问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg2+-ATPase,Ca2+-ATPase抑制作用的动力学研究

问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg²⁺-ATPase,Ca²⁺-ATPase有显著的抑制作用,对Mg²⁺-ATPase的抑制机制分别为竞争性抑制(Mg²⁺,Ki=4.93×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=1.06×10^-4mol/L),对Ca²⁺-ATPase的抑制机制分别为混合型抑制(Ca²⁺,Ki=5.07×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=3.27×10-4mol/L)。     

Na~＋/Ca~（2＋）交换体α-2（807-844）抗体的制备及其对大鼠心肌细胞Na~＋/Ca~（2＋）交换电流的抑制作用

目的在制备和纯化抗心肌Na＋/Ca2＋交换体α-2（807-844）肽段抗体的基础上,观察抗体对大鼠心肌细胞Na＋/Ca2＋交换电流及L型钙电流（ICa）、瞬时外向钾电流（Ito）和内向整流钾电流（Ik1）的影响。方法利用人工合成的α-2（807-844）多肽免疫兔制备抗α-2（807-844）抗体,抗血清经Protein A亲和柱纯化,利用全细胞膜片钳技术观察纯化后抗体对心肌细胞Na＋/Ca2＋交换电流（INa/Ca）、L型钙电流（ICa）、瞬时外向钾电流（Ito）和内向整流钾电流（Ik1）的影响。结果经主动免疫,抗Na＋/Ca2＋交换体α-2（840-877）抗血清效价达1∶243 000,纯化后抗α-2（840-877）抗体浓度为7.21mg/mL。纯化后的抗体在SDS-PAGE时出现清晰的2条带,其分子量分别为25kD和50kD左右。在1nmol/L～104nmol/L浓度范围内,抗α-2抗体对成年大鼠心肌细胞外向和内向Na＋/Ca2＋交换电流均表现为剂量依赖性的抑制作用;对Ito和Ik1则均未见明显影响。此外,104nmol/L该抗体对L型钙电流亦具有抑制作用。通过氨基酸序列比对发现,α-2（807-844）肽段与L型钙通道第2结构域孔环（697～730位氨基酸）序列相似度为23.7%,可能是抗体对L型钙通道出现交叉反应的原因。结论在1nmol/L～103nmol/L浓度范围内,抗心肌Na＋/Ca2＋交换体α-2（807-844）抗体可特异性抑制大鼠心肌Na＋/Ca2＋交换活动;对L型钙通道电流、瞬时外向钾通道电流和内向整流钾通道电流均未见明显影响。     

针刺对D-gal致衰老大鼠模型脑组织NO、NOS及Ca~（2＋）-Mg~（2＋）-ATP酶活性的影响

目的：探讨针刺抗脑老化的作用机制。方法：将常用的抗衰老穴位分为督穴组和体穴组,观察不同组穴对衰老大鼠模型脑组织NO、NOS含量及Ca2＋-Mg2＋-ATP酶活性的影响。结果：D-gal致大鼠衰老后,脑组织中NO、NOS的含量明显升高,督穴组、体穴组均有延缓其含量升高的作用,且督穴组较体穴组作用强（P〈0.05）,具有显著性差异。而脑细胞膜Ca2＋-Mg2＋-ATPase活性明显降低,各针刺组均有延缓其活性降低的作用,督穴组、体穴组之间比较,督穴组脑细胞膜Ca2＋-Mg2＋-ATPase活性明显高于体穴组,有显著性差异（P〈0.05）。结论：针刺可以通过提高Ca2＋-Mg2＋-ATPase活性,稳定NOS浓度,从而平衡NO含量,充分发挥NO生理机能,而发挥抗脑衰老的作用,同时督穴组抗脑老化作用更为理想。     

马钱子总碱囊泡凝胶对AA大鼠的治疗作用

目的:观察马钱子总碱囊泡凝胶对佐剂性关节炎(AA)大鼠的治疗作用及其机制。方法:SD大鼠随机分为9组:正常组、AA模型组、马钱子总碱囊泡凝胶高、中、低剂量(25,12.5,6.25 mg·kg-1)组、马钱子总碱药物凝胶高、中、低剂量(25,12.5,6.25 mg·kg-1)组和扶他林对照组(双氯芬酸二乙胺乳胶剂,50 mg·kg-1)。除正常组外,其余各组均以弗氏完全佐剂(FCA)每鼠左后足跖皮内注射0.1 mL致炎,各给药组在大鼠足趾部分均匀涂抹药物并用油纸包裹。足容积法测量继发侧足肿胀度,进行疼痛评分和多发性关节炎评分,HE染色观察关节病理损伤,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素(PGE2)、白细胞介素6(IL-6)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达。结果:与模型组相比,囊泡凝胶和药物凝胶可明显减轻AA大鼠的继发侧足爪肿胀度(17～21 d)。马钱子总碱囊泡凝胶和药物凝胶可有效抑制大鼠多发性关节炎指数,减轻关节病理学损伤,马钱子总碱囊泡凝胶还可降低滑膜组织匀浆上清液IL-1,TNF-α,PGE2,IL-6水平和提高VEGF水平。结论:马钱子总碱囊泡凝胶可拮抗大鼠AA发展,其作用机制与抑制炎症介质的生成密切相关。     

