乙型肝炎病毒相关性肝癌患者的蛋白质组学研究

目的 初步探讨蛋白质组技术在精浆研究中的应用,建立乙型肝炎病毒相关性肝癌及健康者血清双向凝胶电泳图谱;筛查并鉴定二者间的差异表达蛋白质,期望从中发现有意义的分子标志物.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离乙型肝炎病毒相关性肝癌和健康者血清总蛋白,银染显色,PDQuest7.3.0软件分析,从中选取差异表达蛋白质,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质.结果 获得分辨率较好的精浆双向凝胶电泳图谱;得到8个在乙型肝炎病毒相关性肝癌与健康者血清中差异有统计学意义的蛋白质斑点,进行鉴定,结果 表明这些特异蛋白分别为肝脂肪酸结合蛋白、谷胱甘肽S转移酶A1、27×10~3热休克蛋白、黄素还原酶、假定蛋白、醛酮还原酶、乙二醛酶、细胞角蛋白18.结论 在乙型肝炎病毒相关性肝癌与健康者血清中表达蛋白质差异有统计学意义,利用蛋白质组学这一高通量的筛查技术可望从中发现与乙型肝炎病毒相关性肝癌相关的血清标志物.     

盆腔器官脱垂患者阴道组织比较蛋白质组学研究

目的:建立盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse,POP)患者及非脱垂对照者阴道组织蛋白质双向凝胶电泳图谱,并结合质谱技术分析其差异表达蛋白质,寻找POP疾病相关蛋白,以进一步阐明POP的发病机制。方法:收集绝经后年龄相匹配的POP组和对照组尿道周围阴道壁组织标本各10份,提取组织总蛋白,进行双向凝胶电泳(two-dimensional gel electro-phoresis,2-DE)得到凝胶图谱,采用Image Master 5.0 2D图象分析软件进行匹配和差异分析,识别两组间差异表达蛋白。将部分差异蛋白点胶内原位酶解后进行MALDI-TOF-MS分析,获取肽质量指纹图谱并进行生物信息学检索鉴定蛋白质。结果:得到了分辨率高,重复性好的POP组和对照组阴道壁组织蛋白双向凝胶电泳图谱,POP组的平均蛋白质点数为(871±96)个,正常对照组为(856±89)个。通过比较分析,差异表达蛋白质点数为27个。选取其中8个具有明显差异的蛋白点进行质谱鉴定,初步鉴定出5种蛋白质,其中2个蛋白质在POP组表达上调,3个蛋白质表达下调。结论:两者间存在一些差异表达的蛋白质,为阐明POP发病机制打下了坚实的基础。     

尿液蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立及优化

目的 建立稳定的尿液蛋白质组学双向凝胶电泳技术体系.方法 对尿液蛋白质组双向电泳样品的收集保存、样品制备、上样量、水化方式、水化上样液成分、IPG胶条选择及电泳程序参数等进行了比较研究和条件优化.结果 双向电泳图谱清晰.检测到蛋白斑点数目为(849+18)个,匹配率达到81.26%.结论 建立了较稳定的尿液蛋白质双向凝胶电泳方法 ,可用于开展疾病的尿液蛋白质组学研究.     

人外周静脉血血清蛋白质双向凝胶电泳条件优化

目的优化人外周静脉血血清蛋白质的双向凝胶电泳条件。方法血清总蛋白经去除白蛋白、IgG和丙酮沉淀去盐分处理后,固相pH梯度等电聚焦(IEF)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)进行蛋白质电泳,对蛋白质的上样量、固相pH梯度(IPG)胶条的pH值范围、凝胶浓度、水化上样液体积和IEF程序及其参数等条件进行优化。结果将50～100μg蛋白质溶解于终体积为350μl水化上样液,应用pH4～7的IPG胶条和浓度12%的SDS-PAGE凝胶进行双向电泳,经优化电泳电流、时间等参数后,建立了合适的双向凝胶电泳条件,得到比较理想的蛋白质二维图谱。结论优化了血清蛋白质双向凝胶电泳条件,为进一步开展血清差异蛋白质组学研究奠定基础。     

应用双向电泳对HBV相关性肝细胞癌肝组织蛋白质组的初步研究

目的　应用双向凝胶电泳技术 (two -dimensionalgelelectrophoresis ,2 -DE) ,分离乙肝病毒相关性肝细胞癌 (hepatocellu larcarcinoma ,HCC )的癌组织和癌周组织总蛋白质 ,分析二者之间蛋白质组的差异。方法　以固相pH梯度等电聚焦为第一向 ,垂直板SDS -PAGE为第二向分离肝组织总蛋白质 ,银染显色 ,扫描仪获取凝胶图像并对其进行软件分析。结果　癌组织、癌周组织(肝硬化组织 )、癌周组织 (慢性肝炎组织 )图谱蛋白质点数存在差异 (P <0 0 5 ) ;在与癌组织蛋白质组的差异分析中 ,肝硬化组织和慢性肝炎组织之间存在显著差异 (P <0 0 1)。结论　癌组织与癌周组织的蛋白质组具有差异 ,对这些差异蛋白质点的进一步分析有助于研究HBV相关性HCC的癌变机制及肿瘤标记。     

