肿瘤坏死因子诱导蛋白8对滋养细胞凋亡和侵袭影响研究

目的探讨肿瘤坏死因子诱导蛋白8(TNFAIP8)对HTR8/SVneo滋养细胞凋亡和侵袭、迁移的影响。方法应用免疫组化检测2016年11月至2017年6月福建省立医院南院门诊行人工流产术的7～10周单胎正常妊娠妇女30例的正常早孕期绒毛中TNFAIP8的表达情况。构建针对TNFAIP8的慢病毒载体,感染HTR8/SVneo细胞后沉默TNFAIP8的表达,运用qRT-PCR、Western blot检验沉默效果。Transwell实验、细胞划痕实验、FCM法检测沉默TNFAIP8表达后的HTR8/SVneo细胞的侵袭、迁移能力及凋亡的影响。结果 TNFAIP8在正常早孕期绒毛外滋养细胞中阳性表达,且在绒毛组织与外周血淋巴细胞中表达呈正相关。运用qRT-PCR和Western blot检测显示,shTNFAIP8转入HTR8/SVneo细胞后,TNFAIP8蛋白和mRNA水平明显下调(P 0.05)。Transwell实验、细胞划痕实验结果显示沉默HTR8/SVneo细胞中TNFAIP8的表达明显抑制细胞的侵袭和迁移能力(P 0.001)。FCM法检测结果显示,TNFAIP8沉默组细胞凋亡显著增加(P0.05)。结论在早孕期绒毛外滋养细胞中,阳性表达的TNFAIP8可促进HTR8/SVneo滋养细胞的侵袭及迁移并抑制细胞的凋亡。     

内皮脂酶与重度子痫前期的相关性及其对滋养层细胞功能影响的研究

目的:探讨内皮脂酶(EL)基因在重度子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达,以及EL对人胎盘滋养层细胞生物学功能的影响及其调控机制。方法:收集12例重度PE患者和12例正常孕妇的胎盘组织。Real time-PCR、Western blot法检测EL mRNA和蛋白水平表达。脂质体转染人正常绒毛膜滋养层细胞系HTR8/SVneo干扰EL表达,Real timePCR、Western blot法检测EL转录及表达水平。用Annexin V-FITC、Transwell、Invasion、Tube formation等检测EL表达降低对HTR8/SVneo细胞凋亡、侵袭、迁移及血管化等能力的影响。Real time-PCR探究HTR8/SVneo功能改变的分子机制。结果:PE胎盘组织中EL表达水平下降;EL表达下降影响滋养细胞凋亡、侵袭、迁移等生物活性,MMP-9表达降低。结论:EL可能通过改变MMP-9表达影响人滋养层细胞的生物学功能,并通过S1PR-SPHK-e NOS通路参与胎盘血管的浅着床过程,从而促进PE的发生发展。     

微小RNA-101及髓细胞白血病因子-1在子痫前期中的表达及对胎盘滋养层细胞的影响

目的:探讨微小RNA-101(miR-101)和髓细胞白血病因子-1(MCL1)在子痫前期(PE)中的表达及对胎盘滋养层细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法:收集2018年6月至2020年12月在郑州大学第二附属医院妇产科就诊的56例PE孕妇(PE组)和60例正常孕妇(对照组)的相关资料,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其胎盘组织中miR-101的相对表达水平,蛋白免疫印迹法及免疫组织化学法检测MCL1的表达,分析二者表达的相关性;采用双荧光素酶报告基因实验验证人滋养层细胞HTR8/SVneo中miR-101与MCL1的靶向关系;通过转染分别抑制HTR8/SVneo细胞中miR-101和MCL1的表达,并采用CCK8法、流式细胞仪及细胞侵袭实验检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力的变化。结果:PE组胎盘组织中miR-101水平明显高于对照组,MCL1蛋白水平明显低于对照组(P<0.05),且二者表达呈负相关(r<0,P<0.05);miR-101与MCL1之间存在靶向关系,体外抑制miR-101后HTR8/SVneo细胞的增殖和侵袭活性升高,凋亡率下降(P<0.05),与单独抑制miR-101相比,共抑制miR-101和MCL1的表达后细胞的增殖和迁移能力降低,凋亡率升高(P<0.05)。结论:miR-101在PE胎盘组织中高表达,并通过靶向MCL1引起滋养层细胞增殖、浸润不足和异常凋亡,参与PE的发生进展。     

