沉默HIF-1α基因表达对大鼠肝癌细胞增殖的影响

 目的： 探讨沉默缺氧诱导因子　1α（HIF-1α）基因表达对缺氧状态下肝癌细胞增殖的影响。方法：选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴（CoCl2）建立缺氧模型。制备3组特异性较强的HIF-1α siRNA-脂质体复合物,转染于肝癌细胞。利用real-time RT-PCR、Western blotting等方法分别检测肝癌细胞HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、p21和cyclin D1在mRNA和（或）蛋白水平的表达。MTT及BrdU 掺入实验检测细胞增殖的变化。结果：缺氧条件下,肝癌细胞的HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达显著增多（P<0.05）。HIF-1α基因表达沉默后,HIF-1α、VEGF及cyclin D1 mRNA和（或）蛋白表达明显减少（P<0.05）,p21蛋白表达明显增加（P<0.05）。HIF-1α siRNA转染组的BrdU阳性细胞比例明显少于对照组(P<0.05)。结论：沉默HIF-1α基因表达对缺氧状态下肝癌细胞的增殖有显著抑制作用。     

HMBA对人舌癌Tca8113细胞增殖和KLF6及相关蛋白表达的影响

目的: 研究六亚甲基二乙酰胺(hexamethylene bisacetamide, HMBA)对人舌癌Tca8113细胞增殖和Kruppel样因子6(Kruppel-like factor 6, KLF6)及相关蛋白表达的影响。方法: HMBA处理Tca8113细胞后,观察细胞生长和细胞形态;流式细胞术观察细胞周期;RT-PCR检测KLF6 mRNA的表达;免疫细胞化学技术检测KLF6、p53、cyclin D1及c-Jun的蛋白表达。结果: HMBA处理后贴壁细胞的数量随浓度增加明显减少;MTT实验显示其生长抑制作用呈浓度/时间-效应关系;镜下观察显示处理后Tca8113细胞出现向正常细胞形态逆转演变的特征。流式细胞术检测结果显示,对照组Tca8113细胞G₁期比例为(52.00±0.02)%,S期为(34.00±0.08)%,G期为(14.00±0.10)%;HMBA处理后,随作用时间增加,G₁期细胞显著增加,S期细胞显著减少,G₂期细胞也减少,细胞明显被阻滞于G₁期(P<0.05);出现凋亡峰。 RT-PCR结果显示HMBA处理后KLF6 mRNA的表达上调(P<0.05); 免疫组化检测显示HMBA处理后KLF6和p53蛋白表达上调(P<0.05),cyclin D1和c-Jun表达下调(P<0.05)。结论: HMBA对Tca8113细胞增殖具有抑制作用;其作用机制一方面可能通过p53上调p21的表达和活性,另一方面可能通过上调表达的KLF6解除c-Jun对p21的抑制作用,下调cyclin D1,抑制CDK4/6和cyclin D1复合物活性,将Tca8113细胞阻滞于G₀/G₁期,诱导Tca8113细胞向正常细胞分化,恢复正常细胞的表型和功能,并促进细胞凋亡。     

IGFBP7对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制

目的: 探究胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其分子生物学机制。方法: 将质粒pCMV6-IGFBP7转染MCF-7细胞,构建稳定表达IGFBP7的MCF-7细胞系;采用Western blotting检测IGFBP7在MCF-7细胞稳定转染子的表达;采用软琼脂培养克隆形成实验检测IGFBP7对MCF-7细胞克隆形成能力的影响;采用流式细胞术检测IGFBP7对MCF-7细胞周期的影响;采用Western blotting检测IGFBP7对MCF-7细胞细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)、cyclin E、CDK2、p21^CIP1/WAF1、p27^KIP1、p53、视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)和p-Rb蛋白含量的影响。结果: (1)只有稳定转染质粒pCMV6-IGFBP7的MCF-7细胞表达IGFBP7。(2)IGFBP7能够显著降低MCF-7细胞的克隆形成率(P<0.01),阻止细胞从G₁期进入S 期,使其停滞于G₁期(P<0.01)。(3)IGFBP7能够显著抑制ERK1/2的磷酸化(P<0.01)。(4)IGFBP7能够下调cyclin D1和cyclin E蛋白表达(P<0.01),上调p27^KIP1、p21^CIP1/WAF1和p53蛋白表达(P<0.01),抑制Rb的磷酸化(P<0.01)。(5)MEK1/2阻断剂PD98059可部分模拟IGFBP7的肿瘤抑制效应。结论: (1) IGFBP7可通过下调cyclin D1和cyclin E蛋白表达,上调p27^KIP1、p21^CIP1/WAF1和p53蛋白表达,以及抑制Rb磷酸化发挥抗肿瘤作用;(2) IGFBP7对cyclin D1和p27^KIP1的调节可能与其抑制ERK1/2信号通路有关。     