椎动脉缺血型颈椎病肝阳化风证患者外周血淋巴细胞蛋白质组学研究

目的采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,建立椎动脉缺血型颈椎病肝阳化风证和肝阳上亢证高分辨率的二维凝胶电泳图谱,从蛋白质组学角度探讨椎动脉缺血型颈椎病中医肝阳化风证和肝阳上亢证的本质内涵。方法设颈椎病肝阳化风证组、颈椎病肝阳上亢证组及健康人对照组3组,取外周静脉血分离淋巴细胞提取蛋白质,经双向凝胶电泳,考马斯亮蓝染色获取凝胶图谱,以PDQuestV7.3.1软件对三组表达图谱进行差异分析,选定差异蛋白点进行质谱分析和SWISS-PROT数据库检索鉴定蛋白质。结果建立了颈椎病肝阳化风证组、肝阳上亢证组、健康人组外周静脉血淋巴细胞2-DE图谱;通过分析比较,发现16个蛋白质点在肝阳化风证组中异常表达,12个蛋白质点在肝阳上亢证组中异常表达,肝阳化风证组与肝阳上亢证组比较,分析发现16个差异蛋白点,3个相同蛋白质点。结论颈椎病(椎动脉缺血型)肝阳化风证与肝阳上亢证有差异蛋白又有相同的蛋白,提示同病异证在共同的物质基础上存在着不同的本质内涵。     

日本血吸虫尾蚴及童虫可溶性抗原蛋白质组研究

应用免疫蛋白质组研究方法筛选、鉴定日本血吸虫尾蚴、童虫可溶性抗原蛋白质。方法日本血吸虫尾蚴可溶性粗抗原(SCAP)、童虫可溶性粗抗原(SLAP)分别用双向凝胶电泳(2-DE)分离蛋白质，每样本同时制3块胶，1块胶进行银染，2块胶通过电转印后再分别用感染兔和正常兔血清作Western印迹分析，确定特异性阳性反应点，再从相...     

难免流产与正常早孕子宫内膜蛋白质组的差异

目的用蛋白质组学相关技术分析难免流产与正常早孕子宫内膜蛋白质组的差异,探讨自然流产发生的可能机制。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE)分别分离难免流产(研究组)者和正常早孕行人工流产(对照组)者子宫内膜的蛋白质组。银染显色,PDQuest2DE软件分析。结果图像分析测得2种胶的匹配率达84.5%,在等电点pI4~9、分子量17.0~75.4kD范围内分离得研究组子宫内膜蛋白点大约730个,对照组子宫内膜蛋白点大约780个,其中至少60个蛋白点在2种子宫内膜间有2倍以上的量变。结论难免流产与正常早孕子宫内膜蛋白质组的差异表达,可能是导致孕卵着床胚泡植入障碍造成流产的一个原因。     

膀胱移行上皮癌细胞系双向电泳技术的建立

目的建立高分辨率的移行上皮癌细胞PUMC双向凝胶电泳图谱,并初步分析其蛋白质表达情况。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离膀胱移行上皮癌细胞PUMC细胞总蛋白,凝胶考马斯亮蓝染色,然后利用GS-800 Calibrated Densitometer凝胶成像系统获取图像,用 PDQuest2D分析软件对图像进行背景消减、斑点检测、匹配、斑点位置重复性进行系统分析。结果获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱。结论建立膀胱癌移行上皮癌细胞PUMC的双向电泳参考图谱,为进一步构建其蛋白质表达数据库提供了基础。     

尿液蛋白质组学在膀胱尿路上皮癌早期诊断中的应用

目的 寻找膀胱尿路上皮癌(BUC)患者与健康志愿者尿液蛋白质组学差异,为BUC的早期诊断奠定基础.方法 采用25％乙醇沉淀法制备尿液双向电泳样品,尿液蛋白经双向凝胶电泳(2-DE)分离后行考马斯亮蓝染色,利用PDQuest8.0 2D凝胶图像分析软件进行分析,所得差异蛋白点用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱仪(MALDI-TOF-TOF-MS)进行肽序测定,结合Swiss-Prot蛋白质数据库对差异蛋白进行初步鉴定,并应用Western blot方法对差异蛋白在两组间的差异表达情况进行验证.结果 获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳图谱.BUC组与对照组凝胶的蛋白质点数分别为(789±18)个和(762± 14)个;与对照组比较,BUC组有6个蛋白质点表达明显下调,11个蛋白质点表达明显上调.经质谱分析后,初步鉴定了5种蛋白质,分别为纤维蛋白原、乳酸脱氢酶B、载脂蛋白A1、丛生蛋白和触珠蛋白,均在BUC组呈表达增高趋势.Western blot验证了双向凝胶电泳结果.结论 BUC患者与健康志愿者的尿液蛋白质组存在明显的差异,差异蛋白的鉴定为进一步寻找BUC早期诊断的分子标志物提供了研究基础和依据.     

