Bcl-2基因与细胞凋亡

细胞凋亡是机体细胞衰老与死亡过程的一种主要形式,它是一个生理性调节机制,在生物体的发育形成及功能维持中起重要作用。近年来研究发现Bcl-2及其相关蛋白在细胞凋亡的调控中起着很重要的作用。本文就Bcl—2分子生物学、生理功能、作用机制以及Bcl—2研究的应用展望等方面进行了讨论。     

白花丹参上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

[摘要]目的研究白花丹参对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及对凋亡相关基因Bcl-2表达的调节。方法应用酶消化灌注法分离人脐静脉血管内皮细胞,采用形态学观察和Ⅷ因子抗体免疫荧光检测法进行鉴定。取对数生长期的细胞分组进行干预(白花丹参高剂量组0.10 g/ml, 白花丹参低剂量组0.01 g/ml),应用流式细胞技术观察细胞凋亡情况,应用免疫细胞荧光技术检测凋亡相关基因Bcl-2的表达。结果在白花丹参干预下,H2O2诱导的HUVEC凋亡率降低(高剂量组P<0.01,低剂量组P<0.05),高剂量组Bcl-2的表达增加(P<0.01)。结论白花丹参对H2O2诱导的HUVEC凋亡具有抑制作用,这种作用与Bcl-2表达上调有关。     

辛伐他汀通过上调动脉粥样硬化大鼠血管壁Bcl-2蛋白的表达而抑制细胞凋亡

目的 探讨辛伐他汀对动脉粥样硬化(AS)大鼠模型血管壁细胞凋亡、Bcl-2蛋白的表达干预作用.方法 高脂饲料及腹腔注射维生素D3复制大鼠AS模型,随机分为对照组(n=10)给予普通饲料喂养,实验组(n=13)给予高脂饲料喂养,干预组(n=13)给予高脂饲料喂养基础上加用辛伐他汀干预,11周后取胸主动脉,观察其斑块变化.采用免疫组化Elivision法测定AS血管壁中Bcl-2蛋白表达.通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI),分析各组中Bcl-2表达及AI变化.结果 与对照组比较,Bcl-2蛋白的表达在实验组明显降低(P<0.05);而与实验组比较,干预组Bcl-2蛋白的表达明显升高(P<0.05),且与对照组比较无差异.同时,AI在各组中的变化比较则相反,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 辛伐他汀抗大鼠AS的作用可能与上调Bcl-2蛋白表达,进而抑制细胞凋亡相关.     

过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡时核仁素的表达及细胞定位变化

目的:探讨核仁素C23在过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)致人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)凋亡中的表达及定位情况.方法:采用H2O2 (0.5 mmol/L)作用于人HUVEC,采用流式细胞术以及caspase-3活性检测观察细胞凋亡的发生情况,并通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western 印迹分别检测核仁素mRNA和蛋白质水平;间接免疫荧光检测核仁素的细胞内分布情况.结果:流式细胞术以及caspase-3活性检测均表明H2O2能明显地诱导HUVEC凋亡,并且Western 印迹分析显示H2O2能够使核仁素发生断裂,RT-PCR分析显示H2O2诱导核仁素mRNA表达下调;间接免疫荧光检测显示核仁素从胞核移位至胞浆.结论:H2O2可诱导HUVEC凋亡,同时伴有核仁素表达下调及从胞核移位至胞浆.     

Bcl-2基因增强表达对TNF诱导U937细胞凋亡的效应

目的：探讨Ｂｃｌ－２基因增强表达对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）诱导的Ｕ９３７细胞凋亡的生物学效应。方法：用磷酸钙沉淀法将Ｂｃｌ－２基因转染到Ｕ９３７细胞，用Ｇ４１８筛选稳定转染子，用不同剂量ＴＮＦ处理后观察转染与未转染细胞的存活率。结果：用Ｂｃｌ－２稳定转染的Ｕ９３７细胞经ＴＮＦ处理，存活率明显高于未转染细胞。结论：Ｂｃｌ－２基因增强表达阻抑ＴＮＦ诱导的Ｕ９３７细胞凋亡     