干扰素诱导蛋白p204表达变化对大鼠血管平滑肌细胞增殖及p21表达的影响

目的: 观察干扰素诱导蛋白p204对鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及p21表达的影响,探讨p204在VSMCs增殖调控中的作用及可能机制。方法: 应用干扰素 α(IFN-α)处理和p204基因( Ifi204 )的小干扰RNA(siRNA)瞬时干预体外培养的VSMCs,用MTT法测定细胞活力反映细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,用半定量RT-PCR 法和Western blotting 分别检测p204和p21的mRNA和蛋白表达。结果: IFN-α可诱导鼠VSMCs p204 mRNA和蛋白表达上调,降低VSMCs细胞活力和细胞周期G₁/S转换,伴p21 mRNA和蛋白表达上调。转染 Ifi204 siRNA可抑制p204和p21表达,提高VSMCs细胞活力和促进细胞周期G₁/S转换。结论: p204表达可抑制鼠VSMCs的增殖,该效应可能与激活p21表达有关。     

p38信号通路对SETD4在细胞中的表达和定位的影响

目的: 观察SETD4(SET domain containing 4)蛋白在不同细胞中的表达和定位情况,以及亚砷酸钠(NaAsO₂)刺激对细胞SETD4表达和定位的影响,探讨NaAsO₂诱导SETD4的改变是否依赖于p38信号通路。方法: 用Western blotting检测SETD4在不同细胞中蛋白的表达情况,用细胞免疫荧光技术检测SETD4在细胞中的定位;用NaAsO₂刺激 p38 ^+/+和 p38 ^-/-细胞,分别收集细胞总蛋白检测SETD4蛋白的表达变化,同时观察SETD4的定位和移位改变。结果: SETD4蛋白无论在鼠源还是人源的细胞中均有表达;细胞免疫荧光结果显示SETD4在整个细胞中分布,以胞质较多; p38 ^+/+和 p38 ^-/-细胞受NaAsO₂刺激后其SETD4蛋白的表达趋势一致,即均在6 h时有明显减少; p38 ^+/+细胞受NaAsO₂刺激后SETD4蛋白从胞质向胞核移位,而 p38 ^-/-细胞SETD4的移位现象不明显。结论: SETD4蛋白在不同种属及组织来源的细胞中均有表达,表现为全细胞分布,以胞质为主;NaAsO₂刺激可影响细胞SETD4蛋白的表达水平及定位,NaAsO₂诱导的SETD4移位改变有赖于p38 MAPK介导的信号通路。     

干扰素诱导蛋白p204对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的: 研究干扰素诱导蛋白p204对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响并探讨其可能的机制。方法: 应用干扰素α(IFN-α)和p204基因(Ifi204)的小干扰RNA(siRNA)瞬时干预体外培养的VSMCs,用MTT法测定细胞活力反映细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,用实时 qRT-PCR法和Western blotting 分别检测mRNA和蛋白表达。结果: IFN-α可诱导大鼠VSMCs p204 mRNA和蛋白表达上调,抑制VSMCs细胞活力和细胞周期G₁/S转换,伴Ras蛋白表达减少,Raf和ERK磷酸化水平下降。转染Ifi204 siRNA可抑制p204表达,提高VSMCs细胞活力和促进细胞周期G₁/S转换,伴Ras蛋白表达增多,Raf和ERK磷酸化水平升高。结论: p204表达可抑制鼠VSMCs的增殖,该效应可能与p204抑制Ras/Raf/MEK/ERK信号通路的激活有关。     

