奥沙利铂对人肝癌细胞HepG2放射增敏作用初探

目的 观察奥沙利铂对人肝癌细胞HepG₂放射后增殖的影响。方法 采用MTT法测定不同浓度奥沙利铂作用HepG₂细胞不同时间后的细胞半数抑制浓度(IC₅₀)。选择合适的奥沙利铂浓度行细胞克隆形成实验,分别给予3种不同处理:HepG₂空白组、单纯照射组(1、2、4、6、8、10 Gy单次照射)、奥沙利铂+照射组)。同期选取6 Gy照射组检测细胞凋亡情况。检测以上3组细胞中细胞增殖蛋白ERK1/2和DNA损伤修复蛋白Ku-70表达情况。结果 奥沙利铂对HepG₂细胞的6、12、24、48 h的IC₅₀分别为54.4、29.1、17.8、10.5 mg/L。3 mg/L浓度奥沙利铂的放射增敏比为1.59。细胞凋亡情况检测结果表明奥沙利铂+照射组存活细胞比例均低于照射组(P=0.005)、奥沙利铂组(P=0.008)和空白对照组(P=0.001)。照射组和奥沙利铂+照射组的ERK1/2表达水平被持续抑制,其中照射组的ERK1/2表达水平在处理后48 h开始升高,但低于对照组,奥沙利铂+照射组的ERK1/2表达水平一直为最低,且没有升高趋势。各组Ku-70的变化水平与ERK1/2类似。结论 奥沙利铂对于人肝癌细胞HepG₂的体外放射具有显著的增敏作用。     

白藜芦醇对肺癌紫杉醇耐药细胞的增殖抑制作用及其机制

目的：研究白藜芦醇作用后人肺腺癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇敏感性的改变,并探讨其作用机制。方法：建立人肺腺癌紫杉醇耐药细胞A549/Taxol-R,用不同浓度白藜芦醇、紫杉醇单独或联合干预A549/Taxol-R细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率;概率单位法计算半数抑制浓度（IC₅₀）;观察不同浓度白藜芦醇处理后,紫杉醇对A549/Taxol-R细胞IC₅₀的变化;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果：白藜芦醇对A549/Taxol-R细胞增殖的抑制率具有浓度和时间的双重依赖性（P均 < 0.05）。白藜芦醇处理后,紫杉醇对A549/Taxol-R细胞的IC₅₀值下降,从（17.50±1.24）μg/mL降低至（4.18±0.62）μg/mL。白藜芦醇和紫杉醇联合干预的A549/Taxol-R细胞凋亡率、坏死率高于单独干预组（P < 0.05）,联合干预组A549/Taxol-R细胞的Bax、Caspase-3的表达较单独干预组上调,而Bcl-2的表达则相对下调（P < 0.05）。结论：白藜芦醇可能通过促进细胞的凋亡来增强人肺腺癌紫杉醇耐药细胞对紫杉醇的敏感性,其机制可能和促进Bax、Caspase-3的表达,下调Bcl-2的表达有关。     

黄荆子乙酸乙酯提取物诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡

[目的]探讨黄荆子乙酸乙酯提取物（EVn-50）体外诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡作用。[方法]体外培养Hela细胞,不同浓度EVn-50（1.0、10.0、100.0μg/ml）作用于Hela细胞。采用PI染色FCM检测EVn-50诱导Hela细胞的凋亡作用;采用间接免疫荧光标记FCM检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。[结果]EVn-501.0、10.0、100.0μg/ml处理Hela细胞48h后,细胞的凋亡率分别为1.06%、8.80%及20.90%,呈浓度依赖性（P〈0.05）。不同浓度EVn-50作用Hela细胞48h,细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达逐渐升高,Bcl-2蛋白表达逐渐降低（P〈0.05）。[结论]EVn-50具有诱导Hela细胞凋亡作用,其作用可能与改变凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达有关。     