过表达NDRG1通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进滋养层细胞上皮-间质转化

目的:探讨N-myc下游调节基因1(NDRG1)过表达对滋养层细胞上皮-间质转化(EMT)的影响以及对Wnt/β-catenin信号通路的作用。方法:采用携带NDRG1基因的慢病毒感染人胎盘滋养层细胞系HTR-8/SVneo,建立NDRG1基因稳定过表达的HTR-8/SVneo细胞株。qRT-PCR和Western blot法检测慢病毒感染后细胞中NDRG1基因mRNA和蛋白的表达水平,Transwell小室法观察细胞侵袭和迁移能力,免疫荧光实验检测β-catenin蛋白核转位情况,Western blot法分析EMT相关蛋白、Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9等蛋白表达。结果:慢病毒介导NDRG1过表达后,HTR-8/SVneo细胞中NDRG1 mRNA和蛋白表达水平显著上调。NDRG1过表达可显著增强细胞的侵袭和迁移能力,并上调MMP-2、MMP-9、波形蛋白(Vimentin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、β-catenin、Snail1和环氧化酶-2(COX-2)等蛋白的表达水平,下调上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)磷酸化水平,同时促进β-catenin蛋白由细胞质向细胞核转位。结论:NDRG1过表达可促进HTR-8/SVneo细胞EMT过程,提高细胞侵袭和迁移能力,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路转导相关。     

不明原因早期复发性流产患者蜕膜自然杀伤细胞对滋养层细胞系侵袭功能的影响

目的研究早孕期复发性流产(RSA)患者与正常早孕妇女的蜕膜自然杀伤细胞(d NK)对滋养层细胞系HTR-8/SVneo侵袭能力的影响。方法收集正常早孕人工流产妇女(正常早孕组,n=10)和不明原因RSA患者(RSA组,n=8)的早孕蜕膜组织,用密度梯度离心法分离出蜕膜淋巴细胞,免疫磁珠法进一步分选出CD56+CD16-NK细胞,即蜕膜NK细胞,将蜕膜NK细胞与HTR-8/SVneo共培养24 h后,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测蜕膜NK细胞对滋养层细胞系HTR8/SVneo黏附及侵袭能力的影响,用Real-time PCR检测共培养后HTR-8/SVneo细胞的MMP-2和MMP-9 mRNA水平的表达情况。结果与正常早孕妇女相比,不明原因早孕期RSA患者的蜕膜NK细胞对滋养层细胞系HTR8/SVneo侵袭能力有减弱作用,并使HTR-8/SVneo表达促侵袭分子MMP-2和MMP-9表达降低。结论妊娠早期局部母-胎界面d NK细胞的功能异常可能是导致不明原因RSA的一个原因。     

长链非编码RNA中OIP5-AS1在重度子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及意义

目的 探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(Opa-interactingprotein 5 antisense RNA 1, OIP5-AS1)在重度子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及其可能作用。方法 采用实时定量荧光（RT-qPCR）法测定30例重度子痫前期孕妇和30例正常胎盘中OIP5-AS1和miR-29b表达情况;采用过划痕实验和Transwell侵袭实验检测缺氧条件下向人绒毛膜滋养层细胞系（HTR-8/SVneo细胞）内转染OIP5-AS1对HTR-8/SVneo细胞迁移和侵袭能力的影响;采用RT-qPCR法测定转染OIP5-AS1和OIP5-AS1基因的小干扰RNA(OIP5-AS1siRNA)后HTR-8/SVneo细胞微小RNA(microRNA,miRNA)miR-29b的表达情况。结果 在mRNA水平上,重度子痫前期组胎盘组织中OIP5-AS1较对照组表达降低（P <0.01）;过表达OIP5-AS1后,HTR-8/SVneo细胞迁移和侵袭能力增加,差异有统计学意义（P <0.01）;过表达OIP5-AS1后HTR-8/SVneo细胞中...     

