重楼总皂苷对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用及对细胞周期的影响

目的:研究重楼总皂苷对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用及对细胞周期的影响.方法:用MTT法测定重楼总皂苷对A549细胞的增殖抑制率;Hoechst-PI双染观察细胞形态学变化;流式细胞术测定重楼总皂苷对A549细胞周期时相分布的影响.结果:重楼总皂苷能抑制A549细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性;Hoechst-PI双染显示细胞凋亡特征;重楼总皂苷使A549细胞被阻滞在S期.结论:重楼总皂苷对A549细胞的增殖有较强的抑制作用,明显影响细胞周期时相分布.     

苦参碱对体外人肺癌A549细胞的抑制作用

目的:研究苦参碱对体外培养人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制.方法:用不同浓度的苦参碱作用A549细胞24、48、72 h,以MTT法检测苦参碱对A549细胞的抑制作用,流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期分布时相,TRAP-ELISA法检测端粒酶的活性.结果:随着时间和浓度的增加,苦参碱对A549细胞的抑制作用逐渐增强(P＜0.01);不同浓度苦参碱(0.5、1.0、1.5、2.0 mg/mL)诱导A549细胞的凋亡率分别为3.2%、9.5%、13.4%、17.6%;G0/G1期细胞比例增加,G2/S期细胞比例下降;端粒酶的活性呈浓度和时间依赖性降低.结论:苦参碱可通过抑制端粒酶活性、诱导细胞凋亡抑制体外培养的A549细胞的增殖.     

帕瑞昔布对非小细胞肺癌细胞株A549增殖和迁移的影响

目的 研究帕瑞昔布对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能机制.方法 采用随机数字表法将A549细胞随机分为四组：对照组（C组）,10 μmol/L帕瑞昔布（P1组）、40 μmol/L帕瑞昔布组（P2组）和160 μmol/L帕瑞昔布组（P3组）.C组细胞常规培养,P1、P2和P3组细胞分别用终浓度为10 μmol/L、40 μmol/L和160 μmol/L的帕瑞昔布处理A549细胞24 h.MTT法检测各组细胞的增殖情况,划痕试验检测各组细胞的迁移能力,Western blot法检测各组细胞p-AKT、survivin的表达情况.结果 与C组比较,P1、P2和P3组细胞的增殖抑制率依次增高（P＜0.05）,P1、P2和P3组细胞的迁移距离依次降低（P＜0.05）,P1、P2和P3组细胞p-AKT和survivin的表达水平依次降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性.结论 帕瑞昔布可以抑制A549细胞的增殖和迁移,其机制可能是抑制p-AKT和survivin的表达.     

葡萄籽原花青素诱导人肺癌A549细胞凋亡的研究

[目的]研究葡萄籽提取物原花青素对人肺癌细胞株A549凋亡的影响.[方法]以不同浓度的原花青素与 A549细胞体外共同培养,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态学变化;TUNEL法检测细胞凋亡率.[结果]原花青素可体外抑制 A549细胞生长,在2.5~250 μmol/L的浓度范围,细胞增殖抑制率差异极为显著( P <0.01).作用24 h的IC50值达7.40 μmol/L,且呈浓度和时间依赖性;荧光染色可见不同浓度原花青素作用于细胞后,凋亡细胞增加,并可见染色质凝集、细胞核碎裂等细胞凋亡特征性变化.TUNEL法计量结果显示,随着PA作用浓度的增加,凋亡率增高,呈剂量依赖性.实验组细胞凋亡率均高于对照组( P <0.05).[结论]原花青素在体外能通过抑制人肺癌细胞株A549细胞增殖,促进细胞凋亡.     

