miR-200c在胃癌中的表达水平与患者临床病理特征的关系

目的:探讨miR-200c在胃癌组织中的表达水平与胃癌患者临床病理特征及无病生存期(diease free survial,DFS)的关系.方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年1月64例胃癌手术切除的标本及相关临床资料,采用实时荧光定量PCR技术检测miR-200c在胃癌组织和配对癌旁非癌组织中的表达.回顾性分析miR-200c表达水平与胃癌患者的临床病理特征及DFS相关性.结果:胃癌组织中miR-200c的表达水平显著低于癌旁非癌组织(3.29vs5.91,P＜0.01).miR-200c的表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度、转移和脉管瘤栓呈显著负相关(均P＜0.01).miR-200c高表达组患者中位DFS明显长于低表达组患者(22.0 vs 13.5个月,P＜0.01),其表达水平与患者DFS呈正相关(P＜0.01).结论:miR-200c在胃癌组织中低表达,其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度和脉管瘤栓呈负相关,与DFS呈正相关,在胃癌的发生发展及预后中具有重要作用.     

miRNA-302 c在子宫内膜癌组织中的表达及其与临床病理资料的关系

目的：探讨miRNA-302c在子宫内膜癌组织中的表达及其与临床病理资料之间的关系。方法：收集中国医科大学附属盛京医院2012年-2015年子宫内膜癌患者手术标本49例及对照组正常子宫内膜组织39例,应用实时荧光定量PCR（ Real-time PCR）方法检测子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中miRNA-302c的表达情况,分析miRNA-302c在子宫内膜癌组织中的表达与临床病理资料之间的关系。结果：miRNA-302c在子宫内膜癌组织中的表达水平低于正常子宫内膜组织,其差异具有统计学意义（ P＝0.048,﹤0.05）。miRNA-302c在手术分期为Ⅰ期的子宫内膜癌组织中的表达与其在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的表达进行比较,差异有统计学意义（ P＝0.010,﹤0.05）;miRNA-302c在不同组织学分化程度（高、中、低分化）的子宫内膜癌组织中的表达的差异具有统计学差异（P＝0.035,﹤0.05）;有淋巴结转移与无淋巴结转移的子宫内膜癌组织中, miRNA-302c表达水平差异具有统计学意义（ P＝0.008,﹤0.05）;而miRNA-302c在子宫内膜癌组织中的表达情况与其他临床病理资料之间无明显统计学关系。结论：miRNA-302c在子宫内膜癌组织中的表达低于正常子宫内膜组织,其差异具有统计学意义。另外,在不同手术病理分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期）,不同的组织学分化程度（高、中、低分化）,有、无淋巴结转移的子宫内膜癌组织中,miRNA-302c表达水平具有统计学差异。综上所述,miRNA-302c与子宫内膜癌的发生、手术分期、组织学分化程度,有无淋巴结转移存在一定的相关性。     

胃癌中DNA甲基化对miR-200c 141表达影响的研究

  目的  探讨胃癌组织中miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141表达水平和临床病理特征的相关性。  方法  运用实时定量PCR（qRT-PCR）和BS-MSP方法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-200c/141CpG岛的表达与其基因甲基化水平。统计学分析miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141水平和临床病理特征的关系。  结果  miR-200c/141CpG岛的甲基化水平在胃癌组织中显著升高,miR-200c和miR-141的水平显著降低,miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c和miR-141的水平呈负相关。  结论  胃癌组织中升高的miR-200c/141CpG岛的甲基化水平诱导miR-200c和miR-141表达降低。      

miRNA-200c在结直肠癌发展中作用机制的研究进展

结直肠癌(CRC)是中国第四大致死性疾病,其病因病机复杂.手术、化疗和放疗是目前CRC的主要治疗方法,尽管近年来开发了新的治疗和早期筛查方法,但CRC患者的预后并未得到明显改善.因此,找到合适的生物标志物用于及时发现和治疗CRC是非常有必要的.近年来研究发现微小RNA(miRNA)家族在恶性肿瘤的发生发展中具有重要作用,其中miRNA-200c可以通过靶向调控多种基因调节CRC的发展.本文主要介绍miR-NA-200c的生物学作用,并对miRNA-200c在CRC中作用机制的研究进展进行综述.     