GPR30在妊娠期胎盘中的表达及其对滋养细胞侵袭能力影响的研究

目的:探讨G-蛋白偶联受体30(GPR30)在妊娠期胎盘中的表达,以及其对人胎盘滋养细胞侵袭力的影响。方法:免疫组化法检测早孕期绒毛、正常产妇胎盘和重度子痫前期患者胎盘组织中GPR30表达。用17-β-雌二醇(17β-E2)、GPR30激动剂G1和阻滞剂G15预处理体外培养绒毛组织和人绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo。显微镜下观察体外绒毛组织滋养细胞生长侵袭范围,Transwell侵袭实验检测HTR8/SVneo细胞侵袭能力。免疫荧光法检测绒毛组织和HTR8/SVneo细胞中GPR30蛋白表达。Western blot法检测HTR8/SVneo细胞中GPR30和MMP-9蛋白表达。结果:GPR30在早期绒毛组织和正常末期胎盘滋养细胞上都有表达,且早孕期的表达水平高于正常末期胎盘,但在重度子痫前期胎盘上GPR30蛋白表达明显减少。E2及GPR30激动剂G1可增加滋养细胞的侵袭能力,阻滞剂G15则可下调其侵袭性;E2、G1可诱导滋养细胞GPR30蛋白表达上调,而G15则下调其表达。GPR30蛋白水平与侵袭相关蛋白MMP-9表达水平有相关性。结论:GPR30可能参与人类滋养细胞侵袭力的调节,对滋养细胞的侵袭力有正性促进作用。     

LncRNA NEAT1通过靶向miR-103a-3p/SDF2轴调节滋养层细胞增殖、凋亡和侵袭

目的:探讨lncRNA NEAT1在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达及对滋养层细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测lncRNA NEAT1在PE患者胎盘组织中的表达,将人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo随机分为对照(control)组、pcDNA-NC组、pcDNA-NEAT1组、si-NC组、si-NEAT1组、si-NEAT1+inhibitor NC组、si-NEAT1+miR-103a-3p inhibitor组,分别检测各组HTR-8/SVneo细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,Western blot检测SDF2蛋白表达。双荧光素酶报告基因验证LncRNA NEAT1、SDF2与miR-103a-3p的靶向关系。结果:LncRNA NEAT1在PE患者胎盘组织中表达水平升高。与pcDNA-NC组比较,pcDNA-NEAT1组lncRNA NEAT1表达、SDF2蛋白表达、细胞凋亡率显著升高,miR-103a-3p表达及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-NEAT1组lncRNA NEAT1表达...     

降表达SFRP2基因对滋养细胞HTR-8侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨SFRP2基因表达降低对人绒毛膜外滋养细胞HTR-8迁移和侵袭能力的影响。方法:利用慢病毒转染技术构建稳定降表达SFRP2基因的稳克隆细胞株,Transwell实验和划痕实验评估细胞的侵袭和迁移能力,Western blot法检测相关蛋白水平,平板克隆实验检测细胞的成球能力。结果:慢病毒转染SFRP2基因后,与HTR-8-vector组相比,HTR-8-shSFRP2-1/2组的穿膜细胞数增多、迁移距离增加; Vimentin、N-cadherin、MMP-9、MMP-2和Nanog、Oct4蛋白表达量明显增高,而E-cadherin蛋白表达量降低;细胞克隆形成数增加(P0.05)。给予Wnt抑制剂XAV 939后,Wnt/β-catenin信号通路的活性受到抑制,HTR-8-shSFRP2-1/2组细胞的侵袭、迁移能力及干性减弱。结论:降表达SFRP2基因可促进人绒毛膜外滋养细胞HTR8的迁移、侵袭能力和干性。     

miR-26a在妊娠期高血压疾病患者中的表达及其对滋养层细胞侵袭和凋亡的影响

目的:探讨miR-26a在妊娠期高血压疾病患者中的表达及其对滋养层细胞侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:qRT-PCR法检测miR-26a表达,miRNA转染JAR细胞系构建control、miR-26a NC、miR-26、miR-26a inhibitor NC和miR-26a inhibitor组细胞。CCK-8法检测细胞活力,Brdu检测细胞增殖,Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭,TUNEL检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 9、E-cadherin、Vimentin表达。结果:妊娠期高血压疾病孕妇血浆中miR-26a表达量明显高于正常孕妇,差异有统计学意义(P0.05)。过表达miR-26a抑制JAR细胞活力、增殖与侵袭能力(P0.05);抑制miR-26a表达则增加JAR细胞活力、增殖与侵袭能力(P0.05)。过表达miRNA-26后,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量下降(P0.05),凋亡蛋白Cleaved Caspase-9和Bax表达量升高(P0.05);抑制miRNA-26表达后,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量增加(P0.05),凋亡蛋白Cleaved Caspase-9和Bax表达减少(P0.05)。结论:miR-26a在妊娠期高血压疾病患者中高表达,过表达miR-26a能抑制滋养层细胞细胞增殖和侵袭,促进凋亡,其可能机制是通过抑制EMT,调节Bcl-2/Caspase-9介导的。     

过表达miR-198通过靶向调控Wnt2 B表达抑制滋养细胞HTR-8/SVneo的增殖、转移与侵袭

目的:研究过表达miR-198对人滋养细胞株HTR-8/SVneo增殖、转移和侵袭能力的影响,并探讨其可能作用机制.方法:qRT-PCR检测子痫前期(PE)患者及正常产妇胎盘组织中miR-198表达水平.培养人滋养细胞株HTR-8/SVneo,采用脂质体法将miR-198 mimics及其阴性对照mimics NC转染...     