灯盏花素对肺癌A549细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的灯盏花素对肺癌A549细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用MTT法研究不同浓度(0 mM、1 mM、3. 125 mM、6. 25 mM、12. 5 mM、25 mM、50 mM、100 mM)灯盏花素对肺癌A549细胞的生长抑制作用并计算半数抑制浓度(IC50)值;用半数抑制浓度的灯盏花素处理肺癌A549细胞12 h、24 h、48 h后,通过Annexin V-FITC形态学染色法和流式细胞术分析细胞死亡类型和细胞周期变化; Western blot方法检测细胞内p-53/p53、p21、cyclin B1、p-cdc2/cdc2、Bcl-2/Bad和cleaved-caspase-3蛋白表达变化。结果 MTT检测发现灯盏花素处理后的A549细胞生长受到显著抑制(IC50为25. 03 mM),且表现出明显的剂量依赖性(P 0. 05);形态学染色和流式细胞术表明灯盏花素能够诱导肺癌A549细胞时间依赖性凋亡(P 0. 05),并发生G2/M细胞周期阻滞; Western blot结果显示与细胞周期相关蛋白p-p53、p21、p-pcdc2随着灯盏花素作用时间的增加,表达量显著提高(P 0. 05),而cyclin B1的表达明显受到抑制(P0. 05);凋亡相关蛋白分析发现:促凋亡蛋白Bad和cleaved-caspase-3的表达显著增加,抑凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低(P 0. 05)。结论灯盏花素能够使肺癌A549细胞发生G2/M期阻滞,上调细胞周期相关蛋白表达,改变细胞周期,抑制细胞增殖;同时通过调控Bcl-2和caspase家族蛋白诱导并执行肺癌A549细胞凋亡。     

Id3-EGFP融合基因表达载体的构建及其在人肺癌细胞A549中的表达

目的构建人分化抑制因子3（Id3）与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的融合基因表达载体pEGFP／Id3，使Id3-EGFP融合蛋白在人肺癌细胞A549中得到表达。方法扩增并克隆人Id3 cDNA，构建Id3和EGFP的融合基因表达载体pEGFP／Id3。用脂质体转染技术将pEGFP／Id3导入A549细胞，使Id3-EGFP融合蛋白在A549细胞得到表达。结果经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实，Id3基因已正确插入pEGFP-N1中EGFP基因的上游，获得融合基因表达载体pEGFP／Id3。利用脂质体转染技术将pEGFP和pEGFP／Id3转入A549细胞，24h后，在激光共聚焦荧光显微镜下可观察到表达EGFP的细胞发出绿色荧光，流式细胞术分析表明，转染48h时EGFP阳性表达细胞率最高，分别可达65．40％和60．50％。pEGFP／Id3转染的A549细胞S期细胞和G2期细胞比例均明显高于pEGFP转染细胞组和未转染细胞组，表明Id3基因的导入可诱导细胞从G1期向G2期发展，从而促进细胞增殖。结论真核表达载体pEGFP／Id3的成功构建及其在A549细胞中的表达，为研究Id3的细胞定位表达及Id3在细胞生长调控中的作用奠定了实验基础。     

狼毒水提液对人A549肺癌细胞凋亡的影响

<正>中药狼毒大戟为大戟科植物狼毒大戟的根,早在几千年以前就有记载,具有散结、逐水、止痛、杀虫的疗效。长期临床研究发现狼毒具有较好的抗肿瘤作用,且能够抑制多种肿瘤细胞的增殖。本实验旨在探讨狼毒大戟诱导体外培养的人A549细胞凋亡的作用,以期为临床治疗非小细胞肺癌提供科学依据。     

低氧对人肺腺癌A549细胞生长的影响

目的：研究低氧对体外培养的人肺腺癌细胞株A549生长、细胞周期和凋亡的影响。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞技术观察低氧不同时间对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期和凋亡的影响。采用免疫细胞化学方法检测bcl—2和caspase-3表达。采用半定量RT—PCR法分析低氧对细胞内缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA的影响。结果：MTr结果显示低氧12、24、48h后，A549细胞生长受到抑制。流式细胞技术检测显示低氧12、24、48h后，G1／G0期的A549细胞增多，相应的S期细胞减少，同时A549细胞凋亡明显增多。免疫细胞化学结果显示随着低氧时间的延长，bcl-2表达减少，而easpase-3表达增加。RT—PCR检测HIF-1α mRNA的结果显示12、24、48h低氧组HIF-1α mRNA水平均较相应的常氧组增加（P〈0．05）。结论：低氧环境可抑制A549细胞增殖，使细胞周期阻滞于G。／G0期，并促进细胞凋亡，其作用可能是由于低氧环境影响HIF—1α mRNA水平及通过调节bcl—2和caspase-3的表达诱导细胞凋亡而实现。     