胃癌组织TGF-β对miR-200c/141表达影响的研究

目的 TGF-β能够诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化,促进肿瘤发生侵袭转移.miR-200c/141能够抑制上皮间质转化的发生.但TGF-β在胃癌中的表达情况及其对miR-200c/141表达影响尚不清楚.本研究旨在探讨胃癌组织中TGF-β表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系,及对miR-200c和miR-141表达影响.方法 收集河北医科大学第四医院普外科2012-05-01-2013-01-01胃癌根治性手术切除标本64例,采用qRT-PCR技术检测TGF-β、miR-200c及miR-141在胃癌组织和配对癌旁非癌组织中的表达.分析TGF-β表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系及与miR-200c和miR-141水平的相关性.TGF-β处理胃癌细胞株SGC-7901,观察其对miR-200c和miR-141表达的影响.结果 TGF-β在胃癌组织中的表达上调率为66.67%,其在胃癌组织中的表达显著高于癌旁非癌组织[Median,Interquartile Range(2.50,2.43:0.84,0.42);P=0.005].miR-200a、miR-200b、miR-429、miR-200c和miR-141在胃癌组织中的表达下调率分别为53.13%、48.44%、50.00%、78.13%和76.19.miR-200c和miR-141在胃癌组织中的表达显著低于癌旁非癌组织,均P<0.001.miR-200c和miR-141的表达存在正相关关系,r=0.840,P<0.001.TGF-β表达水平与miR-200c和miR-141的表达水平呈显著负相关关系,均P<0.001.TGF-β能够诱导胃癌细胞株SGC-7901中miR-200c和miR-141表达显著降低.TGF-β的表达水平与淋巴结转移情况及脉管瘤栓情况存在显著相关性,与患者性别、年龄、组织学分级、TNM分期、肿瘤侵袭深度和肿瘤远处转移情况无相关性,均P>0.05.     

miRNA-29c在鼻咽癌患者中的表达水平及其临床意义

目的：探讨 miRNA -29c 在鼻咽癌患者血清中的表达及其临床意义。方法：选取50例鼻咽癌患者及50例健康对照组,检测血清中 miRNA -29c 的表达量并分析其与临床病理资料及复发转移的相关性。结果：与健康人对比,鼻咽癌患者血清中 miRNA -29c 的表达量更低（P <0.05）。淋巴结转移的病例表达量明显降低,IV 期病例较 II - III 期病例表达量降低,EB 病毒阳性患者较阴性表达量降低（P <0.05）。与高分化鳞癌相比,低分化和中分化鳞癌组织中 miRNA -29c 的表达水平均明显下降（P <0.05）。2年内复发转移患者的miRNA -29c 表达量更低（P <0.05）。结论：miRNA -29c 低表达可能与鼻咽癌的发生、发展、侵袭转移相关。     

宫颈癌组织中miRNA-34c 的表达水平分析及其靶基因PLK4 的鉴定

目的：分析miRNA-34c 在宫颈癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法：利用荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测甘肃省妇幼保健医院34例宫颈癌和癌旁正常组织中miRNA-34c 表达水平。利用miRNA 靶基因预测数据库预测miRNA-34c 新的靶基因Polo 样激酶4（PLK 4）。 将含有PLK 4 的3‘UTR 片段荧光素酶载体分别与miRNA-34c 模拟物或阴性对照共转染HEK 293T 细胞,并检测其荧光素酶活性。在人宫颈癌细胞SiHa 细胞中分别转染miRNA-34c 模拟物或阴性对照,利用qRT-PCR法和Westernblot法分别检测靶基因的mRNA 和蛋白质的表达水平。结果：与癌旁正常组织相比,miRNA-34c 在宫颈癌组织中表达下调。在HEK 293T 细胞中,miRNA-34c 模拟物显著抑制荧光素酶的活性（P < 0.01）。 miRNA-34c 模拟物显著下调SiHa 细胞中PLK 4 的mRNA 和蛋白质的表达（P < 0.01）。 结论：miRNA-34c 在人宫颈癌组织中表达下调,且能与PLK 4 的3’UTR 结合并下调其mRNA 和蛋白质的表达。     