通心络通过PI-3K/Akt/HIF信号通路改善血管内皮细胞缺氧损伤

目的: 观察通心络对缺氧血管内皮细胞中缺氧诱导因子(HIF)及其上游信号转导通路PI-3K/Akt的影响,探讨PI-3K/Akt/HIF信号通路在通心络改善血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用。方法: 将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分为常氧对照组、通心络组、缺氧组和缺氧+通心络组。采用CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性,Western blotting 检测HIF-1α、Bcl-2、Mcl-1、Bax表达变化及Akt的磷酸化情况。利用HIF-1α的显性负性突变体(DN-HIF)瞬时转染HUVECs,流式细胞仪分析细胞的凋亡情况。利用PI-3K和Akt的显性负性突变体瞬时转染HUVECs,探讨PI-3K/Akt信号通路在通心络改善血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用。结果: 与常氧条件下比较,通心络对缺氧内皮细胞虽有明显的促增殖作用,但程度明显减弱。通心络可显著上调HIF-1α、Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平及Akt磷酸化水平,且下调Bax的表达。利用DN-HIF抑制HIF-1α的活化后,通心络提高缺氧HUVECs活性的程度明显下降,但仍可一定程度上降低细胞凋亡百分率。进一步利用PI-3K显性负性突变体(Δp85)和Akt显性负性突变体(DN-Akt)阻断HIF-1α上游信号通路PI-3K/Akt后,通心络上调缺氧HUVECs HIF-1α蛋白表达的作用明显减弱,促进Akt磷酸化的作用基本消失。结论: 在缺氧条件下,通心络上调HUVECs HIF-1α蛋白表达水平,促进抗凋亡因子同时抑制促凋亡因子的表达,降低细胞凋亡率,从而提高缺氧细胞的增殖率,这些作用在一定程度上依赖于PI-3K/Akt/HIF通路的活性。     

Bmi-1 基因过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响

目的: 探讨原癌基因B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1( Bmi-1 )过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响。方法: 采用逆转录病毒介导转染方法将携带原癌基因 Bmi-1 的质粒或空质粒稳定转染GES-1细胞,通过real-time PCR及Western blotting在mRNA及蛋白水平鉴定转染效果。流式细胞术检测过表达 Bmi-1 对GES-1细胞周期的影响。应用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂盒检测稳定转染 Bmi-1 对GES-1细胞增殖的影响。结果: Real-time PCR及Western blotting结果均表明成功建立稳定转染 Bmi-1 基因的GES-1细胞株。流式细胞术结果表明,过表达 Bmi-1 基因使GES-1细胞G₀/G₁期减少,G₂/M期和S期细胞增多。生长曲线显示,过表达 Bmi-1 基因使GES-1细胞增殖速度明显提高。结论: 过表达 Bmi-1 基因能调控GES-1细胞的细胞周期,促进GES-1细胞的增殖。     

LMP1调节鼻咽上皮与鼻咽癌组织中p27与RPLP0蛋白的表达

目的: 观察p27和核糖体磷酸化蛋白大亚基P0(RPLP0)蛋白在潜伏膜蛋白1(LMP1)阳性鼻咽癌细胞中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律及临床病理学意义。方法: 采用Western blotting分析p27和RPLP0蛋白表达与LMP1表达之间的关系,S-P免疫组织化学染色检测LMP1、p27和RPLP0蛋白在30例鼻咽上皮组织和60例鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达,并分析其临床病理学意义。结果: (1)LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3%和90.0%;(2)与LMP1(-)组织比较,p27蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达降低,而RPLP0蛋白表达与之相反;(3)p27蛋白和RPLP0蛋白表达与鼻咽癌患者年龄、LMP1蛋白的表达、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则反之(P<0.05)。结论: LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中下调p27和上调RPLP0蛋白的表达;鼻咽癌患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则与之相反。     

牛磺酸和锌对急性缺氧小鼠脑组织HIF-1α mRNA表达的影响

 目的：研究牛磺酸和锌对急性缺氧小鼠脑组织缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1 alpha，HIF-1α）mRNA表达的影响，探讨其对缺氧脑的保护作用机制。方法：复制小鼠急性缺氧模型，采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，研究用药后实验小鼠脑组织HIF-1α mRNA表达的变化。结果：正常对照组无HIF-1α mRNA表达，各组小鼠缺氧后脑组织HIF-1α mRNA表达明显高于对照组(P<0.05)；牛磺酸组和牛磺酸+硫酸锌组缺氧后小鼠脑组织HIF-1α mRNA增多最明显，与硫酸锌组有显著差异（P<0.05）；而用药的3组与生理盐水组相比，缺氧后小鼠脑组织HIF-1α mRNA的增多都有显著差异（P<0.05）。结论：急性缺氧时牛磺酸和锌能够增加脑组织HIF-1α mRNA的表达，这可能是其抗脑缺氧机制之一，而两者联合使用比单纯硫酸锌抗缺氧作用更明显。     