肺癌A549细胞P物质和NK-1表达及SR140333对其影响

目的探讨P物质及其受体神经激肽1（NK-1）在体外培养的肺癌细胞系A549中的表达及免疫细胞化学定位,并进一步研究NK-1受体拮抗剂SR140333对A549细胞的影响。方法用放入盖玻片的6孔板进行A549肺癌细胞系的培养,第3天将盖玻片取出进行免疫细胞化学染色;另取培养3 d后的细胞加入SR140333,48 h后应用免疫细胞化学染色方法检测P物质和NK-1的表达。结果 A549细胞系中P物质和NK-1呈阳性表达,P物质阳性表达主要位于胞浆,而NK-1阳性表达主要位于胞膜和胞浆。加入SR140333的A549细胞P物质和NK-1阳性表达明显低于仅加入培养液的细胞,差异有显著性（t=11.54、14.58,P〈0.05）。结论 P物质和NK-1可能通过神经内分泌机制参与肺癌的发病过程,SR140333可抑制A549细胞P物质及NK-1的阳性表达。     

苦参碱对肺腺癌A549细胞CC10 mRNA表达的影响

目的:观察苦参碱对肺腺癌A549细胞生长、凋亡及其对CC10mRNA表达的影响。方法:肺腺癌A549细胞进行培养传代,按苦参碱药物作用浓度由低向高分为A、B、C、D、E组及对照组,培养72h后,MTT实验检测苦参碱对肺癌细胞生长抑制作用;Hoechst33258染色法观察苦参碱对A549细胞凋亡形态的影响,AnnexinV-PI双标法检测苦参碱对A549细胞凋亡率的影响,RT-PCR检测CC10mRNA的表达。结果:不同浓度的苦参碱均具有抑制肺癌A549细胞生长及诱导凋亡作用,A、B、C、D、E组及对照组A549细胞的生长抑制率及凋亡率分别为24.7%、5.12%,33.1%、8.36%,44.3%、10.81%,61.7%、17.10%,74.2%、25.67%及6.2%、3.06%,各组差异具有显著性(P<0.05)。各实验组CC10mRNA阳性表达率分别为1.03±0.07、0.87±0.03、0.74±0.04、0.62±0.06、0.49±0.04。结论:苦参碱抑制肺腺癌A549细胞生长及诱导细胞凋亡的作用可能与其促进CC10mRNA表达上调有关。     

shRNA沉默CD151表达对肺癌细胞A549增殖和迁移的影响

目的:检测CD151 shRNA对人肺癌细胞株A549增殖和迁移的影响.方法:构建CD151基因shRNA表达载体,转染人肺癌细胞株A549,逆转录PCR(RT-PCR)检测CD151 mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,划痕试验检测细胞迁移能力,RT-PCR检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA表达.结果:转染CD151基因shRNA表达栽体后,CD151 mRNA表达显著降低,A549细胞增殖和迁移能力明显下降,与对照相比均有统计学意义(P<0.05),同时伴有MMP-9mRNA表达水平降低.结论:CD151基因沉默可以显著抑制肺癌细胞的增殖和迁移能力,MMP-9基因表达下降可能参与这一过程.     

miRNA-146a真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞恶性增殖的影响

目的 构建miRNA-146a真核表达质粒,探讨其在宫颈癌HeLa细胞株中的表达及对HeLa细胞恶性表型的影响.方法 人工合成miRNA-146a基因序列,将miRNA-146a基因克隆到的真核表达载体pGeneSil-1中,构建成重组质粒pGeneSil-miR-146a.将miRNA-146a重组表达载体瞬时转染宫...     

RNA干扰抑制PIN1对肺癌A-549细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究应用RNA干扰技术在肺癌A549细胞沉默PIN1基因的表达对细胞增殖和细胞周期的影响.方法:构建靶向PIN1基因的shRNA真核表达载体,以脂质体转染A549细胞,G418抗生素筛选稳定沉默PIN1基因的细胞株,Real-time PCR和Western blot验证PIN1基因在mRNA和蛋白水平的抑制效率.PI染色流式细胞仪检测细胞增殖状况和细胞周期分布,分析PIN1下调对A549细胞增殖能力的影响.结果:成功构建了PIN1 shRNA真核表达载体,其表达量较阴性对照载体转染组最高下降了89.3%,蛋白表达显著抑制.流式细胞仪分析表明,PIN1抑制导致细胞出现G1期阻滞,增殖指数显著降低.结论:shRNA真核表达载体稳定转染A549能够有效沉默PIN1基因的表达,进而抑制肺癌细胞的增殖,影响细胞周期,改善肿瘤恶性表征.     

