白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞作用的研究

目的：探讨自制的一种白血病瘤苗对C57BL/6小鼠Mφ杀伤功能的影响。方法：建立白血病荷瘤小鼠模型，用自制的3种不同的白血病瘤苗进行预防或主动免疫治疗，用MTT比色法检测预防或治疗2周、4周后小鼠Mφ杀伤活性，并与对照组比较。结果：(1)随着白血病细胞在小鼠体内的生长，小鼠的Mφ免疫功能受到严重抑制。(2)灭活肿瘤细胞 IFA 细胞因子(rGM-CSF rIL-2 rIL-6)的肿瘤疫苗在提高小鼠的Mφ免疫功能方面，优于灭活肿瘤细胞 IFA肿瘤疫苗，而仅含灭活肿瘤细胞的疫苗作用不明显。结论：灭活肿瘤细胞 IFA 细胞因子(rGM-CSF rIL-2 rIL-6)的肿瘤疫苗可以激活以Mφ为代表的非特异性细胞免疫功能，如非特异性细胞毒、免疫监视、抗原递呈等功能，为进一步活化T淋巴细胞打下基础，此种疫苗在血液恶性肿瘤的特异性主动免疫治疗中很有潜力。     

巨噬细胞瘤苗免疫调节作用的研究

目的 观察巨噬细胞肿瘤疫苗对细胞毒性T细胞（CTL）反应及Th1／Th2型细胞因子分泌的调节作用。方法 分别采用MTT法和比色法检测肿瘤细胞杀伤率和清液上乳酸脱氢酶（LDH）含量,采用Western印记法与ELISA法检测脾细胞内及分泌入培养上清的IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子。结果 巨噬细胞肿瘤疫苗接种组的淋巴细胞肿瘤细胞杀伤率与培养上清液LDH水平分别为（36．70±21．02）％和（0．29±0．15）U／ml,明显高于热灭活肿瘤细胞接种组、石蜡诱导的巨噬细胞接种组（P值均〈0．05）。肿瘤细胞冻融物刺激72h后,各组免疫小鼠的脾细胞内均可检测到IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子;同时巨噬细胞肿瘤疫苗接种组脾细胞培养上清中,IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ含量分别为（7．97±3．15）pg／ml、（0．44±0．11）pg／ml、（1．83±0．85）pg／ml和（9．16±4．64）pg／ml,IL-2、IFN-γ的水平均高于热灭活肿瘤细胞接种组和石蜡诱导的巨噬细胞接种组（P值均〈0．05）。结论 巨噬细胞肿瘤疫苗可诱导机体产生特异性抗肿瘤反应,能够促进Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌。     

针对肿瘤相关巨噬细胞治疗肿瘤的研究进展

虽然肿瘤具有自发生长的能力,但是它们的增殖还是与其局部微环境密切相关。肿瘤相关巨噬细胞也是促进肿瘤生长并决定肿瘤转归的重要因素。目前,巨噬细胞被认为有两种表型,即M1型和M2型。它们的受体表达、分泌的细胞因子,产生的效应分子及功能等都各不相同,而肿瘤相关巨噬细胞通常都具有M2表型。通过对肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的调控引导其向利于机体抗肿瘤免疫的方向发育可能为癌症治疗提供一个新的策略。     