二苯乙烯苷上调Bcl-2抑制内皮细胞凋亡

目的研究二苯乙烯苷（TSG）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的作用,以及对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,筛选造模内皮细胞凋亡的H2O2浓度,以不同浓度二苯乙烯苷作用24 h。采用MTT法检测细胞生长活力,Hoechst33258染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western-blot检测Bcl-2蛋白的含量。结果过氧化氢能引起内皮细胞损伤,抑制细胞增殖,并且随着浓度增加,细胞生存率逐渐降低。其中300μmol/L H2O2作用后细胞增殖明显受到抑制,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞,流式细胞仪检测出明显的凋亡峰,Bcl-2蛋白的表达量显著减少;加入二苯乙烯苷作用后,随着TSG浓度增加,细胞生存率增加,凋亡率逐渐降低;与H2O2造模组比较,10μmol/L的二苯乙烯苷预处理能够显著提高细胞生存率,抑制细胞的凋亡,并且使Bcl-2表达增加（P〈0.05）。结论二苯乙烯苷能抑制过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡,该作用与上调Bcl-2表达有关。     

IP_6诱导肝癌细胞HepG2凋亡及其对Bcl-2和Bax蛋白表达影响

目的研究肌醇六磷酸（IP6）对人肝癌细胞HepG2的诱导凋亡作用及其对相关蛋白表达的影响。方法将不同浓度IP6作用于体外培养的HepG2细胞,应用Hoechst 33258染色在荧光显微镜下观察HepG2细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测IP6对HepG2细胞凋亡率的影响;免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达的变化。结果荧光显微镜下可观察到细胞凋亡的形态学改变;IP6作用后的HepG2细胞凋亡率升高且与药物剂量呈依赖关系（F=342.15,q=2.98～28.53,P〈0.05）;与0 mmol/L IP6组相比,1.0、2.0、3.0 mmol/L IP6组均有效抑制Bcl-2的表达（F=110.21,q=5.88～16.92,P〈0.05）,上调Bax的表达（F=26.00,q=2.97～8.19,P〈0.05）。结论 IP6可能通过调控Bcl-2及Bax蛋白的表达而诱导HepG2细胞的凋亡。     

哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡与Caspase-3及Bcl-2基因家族的关系

目的：探讨哇巴因凋亡诱导Jurkat细胞凋亡的机制。方法：四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察哇巴因对Jurkat细胞生长的抑制作用；应用流式细胞术、原位末端标记技术(TUNEL)等观察细胞凋亡；应用Western—blot测定Caspase-3的活性亚单位及Bcl-2、Bax蛋白表达水平；比色法检测Caspase-3活性。结果：哇巴因能诱导Jurkat细胞凋亡，细胞凋亡过程中，Bax蛋白表达增加，Caspase-3活性明显升高。结论：结论：哇巴因可能通过调节Bcl-2、Bax蛋白表达从而激活Caspase途径诱导Jurkat细胞凋亡。     

龙葵碱调控 Bcl-2 与 Bax 蛋白表达及 caspase-3 活性诱导HepG2 细胞凋亡的研究

目的 探讨龙葵碱诱导 HepG2 细胞凋亡的作用机制。方法 透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法 (TUNEL 法) 检测 DNA 断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测 Bcl-2 与 Bax 蛋白表达,比色法检测 caspase-3 活性的变化。结果 在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL 法发现龙葵碱高、中、低剂量组 HepG2 细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明 0.4、2、10 μmol/L 龙葵碱作用 HepG2 细胞 24 h 凋亡率分别为 4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高 caspase-3 活性,下调 Bcl-2 蛋白表达,上调 Bax 蛋白表达。结论 龙葵碱通过降低 Bcl-2/Bax 的值,激活 caspase-3 酶活性诱导 HepG2 细胞凋亡。     

Overexpression of Bcl-2 partly inhibits apoptosis of human ce rvical cancer SiHa cells induced by arsenic trioxide

ＳｏｍｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓｆｒｏｍｔｈｅＨａｒｂｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｔｈｅＳｈａｎｇｈａｉＳｅｃｏｎｄＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｒｅｐｏｒｔｅｄｔｈａｔａｒｓｅｎｉｃｔｒｉｏｘｉｄｅ (Ａｓ2 Ｏ3)ｉｓａｎｉｄｅａｌｃｌｉｎｉｃａｌｃｏｍｐｏｕｎｄｆｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ (ＡＰＬ)ａｎｄｉｔｃｏｕｌｄｉｎｄｕｃｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＮＢ4ｃｅｌｌｓ 1 3　Ｔｈｒｏｕｇｈｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏｅｘｐｅｒ…     

Caspase3、Bcl-2蛋白在胎盘组织中的表达及其与羊水过少的相关性研究

目的 探讨胎盘组织中凋亡蛋白Caspase3、凋亡抑制蛋白Bel-2的表达及其与羊水过少的相关性.方法 采用免疫组化法检测羊水过少30例(羊水过少组)和正常产妇30例(对照组)胎盘滋养细胞Caspase3、Bcl-2的表达,通过免疫组化积分判断两者表达的高低.结果 羊水过少组胎盘滋养细胞Caspase3、Bcl-2表达的免疫组化积分分别为4.90±0.71、1.80±0.76,对照组分别为2.06±0.64、4.00±0.69.羊水过少组Caspase3的表达明显高于对照组(P<0.05),而Bcl-2则明显低于对照组(P<0.05).Caspase3与Bcl-2在羊水过少组胎盘滋养细胞中的表达呈负相关(r=-0.74,P<0.05).结论 胎盘滋养细胞Caspase3高表达、Bcl-2低表达可能与羊水过少的发生有关.Caspase3与Bcl-2在胎盘滋养细胞中的表达失衡可能是羊水过少发生的原因之一.     

IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达及其受体IL-22R1在人气道细胞中的表达

[摘要]目的检测IL-22在支气管哮喘患者血清中的表达,检测IL-22R1在人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞中的表达,寻找IL-22作用的靶细胞。方法应用ELISA法检测36例支气管哮喘患者及20例正常对照者血清IL-22及IL-17的表达,同时检测36例患者肺通气功能,根据1秒率(FEV1/FVC)及FEV1占预计值的百分比将支气管哮喘患者分为支气管激发试验阳性组(17例)和支气管舒张试验阳性组(19例)。应用实时定量PCR检测人气道平滑肌细胞、人肺成纤维细胞、人气道上皮细胞IL-22R1 mRNA的表达,用免疫荧光以及蛋白质印迹法检测IL-22R1蛋白在上述3种细胞中的表达。结果支气管哮喘患者血清IL-22及IL-17水平与正常对照组相比差异无统计学意义,但支气管舒张试验阳性组患者血清IL-22和IL-17水平高于支气管激发试验阳性组(P<0.05)。IL-22R1 mRNA及蛋白在上述3种细胞均有表达。结论IL-22可能涉及支气管哮喘的发生发展过程,气道平滑肌细胞、肺成纤维细胞、人气道上皮细胞可能均是IL-22发挥作用的靶细胞。     

平阳霉素对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及其机制

目的:观察平阳霉素(PYM)对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及可能机制。方法:采用甲基三氯硅烷(MTS)比色法检测PYM对EA.hy926细胞体外生长的作用;流式细胞术测定PYM作用细胞24h后细胞凋亡、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达、线粒体膜电位的变化;免疫印迹(Western-blot)法检测PYM对EA.hy926细胞中Caspase-8、Caspase-9蛋白表达水平的影响。结果:PYM可明显抑制EA.hy926细胞的增殖,且生长抑制率具有浓度时间依赖性;流式细胞术检测结果显示PYM各浓度作用24h后,细胞凋亡百分率随药物浓度增加而增高,活化Caspase-3表达在PYM各浓度组均增强,线粒体膜电位在各浓度组均下降;Western-blot法检测结果显示PYM作用EA.hy926细胞后,Caspase-8、Caspase-9蛋白均可出现明显的剪切带。结论:PYM能抑制EA.hy926细胞的增殖,这种抑制作用是可通过诱导细胞凋亡实现的,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9参与了PYM诱导EA.hy926细胞凋亡的过程。     