紫草素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的研究紫草素对人非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法利用四甲基偶氮唑盐(MTT比色法研究不同剂量紫草素(0μm、5μm、10μm、20μm)对肺癌A549细胞的增殖作用;通过膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)染色法进行细胞形态学分析;采用流式细胞术进行细胞凋亡分析; Western blot方法检测细胞色素C、Bcl-2/Bax、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved Caspase-9)及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达变化;构建人非小细胞肺癌A549细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分析不同剂量的紫草素的抑瘤作用。结果 MTT检测发现0μm、5μm、10μm、20μm紫草素处理后的A549细胞生长受到显著抑制,且表现出明显的剂量依赖性[(96. 25±3. 18)%、(87. 62±3. 21)%、(73. 57±2. 89)%和(59. 58±1. 87)%](P 0. 05);形态学染色和流式细胞术表明紫草素能够诱导肺癌A549细胞发生剂量依赖性凋亡[(1. 25±0. 78)%、(12. 37±3. 23)%、(22. 89±2. 23)%和(37. 62±5. 23)%](P 0. 05); Westernblot结果显示紫草素能够促进细胞色素C的释放,抑制Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved-caspase-9及cleaved-caspase-3蛋白表达量(P 0. 01);荷瘤鼠模型显示随着剂量的增加,移植瘤的质量明显降低(P 0. 05),抑瘤率显著增高(P 0. 05)。结论紫草素能够呈剂量依赖性促进人非小细胞肺癌A549细胞色素C的释放,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调Bax、cleaved-caspase-9及cleaved-caspase-3蛋白表达量,激活细胞线粒体凋亡途径,诱导细胞凋亡,抑制肺癌A549细胞增殖。     

活性氧在荆花牡荆素诱导人肺癌A549细胞凋亡中的作用

目的 探讨紫花牡荆素(CAS)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制.方法 体外培养A549细胞.MTT法测定CAS对A549细胞增殖的抑制;Annexin V/PI双染色分析细胞凋亡率;H2DCFH-DA探针流式细胞术分析活性氧(ROS)生成.结果 CAS能抑制人肺癌A549细胞增殖,呈浓度依赖性.Annexin V/PI法检测结果显示10 μmol/L的CAS作用A549细胞12 h、24 h、48 h后,其凋亡率分别为22.39%、38.66%、64.82%.H2DCFH-DA探针流式细胞术分析表明,完全培养基组、溶媒(0.1% DMSO)组对A459细胞作用0 h;CAS(10 μmol/L)对A549细胞作用3 h、6 h、12 h;N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,10 mmol/L)+CAS(10 μmol/L)组对A549细胞作用6 h的ROS生成水平分别为8.47、15.26、66.2、74.1、82.2、67.3,随着CAS作用时间延长,细胞内ROS水平增加.NAC对细胞凋亡有抑制作用.结论 CAS可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与提高细胞内ROS产生增加有关.     

短发夹RNA靶向抑制环氧化酶-2基因表达对肺癌细胞A549增殖的影响

目的评价短发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA）靶向肺癌细胞A549环氧化酶-2（COX-2）基因表达的抑制作用，并观察对肺癌细胞A。生长和细胞周期的影响。方法将抑制COX-2基因的shRNADNA模板插入到真核表达载体pGenesil-1的U6启动子下游，构建靶向抑制COX-2基因的重组表达载体pshRNA-COX-2。将试验分为3组：未转染肺癌细胞A549组、阴性对照HK组和pshRNA-COX-2转染组。用脂质体Lipofectamine^TM 2000转染肺癌细胞A549逆转录（RT）-PCR和免疫印迹法（Wb）分别检测COX-2基因mRNA和蛋白表达情况，流式细胞术检测细胞周期，细胞计数检测细胞生长变化。结果与阴性对照组相比，pshRNA-COX-2重组表达载体抑制COX-2mRNA及蛋白表达的抑制率分别为72．2％和48．6％；G0-G1期细胞由63．7％上升为71．0％，S期细胞由26．5％下降为20．0％；细胞生长明显减慢。结论pshRNA-COX-2重组表达载体能显著抑制肺癌细胞COX-2表达，引起G0-G1期细胞增多，S期细胞减少，从而抑制肺癌细胞生长。     