Ca~（2＋）信号通路对肝癌细胞乙酰肝素酶表达的影响

目的探讨Ca2＋信号调节通路对肝癌细胞乙酰肝素酶的表达及分泌的影响。方法不同浓度的Ca2＋及其激动剂毒胡萝卜内酯（TG）和抑制剂S-亚硝基-乙酰青霉胺（SNAP）作用于SMMC-7721细胞,RT-PCR检测肝癌细胞乙酰肝素酶mRNA表达的变化;W estern-b lot检测肝癌细胞及其培养上清乙酰肝素酶蛋白表达的变化。结果 Ca2＋对肝癌细胞乙酰肝素酶mRNA的表达没有影响,随Ca2＋浓度的增加,细胞培养上清和肝癌细胞胞浆乙酰肝素酶蛋白表达增加;Ca2＋激动剂TG能诱导肝癌细胞内及培养上清中HPA蛋白表达,这种诱导作用能被TG抑制剂SNAP抑制。结论 Ca2＋通过细胞内NO→cGMP调控的Ca2＋信号通路促进肝癌细胞内乙酰肝素酶蛋白表达和分泌。     

赤芍对高脂兔血小板胞浆游离钙、红细胞膜Ca~（2＋）－Mg~（2＋）－ATP酶活性的影响

本研究观察了赤芍对高脂兔血小板胞浆游离钙（［Ｃａ２＋］ｉ）、红细胞膜钙－镁－ＡＴＰ酶（Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ）活性血清钙及血脂的影响。结果表明：血小板［Ｃａ２＋］ｉ含量赤芍组（２７６．２５±２７．００ｎｍｏｌ／Ｌ）显著低于高脂组（３９０．８８±７０．００ｎｍｏｌ／Ｌ），Ｐ＜０．０１；红细胞膜Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ基础及激活活性（μｍｏｌ·ｐｉ－１·ｍｇ－１·ｈ－１）赤芍组（０．７９±０．０５，１．３４±０．１０）明显高于高脂组（０．６５±０．０９，１．０４±０．１３），Ｐ＜０．０１。说明赤芍可提高高脂血症兔红细胞Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶基础及激活活性。     

调和饮对绝经前乳腺癌PR（＋）ER（＋）HER-2（-）子宫内膜的影响

目的：探讨中药自拟方调和饮对绝经前经手术放化疗后口服内分泌药物三苯氧胺的乳腺癌患者子宫内膜的影响,为临床提供资料。方法：选取2011年1月～2011年12月期间,黑龙江中医药大学附属二院肿瘤科符合纳入及排除标准的乳腺癌患者60例。选取住院天数、中医临床症状、辅助检查结果等相对完整的患者随机分为对照组（只口服他莫昔芬）,治疗组（口服他莫昔芬同时口服调和饮）各30例,并就收集的资料进行统计分析。结果：①治疗组治疗前子宫内膜厚度为（4.13±1.55）,治疗后子宫内膜为（5.83±2.32）,与治疗前相比有显著性差异（P〈0.01）。②治疗后两组子宫内膜的比较治疗组为（5.83±2.32）,对照组为（8.70±2.87）,经统计学分析有显著性差异（P〈0.01）。结论：调和饮对于绝经前手术放化疗后乳腺癌口服他莫昔芬所致子宫内膜的变化经统计学分析有明显改善作用。     

针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca~（2＋）]_i的影响

[目的]研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca2＋浓度[Ca2＋]i及醒脑开窍针刺对其影响,探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。[方法]建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血（MCAO）模型,采用醒脑开窍针刺法治疗,采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CA1区锥体细胞[Ca2＋]i在不同时间点的变化。[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca2＋]i（以细胞内Ca2＋相对荧光强度表示）在局灶性脑缺血1 h时升高,持续升高至缺血24 h时（P〈0.05）。假手术组与正常组相比[,Ca2＋]i变化差异无统计学意义（P〉0.05）。相应时间点非穴位针刺组与模型组[Ca2＋]i比较,无统计学意义（P〉0.05）。在相应时间点,醒脑开窍针刺组[Ca2＋]i低于模型组（P〈0.01）。[结论]急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[Ca2＋]i随缺血时间的延长而持续升高,提示细胞内钙超载;醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的[Ca2＋]i,提示在缺血后针刺治疗效果越早越好,为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。     

