXA4可通过脂氧素受体(lipoxinA4 receptor,ALX-R)激活Nrf2/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路来发挥抗氧化损伤的作用.

Abstract：

Objective To explore lipoxinA4 (LXA4) expression in maternal serum of pregnant women and the protective effect and mechanism of LXA4 on trophoblastic cells from oxidative injury. Methods Trophoblastic cells were randomized into six groups: Control group; Lipopolysaccharides (LPS) group, cells were stimulated by 10 μg/ml LPS for 24 h; Intervention group, cells stimulated by LPS were treated with 100 nmol/L LXA4 for 24 h; LXA4 group, cells were treated with 100 nmol/L LXA4 for 24 h; Antagonistic group, cells stimulated by LPS were treated with 100 nmol/L LXA4 plus 100 μmol/L N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine (BOC-2) for 24 h; BOC-2 group, trophoblastic cells stimulated by LPS were treated with 100 μmol/L BOC-2 for 24 h. The serum concentration of LXA4 in normal group and preeclampsia group was detected by ELISA. The intracellular formation of reactive oxygen species (ROS) was detected by 2,7-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) as a fluorescent probe. SOD mRNA was analyzed by RT-PCR. SOD and Nrf2 protein expressions were analyzed by Western blot. The levels of SOD in trophoblastic cells were detected by using detection kit. Results (1) The serum concentration of LXA4 was significantly lower in preeclampsia group (165.53±18.89) pg/L than in the control [(545.67±30.91) pg/L, P<0.01]. (2) Compared with control group, the levels of ROS in LPS group were significantly higher, DCF density of trophoblastic cells increased from 53.00±3.08 to 77.00±5.83 (P<0.01). The expression of nuclear Nrf2 protein, SOD mRNA and protein in LPS group were obviously decreased (P<0.01). The levels of SOD in LPS group were also significantly lower (P<0.01). (3) Compared with LPS group, the levels of ROS in intervention group were significantly lower, DCF density of trophoblastic cells decreased from 77.00±5.83 to 62.00±3.39 (P<0.01). The expression of nuclear Nrf2 protein, SOD mRNA in intervention group were obviously increased (P<0.01), so did the SOD protein expression (P<0.05). The levels of SOD were significantly increased from (4.77±0.34) U/ml to (8.93±0.53) U/ml (P<0.01). (4) The levels of SOD in antagonistic group were lower than in intervention group, but still higher than LPS group. [(6.23±0.41) U/ml vs (8.93±0.53) U/ml (P<0.01) or (4.77±0.34) U/ml (P<0.01)]. No significant difference was found in the levels of SOD between BOC-2 and LPS group (P>0.05). Conclusions LXA4 can significantly reduce the oxidative stress of placental trophoblastic cells stimulated by LPS. LXA4 can bind to lipoxin receptors and activate Nrf2-ARE signaling pathway playing a protective effect. So LXA4 in pregnant women can affect the oxidative stress of placenta.     

毛蕊异黄酮苷对卵巢上皮性肿瘤细胞的增殖和凋亡的影响及作用机制#br#

Objective?To investigate the effect and mechanism of Calycosin-7-O-β-D-glucoside(CG) on the proliferation inhibition and apoptosis induction of ovarian epithelial cancer cells (SKOV3). Methods?The objects were divided into negative control group and experimental group, the latter group was divided into low concentration group (50 μmol/L), medium concentration group (100 μmol/L) and high concentration group (200 μmol/L). The effect of CG on the proliferation activity of SKOV3 cells were detected by the CCK8 method. Apoptosis was detected by flow cytometry and Hoechst33258 staining. The mRNA and protein expression levels of apoptosis-related genes of ovarian epithelial cancer cells was detected by RT-qPCR and Western blot. Results?CG inhibited cell proliferation in a concentration of (0~200 μmol/L) in a time-and dose-dependent manner. The cell cycle was arrested in G0/G1 phase, and the total apoptosis rate increased with the increase of the concentration of CG (P<0.05) after 48 h. Protein expression levels of apoptosis-related genes such as Caspase-3, Caspase-9, p53, and Bax increased with increasing drug concentration and Caspase-3 enzyme activity also significantly increased, meanwhile the mRNA and protein expression levels of the anti-apoptotic gene bcl-2 decreased with increasing drug concentration, and the differences were statistically significant (P<0.05). Conclusion?CG can play an anti-tumor effect by inhibiting the proliferation and inducing apoptosis of SKOV3. The mechanism may be related to the activation of p53 pathway and the enhanced activity of caspase-3.     