上调SMYD3对人胆管癌FRH0201细胞中DNMT3B表达及细胞增殖的影响

目的: 研究人胆管癌细胞株FRH0201中SET和MYND结构域含有蛋白3(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)过度表达对DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达及细胞增殖能力的影响。方法: 瞬时转染SMYD3真核表达质粒后, RT-PCR检测细胞中DNMT3B mRNA水平的变化;Western blotting检测细胞中DNMT3B蛋白水平的变化;CCK-8检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期的改变。结果: 以未处理组为对照,胆管癌细胞FRH0201在转染pEGFP-C3-SMYD3质粒后,DNMT3B蛋白及mRNA表达均显著上升(P<0.01);细胞的增殖能力显著提高、细胞增殖速度加快(P<0.05);进入G₂/M期的细胞明显增多(P<0.05)。结论: 过度表达SMYD3,可引起细胞中DNMT3B的表达上调并增强细胞增殖能力。     

急性心肌缺氧对乳鼠心肌细胞脑钠尿肽表达的影响及其作用机制

目的: 观察急性缺氧损伤对乳鼠心肌细胞脑钠尿肽(BNP)表达水平的影响并探讨其可能作用机制。方法: 原代乳鼠心肌细胞缺氧、无糖、无血清培养以模拟心肌缺血损伤,利用CCK-8法测细胞存活率、ELISA法测白细胞介素-6(IL-6)和BNP的表达;以IL-6直接干预体外培养的心肌细胞, 采用RT-PCR、Western blotting和ELISA方法观察BNP、转化生长因子β₁(TGF-β₁)、Smad2 mRNA的转录和蛋白的表达。结果: 缺氧显著上调IL-6和BNP的表达,且两者呈线性正相关;IL-6直接干预可剂量和时间依赖性地上调心肌细胞BNP的mRNA和蛋白表达水平,同时TGF-β₁和Smad2的表达水平亦增加;而针对TGF-β₁的中和抗体能够部分地抑制由IL-6引起的BNP表达增加。结论: 急性心肌缺氧可直接上调BNP的表达水平,这种调节效应与TGF-β₁/Smad2信号通路上调有关。     

ERK信号通路在檞皮素促大鼠MSCs成骨分化中的作用

目的:观察细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在檞皮素(QUE)促进SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化过程中的作用。方法:(1)用0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L和100μmol/LQUE干预MSCs,MTT法检测各浓度QUE对MSCs增殖的影响,碱性磷酸酶(ALP)测定试剂盒检测各浓度QUE对MSCsALP表达的影响;(2)用ERK1/2抑制剂干预后,加入QUE,用ALP测定试剂盒检测ALP的表达,ELISA法检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)和骨钙素(BGP)的表达,Westernblotting检测ERK1/2的表达,荧光定量PCR检测转化生长因子β₁(TGF-β₁)mRNA、骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA和核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达。结果:(1)0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/LQUE剂量依赖性地促进MSCsALP的表达,同时能促进MSCs的增殖;(2)与空白组相比,QUE组ALP、BGP和ColⅠ表达均增加(P<0.01),加入ERK1/2抑制剂后,磷酸化的ERK1/2表达减少(P<0.05),同时ALP、BGP和ColⅠ表达降低(P<0.01);(3)与空白组比较,QUE组TGF-β₁mRNA、BMP-2mRNA和Cbfα1mRNA的表达均增加(P<0.05),加入ERK1/2抑制剂后这3个基因的表达都下降(P<0.05)。结论:一定浓度的QUE能促进MSCs的增殖和成骨分化,ERK通路的激活在此过程中起到了重要的作用。     

柚皮苷在促大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化过程中对MAPK信号通路的影响

目的: 研究中药单体柚皮苷(NG)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化过程中MAPK信号通路的影响。方法: 观察在正常、加入p38、ERK和JNK通路抑制剂SB203580、PD98059、SP600125及3种抑制剂全部加入的情况下,各组碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、I型胶原(Col I)等骨向分化指标的差异。用Western blotting技术检测各组p38、ERK1/2和JNK蛋白的磷酸化水平,用荧光定量PCR技术检测细胞因子转化生长因子β₁(TGF-β₁)、骨形成蛋白2(BMP-2)和核心结合因子α1(Cbfα1) mRNA的表达。结果: (1)10^-7mol/L为本实验中NG的最佳促骨向分化浓度。(2) NG最佳浓度组的ALP和BGP含量比其它各组都高(P<0.05),Col I含量无明显差异(P>0.05);与NG组相比,加入不同抑制剂组的ALP、BGP和ColⅠ表达量出现不同程度的降低。(3)与空白组相比,NG组JNK蛋白的磷酸化水平升高(P<0.05),p38蛋白的磷酸化水平降低(P<0.01),ERK1/2蛋白的磷酸化水平无明显差异(P>0.05)。与NG组相比,加入不同抑制剂组的p38、ERK1/2和JNK蛋白的磷酸化水平有升高也有降低。(4) NG组上调BMP-2的表达(P<0.05),下调Cbfα1的表达(P<0.05),而对TGF-β₁的表达无明显影响(P>0.05)。与NG组相比,加入不同抑制剂组的TGF-β₁、BMP-2和Cbfα1 mRNA表达量出现不同程度的降低。结论: NG主要通过激活MAPK信号通路中ERK通路、JNK通路以及上调BMP-2的表达,促进MSCs的骨向分化。NG上调BMP-2的表达受MAPK通路中p38通路的影响较大。     