增龄对血瘀证及血浆血栓素B_2和6－酮－前列腺素F_（1α）水平的影响

对１３４例２０岁以上健康人进行了血瘀证的调查，发现４５．５２％的健康人群表现血瘀征候，随着增龄血瘀征候检出率呈递增变化。采用放射免疫分析法检测血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、６－酮－前列腺素Ｆ１ａ（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α）及Ｔ／Ｋ比值。结果显示：中年及老年组ＴＸＢ２水平均明显高于青年人（Ｐ均＜０．０１）。而６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１αｖ水平各年龄组变化不大，Ｔ／Ｋ比值老年人显著高于青年人（Ｐ＜０．０１）。表明随着年龄增长，血液逐渐呈现高凝倾向，并与上述指标相关。这对防治心脑血管疾病，防治中医血瘀证具有重要的理论意义和实际意义。     

电针12h对颅脑损伤大鼠脑组织[Ca（2＋）]i和NE含量影响的实验研究

目的：对电针12h对颅脑损伤大鼠脑组织[Ca2＋]i和NE含量的影响进行实验研究。方法：采用激光共聚焦显微镜的动态扫描功能和荧光分子探针技术,从针灸血清学和细胞学角度,对针刺通过颅脑损伤大鼠血清影响SY5Y细胞[Ca2＋]i进行研究;采用高效液相色谱法研究电针对颅脑损伤大鼠脑组织NE含量的影响。结果：各组血清孕育12h后SY5Y细胞[Ca2＋]i相比较显示,模型对照组的荧光强度明显高于空白对照组（P﹤0.01）,针刺治疗组的荧光强度明显低于模型对照组（P﹤0.05）;各组大鼠脑组织NE含量相比较,模型对照组显著高于空白对照组（P﹤0.01）,针刺治疗组明显低于模型对照组（P﹤0.05）。结论：电针12h可减慢颅脑损伤大鼠脑组织[Ca2＋]i和NE含量的上升趋势,提示电针可能是通过抑制脑皮质内大量NE聚集,降低皮质神经元的兴奋性,从而抑制细胞内Ca2＋滞留和超载,减轻脑水肿,对脑组织起到保护作用。     

参芪通络注射液对缺血再灌注损伤大鼠脑组织Na~+K~+Ca~(2+)Mg~(2+)及Na~+-K~+-ATP酶的影响

目的:探讨中药参芪通络注射液对缺血再灌注损伤大鼠脑组织Na+、K+、Ca2+、Mg2+及Na+-K+-ATP酶活性的影响。方法:采用4血管法造成缺血再灌注脑损伤动物模型,分别给予不同剂量参芪通络及复方丹参注射液,观察对脑组织Na+、K+、Ca2+、Mg2+及Na+-K+-ATP酶活性的影响。结果:高剂量参芪通络注射液可显著调节脑细胞内外离子分布,提高Na+-K+-ATP酶活性,部分指标与对照药物复方丹参注射液比较存在显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:参芪通络注射液具有显著调节脑细胞离子分布,提高Na+-K+-ATP酶活性作用,此可能系其脑保护作用机制之一。     

不同时辰针刺对缺血性中风患者血浆TXB_2和6－酮－PGF_（1α）含量的影响

本文用择时针刺（辰时、戌时）方法治疗缺血性中风患者，观察其对血浆ＴＸＢ_２和６－酮－ＰＴＦ_（１α）水平的影响，并与正常人组对照。结果表明，缺血性中风患者血浆ＴＸＢ_２水平高于正常人（Ｐ＜０．０１），而６－酮－ＰＧＦ_（１α）水平低于正常人（Ｐ＜０．０５）。辰时针刺后，血浆ＴＸＢ_２水平显著下降（Ｐ＜０．０５），６－酮－ＰＧＦ_（１α）水平略有上升（Ｐ＞０．１）。戌时针刺后，两者变化均不显著。     