肺鳞癌患者血清miRNA-181a的表达及其对肺癌细胞功能的影响

【目的】探讨肺鳞癌患者血清中microRNA-181a（miR-181a）水平的变化及其对人肺鳞癌细胞生物学功能的影响。【方法】选择56例肺鳞癌患者和50名健康成人,采用stem-[oop定量PCR的方法检测其血清中miR-181a的表达变化;体外实验采用CCK8和Transwell小室实验检测miR-181a对人肺鳞癌细胞株NCI-H226增殖、侵袭和迁移能力的影响。【结果】miR-181a在肺鳞癌患者血清中表达较健康成人显著降低（P〈0．05）;miR181a可明显抑制肺鳞癌细胞NCI—H226的增殖、侵袭和迁移。【结论】在肺鳞癌患者miR-181a是一种保护性的微小RNA,具有较好的诊断和治疗前景。     

shRNA沉默EZH2表达对人肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨shRNA沉默EZH2表达对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法利用RT-PCR方法检测EZH2在人肺癌细胞株中的表达,特异性shRNA沉默EZH2表达后分析NCI-A549细胞增殖和侵袭能力的变化。结果检测14株非小细胞肺癌细胞中EZH2的mRNA表达,80%的细胞株EZH2较正常肺组织高表达;shRNA阻断EZH2表达可显著降低人肺癌A549细胞的增殖和侵袭能力(P<0.05)。结论 EZH2基因沉默能有效抑制人肺癌细胞的增殖和侵袭能力,为深入研究EZH2在非小细胞肺癌中作用提供了研究基础。     

5-Aza-2＇-deoxycytidine对肺癌A549细胞WWOX基因甲基化状态及其生物学行为的影响

【目的】探讨5-Aza-2＇-deoxycytidine（5-Aza-CdR）对肺癌 A549细胞 WWOX基因甲基化状态及其生物学行为的影响。【方法】将培养肺癌 A549细胞分为两组,一组加入5-Aza-CdR培养（观察组）,一组未处理（对照组）,采用甲基化特异性聚合酶连反应（MSP）检测两组 WWOX 基因甲基化状况;Western blot 法检测细胞WWOX蛋白的表达;MTT比色法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测 A549细胞凋亡;然后将 A549细胞皮下注射到小鼠腋下,比较两组体内成瘤率及大小。【结果】对照组细胞出现完全甲基化,而观察组 A549细胞未出现甲基化;与对照组相比,观察组A549细胞WWOX蛋白表达、凋亡率明显上升,细胞增殖的A值显著降低,其差异均有统计学意义（P＜0．05）;观察组成瘤率及肿瘤的大小均低于对照组（P＜0．05）。【结论】5-Aza-CdR做为一种常用的甲基化抑制剂,抑制 WWOX基因启动子的甲基化,上调 WWOX基因的表达,抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡,从而抑制体内成瘤能力。     

高能X射线对肺腺癌A549细胞ERCC1表达的影响

目的检测高能X射线对肺腺癌A549细胞与顺铂耐药相关的基因——切除修复交叉互补基因1（ERCC1）表达的影响。方法对A549细胞进行X射线照射,总剂量10 Gy/（5 d.5f）。利用RT-PCR检测照射前及照射开始后第1~4周细胞的ERCC1基因的表达;免疫组织化学SABC法检测照射前后细胞ERCC1蛋白的表达。结果照射后第1~3周A549细胞ERCC1 mRNA及蛋白的表达水平比照射前显著升高,差异有显著性（F=152.00、26.63,q=6.03~28.31,P〈0.01）。结论肺腺癌A549细胞照射后可能出现顺铂耐药。