PM2.5对HK-2肾细胞部分癌基因和凋亡基因表达的影响

目的： 探讨PM_2.5对人肾上皮细胞（HK-2）部分癌基因和凋亡基因表达的影响。方法： 利用CCK-8试剂盒测定PM_2.5混悬液对HK-2细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）;实验设阴性对照组、PM_2.5混悬液低剂量（10 μg/mL）、高剂量（50 μg/mL）染毒组和阳性对照组（Cr⁶⁺ 10 μmol/L）,分别对HK-2细胞处理24 h后利用实时荧光定量PCR （qPCR）和Western blot检测癌基因（c-myc、c-fos、p53）和凋亡基因（Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2） mRNA和蛋白的表达水平。结果： PM_2.5混悬液对HK-2细胞的IC₅₀为95.98 μg/mL;经PM_2.5混悬液染毒24 h,qPCR结果显示,与阴性对照组比较,PM_2.5混悬液高剂量组和阳性对照组c-myc、c-fos、Caspase-8、Caspase-9 mRNA表达均升高,差异均有统计学意义（P < 0.01）;p53和Bcl-2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义（P < 0.01）。Western blot结果显示,与阴性对照组比较,PM_2.5混悬液高剂量组和阳性对照组c-myc、c-fos、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达均升高,差异均有统计学意义（P < 0.01）;p53和Bcl-2蛋白表达均降低,差异均具有统计学意义（P < 0.05）。结论： PM_2.5可引起HK-2细胞中部分癌基因表达上升、抑癌基因表达下降、促凋亡基因表达上升和抑凋亡基因表达下降,提示PM_2.5对HK-2肾细胞部分癌基因和凋亡基因具有一定的促进与激活作用。     

番茄红素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究番茄红素(Lycopene,LP)对人肝癌HepG2细胞生长的影响并初探其机制。方法取对数生长期HepG2细胞设空白对照组、LP(5 μg/mL)组、LP(10 μg/mL)组、LP(20 μg/mL)组和顺铂(40 μg/mL)组,每组设10个复孔;各组分别给药干预48 h后,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡状况,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA表达,Western blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 与空白对照组比较,经LP(10 μg/mL、20 μg/mL)或顺铂40 μg/mL干预48 h能够显著提高HepG2细胞增殖抑制率,延长细胞周期中G₀/G₁期而缩短G₂/M期,提高细胞凋亡率,上调促凋亡Bax mRNA表达并下调抑凋亡Bcl-2 mRNA表达,提高Bax/Bcl-2比值,上调Caspase-3蛋白表达,LP上述作用具有一定的剂量依赖性。结论 LP具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与LP干预细胞周期分布和调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

桔梗皂苷D对人移行细胞癌5637细胞株的诱导凋亡作用及其分子机制

目的 探讨桔梗皂苷D对人移行细胞癌5637细胞诱导凋亡作用及分子机制。方法 HE染色和透射电子显微镜观察细胞的形态学变化;流式细胞学技术检测细胞凋亡率的变化;Western blot法检测凋亡通路相关蛋白的表达变化;PCR法检测p53、Bcl-2、Bax mRNA表达;免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白表达的影响。结果 通过HE染色和电子显微镜观察桔梗皂苷D组5637细胞,可见凋亡细胞,凋亡指数明显高于对照组（P<0.01）;与对照组细胞相比,桔梗皂苷D组5637细胞Survivin、Livin表达量明显下降（P<0.05）;Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3、Cyt-c表达量与对照组比较,明显增加（P<0.05）;p53、Bax mRNA水平明显升高,Bcl-2 mRNA表达下降（P<0.01）; Bax、Caspase-9、Caspase-8以及Caspase-3表达较对照组增多,而Bcl-2表达则明显下降（P<0.01）。结论 桔梗皂苷D能诱导人移行细胞癌5637细胞凋亡,其作用机制可能与上调Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3、Cyt-c、p53和下调Bcl-2表达、激活线粒体途径和死亡受体途径有关。     

番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用机制

目的探讨番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的分子机制。方法体外培养SW480细胞,采用MTT比色实验、流式细胞术、RT-PCR和Westernblot方法,分析番茄红素对SW480细胞的生长增殖作用、对细胞凋亡率的影响及对细胞凋亡相关分子Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达的影响。结果MTT法显示,番茄红素能显著抑制SW480细胞的生长增殖能力,且呈一定的量效与时效关系,24 h的半数抑制浓度(IC50)为1.0 μmol/L;流式细胞仪分析表明,番茄红素呈浓度依赖性诱导SW480细胞凋亡;RT-PCR或Western blot分析表明,SW480细胞经不同浓度番茄红素诱导后,与溶媒组相比,Bcl-2表达逐渐减弱,而Bax,Caspase-9和Caspase-3表达逐渐增强,Bcl-2/Bax比值降低。结论番茄红素对SW480细胞的抑制增殖作用,可能与降低Bcl-2/Bax比值、增加Caspase-9和Caspase-3蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。     

汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 采用不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）汉黄芩素作用鼻咽癌CNE2细胞,以溶剂为对照组。采用实时无标记细胞功能分析仪监测细胞增殖情况,双荧光法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测PCNA、Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平。结果 不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）汉黄芩素作用24 h后CNE2细胞增殖抑制率依次为20.3%、23.7%、33.4%、40.9%,IC₅₀为42.41 μmol/L;36 h依次为18.0%、22.0%、36.1%、40.5%,IC₅₀为34.46 μmol/L;48 h依次为7.4%、20.2%、35.0%、40.9%,IC₅₀为22.81 μmol/L。与溶剂对照组比较,10.0 μmol/L、20.0 μmol/L汉黄芩素组细胞凋亡率均升高（t=23.710,P=0.001;t=43.934,P<0.001）。20.0 μmol/L汉黄芩素处理鼻咽癌CNE2细胞48 h后,与溶剂对照组比较,Bax蛋白表达水平上升（P<0.05）,Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.05）。 结论 汉黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖并诱导其凋亡,可能通过促进Bax蛋白表达并抑制Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达发挥作用。     

附子提取物对肺癌A549细胞增殖抑制及放射增敏作用的研究

目的: 观察附子提取物对人肺癌A549细胞增殖及放射敏感性的影响,并探讨其可能的机制。方法: 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度附子提取物作用后细胞增殖情况,并选择IC₂₀(30μg/mL)作为后续实验浓度。集落形成实验检测A549细胞的存活分数,单机多靶模型拟合细胞存活曲线计算平均致死剂量(D₀)及放射增敏比(SER)。将细胞分为对照组、附子组、X射线照射组和附子处理后X射线照射组。对照组给予培养基,附子组给予30μg/mL附子提取物处理24 h,X射线照射组采用10 Gy的X射线照射,附子处理后X射线照射组先采用30μg/mL附子提取物处理24 h后,再给予10 Gy的X射线照射。流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果: CCK-8法检测结果显示,小于20μg/mL的附子提取物对A549细胞存活率有增强作用,但随着附子提取物浓度到达30μg/mL,开始对人肺癌A549细胞生长具有抑制作用,且与附子提取物浓度相关。集落形成实验结果提示附子处理后X射线照射组存活曲线起始处肩部稍窄,表明联用附子提取物后,引起细胞死亡所需的放疗剂量逐渐减小,X射线照射组和附子处理后X射线照射组D₀值分别为1.83和1.48 Gy,SER为1.24。流式细胞术检测结果提示附子处理后X射线照射组细胞凋亡率显著增加,高于附子组和X线照射组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,附子组与X射线照射组较对照组细胞Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降。附子处理后X射线照射组较对照组细胞Bax、Bcl-2蛋白含量变化更加显著(P<0.01)。结论: 30μg/mL的附子提取物对人肺癌A549细胞具有增殖抑制作用和放射增敏作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

上海中医药大学附属普陀医院实验中心，上海中医药大学中西医结合肿瘤介入研究所，上海200062

背景与目的：细胞凋亡受阻是肿瘤细胞产生耐药的重要因素,从细胞凋亡的研究入手,将为肿瘤的治疗和耐药性的逆转开辟新的途径。本研究观察一种新型萘酰亚胺类衍生物8c对结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞的作用,探讨诱导HCT116/L-OHP耐药细胞凋亡的分子机制。方法：采用CCK-8法检测8c对HCT116/L-OHP细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术观察8c对HCT116/L-OHP细胞凋亡的影响;采用实时定量PCR(realtime PCR)检测p53 mRNA、Bax mRNA及Bcl-2 mRNA水平变化;蛋白［质］印迹法(Western blot)检测p-p53、Bax、Bcl-2及细胞色素c(Cyt-c)的蛋白表达水平。结果：8c抑制HCT116/L-OHP细胞增殖的半数抑制浓度(IC₅₀=8.16 μmol/L)低于阳性对照氨奈菲特(IC₅₀=28.37 μmol/L);药物作用后,8c诱导耐药细胞产生凋亡,凋亡通路中p53(Ser15)磷酸化水平上升,但p53 mRNA水平不受影响;Bax蛋白水平及mRNA水平明显上升,Bcl-2蛋白及mRNA水平下降,使得Bax/Bcl-2比例增加,同时8c又引起细胞色素c的释放。结论：8c通过磷酸化p53 Ser-15位点激活p53,随即激活细胞凋亡通路相关蛋白的表达,这可能是8c抑制结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞增殖的重要机制之一。8c具有良好的抗肿瘤及抗耐药潜力和开发应用前景。     

