PUMA在奥沙利铂治疗大肠癌中作用机制的实验研究

目的：研究凋亡相关基因PUMA在奥沙利铂（oxaliplatin）治疗大肠癌药物机制中的作用,为更好地发挥奥沙利铂的抗肿瘤作用提供实验基础。方法：蛋白印迹法检测在大肠癌LoVo细胞株中奥沙利铂对PUMA蛋白表达的诱导作用;构建稳定表达反义PUMA基因的重组质粒及细胞系;流式细胞术检测细胞凋亡,MTT法测定细胞增殖。结果：成功构建表达反义PUMA基因的重组质粒及细胞系;在大肠癌LoVo细胞株中,奥沙利铂可以诱导PUMA的表达,并在一定范围内呈时间和剂量依赖关系;在PUMA的表达受抑制后,奥沙利铂诱导大肠癌细胞凋亡的作用明显减弱。结论：PUMA的表达在奥沙利铂诱导LoVo细胞凋亡的过程中具有重要作用,PUMA表达的抑制会降低大肠癌LoVo细胞对奥沙利铂治疗的敏感性。     

奥沙利铂对结肠癌细胞XIAP表达及凋亡的影响

目的 研究奥沙利铂对人结肠癌细胞株SW1116中XIAP表达及凋亡的影响,探讨其诱导凋亡的作用机制。方法 应用流式细胞仪检测XIAP表达及凋亡的情况。结果 奥沙利铂对XIAP表达有明显的抑制作用（P〈0.05）,凋亡率明显高于对照组（P〈0.01）。结论 奥沙利铂具有抑制结肠癌细胞株SW1116中XIAP表达,诱导结肠癌细胞凋亡作用,其机制与抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

PD98059对人子宫颈癌细胞株Siha增殖和凋亡的影响

目的探讨ERK1/2抑制剂PD98059对人子宫颈癌细胞株Siha细胞增殖和凋亡的影响。方法不同浓度（10μmol/L25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L）PD98059作用于Siha,取不同时间点（6h,12h,24h,48h）,然后采用MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果 PD98059能够抑制Siha细胞增殖,诱导细胞凋亡,并且呈时间-剂量依赖性（P〈0.05）。结论 PD98059能够抑制子宫颈癌细胞株Siha细胞增殖,诱导凋亡,可能与PD98059抑制了RAS-RAF-MEK-ERK信号转导途径有关。     

PD98059抑制Peroxynitrite诱导人脑血管平滑肌细胞DDR2的表达

目的 探讨过氧亚硝酸盐(ONOO-)诱导人脑血管平滑肌细胞(HBVSMCs)盘状结构域受体2(DDR2)表达的机制.方法 体外培养HBVSMCs,用倒置相差显微镜、吖啶橙染色法和MTT比色法对PD98059预处理的细胞进行细胞形态学及细胞生存率检测,采用Western blot及Real-time PCR技术,检测ONOO-作用下HBVSMCs中DDR2表达及施加ERK1/2抑制剂PD98059后DDR2/MMP-9表达的变化.结果 10 μmol/L ONOO-诱导DDR2在蛋白及mRNA水平上呈现高表达(P＜0.05),随着ONOO-浓度的增加,DDR2逐渐呈现低表达(P＜0.05).PD98059预处理后的HBVSMCs,无明显形态学变化,对其进行生存率检测亦无显著影响(P＞0.05).PD98059显著抑制ONOO-诱导的DDR2/MMP-9表达(P＜0.05).结论 ERK1/2信号转导途径抑制剂PD98059可以抑制ONOO-诱导的DDR2/MMP-9表达,ONOO-诱导HBVSMCsDDR2的表达机制与ERK1/2信号转导途径有关.     

奥沙利铂对 K562细胞体外生长的影响

目的:观察奥沙利铂对人白血病K562细胞的作用.方法:检测奥沙利铂对K562细胞作用的时间效应和剂量效应,在电镜下观察奥沙利铂作用后细胞形态变化;用流式细胞仪分析细胞周期的改变.结果:随着作用时间及药物浓度的增加,奥沙利铂对K562细胞的增殖抑制作用就越明显.0.016mmol/L奥沙利铂作用72h,K562细胞生长抑制率达85%,形态学及流式细胞仪分析显示G2/M期阻滞和细胞凋亡.结论:奥沙利铂诱发的人白血病细胞的凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关.     