miRNA-145在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨miRNA-145在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征、预后之间的关系。方法:应用实时定量RT-PCR（qRT-PCR）检测miRNA-145在63例胃癌组织和40例对照组织中的表达,并将miRNA-145的含量分为高表达组和低表达组,分析其与胃癌临床病理特征、预后的关系。结果:miRNA-145在胃癌组织中的表达低于对照组,具有显著性差异（P<0.000 1）。miRNA-145的表达与患者的性别、年龄以及肿瘤的大小无关（P>0.05)。与分化程度、TNM分期、远处转移及术后3年生存率有关（P<0.05）。结论:miRNA-145的表达与胃癌的发生、发展及预后有关,miRNA-145有望成为胃癌新的肿瘤标志物之一。     

miRNA-340和cyclin D1在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨胃癌组织中miRNA-340（miR-340）和cyclin D1的表达水平,并分析二者与胃癌患者临床病理参数的关系。方法:选取2019年12月至2020年06月期间我院病理科胃癌手术切除组织及对应癌旁正常胃黏膜组织(距离肿瘤边缘≥5 cm)共60例。采用qRT-PCR检测组织中miR-340的表达水平,采用免疫组化染色检测cyclin D1蛋白表达水平,并分析二者与胃癌患者临床病理参数的关系。结果:胃癌组织中miR-340的表达水平（2.38±0.51）明显低于癌旁正常黏膜组织（2.70±0.54）,差异具有统计学意义（P＜0.05）;胃癌组织中cyclin D1蛋白的表达水平（48.33％）明显高于癌旁正常黏膜组织（16.67％）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。胃癌组织中miR-340表达与cyclin D1蛋白表达呈负相关（r=-0.367,P＜0.05）。胃癌组织中miR-340的表达与肿瘤直径、肿瘤的分化程度、浸润深度、临床分期有关（P＜0.05）,cyclin D1蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、临床分期、神经侵犯及淋巴结转移有关（P＜0.05）。结论:胃癌组织中miR-340和cyclin D1蛋白表达异常,且与不良预后相关,二者联合有望成为胃癌诊疗的潜在生物标志物。     

血清miRNA-200b在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 探究血清miRNA-200b在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达水平.方法 选择45例NSCLC患者为观察组,同时选取30例经诊断无肿瘤疾病的健康对照组.qRT-PCR检测各组血清miRNA-200b的表达水平.结果 观察组患者miRNA-200b血清表达水平明显高于对照组(P＜0.0001).观察组患者血清miRNA-200b水平随着临床分期的升高而显著上升(P＜0.05);另外,NSCLC患者中肺鳞癌患者血清miRNA-200b表达显著高于腺癌(P＜0.0001).此外,ROC分析miRNA-200b诊断NSCLC最佳cutoff值为0.276(敏感性46.7％,特异性93.3％,AUC值0.779).结论 NSCLC患者血清miRNA-200b水平显著升高,在NSCLC患者的疾病发展过程中起到重要的作用,可作为无创早期诊断NSCLC的指标之一.     

