珍珠梅黄酮纳米粒诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌Hep G-2细胞凋亡的影响。方法采用MTT法观察不同时间(24,48,72h)、不同浓度(50,100,200μmol/L)的珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌细胞(Hep G-2,Hep3B,PLC/PRF/5)及人正常肝细胞(Chang Liver)的增殖抑制作用;利用光学、荧光和透射电子显微镜观察Hep G-2细胞凋亡,并应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 MTT法检测细胞增殖抑制结果显示:不同浓度的珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌细胞(Hep G-2,Hep3B,PLC/PRF/5)及人正常肝细胞(Chang Liver)均有不同程度的抑制作用,对人肝癌Hep G-2细胞抑制最明显;形态学检测结果显示:珠梅黄酮纳米粒干预Hep G-2细胞48 h后,细胞出现明显的凋亡;流式细胞术检测阴性对照组、5-Fu阳性对照组及不同浓度珍珠梅黄酮纳米粒干预组(50,100μmol/L)凋亡率分别为为4.9%,89.6%,50.0%,86.2%。结论珠梅黄酮纳米粒可以抑制人肝癌Hep G-2生长并诱导其凋亡。     

乌索酸固体脂质纳米粒的制备及其抗肿瘤活性考察

目的:优选乌索酸固体脂质纳米粒的处方工艺并考察其理化性质及体外抗肿瘤活性。方法:采用薄膜分散法制备乌索酸固体脂质纳米粒,以包封率为指标,通过正交试验优选处方工艺;利用透射电镜、激光粒度测定仪等考察纳米粒的理化性质,通过MMT法检测其体外抗肿瘤活性。结果:最佳处方工艺为乌索酸90 mg,卵磷脂30 mg,硬脂酸10 mg,磷酸盐缓冲液浓度10 mmol·L-1;制备的乌索酸固体脂质纳米粒在透射电镜下呈球形或椭圆球形,平均粒径(184.7±18.3)nm,包封率(82.6±0.6)%,载药量(11.9±0.5)%,48 h体外累积释放率达81.21%,30 d内粒径与包封率均无明显变化。在5,10,20,40,80μmol·L-1时,乌索酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制率分别为(9.0±1.2)%,(15.7±2.8)%,(42.3±4.6)%,(78.7±6.9)%,(79.3±7.2)%;乌索酸固体脂质纳米粒的抑制率则分别为(9.0±1.3)%,(23.6±2.2)%,(59.3±6.1)%,(84.7±8.3)%,(85.0±8.1)%。结论:薄膜法分散法制备的乌索酸固体脂质纳米粒粒径适中、体外释放和稳定性良好,具有优良的抗肿瘤活性。     

隐丹参酮固体脂质纳米粒的制备及药动学研究

目的:制备隐丹参酮固体脂质纳米粒,比较大鼠灌胃给药后生物利用度提高情况。方法:薄膜超声法制备隐丹参酮固体脂质纳米粒,考察固体脂质纳米粒的粒径、Zeta电位和体外释放模型。将SD大鼠随机分为原料药组和隐丹参酮固体脂质纳米粒组,测定隐丹参酮的血药浓度,计算主要药动学参数。结果:隐丹参酮固体脂质纳米粒外观呈浅橙色乳光,平均粒径为(213.55±9.67)nm,Zeta电位为(-34.2±3.4)mV,包封率为(81.18±1.62)%,载药量为(5.25±0.67)%。隐丹参酮固体脂质纳米粒体外释药具有明显的缓释特征,释药模型符合Weibull模型:LnLn(1/1-M_t/M_∞)=0.8238Lnt-2.1241(r=0.9872)。药动学结果显示,隐丹参酮原料药的AUC_(0～t)为(622.59±107.04)μg/L·h,隐丹参酮固体脂质纳米粒AUC_(0～t)为(1 143.72±163.08)μg/L·h,相对生物利用度提高至1.84倍。结论:固体脂质纳米粒可有效促进隐丹参酮口服吸收,提高其口服吸收生物利用度。     