死亡肿瘤细胞诱导分化的巨噬细胞体内抗瘤作用的研究

目的观察死亡肿瘤细胞诱导分化的巨噬细胞的体内抗瘤作用。方法采用死亡H22肿瘤细胞诱导单核-巨噬细胞的分化。取40只健康纯系的昆明小鼠，随机分为4组：①生理盐水接种组（A组）；②热灭活H22肿瘤细胞接种组（B组）；③液体石蜡诱生的巨噬细胞接种组（C组）；④死亡肿瘤细胞诱导分化的巨噬细胞接种组（D组）。A组、B组、C组和D组小鼠分别于左后肢皮下接种生理盐水、热灭活H22肿瘤细胞、液体石蜡诱生的巨噬细胞和死亡肿瘤细胞诱导分化的巨噬细胞，2周后各组小鼠分别于左前肢皮下接种生长良好的H22肿瘤细胞，6周后处死全部小鼠，并计算成瘤率、瘤重量与瘤体积；制备小鼠全脾细胞作为效应细胞，以H22肿瘤细胞为靶细胞，混合培养72h后MTT法检测肿瘤细胞杀伤率。结果D组的成瘤率、瘤重量与瘤体积分别为10％、0．12g和0．10cm^3，明显低于A组[80％、（2．41±0．72）g和（2．45±0．82）cm^3]、B组[40％、（0．51±0．36）g和（0．65±0．31）cm^3]和C组[60％、（1．87±0．67）g和（2．15±0．45）cm^3]，P〈0．05，差异有统计学意义；D组的肿瘤细胞杀伤率为（35．89±13．86）％，明显高于A组（12．10±2．74）％、B组（14．88±3．96）％和C组（24．54±4．18）％，P〈0．05，差异有统计学意义。结论死亡肿瘤细胞诱导分化的巨噬细胞具有明显的抗瘤作用。     

HTA-HSP70-BCG诱导的DC疫苗体内抗瘤作用的研究

目的：观察HTA-HSP70-BCG诱导的DC疫苗体内抗瘤效应和机制。方法：骨髓来源的不成熟DC通过在培养基中加入rmGM-CSF和rmIL-4培养5天获得。以HTA-HSP70-BCG冲激DC24小时获得DC疫苗，用流式细胞仪检测DC表面CD86和CD40的表达。取健康BALB／c（SPF）小鼠，第0天右腋皮下接种Hea-F细胞，第5天随机分成5组，分别为：①攻击对照组，不进行任何治疗；②CTX化疗组，第5天在接种部位注射CTX；③CTX＋不成熟DC组，注射CTX6小时后，于小鼠左腋皮下注射不成熟DC；④CTX＋HTA-HSP70-BCG组，注射CTX6小时后，于小鼠左腋皮下注射HTA-HSP70-BCG；⑤CTX＋HTA-HSP70-BCG DC组，注射CTX6小时后，于小鼠左腋皮下注射HTA-HSP70-BCG冲激的DC，于第26天解剖小鼠，称瘤重。制备各组小鼠全脾细胞作为效应细胞，以Hca-F瘤细胞为靶细胞，培养72小时，用MTT法测杀瘤活性。结果：DC经HTA-HSP70-BCG冲激后，CD86和CD40上调，分别为98．17％和90．08％（P〈0．05），HTA-HSP70-BCGDC组肿瘤的体积和重量均较对照组和其它处理组小（P〈0．05），HTA-HSP70-BCGDC组的脾细胞比对照组和其它处理组有较强的杀Hea-F瘤细胞的能力（P〈0．05）。结论：体外构建的HTA-HSP70-BCGDC疫苗在小鼠体内可诱导出较强的杀瘤效应。     

活化巨噬细胞的细胞毒作用特性

机体抗肿瘤免疫主要是细胞免疫介导的 ,体内的抗肿瘤细胞毒效应细胞有 :①ＣＴＬ细胞 ;②ＮＫ细胞 ;③巨噬细胞。巨噬细胞通常以常在性巨噬细胞存在于机体各组织中 ,受到刺激后成为活化巨噬细胞 ,从而获得多种生物学功能 ,包括对肿瘤细胞的细胞毒功能。与ＣＴＬ及ＮＫ细胞相比     

基于DC的肿瘤疫苗

过去十年来,树突状细胞在刺激特异性免疫应答中关键作用的认定,使其应用到癌症和HIV的治疗领域中来.已有许多成功的报道,但这些应答的最佳途径和持续时间仍然有待进一步确定.DCs的质量、将肿瘤抗原转入DCs中的方法和免疫反应检测等有关的一些问题使得不同实验室中的实验结果很难进行比较.要确定基于DCs的肿瘤疫苗的作用、将DCs接种到病人体内的最有效途径和用来转入DCs中的肿瘤抗原等都需要作大量的工作.     