蜕膜基质细胞培养液对滋养细胞增殖、凋亡及浸润的影响及对浸润作用机制的研究

目的:探讨早孕蜕膜基质细胞培养液(DSCM)对滋养细胞增殖、凋亡以及浸润能力的影响及对浸润功能的作用机制。方法:原代分离、培养并鉴定人早孕蜕膜基质细胞,收集并制备成不同浓度的DSCM,采用噻唑兰(MTT)、Annexin V-FITC、Transwell方法检测不同浓度的DSCM对滋养细胞增殖、凋亡、浸润能力的影响,采用RT-PCR及明胶酶谱法检测滋养细胞基质金属蛋白酶(MMPs)的改变。结果:得到纯度大于90%的蜕膜基质细胞。随着DSCM的浓度增高(5%DSCM,20%DSCM,50%DSCM,100%DSCM)细胞的吸光度值增高、凋亡率减少、浸润细胞数增多(P0.05)。不同浓度的DSCM组MMP-2及MMP-9 mRNA、蛋白的变化与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论:早孕DSCM可以促进滋养细胞增殖,抑制凋亡,并通过上调滋养细胞对MMP-2与MMP-9的表达来促进其浸润功能。     

miR-200c过表达对OVCAR-3卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨miR-200c过表达对上皮性卵巢癌细胞OVCAR-3增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：构建逆转录病毒表达质粒pMSCVpuro-miR-200c,转染OVCAR-3卵巢癌细胞株,分别用细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK8）和Transwell小室法检测过表达miR-200c的OVCAR-3细胞的增殖、迁移以及侵袭力改变,同时采用基因芯片检测转染前后OVCAR-3细胞的差异基因表达情况。结果：与未转染细胞相比,pMSCVpuro-miR-200c-OVCAR-3细胞的增殖、迁移及侵袭力下降（均P＜0.01）。通过基因芯片的检测,miR-200c过表达可引起OVCAR-3细胞中上调表达的基因有190个,下调表达的基因有166个。结论：miR-200c作为抑癌基因参与抑制上皮卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭力。     

P27基因参与子痫前期发生机制的研究进展

子痫前期(pre-eclampsia,PE)是妊娠期特发疾病,其发生与发展是导致母儿患病率、死亡率增加的重要原因,胎盘中滋养细胞正常的增殖、迁移与分化与其关系密切。P27作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin dependent kinase inhibitors,CKIs),与细胞周期因子结合调控细胞周期。与正常孕妇相比,PE患者胎盘滋养细胞中P27基因的表达明显增加,这可能与滋养细胞的增殖及侵入障碍有关。P27蛋白与不同蛋白质结合发挥不同作用,其调节主要依靠翻译后修饰及亚细胞定位。Nodal作为转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)的成员,在滋养细胞中通过多种机制上调P27 mRNA和蛋白水平,提高了P27蛋白的稳定性并在S10处诱导了P27蛋白的磷酸化,促使P27蛋白和CDK2向细胞质的转移,且加强P27/CDK2/CDK5/Stathmin的结合,从而抑制了细胞增殖、迁移及侵袭。P27蛋白在许多位点被磷酸化,氧化应激、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、蛋白O-岩藻糖基转移酶1(protein O-fucosyltransferase 1,poFUT1)、磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶(PFKFB1-4)等通过使P27蛋白磷酸化,影响其泛素-蛋白酶体降解途径调节细胞周期进程。     