大肠癌应用奥沙利铂化疗的护理

本科室自2003年4月至2004年4月对应用5-氟脲嘧啶治疗失效的大肠癌患应用奥沙利铂治疗取得了一定的效果。本药是继顺铂和卡铂之后的第三代铂类抗癌药，不仅改善顺铂及卡铂的毒副反应．而且扩大了它们的活性谱。通过对临床68例患用药后及用药过程观察，提出如下相关护理措施：     

PD98059对肝癌HepG2细胞Tec信号转导作用的初步研究

目的探讨MEK1抑制剂PD98059对肝癌细胞株HepG2细胞中Tec(tyrosine kinase expressed in hepatocellular carcinoma)及ERK2作用.方法免疫细胞化学方法检测Tec、ERK2在HepG2细胞中的表达;用RT-PCR和Westernblot方法检测,不同浓度PD98059处理细胞后,HepG2细胞中的Tec、ERK2 mRNA及蛋白表达.结果Tec、ERK2在HepG2细胞中呈高表达,PD98059明显影响HepG2细胞Tec、ERK2 mRNA以及蛋白表达,呈剂量依赖性,40 μmol/LPD98059细胞抑制最明显.结论Tec可能是肝癌细胞内Ras/Raf/ERK信号转导途径上游的信号蛋白,与Ras/Raf/ERK信号转导通路存在着某种信号联系.     

奥沙利铂对胃癌细胞XIAP表达及凋亡的影响

目的研究奥沙利铂对人MGC-803胃癌细胞株中XIAP表达及凋亡的影响,探讨其诱导凋亡的作用机制。方法应用流式细胞仪检测XIAP表达及凋亡的情况。结果奥沙利铂对XIAP表达有明显的抑制作用(P<0.05),凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。结论奥沙利铂具有抑制MGC-803胃癌细胞株中XIAP表达,诱导胃癌细胞凋亡作用,其机制与抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

大肠癌细胞对5-氟尿嘧啶和奥沙利铂的敏感性

目的:比较5-氟尿嘧啶(5-FU)和亚叶酸(FA)联合应用(FUFA)、奥沙利铂(LOHP)以及LOHP加FUFA对DukesB和C期结直肠癌细胞的抑制作用.方法:收集术前未化疗,手术切除的大肠癌标本60例,将肿瘤标本制成浓度为2×105/ml细胞悬液,分别加入终浓度为0.01、0.1和1倍血浆峰值浓度(PPC)的FUFA、LO-HP和LOHP加FUFA,用MTT法测定肿瘤细胞生存率.结果:组间比较显示:FUFA和LOHP之间的综合疗效无统计学差异(P=0.338),FUFA和LOHP加FUFA之间也没有统计学差异(P=0.138).与LOHP单独用药相比较,LOHP、FUFA联合用药的综合肿瘤细胞存活率降低,显示出统计学上的差异(P=0.033).结论:对临床上确诊的DukesB和C期结直肠癌细胞,FUFA和LOHP在单药用药时都具有抑制作用,而该作用在LOHP加FUFA时增强,二药联合具有协同作用,这些作用呈现剂量相关性.     

奥沙利铂为主联合化疗治疗晚期大肠癌的观察及护理

目的：探讨预防和减轻奥沙利铂联合氟尿嘧啶、亚叶酸钙化疗毒副反应的护理及用药的管理。方法：化疗期间进行了观察和分析，并采用了护理干预。结果：19例晚期大肠癌患者接受了化疗，CR2例，PR5例，SD7例，PD5例，总有效率36．8％。主要毒性反应为恶心呕吐（84．2％），神经毒性（63．1％），贫血（36．9％），腹泻和白细胞下降。结论：奥沙利铂联合氟尿嘧啶、亚叶酸钙治疗晚期大肠癌疗效好，只要通过切实可行的护理措施，就可保证化疗疗程的顺利完成。     