肿瘤微环境中巨噬细胞对NK细胞的调控作用

自然杀伤（NK）细胞具有MHCⅠ非依赖性,无需抗原呈递细胞刺激,就能直接杀伤肿瘤细胞,在抗肿瘤免疫过程中发挥重要的作用。但NK细胞所处的局部微环境以及细胞间的相互作用影响肿瘤部位NK细胞的增殖、成熟、效应分子分泌和功能。巨噬细胞是肿瘤组织中占比最大的一类细胞群体,巨噬细胞与NK细胞间的相互作用在抗肿瘤免疫中至关重要。本综述详细阐述了肿瘤组织中巨噬细胞对NK细胞的调控作用,以期为重编程巨噬细胞表型恢复NK细胞抗肿瘤免疫能力及开发NK细胞免疫疗法提供更多思路。     

组织定居巨噬细胞在肿瘤微环境中的作用

肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)是肿瘤微环境中最主要的免疫细胞群之一,在肿瘤生长、血管生成和治疗等各环节发挥重要作用。以往研究认为肿瘤微环境中TAMs主要来源于循环单核细胞,但近期研究证实,起源于胚胎卵黄囊及胎肝的组织定居巨噬细胞也可以在肿瘤微环境中分化为TAMs,...     

树突状细胞与肿瘤疫苗

细胞生物学、分子生物学和免疫学等学科的飞速发展,以及新的实验体系和新的技术方法的不断涌现,促进了肿瘤递呈性免疫治疗的日新月异,树突状细胞作为体内功能最强的抗原递呈细胞在以T细胞识别肿瘤抗原为核心的肿瘤生物治疗研究中展现了良好的应用前景。本文通过对树突状细胞在肿瘤疫苗中设计策略的综述,有助于更加准确地看待当今的肿瘤生物治疗。     

树突状细胞和肿瘤细胞融合疫苗的研究进展

随着树突状细胞（DC）在体外的大量扩增和融合技术的飞速发展,肿瘤细胞与DC融合所获得的融合瘤苗已经成为国内外肿瘤免疫治疗的焦点。DC融合瘤细胞在共刺激信号存在的条件下,加工处理递呈肿瘤相关性抗原（TAA）和肿瘤特异性抗原（TSA）,诱导特异性抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,逆转机体对肿瘤抗原的耐受,是一种有广阔应用前景的免疫治疗方法,为肿瘤患者的治疗开辟了一条新的途径。     

参杞合剂对荷瘤小鼠免疫功能及细胞周期的影响

目的：研究参杞合剂(SQ)对小鼠腹水型肝癌细胞免疫功能及细胞周期的影响。方法：用参杞合剂对荷瘤鼠进行连续胃饲治疗10天，观察其抑瘤率及免疫学指标的改变。流式细胞仪结合电镜观察其细胞周期的改变。结果：荷瘤小鼠抑瘤率为65.68％，SQ能增强荷瘤小鼠的免疫功能(P＜0．05)；流式细胞仪检测肿瘤细胞形成S期阻滞。病理可见大片坏死，电镜可见坏死及凋亡。结论：参杞合剂可显著抑制肿瘤生长，其机理与提高机体免疫功能，阻滞肿瘤细胞增殖有关。     

人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究

目的　检测HIV 2核心蛋白DNA疫苗诱导Balb c小鼠免疫应答的能力。方法　将表达HIV 2核心蛋白DNA疫苗质粒pVAXIgag肌注Balb c小鼠 ,分析CD4 、CD8 T淋巴细胞的数量、脾特异性CTL反应、血清中HIV 2的特异性抗体水平。结果　重组质粒pVAXI gag免疫组与空载体pVAXI及PBS对照组相比较差异显著 ,血清抗体滴度及淋巴细胞杀伤效应为P <0 .0 1,脾T细胞亚群的数量为P <0 .0 5。结论　HIV 2核心蛋白DNA疫苗能诱导Balb c小鼠产生特异性细胞免疫应答和体液免疫应答     