神经调节因子对MDA-MB-231细胞mtp53和HIF-1α的影响及意义

 目的：探讨在ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231中,神经调节因子（NRGs）/ ErbB2信号通路对突变型p53（mtp53）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的影响及意义。方法：免疫细胞化学法和Western blotting检测MDA-MB-231细胞中神经调节因子（NRG）的表达。应用rbB2受体功能抑制剂AG825处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡; Western blotting检测mtp53、HIF-1α蛋白表达;RT-PCR检测HIF-1αmRNA的表达。结果：神经调节因子在乳腺癌细胞MDA-MB-231呈显著表达,Western blotting实验可见分子量44 kD的NRG抗体阳性反应条带。应用ErbB2受体功能抑制剂AG825后,MDA-MB-231细胞生长受到抑制,作用呈时效、量效依赖关系(P<0.01);细胞周期阻滞在G0/G1期;细胞凋亡增加（P<0.05）;mtp53、HIF-1α蛋白表达减少(P<0.05);HIF-1α mRNA表达减少(P<0.05)。结论：ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231存在神经调节因子分泌,可能通过神经调节因子自分泌或旁分泌配体作用方式使ErbB2受体信号转导处于激活状态,上调mtp53和HIF-1α的表达,促进肿瘤细胞的增殖、存活能力和抑制凋亡。     

siRNA沉默转酮醇酶样蛋白1基因对人肝癌HepG2细胞生长微环境的影响

目的:通过siRNA技术沉默肝癌细胞系HepG2转酮醇酶样蛋白1(TKTL1)基因后观察其对生长微环境中乳酸生成水平、还原型谷胱甘肽(GSH)水平及NADPH/NADP⁺比值的影响,旨在探讨肿瘤细胞TKTL1表达与其转移特性的内在联系。方法:用构建的靶向TKTL1基因siRNA干扰质粒载体转染HepG2细胞株,RT-PCR检测TKTL1mRNA表达并结合转酮醇酶(TKT)活性测定判断其干扰效率;以未转染HepG2细胞为对照,进一步观察TKTL1沉默的癌细胞内乳酸生成水平、GSH含量、NADPH/NADP⁺比值及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)活性的变化。结果:siRNA沉默HepG2细胞TKTL1基因后TKTL1mRNA表达下降、TKT活性显著降低(P<0.01),乳酸生成、GSH水平及NADPH/NADP⁺比值较对照组细胞均显著降低(P<0.01),但G-6-PD活性无明显变化(P＞0.05)。结论:肿瘤可能通过TKTL1高表达调整葡萄糖代谢从而改变乳酸及氧化自由基生成,使细胞生长微环境利于肿瘤转移。     

洛伐他汀诱导人子宫内膜癌JEC细胞G1 期同步化的研究

目的: 探讨洛伐他汀(Lov)诱导人子宫内膜癌JEC细胞G₁期同步化的方法及JEC细胞解除G₁期同步化后的细胞周期进程。方法: CCK-8法测定JEC细胞的倍增时间,采用10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L和40 μmol/L的Lov,作用1×细胞倍增时间进行流式细胞术检测G₁期细胞的比例,获得G₁期同步化的最佳Lov浓度;采用最佳浓度作用JEC细胞,于作用后的0.5×倍增时间~2×倍增时间内,每隔4 h检测同步化程度,获得最佳浓度Lov作用下的最佳同步化时间;解除G₁期同步化,每隔4 h检测一次,研究JEC细胞解除G₁期同步化后的细胞周期进程。结果: CCK-8法检测显示JEC细胞的倍增时间约为24 h;JEC细胞的最佳G₁期同步化条件为:20 μmol/L Lov作用24 h,可获取G₁期细胞(85.00±0.79)%;JEC细胞于解除G₁期同步化后16 h,获得最大量的S期细胞,为(45.28±0.53)%;同时G₁期细胞比例达到最低,为(35.93±0.44)%。结论: 20 μmol/L Lov作用24 h,可获得大量G₁期细胞;解除G₁期同步化后16 h,S期细胞比例最高,G₁期细胞比例达到最低,达到满意的G₁期同步化释放后效果。     