咪喹莫特固体脂质纳米粒的制备及其性能研究

 目的制备咪喹莫特固体脂质纳米粒,并考察其理化性质及其对透皮的影响。方法采用高压均质法制备咪喹莫特固体脂质纳米粒;采用透射电镜(TEM)观察纳米粒的形貌;光子相关光谱(PCS)测定其粒径大小和分布;紫外分光光度法测定载药纳米粒的包封率及载药量;MTT法进行细胞毒性试验,动态透析袋技术研究药物体外释放特性,采用Franz扩散法进行药物透皮试验。结果优化条件下制备的咪喹莫特固体脂质纳米粒平均粒径在(133±6)nm,多分散性指数(PI)值为0.348±0.05,平均包封率和载药量分别为(94.68±1.41)%和(4.73±0.07)%,体外释放呈现突释期和缓释释放期,对Hacat细胞无细胞毒性,增加了药物在皮肤层中的贮存量。结论咪喹莫特固体脂质纳米粒较优制备条件:癸酸与单硬脂酸甘油酯质量比为1∶3,S-40与Span-20质量比为1∶1;该咪喹莫特固体脂质纳米粒无皮肤刺激性,可望作为咪喹莫特经皮给药新制剂。     

莪术醇固体脂质纳米粒的制备及其抗肿瘤活性

目的制备莪术醇固体脂质纳米粒,并评价其抗肿瘤活性。方法乳化超声分散法制备固体脂质纳米粒,测定粒径、Zeta电位、包封率、载药量、体外释药、光稳定性(4 500 lx,25℃)。MTT法考察固体脂质纳米粒对人宫颈癌上皮细胞(Caski细胞)的抑制作用。结果所得莪术醇固体脂质纳米粒粒径为(198.84±4.17)nm,Zeta电位为(-21.8±2.5)mV,包封率为83.27%,载药量为3.83%,36 h内累积溶出度为61.81%;体外释药符合Weibull模型(R²=0.960 5);光照72 h后,莪术醇含有量仅降低了3.42%;对Caski细胞有较好的抑制作用,并呈量效和时效依赖性(P<0.05,P<0.01)。结论固体脂质纳米粒可明显提高莪术醇体外抗肿瘤活性。     

甘草次酸固体脂质纳米凝胶的制备及体外透皮效应

目的制备甘草次酸固体脂质纳米凝胶并考察其体外透皮效应。方法采用微乳液法制备甘草次酸固体脂质纳米粒并考察其包封率、粒径与表面电位,以研和法制备固体脂质纳米粒凝胶;采用改良Franz立式扩散池法进行体外透皮实验,HPLC法测定甘草次酸,评价甘草次酸固体脂质纳米粒凝胶的经皮渗透结果。结果甘草次酸固体脂质纳米粒外观为圆球形或椭球形;甘草次酸固体脂质纳米粒的包封率为(64.75±1.36)%,粒径范围(46.13±20.10)nm,电位分布范围为(-53.4±7.11)mV。24 h甘草次酸固体脂质纳米粒凝胶较甘草次酸固体脂质纳米粒的累积透过量提高66%。结论甘草次酸固体脂质纳米粒凝胶能提高甘草次酸的透皮速率,有望成为甘草次酸透皮给药的新型制剂。     