荷载人生存素的多表位树突状细胞疫苗的抗肿瘤活性研究

目的:观察荷载人生存素(survivin)的多表位树突状细胞(DC)疫苗的抗肿瘤活性.方法:分别将含4个sur-vivin的HLA-A2类限制性CD8+ CTL表位和1个CD4+ Th细胞表位的重组真核表达质粒pPIRESneo3.0-survivin(4)/Th,以及含4个CD8+ CTL表位的重组质粒pPIRESneo3.0-survivin (4),转染人DC并制备DC疫苗.实验分为survivin(4)/Th组、survivin (4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组.DC疫苗作用后,MCF-7细胞的凋亡率明显高于survivin(4)组(P＜0.05),亦明显高于空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P＜0.05).运用流式细胞术(FCM)分别检测DC表面CD83、CD86、T淋巴细胞表面CD4、CD8a的表达以及DC疫苗作用后MCF-7乳腺癌细胞的凋亡.用ELISA法检测上清中IFN-γ的含量.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测DC疫苗诱导的CTL对MCF-7细胞的抑制率.结果:流式细胞术检测显示,人DC高表达CD83、CD86;人外周血T淋巴细胞高表达CD4、CD8a;survivin (4)/Th组IFN-γ的含量[(66.50±3.34) ng/L]明显高于survivin(4)组[(46.10±1.35)ng/L]、空质粒组[(25.17±0.32) ng/L]、未转染DC与T细胞共培养组[(25.47±0.95)ng/L]和单独T淋巴细胞组[(23.73 +0.50)ng/L],P＜0.05.survivin (4)/Th组中MCF-7细胞的抑制率明显高于survivin (4)组、空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P＜0.05).DC疫苗作用后,MCF-7细胞的凋亡率[ (10.63±0.29)％]明显高于survivin(4)组(P＜0.05),亦明显高于空质粒组、未转染DC与T细胞共培养组和单独T淋巴细胞组(P＜0.05).结论:荷载多个survivin的CD8+ CTL表位的树突状细胞肿瘤疫苗具有很强的抗肿瘤活性,CD4+ Th细胞对CD8+ CTL的抗肿瘤方面有明显的促进作用.     

树突状细胞疫苗在妇科肿瘤免疫治疗中的研究进展

树突状细胞(DC)具有摄取、加工、处理和呈递抗原以及激活初始T淋巴细胞的功能,是体内功能最强的专职抗原递呈细胞,也是免疫应答的关键细胞.近年来研究发现,体外经肿瘤抗原刺激的DC回输到病人体内,能诱导机体产生细胞毒性T淋巴细胞,从而发挥特异性肿瘤杀伤作用.根据这一发现研制的DC疫苗目前在妇科肿瘤免疫治疗中已取得重要进展,...     

抗肿瘤树突状细胞疫苗研究进展

近代肿瘤学的新发展主要在于其对抗原提呈过程的新认识 ,大多数抗原都需要经过抗原提呈细胞(ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓ ,ＡＰＣｓ)的摄取、加工、内化 ,产生短链多肽并与主要组织相容性复合体 (ｍａｊｏｒｈｉｓｔｏ ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｃｏｍｐｌｅｘ ,ＭＨＣ)结合后表达于细胞膜表面才能被Ｔ细胞受体所识别 ;同时 ,ＡＰＣｓ与Ｔ细胞之间通过共刺激分子的结合发出第二信号 ,从而更加有效地促进Ｔ细胞的活化、增殖。因此 ,在抗肿瘤免疫过程中 ,ＡＰＣｓ的功能越来越受到人们的重视。近年来 ,作为抗原提呈能力最…     