Wnt2在植入胎盘组织中的表达及其对滋养细胞迁移和侵袭功能的影响

目的检测Wnt2在植入胎盘组织中的表达,分析Wnt2对滋养细胞凋亡、迁移和侵袭功能的影响。方法收集2020年7月至2021年1月于武汉大学中南医院妇产科行剖宫产的胎盘植入孕产妇胎盘组织15例(植入组)和正常孕产妇胎盘组织15例(对照组)。RT-PCR法和Western blot法检测胎盘组织中Wnt2表达水平,采用siRNA敲低HTR-8/Svneo细胞中Wnt2表达水平,流式细胞学法检测细胞凋亡,Transwell侵袭和迁移实验评估细胞的迁移和侵袭能力,RT-PCR法和Western blot法检测β-catenin、Bcl-2、Caspase-3、MMP-2和MMP-9表达水平。结果与对照组相比,植入组胎盘组织中Wnt2、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达量均显著升高(均P<0.05)。转染敲低HTR-8/Svneo细胞Wnt2水平后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),细胞迁移和侵袭能力显著抑制(P<0.01),β-catenin、Bcl-2、MMP-2和MMP-9表达显著下降(均P<0.05),而Caspase-3表达显著升高(P<0.05)。结论植入胎盘组织中Wnt2蛋白表达显著升高,且Wnt2可能通过wnt/β-catenin信号通路参与了胎盘滋养细胞的凋亡、迁移和侵袭。     

细胞外信号调节激酶信号转导通路活化在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用

目的 观察细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulated kinase,ERK)在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用.方法 Wistar大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血组和PD98059(ERK抑制剂)组,通过结扎右侧颈总动脉,恢复2 h后,吸入含8%氧气的氧氮混合气体2 h的方法 建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,PD98059组结扎右侧颈总动脉前10 min股静脉注射PD980592 mg/kg.各组新生大鼠于模型制作后6 h剥离结扎侧海马及皮层脑组织,分别测定脑组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和细胞凋亡水平.Western印迹法检测ERK1和ERK2,Bcl-2和Bax蛋白的表达.组间差异比较采用方差分析及q检验.结果 缺氧缺血组细胞凋亡率明显高于假手术组[(18.80±1.37)%和(3.53±0.34)%](q=6.06,P＜0.01),PD98059组细胞凋亡率[(15.53±0.64)%]低于缺氧缺血组(q=3.87,P＜0.01).缺氧缺血组MDA含量为(342.9±10.8)μmol/L,明显高于假手术组[(181.5±17.0)μmol/L](q=6.35,P＜0.01)和PD98059组[(252.0±17.1)μmol/L](q=5.28,P＜0.01),而SOD活性[(34.8±4.3)U/ml]明显低于假手术组[(63.4±4.3)U/ml](q=4.99,P＜0.01)和PD98059组[(51.5±3.8)U/ml](q=4.17,P＜0.01).3组总ERK1和ERK2蛋白表达差异无统计学意义.缺氧缺血组磷酸化ERK1和磷酸化ERK2蛋白表达明显高于假手术组(q分别=3.82和4.08,P均＜0.01)和PD98059组(q分别=4.79和5.12,P均＜0.01).缺氧缺血后Bcl-2和Bax蛋白表达明显高于假手术组(q分别=3.55和3.42,P均＜0.01);PD98059组较缺氧缺血组抗凋亡蛋白Bcl-2表达增加,促凋亡蛋白Bax表达降低(q分别=3.71和5.86,P均＜0.01).结论 ERK激活通过调节凋亡蛋白表达参与了新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发生.