靶向熊果酸脂质纳米粒抗宫颈癌的作用研究

目的探讨靶向熊果酸脂质纳米制剂抗宫颈癌的作用效果。方法利用新型靶向性功能材料叶酸-CONH-聚乙二醇-NH-胆固醇合成靶向熊果酸脂质纳米粒,采用MTT法对比靶向熊果酸脂质纳米粒的人宫颈癌HeLa细胞和宫颈正常鳞状上皮细胞的增殖抑制作用的差异性;用流式细胞术考察其促细胞凋亡作用;应用蛋白免疫印迹(Western blotting)检测Bcl-2、Bax、Livin及Caspase-3的蛋白表达,用实时荧光定量-聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测基因表达,探索靶向熊果酸脂质纳米粒抗宫颈肿瘤的作用机制。初步考察靶向熊果酸脂质纳米粒在荷瘤鼠体内的抗肿瘤作用。结果靶向熊果酸脂质纳米粒对HeLa细胞具有显著的细胞增殖抑制及促细胞凋亡作用;使细胞中Livin、Bcl-2基因或蛋白表达增加,Caspase-3、Bax基因或蛋白表达减少;体内抑瘤效率高于普通熊果酸脂质纳米粒。结论靶向熊果酸脂质纳米粒可有效传输药物至肿瘤组织,抑制细胞的增殖,促使其凋亡,具有一定的体内抗肿瘤效果。     

川陈皮素固体脂质纳米粒的制备

目的通过优化固体脂质纳米粒处方,制备川陈皮素固体脂质纳米粒。方法采用热熔乳化超声-低温固化法制备固体脂质纳米粒,以山嵛酸甘油酯质量浓度、磷脂质量浓度和药脂比为考察对象,以包封率和粒径为评价指标,利用三因素三水平中心复合设计-效应面法优化处方;采用Malvern粒度仪测定纳米粒的粒径分布和Zeta电位,透射电镜考察其形态;并考察纳米粒的体外释药行为。结果川陈皮素固体脂质纳米粒的包封率为(91.8±2.7)%,粒径为(189.6±23.4)nm,Zeta电位为-31.8 mV,透射电镜显示微乳粒径均一,成球状分布,48 h累积释放为55%。结论固体脂质纳米粒能改善川陈皮素水难溶性,有望提高其在体内的生物利用度。     

HPLC法测定天山雪莲提取物固体脂质纳米粒载药量与包封率

目的:建立HPLC法同时测定天山雪莲提取物固体脂质纳米粒中绿原酸和芦丁的载药量和包封率的方法。方法:采用Shim-pack VP-ODS C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.4%磷酸(B),梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min;检测波长分别为327 nm、257 nm,柱温35℃。采用超滤法分离天山雪莲提取物固体脂质纳米粒与游离药物测定包封率。结果:绿原酸和芦丁分离度良好,质量浓度分别在9.625～96.25μg/mL、12.87～128.7μg/mL范围内与色谱峰面积均呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为(98.5±0.12)%和(99.40±0.21)%,精密度和稳定性较好。超滤法回收率分别为(99.31±0.97)%和(99.44±0.36)%。2种成分的重复性实验的RSD均小于2.0%。3批天山雪莲提取物固体脂质纳米粒中绿原酸和芦丁的包封率分别为(83.82±0.32)%和(87.78±0.80)%,载药量分别为(17.66±0.40)%和(20.14±0.33)%。结论:本法简单快速、结果准确可靠,可同时测定天山雪莲提取物固体脂质纳米粒中绿原酸和芦丁的载药量和包封率。     