miRNA-200c对非小细胞肺癌A549细胞甲氨蝶呤耐药性的影响

目的 探讨miRNA-200c（miR-200c）在非小细胞肺癌A549细胞耐甲氨蝶呤（MTX）（A549/MTX）中的影响及可能的作用机制。方法 通过实时荧光定量（qRT-PCR）法检测人肺癌亲本细胞株A549细胞、转染miR-200c模拟物（mimic）的A549/MTX细胞（A549/MTX-M）及转染miR- 阴性对照（NC）A549/MTX细胞（A549/MTX-N）中miR-200c的表达水平。分别采用MTT法、锥虫兰染色及流式细胞术检测三组细胞对MTX的药物敏感度、细胞增殖能力及细胞凋亡变化,并采用qRT-PCR检测其P53和P21基因表达的变化。结果 miR-200c在A549细胞中的表达水平显著高于A549/MTX-N细胞;A549/MTX-M细胞miR-200c水平高于A549/MTX-N细胞;用不同浓度MTX刺激细胞,与A549/MTX-N细胞比较,A549/MTX-M细胞的增殖能力减弱、凋亡细胞增多,并呈剂量依赖性,差异均有统计学意义。转染miR-200c mimic后,P53和P21基因表达水平上升,与转染miR-NC细胞比较,差异有统计学意义。结论 miR-200c能够逆转A549/MTX细胞对MTX的耐药性,其作用机制可能是通过P53/P21信号转导通路诱导细胞凋亡来实现的。     

miRNA-214在乳腺癌组织中的表达及其意义

[目的]探讨miRNA-214在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征及预后的关系.[方法]应用实时定量qPCR检测45例乳腺癌及癌旁正常组织中miRNA-214的含量,分析其与临床病理特征、预后的关系.[结果]乳腺癌组织中miRNA-214的含量明显低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.01);miRNA-214在Ki-67阴性组的表达量明显高于Ki-67阳性组,差异具有统计学意义(P=0.01);miRNA-214水平与患者的年龄、月经状况、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移、ER、PR、Her-2及p53的表达均无关(P＞0.05).[结论]miRNA-214在乳腺癌组织中呈低表达,并与Ki-67表达相关,提示其可能与乳腺癌的发生、发展及预后有关.     

miRNA-200c通过抑制Akt通路提高胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的:研究miRNA-200c对人胃癌耐药SGC7901/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:Western blotting检测SGC7901/DDP及其亲代SGC7901细胞E-cadherin、PTEN、p-Akt及总Akt蛋白的表达;瞬时转染miRNA-200c前体(miR-NA-200c precursor,Pre-200c)提高SGC7901/DDP细胞miRNA-200c的表达,MTT法检测转染后SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性,并分析p-Akt表达的改变;应用Akt通路抑制剂LY94002处理SGC7901/DDP细胞抑制Akt磷酸化,检测处理后细胞对顺铂的敏感性。结果:与SGC7901细胞相比,SGC7901/DDP细胞中p-Akt蛋白的表达量显著增高(1.02±0.09 vs 0.17±0.02,P<0.05),E-cadherin、PTEN蛋白的表达量显著降低(0.10±0.03 vs 0.47±0.06,0.18±0.06 vs 0.87±0.06;均P<0.05)。转染Pre-200c后,顺铂对SGC7901/DDP细胞的IC50显著低于对照组[(7.52±0.19)vs(12.18±0.29)mg/L,P<0.05],细胞中p-Akt蛋白的表达量也显著低于对照组(0.22±0.04 vs 0.69±0.09,P<0.05);LY94002处理后,SGC7901/DDP细胞p-Akt蛋白的表达显著抑制(0.18±0.06 vs 0.66±0.10,P<0.05),顺铂对细胞的IC50显著低于对照组[(6.80±0.28)vs(11.94±1.73)mg/L,P<0.05]。结论:SGC7901/DDP细胞的耐药可能与E-cadherin和PTEN蛋白的表达缺失及Akt通路的异常激活有关,而miRNA-200c提高该细胞对顺铂的敏感性可能是通过抑制Akt通路而发挥作用。     

Inhibitory effects of miRNA-200c on chemotherapy-resistance and cell proliferation of gastric cancer SGC7901/DDP cells

Background and Objective: miRNA-200c can not only inhibit the aggressiveness of cancer cells but also increase the sensitivity of cells to antitumor drugs. However, some mechanisms are still unclear. Recent researches revealed that E-cadherin is more than an inhibitor of metastasis, and it also plays important roles in reversing drug resistance. We had previously found that miRNA-200c could not only induce the expression of E-cadherin but also increase the sensitivity of gastric cancer SGC7901/DDP cells to ...     