二价轮状病毒灭活疫苗的免疫效果评价

目的 评价二价轮状病毒灭活疫苗免疫效果,探讨其开发的可行性.方法 首先将G1型和G3型轮状病毒灭活疫苗等量混合制备二价疫苗,设立抗原量相等的G1型、G3型单价疫苗对照及PBS阴性对照,然后肌内注射免疫小鼠,通过ELISA检测血清和肠道中病毒特异性IgG和IgA、微量中和实验检测血清中病毒特异性中和抗体,ELISPOT分析免疫小鼠脾细胞中病毒特异性IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞的数量,评价二价疫苗的免疫效果.结果 与阴性对照组相比,二价疫苗显著诱发了G1和G3特异性血清IgG、IgA、中和抗体和肠道IgG、IgA.与单价疫苗组相比,二价疫苗诱发的G1特异性血清IgG和IgA、肠道IgG和IgA及血清中和抗体与G1单价疫苗组诱发的相应抗体间差异无统计学意义;但二价疫苗组诱发的G3特异性血清IgG(t=2.691,P＜0.05)及中和抗体(t=2.561,P＜0.05)却显著高于G3单价疫苗组诱发的相应抗体水平,其余G3特异性抗体水平两者无差异.同时,与阴性对照组相比,二价疫苗免疫小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-4分泌细胞的数量均显著增加.与单价疫苗组相比,G1刺激产生的IFN-γ和IL-4分泌细胞的数量,二价疫苗组与G1单价疫苗组无显著差异;但在二价疫苗组,G3刺激产生的IL-4分泌细胞的数量显著高于G3单价疫苗组(t=2.327,P＜0.05),而IFN-γ分泌细胞的数量两组无显著性差异.结论 二价疫苗可以有效的诱发免疫应答,疫苗不同成分诱发的免疫应答未发生干扰抑制,这些结果为临床二价轮状病毒灭活疫苗的开发提供了实验依据.     

中国株HIV-1 gp120核酸疫苗的实验免疫研究

目的　探讨表达中国株HIV 1gp12 0基因的核酸疫苗在小鼠体内的免疫反应。方法　将表达HIV 1gp12 0的核酸疫苗质粒pVAXP经肌肉注射免疫Balb c小鼠 ,检测免疫小鼠脾CD4 +、CD8+T细胞亚群的数量 ,脾特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果　重组质粒pVAXP免疫组小鼠脾CD4 +、CD8+T细胞亚群的数值均比对照组高 (P <0 .0 5 ) ;免疫组脾特异性CTL杀伤活性与对照组相比差异极显著 (P <0 .0 1) ;血清抗体滴度显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　表达HIV 1gp12 0基因的核酸疫苗质粒pVAXP能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫。     

顺铂联合DC疫苗对荷瘤小鼠抗肿瘤作用观察

目的:观察顺铂联合DC疫苗对荷瘤小鼠抗肿瘤作用。方法:用终浓度20μg/ml的顺铂处理体外培养的小鼠黑色素瘤B16或B16-hsp70L1细胞,24小时后,Western blot方法观察HMGB1、hsp70蛋白表达;用顺铂处理的B16或B16-hsp70L1细胞裂解液负载DC,LPS诱导成熟,流式细胞仪分析DCs表面MHCⅠ、ICAM-1、CD86的表达。制备荷瘤小鼠模型,给荷瘤小鼠经腹腔注射顺铂(100μg/只),瘤内注射DC疫苗(3×106/只),观察肿瘤生长曲线、荷瘤小鼠脾脏中肿瘤抗原特异性CD8+T淋巴细胞IFN-γ的分泌及CTL活性。结果:顺铂显著促进B16或B16-hsp70L1细胞HMGB1的表达,对hsp70蛋白表达影响不明显;顺铂处理的B16或B16-hsp70L1细胞裂解液负载DC后,MHCⅠ、ICAM-1及CD86表达率分别为41%、39%、42%和47%、41%、42%;顺铂联合DC疫苗不仅显著抑制荷瘤小鼠肿瘤增殖(P0.05),对荷瘤小鼠脾脏CD8+T淋巴细胞IFN-γ的分泌及CTL活性也有明显的提高。结论:顺铂处理的B16细胞裂解液可诱导DC活化;联合DC疫苗后不仅显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,对肿瘤特异性免疫应答也具有一定的促进作用。