聚多巴胺修饰的载榄香烯介孔二氧化硅纳米粒的制备及其靶向抗肿瘤活性研究

目的制备聚多巴胺(PDA)修饰的载榄香烯(ELE)介孔二氧化硅纳米粒(D/MSN-ELE),并对其进行处方工艺优化、质量评价、体外释放、体外抗肿瘤活性及促进细胞凋亡能力研究。方法通过溶液吸附法制备载榄香烯介孔二氧化硅纳米粒(MSN-ELE),聚合法制备聚多巴胺修饰的介孔二氧化硅纳米粒(D/MSN)和D/MSN-ELE,应用透射电子显微镜表征不同纳米粒的形态,热重分析计算PDA接枝率,HPLC法评价D/MSN-ELE载药量和包封率,透析袋法考察D/MSN-ELE的体外释放特性。采用MTT染色法,分析不同纳米粒对人胚胎成纤维HELF细胞和人非小细胞肺癌A549细胞的细胞毒性。采用流式细胞仪检测D/MSN-ELE活性氧水平和线粒体膜电位水平。结果最优制备工艺为药物与载体比例6∶1,温度为50℃,时间为8 h,此工艺条件下制备的D/MSN-ELE分布均一,粒径为(288.70±3.88)nm。其平均载药量和包封率分别为(11.58±0.73)%和(59.82±0.57)%。体外释药具有pH值响应性,累积释药量随pH值减小而增大。ELE、MSN-ELE和D/MSN-ELE对A549细胞的半数抑制...     

桔梗皂苷D抑制人结肠癌SW620细胞增殖及其机制的研究

 目的 研究桔梗皂苷D对人结肠癌SW620细胞增殖的影响及作用机制。方法 采用人结肠癌细胞株SW620细胞,分别以四甲基偶氮唑蓝法观察桔梗皂苷D对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞术检测桔梗皂苷D对细胞周期分布和凋亡的影响, 蛋白质免疫印迹法检测桔梗皂苷D对细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达的影响。结果 与空白对照组比较,桔梗皂苷D呈剂量依赖地抑制人结肠癌SW620细胞的生长;15、20 μmol·L^-1桔梗皂苷D作用细胞24 h后,显著增加G₀/G₁期细胞比例,分别为(72.83±5.26)%和(76.82±5.83)%(P<0.05,空白对照组(56.78±4.92)%,周期蛋白cyclinD1、c-myc、CDK6表达明显下调;10、15、20 μmol·L^-1桔梗皂苷D作用细胞48 h后,明显增加细胞凋亡率,分别为（19.5±5.1）%、（35.8±5.3）%和（43.8±4.0）%(P<0.05,空白对照组（8.93±5.72）%,相关蛋白pro-caspase3、PARP表达下降。结论 桔梗皂苷D通过调控周期蛋白cyclinD1、c-myc、CDK6的表达,将细胞阻滞于G₁期,进而诱导细胞凋亡,抑制人结肠癌细胞SW620的增殖。     

玳玳黄酮自微乳化微丸在大鼠体内的生物利用度研究

 目的 建立HPLC同时测定大鼠血浆中柚皮苷和新橙皮苷含量的方法,研究玳玳黄酮自微乳化微丸在大鼠体内的药物动力学和相对生物利用度。 方法 将随机分组的大鼠分别灌胃给药玳玳黄酮自微乳化微丸液及玳玳黄酮有效部位混悬液,剂量120 mg·kg^-1（按玳玳总黄酮含量计）,分别于0.083,0.167,0.333,0.5,0.667,1,2、4、6、8、10、12和24 h取血。采用HPLC同时测定血浆样品中柚皮苷和新橙皮苷的浓度,运用DAS 3.0药动学程序计算药动学参数。 结果 比较口服玳玳黄酮自微乳化微丸及玳玳黄酮有效部位混悬液的药动学参数,柚皮苷AUC_0-24分别为（17.710±6.588）和（9.139±1.982）mg·h·L^-1,ρ_max分别为（4.816±1.329）和（1.575±0.324） mg·L^-1,t_max分别为（0.611±0.086）和（0.917±0.204）h,t_1/2分别为（13.078±6.382）和（11.678±6.919）h,新橙皮苷AUC_0-24分别为（18.094±4.892）和（10.961±2.276）mg·h·L^-1,ρ_max分别为（5.657±1.391）和（2.096±0.512）mg·L^-1,t_max分别为（0.583±0.091）和（0.806±0.222）h,t_1/2分别为（14.606±7.562）和（10.985±6.963）h。以玳玳黄酮有效部位混悬液为参比,玳玳黄酮自微乳化微丸中柚皮苷和新橙皮苷的相对生物利用度分别为193.78% 和165.08%。 结论 玳玳黄酮研制成玳玳黄酮自微乳化微丸制剂能提高其口服生物利用度和改善其药剂学性质。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中16种胆汁酸及在甘草减毒研究中的应用