胃癌相关基因gcl的克隆及其功能预测

目的：应用生物信息学平台对胃癌相关基因表达片段进行cDNA全长克隆及序列分析和蛋白功能预测。方法：选用人胃癌、癌前病变及正常胃粘膜组织经mRNA差异显示技术筛选获得的差异表达片段，对所获得的1条功能未知基因表达片段“I”，利用5＇cDNA末端快速扩增方法扩增全长cDNA，结合Northern杂交印迹方法进行验证分析：利用NCBI、EMBL数据库资源分析其编码氨基酸的生物学特征以及预测其编码蛋白的功能。结果：扩增得到序列I的全长cDNA，命名为geI。分析显示gcI含有2个跨膜区，定位于胞膜；含有3个蛋白激酶C磷酸化位点和3个N端豆蔻酰化作用位点。结论：克隆的胃癌相关基因表达全长序列geI、编码与信号转导有关的跨膜蛋白，可能是参与胃癌发生过程中的相关基因。     

胃癌相关基因gcI的克隆及其功能预测

目的:应用生物信息学平台对胃癌相关基因表达片段进行cDNA全长克隆及序列分析和蛋白功能预测.方法:选用人胃癌、癌前病变及正常胃粘膜组织经mRNA差异显示技术筛选获得的差异表达片段,对所获得的1条功能未知基因表达片段"Ⅰ",利用5'cDNA末端快速扩增方法扩增全长cDNA,结合Northern杂交印迹方法进行验证分析;利用NCBI、EMBL数据库资源分析其编码氨基酸的生物学特征以及预测其编码蛋白的功能.结果:扩增得到序列Ⅰ的全长cDNA,命名为gcI.分析显示gcI含有2个跨膜区,定位于胞膜;含有3个蛋白激酶C磷酸化位点和3个N端豆蔻酰化作用位点.结论:克隆的胃癌相关基因表达全长序列gcI、编码与信号转导有关的跨膜蛋白,可能是参与胃癌发生过程中的相关基因.     

miRNA-200c逆转胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的耐药性及其相关机制

目的:探讨微RNA-200c (microRNA-200c,miRNA-200c)在逆转胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂(cisplatin,DDP)耐药中的作用及其可能的作用机制.方法:应用实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)法检测对DDP耐药的胃癌细胞SGC7901/DDP及其亲本细胞SGC7901中miRNA-200c的表达差异,同时检测SGC7901/DDP细胞转染miRNA-200c前体片段后miRNA-200c表达的变化;应用MTT法检测转染后SGC7901/DDP细胞对DDP药物敏感度的改变;Western印迹法检测转染后细胞bax、10号染色体同源丢失性磷酸酶与张力蛋白(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)和E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达变化.结果:SGC7901/DDP细胞中miRNA-200c的相对表达量显著低于DDP敏感细胞株SGC7901中的表达量 (P<0.05),SGC7901/DDP细胞转染miRNA-200c前体片段24 h后细胞中miRNA-200c的表达水平比转染阴性对照片段的细胞明显提高(P<0.05).DDP对转染miRNA-200c前体片段细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)显著低于转染阴性对照片段的细胞(P<0.05).转染miRNA-200c前体片段后,SGC7901/DDP细胞的bax、PTEN和E-cad的蛋白表达水平明显高于转染阴性对照片段的细胞 (P<0.05).结论:miRNA-200c可能通过上调E-cad、PTEN和bax蛋白表达而逆转SGC7901/DDP细胞对DDP的耐药.