非小细胞肺癌中P53表达的不同亚细胞定位及功能意义的研究

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中不同亚细胞定位P53蛋白及其可能的功能意义。方法:以免疫组化及流式细胞分析术研究了43例NSCLC病人肿瘤组织P53表达定位与G₁/S检查点功能及DNA含量的关系。结果:发现P53蛋白不同的亚细胞定位与病人的病程密切相关,同时,在P53核表达定位的病人肿瘤组织细胞S期比例明显增多而G₀－G₁期比例明显较胞浆表达病人减少,G₂－M期比例及DNA指数在两组间无明显差异。结论:不同亚细胞定 位的P53蛋白具有不同的G₁/S检查点调节功能,胞浆P53蛋白仍有部分G₁/S检查点调控功能,因此出现较少的SPF及较多的G₀－G₁细胞,代表了恶性度较低的细胞亚群;而核表达阳性P53蛋白具有更差的G₁/S检查点调控功能,代表了恶性度较高的肿瘤亚群,这与肿瘤进展可能有关。     

三七皂苷单体R1 抑制低氧高二氧化碳诱导的肺动脉平滑肌细胞p38 MAPK信号通路的活化

目的: 探讨三七皂苷单体R₁(R₁)减轻低氧高二氧化碳(CO₂)性肺动脉收缩的作用及其与p38 MAPK信号通路的关系。方法: 原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),取第2至5代对数生长期细胞至低氧高CO₂(1% O₂, 6% CO₂)条件下继续培养,并分别用8、40、100 mg/L R₁ 孵育24 h后收集细胞,采用免疫印迹法测定p38 MAPK磷酸化蛋白表达,半定量RT-PCR检测p38 MAPK mRNA的表达。结果: Western blotting和RT-PCR结果显示,低氧高CO₂组p-p38 MAPK蛋白和p38 MAPK mRNA表达明显高于对照组(N)组(P<0.01)。与低氧高CO₂组相比,R₁(8、40、100 mg/L)不同程度抑制了p-p38 MAPK蛋白和p38 MAPK mRNA的表达(P<0.01),并呈剂量依赖关系。结论: 低氧高CO₂诱导PASMCs p38 MAPK活化,三七皂苷单体R₁可能通过抑制p38 MAPK通路减轻低氧高CO₂性肺动脉收缩。     

乏氧对肺癌细胞系HIF家族成员HIF-1α、HIF-2α和HIF-β表达的影响及其相关性

目的 探讨乏氧对不同类型肺癌细胞乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、乏氧诱导因子-2α(HIF-2α)和乏氧诱导因子-β(HIF-β)基因表达的影响及其相关性. 方法 以0.5%低氧培养箱模拟细胞低氧环境,采用定最RT-PCR和Western blotting方法 分别检测乏氧处理4～24h人肺癌细胞系SPCA1、A549、H446、SH77、H520和95D中HIF-1α、HIF-2α和HIF-βmRNA和蛋白水平的表达. 结果 1.常氧下不同肺癌细胞系HIF-1α、HIF-2α mRNA表达水平较低,短期乏氧HIF-1α mRNA降低而HIF-2α mRNA增加,随乏氧时间延长两者mRNA表达逐渐增加.2.HIF-1α和HIF-2α蛋白在常氧下表达均较低,乏氧下两者表达增强但变化趋势不一致,HIF-1α蛋白在所有细胞中均有表达,HIF-2α蛋白仅在某些细胞有表达.3.HIF-β mRNA和蛋白在常氧或乏氧下表达无明显变化.4.相关性分析表明,乏氧下HIF-2α mRNA与蛋白表达呈正相关(r=0.989,P=0.011);而HIF-1α和HIF-β mRNA与蛋白无相关性. 结论 肺癌细胞中HIF-1α、HIF-2α和HIF-β对乏氧刺激表现出不同的应答方式且具有细胞特异性,乏氧对HIF-1α和HIF-2α的调控可能分别发牛在翻译和转录水平,而对HIF-β无明显的调控作用.