雷替曲塞及其联合PD98059对HT-29细胞的影响

目的 研究雷替曲塞及其联合PD98059对结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响,并探讨其分子机制.方法 ① 在倒置显微镜下观察处理24 h后各组细胞的形态及数量变化;② 使用细胞计数法检测不同处理条件下的细胞数;③ 使用流式细胞术检测各处理组细胞的凋亡率;④ 使用RT-PCR法检测各组K-RAS、ERK1、ERK2 mRNA的相对表达量.结果 ① 倒置显微镜下观察可见与对照组相比,除PD98059组外,其他各组细胞数量均减少,形态均发生凋亡变化,且随雷替曲塞浓度增高,变化程度增加;联合组细胞形态及数量变化较对应雷替曲塞组程度更深.② 细胞计数法显示各组细胞数均明显低于对照组的细胞数,且随着雷替曲塞浓度的增加,细胞数呈递减趋势;联合组与其他各组间均存在明显差异;③ 流式细胞仪检测显示和对照组相比,各组凋亡率均明显上升,在雷替曲塞组中存在浓度依赖性;联合组与其他各组的细胞凋亡率均存在差异;④ RT-PCR结果显示:与对照组相比,PD98059组、雷替曲塞组及联合组在K-RAS、ERK1、ERK2 mRNA的表达上均未表现出明显的差异.结论 ① 雷替曲塞对结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响呈浓度依赖性;② 雷替曲塞联合ERK抑制剂对HT-29细胞具有协同作用;③ ERK抑制剂不是在基因表达水平影响细胞的增殖及凋亡.     

榄香烯和PD98059诱导人胃癌SCG-7901细胞株凋亡及其机制的探讨

目的：探讨榄香烯及PD98059对人胃癌SCG-7901细胞株凋亡的影响,及其与ERK1／2、P38MAPK信号通路的关系。方法：用不同浓度的榄香烯和PD98059处理人胃癌SCG-7901细胞,体外细胞增殖抑制实验（MTT）法检测细胞增殖情况;Western—blot法检测ERKl／2、磷酸化ERKl／2（p-ERK1／2）和磷酸化P38（p-P38）的表达;RT-PCR检测bcl-2mRNA及baxmRNA的表达;TUNEL法检测胃癌细胞凋亡并计算凋亡指数。结果：榄香烯和PD98059单独作用都有抑制胃癌细胞增殖的作用,前者呈浓度和时间依赖性,后者则呈时间依赖性但无浓度依赖性,两药联合作用时对胃癌细胞增殖的抑制作用显著大于单一用药时（P〈0．05）;随榄香烯的浓度增加p-ERK1／2蛋白的表达量增加（P〈0．05）,总FRK1／2无明显变化;榄香烯（0．08mg／mL）、PD98059（50μmol／L）及榄香烯＋PD98059组作用胃癌细胞24h,p-P38的表达均高于对照组（P〈0．05）,且榄香烯＋PD98059组较榄香烯组或PD98059组更高（P〈0．05）;随榄香烯浓度的增加,baxmRNA的表达增加,bcl-2mRNA的表达降低,且榄香烯＋PD98059组表现最显著;实验组细胞凋亡率均高于对照组（P〈0．05）,具有浓度依赖性（P〈0．05）,且榄香烯＋PD98059组的凋亡率明显高于单一作用组（P〈0．05）。结论：榄香烯及PD98059可以抑制胃癌细胞增殖,前者具有时间和浓度依赖性;榄香烯及PD98059还可以促进胃癌细胞凋亡。榄香烯抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的机制包括促进ERKl／2磷酸化和上调P-P38MAPK信号通路的表达;PD98059抑制ERKl／2的磷酸化,但通过上调p-P38MAPK信号通路的表达而发挥其细胞调节作用。     