电针人中穴对脑梗死大鼠ACE-AngⅡ/ACE2-Ang（1-7）轴相关因子表达的干预效应研究

目的 观察脑梗死大鼠血管紧张素转化酶（ACE）-血管紧张素（Ang）Ⅱ/ACE2-Ang（1-7）轴通路的变化规律以及电针干预效应,从血管舒缩的角度探讨针刺治疗脑梗死的作用机制。方法 将126只大鼠随机分为空白组、模型组、电针组。模型组和电针组按术后1、3、6、9、12、18、24 h,3、7、12 d各分为10个时相组,造模后电针组每日针刺人中穴。各组大鼠进行神经功能缺损,脑梗死面积以及免疫组化的检测。结果 1）针刺后各组大脑中动脉闭塞（MCAO）模型大鼠神经功能缺损评分（NSS）随缺血时间延长逐渐下降,各时相评分均显著高于空白组（P < 0.01）;电针组各时相评分低于模型组,两组在3、7、12 d差异有统计学意义（P < 0.01）。2）绿化三苯四氮唑（TTC）染色结果模型组与空白组比较差异有统计学意义（P < 0.05,P < 0.01）,各时相电针组明显小于同时相模型组（P < 0.05,P < 0.01）。3）免疫组化结果：模型组ACE表达在术后上调至18 h回落,1 h~7 d显著高于空白组（P < 0.01）;电针组除6 h外表达均低于模型组,9、18、24 h有统计学差异（P < 0.05,P < 0.01）。模型组AngII表达在术后上调至24 h回落,在3~9 h和18 h~7 d高于空白组（P < 0.05,P < 0.01）;电针组1 h~3 d均低于模型组,3、6、18 h~3 d差异有统计学意义（P < 0.05,P < 0.01）。模型组血管紧张素受体AT1表达在术后9 h上调至24 h回落,其中3 h、9 h~24 h有统计学差异（P < 0.05,P < 0.01）;电针组自9 h后均低于模型组,12、18、24 h差异有统计学意义（P < 0.05）。电针组ACE2表达在术后3 h上调至18 h后下调,1 h到12 d高于空白组,1、9到3 d有统计学差异（P < 0.05）;电针组24 h~3 d时相与模型组比较差异有统计学意义（P < 0.05）。模型组Ang（1-7）表达自9 h上调至12 h后下调,除1、6 h时相外,均显著高于空白组（P < 0.05,P < 0.01）。电针组从3 h开始上调至24 h后下调,24 h到7 d高于模型组差异有统计学意义（P < 0.01）。模型组血管内皮细胞表达的Ang（1-7）的特异性受体（MAS）表达自12 h上调至3 d后下调,3、6、12 h~12 d时相均高于空白组,12 h~7 d差异有统计学意义（P < 0.05,P < 0.01）;电针组自9 h后表达高于模型组,其中3、24 h,3、7 d差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 电针干预能显著改善MCAO大鼠的神经功能症状,减少脑缺血体积,改善脑血流量,下调ACE、AngII、ATl的表达情况,上调Ang（1-7）、ACE2、MAS的表达情况,改善脑梗死的预后。     

天麻芎苓止眩片对自发性高血压大鼠ACE2/Ang（1-7）/Mas轴的影响

目的?探讨天麻芎苓止眩片（TXZT）对自发性高血压大鼠（SHR）血管紧张素转换酶（ACE）2/血管紧张素（Ang，1-7）/Mas轴的调控作用，探讨其防治高血压病的作用机制。方法?50只SHR大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、TXZT高、中、低剂量组，另取10只WKY大鼠作为正常组，厄贝沙坦组给予厄贝沙坦27 mg/kg灌胃；TXZT高、中、低剂量组分别给予TXZT 2.0 、1.0、0.5 g/kg 灌胃；模型组和正常组分别给予等量蒸馏水灌胃。各组均连续给药4周。测量干预前后大鼠收缩压；ELISA法检测血清中肾素（REN）、醛固酮（ALD）、AngⅡ、ACE2、Ang （1-7）的含量变化；免疫组化法检测主动脉AngⅡ、ACE2蛋白表达；Western Blot法检测主动脉ACE2、Mas蛋白表达；RT-PCR法检测主动脉ACE2、Mas mRNA表达。结果?与正常组比较，模型组各时间收缩压升高，血清REN、ALD、AngⅡ水平、主动脉AngⅡ表达升高，血清ACE2、Ang（1-7）水平、主动脉ACE2、Mas蛋白及mRNA表达降低（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，干预后各组各时间收缩压降低，主动脉ACE2 mRNA表达增加（P<0.05）；厄贝沙坦组大鼠血清REN、ALD、AngⅡ水平、主动脉AngⅡ表达降低，血清ACE2、Ang（1-7）水平升高（P<0.05，P<0.01）；TXZT高剂量组大鼠血清REN、ALD、AngⅡ水平、主动脉AngⅡ表达降低，血清ACE2、Ang（1-7）水平、主动脉ACE2蛋白、Mas mRNA表达升高（P<0.05，P<0.01）；TXZT中剂量组血清ALD、AngⅡ水平、主动脉AngⅡ表达降低，血清ACE2、Ang（1-7）水平、主动脉ACE2、Mas蛋白、Mas mRNA表达升高（P<0.05，P<0.01）；TXZT低剂量组大鼠血清AngⅡ水平降低（P<0.05）。与厄贝沙坦组比较，TXZT高剂量组给药后第2、4周、TXZT中剂量组给药后各时间、TXZT低剂量组给药后第2、3、4周收缩压升高（P<0.05，P<0.01）。结论?TXZT有明显、持续、稳定的降压作用，调节ACE2/Ang（1-7）/Mas受体轴抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）系统活性可能是其降压效应的重要机制之一。