Abstract：

Objective To investigate the effects of extracellular-signal regulated kinase (ERK) on hypoxic-ischemic brain damage of neonatal rats.Methods The hypoxic-ischemic brain damage model of neonatal Wistar rats was established as following:first the right common carotid artery of the rats was ligated;2 h after operation,the rats began to inhale 8%-oxygen oxygen-nitrogen gas mixture lasting for 2 h.Rats were randomly divided into three groups:sham-group,hypoxic-ischemic group and ERK inhibitor PD98059 group (the rats were injected PD98059 2 mg/kg 10 min before the ligation).Six hours after the models were done,hippocampi and cortex of the ligation side of rats in the three groups were collected,and the levels of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) were measured.Apoptosis of neuron was assessed by TUNEL staining.The expression of ERK1,ERK 2,Bcl-2 and Bax were examined by Western blot.The differences among the groups were analyzed with ANOVA and q test.Results Compared with the sham-group,the MDA level [(342.9± 10.8) μmol/L vs (181.5± 17.0) μmol/L,q= 6.35,P＜0.01) and the apoptosis rate of neuron [(18.80±1.37)% vs (3.53±0.34)%,q=6.06,P＜0.01) of hypoxic-ischemic group was higher,and SOD level was lower [(34.8±4.3) U/ml vs (63.4±4.3) U/ml,q=4.99,P＜0.01].While the apoptosis rate of neuron [(15.53±0.64) %] and MDA level [(252.0± 17.1) μmol/L] of PD98059 group were lower than those of hypoxic-ischemic group(q=3.87 and 5.28,P＜0.01respectively),the SOD level [(51.5 ± 3.8) U/ml] was higher than that of hypoxic-ischemic group (q=4.17,P＜0.01).There were no differences of ERK1 and ERK2 expressions among the three groups.The phosphorylated ERK1 and ERK2 levels of hypoxic-ischemic group were higher than those of sham-group (q=3.82 and 4.08,P＜0.01) and PD98059 group (q=4.79 and 5.12,P＜0.01).The expression of Bcl-2 and Bax of hypoxic-ischemic group were higher than those of sham-group (q=3.55 and 3.42,P＜0.01).Compared with hypoxic-ischemic group,Bcl-2 expression (q=3.71,P＜0.01) of PD98059 group was higher,and Bax expression (q=5.86,P ＜ 0.01) was lower.Conclusions ERK is involved in hypoxic-ischemic brain damage of neonatal rats through regulating the expression of apoptosis protein.     