紫外线对人晶状体上皮细胞凋亡的诱导及Bcl-2,Bax基因的影响

目的:研究紫外线照射体外培养人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)对凋亡的诱导、凋亡调控基因(Bax,Bcl-2)表达的变化,探讨紫外线诱导HLEC凋亡的机制。方法:以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一紫外线光源对HLEC进行照射。按紫外线照射时间将HLEC分为0,5,10,15及30 min组。采用Annexin V+PI双染流式细胞计数对HLEC凋亡进行检测,用原位杂交的方法检测各组Bax,Bcl-2 mRNA的表达。结果:随紫外线照射时间的延长HLEC凋亡率增加,Bcl-2阳性细胞率逐渐降低;而Bax阳性细胞率逐渐增加。HLEC凋亡率与Bcl-2和Bax的比率呈负相关(r=-0.874,P<0.05)。结论:紫外线照射可诱导HLEC凋亡,Bax和Bcl-2可能参与了紫外线诱导的HLEC凋亡的基因调控过程。     

单核细胞趋化蛋白-1对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 研究单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1, MCP-1)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, hUVEC)凋亡的影响.方法 培养并鉴定人脐静脉内皮细胞;用不同浓度MCP-1(0.1、1.0、10、100 μg/L)对其作用24、48 h;先用MTT比色法观察细胞存活率、流式细胞技术检测细胞DNA含量及细胞周期观察其对hUVEC凋亡的影响.结果 单核细胞趋化蛋白-1能诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡(P＜0.05),其效应随浓度和时间的增加而增强:MTT明显减低;细胞DNA含量减少,出现明显亚G0/G1峰(凋亡细胞峰).结论 单核细胞趋化蛋白-1能诱导人脐静脉内皮细胞凋亡.     

蟾蜍灵对EAhy926细胞增殖、凋亡及Caspase3,Bcl-2表达的影响

[目的]探讨蟾蜍灵对血管内皮细胞EAhy926的增殖抑制作用及其机制.[方法]体外培养血管内皮细胞EAhy926,用不同浓度蟾蜍灵进行干预.通过四甲基偶氮唑盐(MTI)法检测细胞增殖抑制率;用倒置光显微镜观察细胞形态变化;用Hoechst33342/PI双荧光染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化;以流式细胞术检测细胞凋亡的比率;应用半定量逆转录PCR检测EAhy926细胞中Caspase3和Bcl-2的mRNA表达.[结果]蟾蜍灵对EAhy926细胞生长具有抑制作用;且在0.0625-1μmol/L范围内呈时间、剂量依赖性;荧光显微镜下可见0.1μmol/L的蟾蜍灵作用24 h可诱导EAhy926细胞凋亡,作用48h可引起细胞部分坏死;流式细胞术检测出典型的“凋亡峰”,凋亡率8.2％～36.5％,且呈时间依赖性.半定量RT-PCR显示Caspase3 mRNA表达较对照组明显增强,Bcl-2 mRNA表达较对照组明显减弱,且二者均呈剂量依赖性.[结论]蟾蜍灵抑制EAhy926细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase3和下调Bcl-2基因表达有关.     

非诺贝特对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞增生、凋亡、NO生成及XIAP mRNA表达的影响

目的:探讨非诺贝特对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增生、凋亡、NO生成及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)mRNA表达的影响.方法:体外培养HUVECs株CRL-1730,分为正常对照组、LPC组、低浓度非诺贝特组(10 μmol/L)、中浓度非诺贝特组(50 μmol/L)、高浓度非诺贝特组(100 μmol/L).分别观测内皮细胞增生、凋亡、NO生成及XIAP mRNA表达的变化.结果:与正常对照组比较,LPC抑制CRL-1730细胞增生,促进凋亡,降低NO浓度,减弱XIAP mRNA的表达.非诺贝特干预后,CRL-1730细胞增生增强,凋亡减少,NO浓度升高,XIAP mRNA表达增强,且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系.结论:非诺贝特可通过促进XIAP表达,干预LPC对HUVECs的影响,使内皮细胞增生增强,凋亡减少,NO浓度升高,从而起到抗动脉硬化作用.