Zebularine-induced apoptosis in Calu-6 lung cancer cells is influenced by ROS and GSH level changes

Zebularine (Zeb) is a DNA methyltransferase (DNMT) inhibitor that has various biological properties including anti-cancer effect. In the present study, we evaluated the effects of Zeb on the growth and death of Calu-6 lung cancer cells in relation to reactive oxygen species (ROS) and glutathione (GSH) levels. Zeb inhibited the growth of Calu-6 cells with an IC₅₀ of approximately 150 μM at 72 h in a dose-dependent manner. Zeb induced an S phase arrest of the cell cycle and apoptosis in Calu-6 cells. Pan-caspase inhibitor (Z-VAD) and caspase-8 inhibitor (Z-IETD) significantly rescued some cells from Zeb-induced Calu-6 cell death. In relation to ROS and GSH levels, O₂ ^?? level was significantly increased in Zeb-treated Calu-6 cells and caspase inhibitors reduced O₂ ^?? level in these cells. Zeb induced GSH depletion in HeLa cells, which was attenuated by caspase inhibitors. L-buthionine sulfoximine (BSO), a GSH synthesis inhibitor, intensified the apoptotic cell death, ROS level, and GSH depletion in Zeb-treated Calu-6 cells. In addition, BSO increased Bax protein and decreased Bcl-2 protein in Zeb-treated Calu-6 cells. In conclusion, Zeb inhibited the growth of Calu-6 lung cancer cells via cell cycle arrest and caspase-dependent apoptosis and its cell death was influenced by ROS and GSH level changes.     

The BH3-only protein BimL overrides Bcl-2-mediated apoptosis resistance in melanoma cells

Melanoma cells are characterized by apoptosis deficiency coinciding with reduced expression of the proapoptotic Bcl-2 protein Bim. An adenoviral vector was constructed with the Bim_L cDNA controlled by an inducible promoter. Highly efficient apoptosis induction and abrogated cell proliferation was seen in melanoma cells upon Bim_L overexpression. Loss of mitochondrial membrane potential, release of mitochondrial apoptogenic factors and caspase-9 processing indicated the activation of mitochondrial apoptosis pathways. Bim_L activated both Bax and Bak, as shown by siRNA knockdown and activation-specific antibodies. Of note, Bim_L overrode the apoptosis blockade by Bcl-2 overexpression or by Bax/Bak single knockdown. The high efficacy correlated to Bim_L interaction with all antiapoptotic Bcl-2 family members in melanoma cells, shown by co-immunoprecipitation analyses for Bcl-2, Bcl-x_L, Mcl-1 and Bcl-w. Thus, Bim_L reveals an outstanding proapoptotic potential in melanoma cells, and strategies for its re-expression appear of interest. These have been reported for B-Raf inhibitors, and their efficacy may be partly attributed to Bim_L.     