榄香烯体外和体内抑制人胃癌SGC―7901细胞株的增殖作用及机制

目的观察榄香烯对人胃癌SGC-7901细胞株体外和体内增殖、抑制及凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法采用不同药物对培养后的人胃癌SGC-7901细胞株进行处理并分为4组：对照组、榄香烯组、细胞外信号调控的蛋白激酶1/2（ERK1/2）信号通路抑制剂PD98059组和榄香烯+PD98059联合组;再将20只雄性裸鼠随机分为4组：甲组（腹腔注射0.9%氯化钠注射液）、乙组（腹腔注射榄香烯最大耐受剂量200mg/kg）、丙组（腹腔注射PD98059最大耐受剂量1mg/kg）、丁组（腹腔注射最大耐受剂量榄香烯+PD98059）,均制作胃癌移植瘤模型,并腹腔注射不同药物进行治疗。观察榄香烯和PD98059对细胞株相关蛋白的表达情况及裸鼠胃癌移植瘤的大小及对裸鼠生长的影响。采用MTT法检测细胞增殖情况,Western-blot法检测ERK1/2、磷酸化细胞外信号调控的蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38）的表达,real-timeRT-PCR检测Bcl-2mRNA及BaxmRNA的表达,TUNEL法检测胃癌细胞凋亡并计算凋亡指数。结果与对照组相比,榄香烯组随药物浓度的增加,p-ERK1/2表达增加（P＜0.05或0.01）,BaxmRNA的表达增加（均P＜0.01）,Bcl-2mRNA的表达降低[除榄香烯0.02mg/ml外,其他浓度均具有统计学差异（均P＜0.01）],而总ERK1/2的表达无明显变化（均P＞0.05）;榄香烯、PD98059及榄香烯+PD98059对胃癌细胞增殖均具有抑制作用（均P＜0.05）,且两药联合的抑制作用最好;榄香烯、PD98059及榄香烯+PD98059组细胞凋亡率均高于对照组（P＜0.05或0.01）,并具有浓度依赖性,且两药联合组的凋亡率明显高于单一用药组（均P＜0.05）;乙、丁两组移植瘤的瘤重均较甲组明显减小（P＜0.05或0.01）,且两药联合时抑瘤率达75.59%。结论榄香烯对肿瘤细胞具有抑制作用,且可能是通过上调p-ERK1/2和p-p38蛋白的表达促进胃癌细胞和移植瘤的凋亡,另榄香烯与PD98059联合使用时对肿瘤细胞及组织具有协同抑制效应。     

PUMA和caspase-3在结直肠癌中的表达及意义

目的：检测PUMA和caspase-3在结直肠癌和腺瘤中的表达情况,探讨其在结直肠癌发生、发展中的意义。方法：免疫组化方法检测44例正常结直肠黏膜、20例结直肠腺瘤、60例结直肠癌组织中PUMA和caspase-3的表达水平,分析其表达情况及其与结直肠癌临床病理参数之间的关系。结果：PUMA在正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤、结直肠癌组织的表达率分别为63.6%、30.0%、31.7%,正常黏膜PUMA的表达高于腺瘤和癌（P〈0.05）,结直肠癌中PUMA的表达与肿瘤的大小相关（P〈0.05）,与其它临床病理参数无关（P〉0.05）;caspase-3在正常结直肠黏膜、结直肠腺瘤、结直肠癌组织的表达率分别为95.5%、70%、66.7%,正常黏膜caspase-3的表达高于腺瘤和癌（P〈0.05）,caspase-3的表达与结直肠癌临床病理参数无关（P〉0.05）。结直肠癌中PUMA与caspase-3的表达呈正相关（r=0.329,P〈0.05）。结论：PUMA、caspase-3的表达下调可能参与结直肠癌的发生。     

PD98059对bFGF诱导的CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)激酶MEK抑制剂PD98059对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用.方法以不同浓度的bFGF和PD98059诱导CAOV3细胞,通过细胞计数法MTT比色法观察PD98059对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪测定细胞各周期细胞百分数的变化;利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定ERK活性的变化.结果bFGF使该细胞株增殖比明显增加,而PD98059使该细胞株增殖比明显下降,在一定浓度范围内,其程度均随浓度增高而增强;CAOV3细胞受到bFGF刺激后,由G0 G1期进入S和G2 M期的细胞明显增多,在PD98059的作用下,由G0 G1期进入S和G2 M期的细胞明显减少,并在一定浓度范围内成剂量依赖性,与对照组比较,差异显著;随着bFGF浓度的增加,CAOV3细胞ERK活性随之升高,当bFGF浓度为75ng/ml时,ERK活性达到峰值,PD98059抑制细胞内ERK活性,与PD98059浓度呈剂量依赖效应.结论PD98059对bFGF引起的细胞增殖具有抑制作用,bFGF可能通过激活Ras-Raf-ERK信号转导途径来调控CAOV3细胞增殖,PD98059可有效阻滞此传导途径.