miR-18a调节HTR-8细胞中雌激素受体α表达的研究

目的:研究微小RNA-18a(miR-18a)在人正常滋养细胞(HTR8)中对雌激素受体α(ERα)表达的调控作用。方法:miR-18a前体分子[miR-18a类似物(miR-18a mimics)、miR-18a空白载体、miR-18a抑制物(miR-18a inhibitor)]转染HTR-8细胞,分为实验组1、阴性对照组(NC组)、实验组2。RT-PCR检测转染后各组中miR-18a的表达情况;RT-PCR与Western-blot检测HTR-8细胞中ERα在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果:实验组1细胞中miR-18a的表达与NC组(0.407±0.019)相比明显增高(0.880±0.060),实验组2细胞中miR-18a的表达显著降低(0.160±0.014),差异有统计学意义(P0.05)。转染48小时后实验组1ERαmRNA的表达(0.249±0.003)与NC组(0.313±0.010)相比差异无统计学意义(P0.05);实验组2 ERαmRNA的表达水平明显增高(0.823±0.023),差异有统计学意义(P0.05)。实验组2 ERα蛋白表达水平(1.030±0.006)与NC组(0.960±0.008)相比有增高,实验组1 ERα蛋白表达水平明显降低(0.660±0.013),差异有统计学意义(P0.05)。结论:在人正常滋养细胞中,miR-18a可能在转录和翻译水平均对ERα具有调控作用。     

GNAS-AS1靶向miR-2116-3 p基因表达调控卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的:探讨GNAS-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法:RT-qPCR法检测正常人卵巢上皮细胞HUM-CELL-0088及卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中GNAS-AS1和miR-2116-3 p表达水平.以SKOV3细胞为研究对象,分别转染GNAS-AS1小干扰RNA、mi...     

MTA1基因表达与子宫颈癌细胞侵袭转移的关系

目的：探讨MTA1基因表达与宫颈癌细胞侵袭转移的关系。方法将真核细胞表达载体pcDNA3质粒、MTA1基因表达载体pcDNA3-MTA1质粒、MTA1基因RNA干扰载体pSilencer3.1-MTA1-siRNA质粒稳定转染宫颈癌细胞株CaSki细胞（分别命名为对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组）,逆转录(RT) -PCR技术和蛋白印迹法检测CaSki细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及平板集落形成实验检测CaSki细胞的增殖情况,划痕实验、穿膜实验检测CaSki细胞的迁移能力,基质黏附实验检测CaSki细胞的黏附能力,细胞侵袭实验检测CaSki细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测CaSki细胞的细胞周期比例。将3组CaSki细胞接种于裸鼠腋下,观察其在裸鼠体内的生长情况。结果 MTA1组细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达强度均明显高于对照组,而MTA1 -siRNA组细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达强度均明显低于对照组。MTT比色法检测显示,与对照组比较,自第2天起,MTA1组细胞的生长速度加快,而MTA1-siRNA组细胞的生长速度减慢,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);平板集落形成实验显示,对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组的克隆数分别为( 133±6)、(169±10)和(57±5)个,MTA1组明显多于对照组（P＜0.05）,而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。划痕实验显示,MTA1组细胞的迁移能力明显增强,而MTA1 -siRNA组细胞的迁移能力明显减弱;穿膜实验显示,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组穿膜细胞数分别为( 153±17)、( 247±38)和(82±10)个,MTA1组明显多于对照组(P＜0.05),而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。基质黏附实验显示,孵育90 min时,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组细胞的黏附率分别为(69.3±3.6)％、(80.4±5.6)％、(39.2±7.4)％,MTA1组明显高于对照组(P＜0.05),而MTA1 -siRNA组明显低于对照组（P＜0.05）。细胞侵袭实验显示,对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组穿膜细胞数分别为(231±19)、(354±36)和(76±7)个,MTA1组明显多于对照组(P＜0.05),而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。流式细胞仪检测显示,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组细胞的G1、S、G2期细胞比例分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。裸鼠接种CaSki细胞30d后,对照组、MTA1组、MTA 1-siRNA组裸鼠肿瘤体积分别为(519 ±236)、(2245±780)、(111±65) mm3,肿瘤质量分别为(0.41 ±0.19)、(2.10±0.39)、(0.11±0.08)g,MTA1组均明显高于对照组(P＜0.05),而MTA1 -siRNA组均明显低于对照组(P＜0.05)。结论MTA1基因促进宫颈癌细胞的侵袭转移,沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞生长减慢,细胞侵袭及转移能力下降,从而逆转宫颈癌细胞的恶性表型,为进一步研究MTA1基因的作用机制以及应用RNA干扰技术进行以MTA1基因为靶点的治疗打下了一定的基础。     