千金子甾醇诱导HL-60细胞凋亡机制研究

目的探讨Bcl-2/Bax信号通路在千金子甾醇诱导HL-60白血病细胞发生凋亡中的作用及其分子机制研究。方法HL-60细胞培养体系中分别加入大、中、小剂量千金子甾醇溶液,甾醇溶液作用细胞24h后,采用CCK-8法检测千金子甾醇对HL-60细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Bcl-2/Bax、Caspase-9和Caspase-3mRNA转录水平,ELISA法检测Caspase-9和Caspase-3蛋白活性。结果 CCK-8法检测结果显示,与对照组比较,千金子甾醇能明显抑制HL-60细胞增殖（F=42.97,P〈0.001）,各个浓度之间进行比较,差异有统计学意义,P〈0.05。流式细胞术检测细胞凋亡率显著增加（F=56.74,P〈0.001）,经10、20和40μg/mL千金子甾醇处理24h后,HL-60细胞早期凋亡率分别为（23.4±3.1）%、（35.7±4.3）%和（53.2±3.9）%,细胞呈典型凋亡形态学改变。千金子甾醇作用后,Bax mRNA转录水平显著升高,Bcl-2mRNA转录水平显著降低,且呈化合物剂量依赖性（F=53.45,P〈0.001）,Caspase-9和Caspase-3 mRNA转录水平升高,且呈化合物剂量依赖性（F=34.21,P〈0.001）,千金子甾醇对HL-60细胞作用24h后Caspase-9和Caspase-3蛋白活性显著升高（F=54.33,P〈0.001）,且随着千金子甾醇浓度增加蛋白活性逐渐升高。结论千金子甾醇通过调节Bcl-2/Bax凋亡信号通路,诱导HL-60细胞凋亡,其作用呈明显剂量依赖性。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对体外培养胃癌细胞SNU凋亡的影响

目的探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对胃癌细胞SNU凋亡的影响。方法体外培养的胃癌细胞株SNU经不同浓度（50、100、1000、2000μg／L）DON处理12h,以流式细胞术（FCM）和免疫蛋白印记（Western blotting）法检测细胞凋亡和凋亡相关蛋白bax、bcl-2、Caspase-3的表达情况。结果FCM榆测结果表明,DON处理12h后,各处理组SNU细胞凋亡率均高于对照组。在50～2000μg／L浓度范同内随着DON浓度升高凋亡率亦相应升高,两者呈明显剂量依赖关系（r=0．940,P〈0．01）。FCM和Westrn blotting法检测结果显示,DON作用12h后,SNU细胞bax和Caspase-3表达升高,bcl-2表达降低．结论DON可剂量依赖地诱导体外培养的胃癌细胞SNU凋亡,上调bax蛋白的表达,下调bcl-2蛋白的表达,进而激活Caspase-3,可能在SUN细胞凋亡过程中发挥作用。     

FCY-302, a Novel Small Molecule,Induces Apoptosis in Leukemia and Myeloma Cells by Attenuating Key Antioxidant and Mitochondrial Enzymes

Arylidene analogs are well proven for biological activities. FCY-302, a novel small molecule belonging to this class, was screened for its biological efficacy in leukemia and myeloma cells. FCY-302 selectively inhibited proliferation of cancer cells with GI50 values of 395.2 nM, 514.6 Nm, and 642.4 nM in HL-60, Jurkat, and RPMI-8226 cells, respectively. The compound also increased sub-G0 peak in the cancer cell cycle and favored apoptosis determined by annexin V assay. The compound decreased the antiapoptotic Bcl-2 levels and increased proapoptotic Bax proteins in leukemia and myeloma cell lines. FCY-302 attenuated the mitochondrial membrane-bound Na⁺ /K⁺ ATPase, Ca²⁺ ATPase, and Mg²⁺ ATPase enzyme activities and significantly decreased activities of antioxidant enzymes like SOD, CAT, G_R, and GST in all the three cancer cells tested. Our findings suggest that FCY-302 inhibits the proliferation of leukemia and myeloma cancer cells by altering key mitochondrial and antioxidant enzymes, eventually driving them to apoptosis. These results drive focus on FCY-302 and its analogs to be developed as potential small molecules with bioactivities against cancer.     

盐酸罗哌卡因对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨盐酸罗哌卡因对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法:细胞计数试剂盒（CCK-8）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞增殖能力的影响,并确定盐酸罗哌卡因的用药浓度,流式细胞术检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI法检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞凋亡的影响,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果:随着盐酸罗哌卡因用药浓度的升高,MGC-803细胞增殖能力逐渐降低,根据CCK-8实验结果分别筛选出浓度为10、50 μg/ml和100 μg/ml的盐酸罗哌卡因用于后续实验。盐酸罗哌卡因能够明显阻滞细胞周期于G2期,诱导细胞凋亡,抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达。结论:盐酸罗哌卡因能够抑制胃癌MGC-803细胞增殖,阻碍MGC-803细胞周期进程,诱导细胞凋亡,该过程可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。