目的建立测定大鼠血浆中16种胆汁酸浓度的LC-MS/MS法。方法鼠血浆样品经过甲醇沉淀蛋白后,上清液挥干,流动相复溶后,用XtimateTMC18柱分离,以甲醇-醋酸铵及甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.25 m L·min-1,进样5μL分析。结果 16种胆汁酸在0.005 6~3.800 0μmol·L-1内,线性关系良好,定量下限浓度为0.005 6μmol·L-1,低、中、高浓度的萃取回收率在70.3%~107.2%之间,日内、日间RSD均小于12.9%。结论该方法准确可靠,灵敏度高,处理简便,适用于血浆中胆汁酸浓度的测定,为临床血浆样品中胆汁酸含量测定提供参考。     

小檗碱增强K562/DOX细胞对多柔比星敏感性的研究

 目的 探讨小檗碱增强耐药K562/DOX细胞对化疗药多柔比星的敏感性的作用。方法 四甲基偶氮唑蓝法检测小檗碱的细胞毒性及其对多柔比星抗肿瘤活性的增强作用;高内涵活细胞成像系统检测无毒剂量小檗碱作用后,多柔比星在K562/DOX细胞内的蓄积量;PI/Hoechst33342双染法检测小檗碱对多柔比星诱导的K562/DOX细胞凋亡的影响;罗丹明123蓄积实验检测小檗碱对P-糖蛋白外排功能的影响。结果 1 μmol·L^-1为小檗碱的无毒剂量,在此无毒剂量下,小檗碱使多柔比星对K562/DOX细胞的IC₅₀降低了1.5倍;1 μmol·L^-1小檗碱可使多柔比星在K562/DOX细胞内的蓄积量增加,增强多柔比星诱导的K562/DOX细胞凋亡, 增加K562/DOX细胞内罗丹明123的蓄积量,从而抑制P-糖蛋白的外排功能。结论 小檗碱可通过抑制K562/DOX细胞膜上P-糖蛋白的外排功能,增加K562/DOX细胞内多柔比星浓度,促进多柔比星对耐药细胞的诱导凋亡作用,逆转K562/DOX细胞的多药耐药性。     

刺囊酸预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

 目的 研究刺囊酸预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法 用终浓度分别为0.5, 5和50 μmol·L^-1的刺囊酸预处理原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞1 h, 予以缺氧3 h后, 再复氧2 h后,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、丙二醛含量及热休克蛋白70表达等指标,观察其对缺氧/复氧损伤的延迟保护作用,并探讨一氧化氮合成酶抑制剂0.1 mmol·L^-1的N-硝基-L-精氨酸甲酯、促分裂原活化蛋白激酶抑制剂50 μmol·L^-1的PD98059和1 μmol·L^-1K⁺-ATP通道阻断剂格列苯脲对其保护作用的影响。结果 与缺氧/复氧组比较,不同剂量的刺囊酸预处理组能显著提高细胞存活率,降低乳酸脱氢酶活性,呈剂量依赖性,且显著能增加超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低丙二醛含量,增加热休克蛋白70表达,能对抗缺氧/复氧损伤;而N-硝基-L-精氨酸甲酯和PD98059能部分取消刺囊酸预处理的上述保护作用。结论 刺囊酸预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤有显著抗氧化作用,且其保护作用机制可能与一氧化氮生成、促分裂原活化蛋白激酶活化及增加热休克蛋白70表达有关。     