胃癌组织及癌旁组织蛋白质双向电泳图谱的差异分析

目的　利用蛋白质组学方法建立分辨率高和重复性好的人胃癌组织及其正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,分析其差异表达的蛋白质 ,为进一步寻找胃癌标志物奠定基础。方法　采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离人胃癌组织及正常胃黏膜组织的总蛋白质 ,凝胶经银染显色后 ,ImagingMaster 2D图像分析软件进行比较分析 ,识别差异表达的蛋白质。结果　⑴癌组织和正常胃黏膜组织凝胶的平均蛋白质点数分别为 10 49± 67和 10 97± 73 ,平均匹配的点数分别为 83 5± 48和 95 3± 5 6,匹配率分别为79 6%和 86 7%。⑵通过比较分析 5例胃癌组织及正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,得到平均匹配蛋白点数为 769± 45 ,差异表达蛋白点数为 81个 ,其中 17个点仅在癌组织中表达 ,2 4个点仅在正常胃黏膜中表达 ,2 6个点在癌组织中为高表达 ,14个点在癌组织中为低表达。结论　本研究建立了分辨率高且重复性较好的人胃癌组织与正常胃黏膜组织的双向凝胶电泳图谱 ,发现两者间存在一些差异表达的蛋白质 ,为进一步筛选胃腺癌特异性的分子标志物打下了坚实的基础。     

2D-DIGE蛋白质组技术的探讨及其在微生物研究中的应用

目的:探讨双向差异凝胶电泳(two dimension difference gel electrophoresis,2D-DIGE)的实验方法,分析比较其优缺点,概述其在微生物研究中的应用。方法:以两株不同血清型的副溶血性弧菌为样本,通过2D-DIGE实验,得到两组蛋白质荧光染色分布图,与银染的效果比较。结果:直观的看到两株细菌的蛋白质差异,且可分析样品丰度变化。结论:该方法有一定的局限性,但却是研究蛋白质组丰度变化的强有力工具。     

人绒癌耐药细胞株JAR/MTX蛋白质组双向凝胶电泳图谱的建立

目的:建立人绒癌耐药细胞株JAR/MTX蛋白质组双向凝胶电泳图谱。方法:用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液培养JAR/MTX细胞,胰酶消化后收集细胞,加入细胞裂解液使细胞充分裂解,离心后取上清液进行双向凝胶电泳和考马斯亮蓝染色,应用PDQuest图像分析系统进行凝胶图谱分析,从凝胶图中选取1个分离较好的蛋白质点,应用四极杆-飞行时间质谱(Q-TOF-MS)和数据库搜索鉴定蛋白质。结果:获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱;在17cmpH3～10IPG胶条上可分离到(810±45)个重复性及分辨率均较好的蛋白位点,蛋白斑点的匹配率为80.2%;1个蛋白点通过质谱分析和数据库检索得到了初步的鉴定。结论:建立了人绒癌耐药细胞株JAR/MTX双向凝胶电泳参考图谱,为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。     

高血压大鼠肝阳上亢证的下丘脑双向凝胶电泳分析

目的通过双向凝胶电泳建立高血压肝阳上亢证大鼠与正常大鼠下丘脑分辨率高、重复性好的蛋白质表达图谱,并分析其差异蛋白质。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离肝阳上亢证大鼠与正常大鼠下丘脑的总蛋白质,经考马斯亮兰染色,PDQuest 7.0软件分析。结果两种状态下的大鼠下丘脑图象平均匹配率达92%,且重复性较好,其蛋白质主要分布在等电点pI3-8,分子量M r14.4~75kD范围。高血压肝阳上亢大鼠下丘脑约有777±27个蛋白质点,正常大鼠下丘脑约有780±31个蛋白质点。与正常大鼠比较肝阳上亢大鼠有22个点表达上升2倍及以上,有25个点表达下降2倍及以上。结论在肝阳上亢状态下有22个蛋白质表达明显增加,还有25个蛋白质表达明显减少。这些蛋白质的变化可能与高血压肝阳上亢的形成有关。     