脂氧素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激反应的影响

目的 探讨脂氧素对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞氧化应激反应的影响.方法 切取正常妊娠剖宫产手术4 h内的新生儿脐带,从中分离出脐静脉内皮细胞并进行传代培养,将培养的脐静脉内皮细胞分成4组:空白对照组,脂多糖处理组(10 μg/ml脂多糖),脂多糖+脂氧素处理组(10μg/ml脂多糖+100 nmol/L脂氧素),脂氧素处理组(100 nmol/L脂氧素).分别作用12 h和24 h后进行检测.采用免疫细胞荧光法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达及核转位情况、内皮细胞特异性Ⅷ因子的表达;采用逆转录(RT)PCR检测Nrf2、血红素加氧酶(HO)1和还原型辅酶Ⅰ醌类氧化还原酶(NQO1)mRNA的表达.结果 (1)荧光显微镜下观察到脐静脉内皮细胞胞质内有黄绿色荧光反应,证实有内皮细胞特异性Ⅷ因子抗原存在.(2)免疫细胞荧光染色显示,空白对照组内皮细胞中Nrf2大部分表达在胞质,胞核内基本不表达.12 h后,脂多糖处理组Nrf2胞核内的表达增加,出现了由胞质向胞核的转位;但24 h后,Nrf2在胞质和胞核内的表达都明显下降.脂多糖+脂氧素处理组在12 h和24 h,Nrf2在胞质和胞核中的表达均明显高于脂多糖处理组;脂氧素处理组Nrf2大部分表达在胞质中.(3)脂多糖处理组和脂多糖+脂氧素处理组在12 h后,Nrf2和HO-1 mRNA表达水平分别为0.581±0.019、0.081±0.009及0.692±0.048、0.136±0.018,均明显高于空白对照组,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);脂多糖处理组在12 h后,NQO1 mRNA表达为0.381±0.009,虽高于空白对照组的0.355±0.044,但差异无统计学意义(P＞0.05),而脂多糖+脂氧素处理组NQO1 mRNA表达为0.574±0.034,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);脂多糖处理组24 h后,Nrf2和NQO1 mRNA的表达水平分别为0.180±0.017、0.472±0.064,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);脂多糖+脂氧素处理组Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA的表达均较脂多糖处理组明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);脂氧素处理组Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA表达水平无论12 h还是24 h,与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 脂氧素通过激活脐静脉内皮细胞胞质内的Nrf2,使其向胞核内转位,进而上调Nrf2下游对细胞有保护作用的抗氧化酶,如HO-1、NQO1,抑制脂多糖诱导的氧化应激,从而保护脐静脉内皮细胞免受损伤.     

NS-398对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制及诱导凋亡作用的研究

目的研究环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS-398对宫颈癌细胞的作用及其作用机制,探讨NS-398在宫颈癌治疗中的可能性。方法用不同浓度NS-398作用于人宫颈癌HeLa细胞,CCK-8法检测NS-398对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪PI染色法检测细胞周期改变;AnnexinⅤ-FITC/PI双标法检测细胞早期凋亡。结果 NS-398对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用。其抑制率随着药物浓度的增高而增加,随着药物作用时间的延长而显著增高。与对照组比较,NS-398处理组G1期细胞明显减少,而S期细胞明显增多,两组比较,差异有统计学意义(P0.05);NS-398作用24h后,在10μmol/L组的HeLa细胞凋亡率为5.60%;20μmol/L组凋亡率为12.89%,而40μmol/L组的凋亡率高达27.03%,对照组HeLa细胞无凋亡。结论 NS-398对宫颈癌细胞具有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。其对宫颈癌细胞的作用可能与诱导癌细胞凋亡有关。     

罗格列酮抑制卵巢癌生长的体内外实验研究

目的:探讨罗格列酮(RGZ)对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞生长的抑制作用。方法:应用噻唑蓝法(MTT)检测RGZ对卵巢癌细胞增殖的影响;应用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测RGZ对SKOV3细胞PPARγ、Bcl-2及Caspase-3 mRNA表达的影响;建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型,分为RGZ治疗组及对照组,观察RGZ对移植瘤体积和重量变化的影响。结果:①MTT法检测不同浓度RGZ组(1、10、50、100、200μmol/L)细胞生长抑制率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),并呈浓度依赖性抑制;②DAPI荧光染色发现,RGZ作用24小时后,细胞核浓缩,着色较深呈亮蓝色,部分细胞核破裂呈碎片状或多边形;③RT-PCR检测发现,不同浓度RGZ(10、50、100μmol/L)作用于SKOV3细胞24小时后PPARγ、Caspase-3 mRNA表达水平上调,而Bcl-2 mRNA表达水平下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);④细胞接种26天后,RGZ各用药组(4、12、60、120mg/kg)裸鼠移植瘤体积增长缓慢,其抑瘤率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RGZ可明显抑制SKOV3细胞的生长,诱导其凋亡,并呈浓度依耐性,通过激活PPARγ-Bcl-2-Caspase-3细胞凋亡信号通路而实现抑制肿瘤细胞生长的作用。