重组大鼠长链2-羟酸氧化酶的克隆与表达

 目的 克隆表达大鼠长链2-羟酸氧化酶。方法 以鼠肾cDNA为模板,扩增大鼠长链2-羟酸氧化酶基因,连接到pET-28a(+)载体上构建重组质粒pET28a-rHao2,转化表达宿主Rosetta(DE3)。利用IPTG诱导重组蛋白的表达,并通过Ni柱纯化。通过监测DCIP在605 nm处吸光度值的变化来测定其对经典底物的酶动力学参数,验证活性。结果 成功构建了表达质粒pET28a-rHao2(β₁)和pET28a-rHao2(β₂),并诱导表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β₁和β₂,其对2-羟基辛酸的K_m分别为(25.1±1.9)和(24.6±1.2) μmol·L^-1;对2-羟基异己酸的K_m分别为(24.6±2.3)和(22.4±1.6) μmol·L^-1。结论 成功克隆表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β₁和β₂,获得了纯度高,活性好的重组酶,可为其体外底物及抑制剂的筛选提供模型。     

高效液相色谱-电喷雾源-质谱联用法测定紫杉醇热敏脂质体及其大鼠体内药动学研究

 目的 建立测定大鼠血浆中紫杉醇的高效液相色谱-电喷雾源-质谱联用（LC-MS/MS）方法,并进行大鼠体内药动学研究。方法 血浆经NaHCO₃溶液（pH 8.0）碱化后,用叔丁基甲醚提取。液相分离采用Zorbax SB C₁₈（2.1 mm×50 mm,3.5 μm）分析柱,柱温25 ℃,以甲醇-水（含0.5 mmol·L^-1乙酸铵）（70∶30,V/V）为流动相,流速为0.3 mL·min^-1,进样量5 μL;采用四级杆质谱检测器,电喷雾源（ESI）,正离子方式检测,在选择离子监测（SIM）模式下检测离子对m/z 876.3→308.1（紫杉醇）和m/z 830.2→549.2（多西他赛）。两组SD大鼠分别尾静脉推注7 mg·kg^-1紫杉醇热敏脂质体与紫杉醇注射液,采集血样后采用高效液相色谱-电喷雾源-质谱联用法测定血药浓度,计算主要药物动力学参数。结果 血浆中无干扰测定的内源性物质,每个样品的分析时间为3.5 min;紫杉醇在2~1 000 ng·mL^-1内呈良好的线性关系（r>0.998 5）,定量限为2 ng·mL^-1,日内、日间精密度RSD均小于15%。紫杉醇热敏脂质体的t_1/2β、MRT、AUC和CL与紫杉醇注射液均具有显著性差异。结论 本方法操作简便,特异性强,灵敏度高,可用于紫杉醇的药动学研究。与紫杉醇注射液相比,紫杉醇热敏脂质体能控制药物的释放,在一定程度上减轻了急性毒性,提高机体耐受性。     