三甲基氯化锡诱导的非洲绿猴肾细胞蛋白质表达谱改变

目的 分析三甲基氯化锡(trimethyltin chloride,TMT-Cl)诱导的非洲绿猴肾细胞(vero细胞)和正常vero细胞之间差异表达蛋白质,以寻找相关的标志物,探讨TMT-Cl所致肾损伤的分子机制.方法 通过双向凝胶电泳和液相色谱-电喷雾线性离子阱质谱技术比较TMT-Cl染毒的vero细胞和正常vero细胞之间蛋白质表达谱的差异,蛋白免疫印迹技术分析其中的2个差异蛋白Annexin A1和α6-Tubulin的表达以验证双向电泳的结果,反转录荧光定量聚合酶链式反应技术进一步分析Annexin AI和α6-Tubulin在mRNA水平的表达.结果 比较TMT-Cl染毒的vero细胞和正常vero细胞蛋白质表达谱,共获得15个差异蛋白点,9个通过质谱分析得到鉴定,3个上调,6个下调.与对照组比较,各TMT-Cl染毒组α6-Tubulin蛋白质和mRNA表达水平均下调,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,各染毒剂量组Annexin A1蛋白表达水平均上调,25和50 μmol/L组mRNA表达水平下调,100 μmol/L组的mRNA表达水平上调,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 双向凝胶电泳结合质谱分析筛选到的9个差异表达蛋白与TMT-Cl所致肾细胞毒性密切相关,可作为早期诊断、治疗及疗效评价的候选生物标志物.     

结核肺组织与正常肺组织蛋白质组双向电泳图谱的差异分析

目的对结核肺组织与正常肺组织双向电泳图谱进行比较分析,筛选差异表达蛋白质。方法利用双向电泳分离结核组及正常组总蛋白质,并通过计算机图像分析软件分析电泳图谱。结果在结核肺组织中检测有效蛋白点数为(190±11)个,正常肺组织中检测有效蛋白点数为(179±5)个。发现两者间共有15个差异蛋白点,蛋白点分子量(Mr)主要分布于15kD～80kD,PI为3～10。4个点在病灶组织中表达上调,11个点在病灶组织中表达下调。结论通过双向凝胶电泳和图像分析技术对结核肺组织及正常肺组织蛋白质组进行研究,获得了结核组与正常组的差异蛋白点,为进一步利用质谱分析技术做差异蛋白质鉴定奠定了基础,并为肺结核的早期诊断、发病机制探索、病情监测提供依据。     

双向凝胶电泳和质谱技术在男性生殖医学研究中的应用

人类基因组计划已基本完成,包括蛋白质组时代的后基因组时代已经到来,蛋白质组研究旨在揭示基因组表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能。借助于蛋白质组研究的两种基本技术手段——双向凝胶电泳和质谱技术,阐明与男性生殖功能密切相关的蛋白质及其功能,必将有助于深入理解睾丸发育/精子发生的生理机制,揭示男性不育的发病机理,最终对男性生殖健康产生深远的影响。     

双向凝胶电泳和质谱技术在男性生殖医学研究中的应用

人类基因组计划已基本完成，包括蛋白质组时代的后基因组时代已经到来，蛋白质组研究旨在揭示基因组表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能。借助于蛋白质组研究的两种基本技术手段——双向凝胶电泳和质谱技术，阐明与男性生殖功能密切相关的蛋白质及其功能，必将有助于深入理解睾丸发育／精子发生的生理机制，揭示男性不育的发病机理，最终对男性生殖健康产生深远的影响。     

蛋白质组检测技术进展

“蛋白质组学”概念自1994年提出之后，其研究技术得到了突飞猛进的发展，主要采用的是双向凝胶电泳，但该方法存在很多不足，尤其在蛋白质的检测手段和定量分析上还不尽如人意。目前广泛使用的染色技术是银染和考马斯亮蓝染色，荧光染色等更准确和灵敏的检测技术也为蛋白质组学技术提供了不可比拟的技术支持。差异凝胶电泳和同位素代码标记的出现，对以双向电泳为核心的传统方法提出了创新和改进，新产生的多元化的分析方法将大大加强目前双向凝胶电泳的应用能力，促进其解决更多的基础问题。     

双向凝胶电泳和质谱技术在男性生殖医学研究中的应用

人类基因组计划已基本完成，包括蛋白质组时代的后基因组时代已经到来，蛋白质组研究旨在揭示基因组表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能，借助于蛋白质组研究的两种基本技术手段－双向凝胶电泳和质谱技术，阐明与男性生殖功能密切相关的蛋白质及其功能，必将有助于深入理解睾丸发育／精子发生的生理机制，揭示男性不育的发病机理，最终对男性生殖健康产生深远的影响。