STOX1在子痫前期滋养细胞炎症反应中的作用研究#br#

Objective?To investigate the STOX1 (Storkhead box1) in the inflammatory response of trophoblast cells simulated by human choriocarcinoma cell line JEG3 cells. Methods?The human choriocarcinoma cell line JEG3 cell line was used to mimic trophoblast cells, and a stable transitional cell line model with overexpression/knockdown of STOX1 gene was constructed. 0.05 mmol/L aspirin was added to the experimental and control groups, respectively. Cell migration ability was measured by Transwell, and apoptosis was detected in each group by flow cytometry, and real-time quantitative PCR and protein immunoblotting were used to detect the expression of cell-associated inflammatory, hypoxic and apoptotic factors, biological behavior, and the relative expression of mRNA and protein of molecular biology. Results?Hypoxia-inducible factor α(HIF-1α), endothelial-type nitric oxide synthase (eNOS), and inducible nitric oxide synthase (iNOS), and apoptosis B lymphocytoma-2 (Bcl-2) were significantly reduced in the overexpression STOX1 trophoblast group (P<0.01); meanwhile, inflammatory response-related factor nuclear factor κB (NF-κB), tumor necrosis factor α (TNF-α), interleukin 8 (IL-8) and cysteine protease-3 (Caspase-3) were significantly increased at both gene and protein levels (P<0.05). The expression of hypoxia-inducible genes HIF-1α (P<0.01), eNOS (P<0.05), and iNOS (P<0.001) and anti-apoptotic genes Bcl-2 (P<0.01) was elevated after knockdown of STOX1, while inflammatory responses NF-κB (P<0.05), TNF-α (P<0.01), IL-8 (P<0.01), and Caspase-3 (P>0.05) levels were reduced. Conclusion?STOX1 induces inflammatory response, promotes hypoxia and apoptosis-related gene expression in JEG3 cell line, aspirin may inhibit the effect of STOX1, reduce apoptosis in JEG3 cells, decrease inflammatory response and improve hypoxia in trophoblast cells, and knockdown of STOX1 has synergistic effect with the use of aspirin.     

TWEAK对人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响及其机制的研究

目的:研究肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用机制。方法:水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力的影响,细胞黏附和移动实验检测TWEAK对细胞体外黏附和移动力的影响,细胞侵袭重建基底膜实验检测TWEAK组细胞体外侵袭力的变化。采用Western blot法检测TWEAK对细胞IκB-α、NF-κB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。通过应用NF-κB拮抗剂PDTC,观察阻断NF-κB通路后VEGF蛋白表达的变化。结果:TWEAK组在24、48h和72h时细胞增殖率无明显变化(P>0.05)。TWEAK组细胞黏附力提高23.67%(P<0.01);TWEAK可增强细胞体外的移动和侵袭力,其趋化指数和侵袭指数分别为1.9±0.3和1.7±0.3(P<0.01)。TWEAK能显著下调IκB-α蛋白表达,上调NF-κB(P65)蛋白在核内的表达,并使VEGF蛋白表达量显著增加。用NF-κB拮抗剂PDTC阻断NF-κB通路,能有效抑制VEGF蛋白的表达。结论:TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力无明显影响。TWEAK能促进HO-8910PM细胞移动、黏附和侵袭力。TWEAK促肿瘤侵袭转移的机制之一可能是通过激活NF-κB通路上调VEGF蛋白表达。     

MicroRNA-155 inhibits proliferation and migration of human extravillous trophoblast derived HTR-8/SVneo cells via down-regulating cyclin D1

MiR-155 is known to participate in various cellular processes by targeting gene expression. We previously revealed a link between miR-155 and perturbation of trophoblast invasion and differentiation. This study aimed to investigate the target molecule(s) of miR-155 on the influence on the proliferation and migration of trophoblast cells. Bioinformatics analysis showed that, at the 3' untranslated region (UTR) of cyclin D1, six bases are complementary to the seed region of miR-155. Luciferase assays and cyclin D1 3'UTR transfection assays validated that cyclin D1 3'UTR was the target of miR-155 in HTR-8/SVneo cells. Overexpression of miR-155 in HTR-8/SVneo cells reduced the level of cyclin D1 protein, decreased cell proliferation and invasion, and increased cell number at the G1 stage. Furthermore, the increased expression of miR-155 also regulated the protein levels of kinase inhibitory protein p27 and phosphorylated cytoskeletal protein filamin A. In conclusion, we found that cyclin D1 may be a target of miR-155 in HTR-8/SVneo cells, and demonstrated a negative regulatory role of miR-155 involved in cyclin D1/p27 pathway in proliferation and migration of the cells.