高效液相色谱法测定人血清、脑脊液和胰液中利奈唑胺浓度

 目的 建立同时测定人血清、脑脊液、胰液中利奈唑胺药物浓度的HPLC测定方法。方法 以利培酮为内标物,在0.1 mol·L^-1NaOH碱性条件下甲基叔丁基醚-正丙醇=90∶10(V/V)液液提取,Shima-pack CLC-ODS-C₁₈(6.0 mm×150 mm,5 μm)色谱柱分离,流动相为甲醇-乙腈-磷酸缓冲溶液(0.02 mol·L^-1KH₂PO₄,H₃PO₄调pH 3.5)=20∶16∶64(V/V/V),流速1.0 mL·min^-1,柱温35 ℃,检测波长254 nm条件下测定。结果 血清中利奈唑胺在0.25~40.0 mg·L^-1内线性良好(r=0.999 9),3个浓度质控样本(0.8、8.0、25.0 mg·L^-1)的批内、批间变异(RSD)分别为1.64%~2.38%(n=5)、4.53%~6.34%(n=5),方法学和提取回收率分别为93.781%~97.393%(n=5)、72.318%~73.442%(n=5);脑脊液中在0.1~20.0 mg·L^-1内线性良好(r=0.999 3),3个浓度质控样本(0.2、2.0、15.0 mg·L^-1)的批内、批间变异(RSD)分别为3.84%~4.83%(n=5)、6.04%~8.16%(n=5),方法学和提取回收率分别为106.910%~110.971%(n=5)、73.226%~80.603%(n=5);胰液中在0.1~20.0 mg·L^-1内线性良好(r=0.999 4),3个浓度质控样本(0.2、2.0、15.0 mg·L^-1)的批内、批间变异(RSD)分别为2.96%~5.30%(n=5)、4.68%~6.40%(n=5),方法学和提取回收率分别为97.178%~105.072%(n=5)、73.333%~76.010%(n=5)。内标提取回收率＞87%。结论 本方法灵敏度高,准确性好,简便快捷,应用液液提取处理样本去除更多杂峰干扰,更广泛适用于临床,尤其适用于合并用药患者生物标本中利奈唑胺药物浓度的测定。     

冠脉宁片中化工染料检查及血竭素高氯酸盐含量测定研究

目的建立冠脉宁片中化工染料检查及血竭素高氯酸盐含量测定方法。方法采用高效液相色谱-串联质谱联用法(HPLC-MS/MS)对冠脉宁片中血竭药材可能存在的化工染料进行检查,并采用高效液相色谱法对其中的血竭素含量进行测定。化工染料检查使用色谱柱为:Agilent Zorbax-SB C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.02 mol·L-1乙酸铵和乙腈的混合溶液,梯度洗脱,520 nm检测;质谱采用ESI+扫描,二级离子扫描方式。血竭素含量测定使用的色谱柱为Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(37∶63),检测波长440 nm。结果 56批次样品中共有7批样品可检出苏丹红Ⅰ、Ⅳ以及808猩红等化工染料。血竭素高氯酸盐在0.408~816.6μg·m L-1内有良好的线性关系,回归方程为y=1.746 1×107ρ+2 419.9,r=1.000 0;平均回收率为98.37%(RSD为1.2%,n=6)。56批次样品中血竭素含量在0.01~0.25 mg·片-1内。结论所建立的方法简便,准确,快速,可用于冠脉宁片中血竭药材的质量控制。     

白首乌中3个C21甾体皂苷类成分对人肺癌A549细胞生长及周期的影响

目的:探讨白首乌的3个C_(21)甾体皂苷类成分对人肺癌A549细胞生长的抑制作用及对细胞周期的影响.方法:按浓度梯度配置3个C_(21)甾体皂苷类成分,使终浓度分别为5,10,20,40,60,80,100 μmol·L~(-1),采用MTT法检测3个C_(21)甾体皂苷类成分作用48 h各浓度对人肺癌A549细胞生长的抑制作用;分别选择3个C_(21)甾体皂苷类成分的IC_(50)近似浓度(47,34,60 μmol·L~(-1))处理细胞12,24,48 h后,采用流式细胞仪检测对细胞周期变化的影响.结果:分离得到的3个C_(21)甾体皂苷:隔山消苷C_1N、隔山消苷C_3N、隔山消苷K_1N作用48 h的IC_(50)分别为46.07,33.02,59.92μmol·L~(-1);细胞周期分析显示,随着作用时间的延长(12,24,48 h),隔山消苷C_1N、隔山消苷C_3N使G_0/G_1期细胞数逐渐增加,S和G_2/M期细胞数逐渐减少(P<0.05,P<0.01);隔山消苷K_1N使S期细胞数减少,G_2/M期细胞数增加(P<0.05,P<0.01).结论:3个甾体皂苷对A549细胞均有不同程度的生长抑制作用,并呈浓度依赖性,其作用机制可能与3个甾体皂苷诱导细胞周期阻滞有关.