石蜡包埋组织DNA的提取

多年存档的常规福尔马林固定石蜡包埋的病理标本,可用聚合酶链反应(PCR)技术进行回顾性研究或检测,但模板DNA的质量直接影响PCR的效果。本文以扩增c-Ki     

一种从石蜡包埋组织中快速提取DNA的方法

目的建立从甲醛固定石蜡包埋组织中高效、快速提取基因组DNA的方法。方法将一片10μm厚石蜡包埋大肠癌组织切片直接浸入150μl消化液中,56℃孵育0.5h、1h和2h,灭活蛋白酶K后离心取上清即为DNA提取物。琼脂糖凝胶电泳检测所提取DNA的片段分布,紫外分光光度法测定DNA的产量及纯度。以提取的DNA为模板,PCR扩增不同长度产物片段并进行产物的直接测序以评价提取方法。结果该提取方法能够获得较长片段的基因组DNA,从一片10μm厚石蜡切片中即可获得大约60μg的DNA,在0.5h消化条件下获取的模板DNA,即可实现对152bp、293bp、392bp和541bp等4种不同片段的100%扩增,1h消化组的PCR产物可直接用于DNA测序。结论建立了一种简单、快速地从甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的方法,只需一步消化即可获得满足普通PCR及测序需要的基因组DNA。     

石蜡包埋软骨组织中DNA提取方法的改良

<正>随着基因遗传学的发展,DNA检测技术也日臻完善,而对某些特定疾病的基因分析能为探究疾病的发病机制以及遗传概况提供可靠的方法学依据。各大医院的病理科均存留着大量的组织蜡块,从这些石蜡标本中提取DNA可以在短时间内获得足够的目标疾病DNA。目前已有多位学者对从石蜡     

石蜡包埋组织基因组DNA提取的条件优化

DNA提取是分子生物学研究的基础工作.在进行回顾性实验研究时,病理科保存的大量石蜡包埋组织(paraffin-embedded tissues, PETs)系分子生物学研究材料的可靠来源,但从福尔马林固定的PETs中提取高质量的DNA仍存在一定难度.PETs在制作过程中受到多种理化因素影响,造成DNA降解严重,使得PCR扩增结果不稳定.如何避免DNA分子损失,保持DNA相对完整和纯度是亟待解决的难题.本研究通过比较不同脱蜡方法和抽提方法所得DNA的质量,旨在找到一种安全有效的PETs中提取DNA的方法.     

探讨两种石蜡包埋组织DNA提取方法

正随着精准医学和个体化医学的快速发展,人们对分子检测的研究越来越广泛、越来越深入;寻找疾病的遗传学发病因素,对不同患者实施适于其病情的治疗及使用不同剂量的药物逐渐成为医学发展的方向[1,2]。新鲜组织、石蜡包埋组织、外周血、胸腹水等样本中核酸的提取,是分子生物学的基本要求。由于患者病程及身体状况等原因,很多情况下短期内获取人体新鲜组织、胸腹水等标本较困难,而甲醛固定石蜡包埋组织(formalin-fixed paraffin-embeded tissue,FFPET)     

石蜡包埋胃癌组织中DNA四种提取方法的探讨

目的探讨提取石蜡包埋胃癌组织中DNA的最佳方法。方法用蛋白酶K消化氯化钠盐析方法、蛋白酶K消化酚氯仿抽提方法、试剂盒方法及改良试剂盒方法,提取石蜡包埋胃癌组织中DNA,进行PCR扩增,应用凝胶电泳成像检出率(检出率=检出数/总例数)比较4种方法提取DNA质量的情况。结果改良试剂盒方法,凝胶电泳成像检出率95.5%(151/158),分别与蛋白酶K消化氯化钠盐析方法15.3%(4/26)、蛋白酶K消化酚氯仿抽提方法8.3%(1/12)、试剂盒方法19.2%(11/57)凝胶电泳成像检出率比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 4种提取DNA方法中改良试剂盒方法,是提取石蜡包埋胃癌组织中DNA的最佳方法。     

一种从冰冻组织中提取中期核并用于快速FISH分析的方法

一种从冰冻组织中提取中期核并用于快速ＦＩＳＨ分析的方法Ｈｅｄｌｅｙ等１９８３年第一次提出了从保存的组织中释放细胞核的方法，这种方法经过多次修改，但仍只适用于石蜡包埋的组织。本文建议的方法可以从－８０℃保存数年的冰冻组织中提取完整的细胞核，并可用于荧光...     

四种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较

背景:由于在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中对DNA造成的损害,影响了后续的聚合酶链反应等研究。选择一种简便有效且经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法成为研究者们关注和亟待解决的问题。目的:比较甲醛固定石蜡包埋组织中4种提取DNA的方法对DNA质量的影响,探讨一种操作简便、污染少、经济实用的石蜡包埋组织中提取DNA的方法。方法:取手术切除的普通甲醛固定石蜡包埋的非小细胞肺癌组织标本20例,分别以二甲苯脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、试剂盒法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法提取其DNA,然后进行电泳分析、紫外分光光度计测定A260/A280比值及PCR扩增。结果与结论:改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法和改良TES水浴脱蜡-试剂盒抽提DNA法可获得较大的DNA片段,且两种方法与试剂盒法所提取DNA的A260/A280值相比较,均有显著性意义(P0.05),4种方法的提取效率差异无显著性意义(P0.1),以改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法所得DNA为模板,扩增的目的条带亮度与阳性对照相当。结果证实改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法简便有效,所用试剂价格低廉,是一种经济实用的石蜡包埋组织DNA提取方法。     

石蜡包埋组织中3种DNA提取方法的比较及优化

近年来,分子病理学技术迅速从科研发展到常规的病理诊断.目前常规检测包括:细菌病毒的检测[1-3]、肿瘤相关基因的突变[4,5]、靶向药物的分子检测[6,7]等,存档的福尔马林固定-石蜡包埋组织(formalin fixed and paraffin embedded tissues,FFPET)常常是形态学研究的宝贵资源,回顾性基因的研究与患者的治疗和临床诊断密切相关.因此DNA提取的质量将直接影响所有以DNA为研究对象的分子生物学实验,对复杂的多重PCR如T/B细胞克隆评价[8]、应用Array-CGH[9]、MLAP-based测定[10]等DNA的质量和纯度提出更高的要求.但是从FFPET中提取DNA以及用DNA进行基因研究中存在检测成功率低、重复性差等问题,多数文献描述提取DNA方法成功率为60%～80%[11],因此提取DNA的质量、纯度、片段的长度决定后续实验的成功与否.同时,对石蜡组织提取DNA前样本的量在很多文献中描述不一,针对提取DNA的方法不同,选择最合适的组织样本量,本组研究通过比较不同抽提方法对肿瘤组织不同蜡膜用量所得DNA质量,总结3种提取DNA的方法对应最合适的蜡膜用量,建立标准化操作程序.     

甲醛固定石蜡包埋组织中DNA的三种提取方法比较

为了寻找最佳的自普通10％甲醛固定石蜡包埋组织中提取DNA的方法,取我院2000年手术切除的10％甲醛固定石蜡包埋的食管癌标本10例,分别以蛋白酶K消化酚氯仿抽提法,蛋白酶K消化氯化钠盐析法和不同pH值下加热提取法提取其DNA,然后进行电泳和PCR扩增分析。结果显示,蛋白酶K消化酚氯仿抽提法,蛋白酶K消化氯化钠盐析法所得DNA产量和质量均高于不同pH值下加热提取法。从而认为蛋白酶K消化氯化钠盐析法简便快捷,不用接触有毒的化学药品,是理想的DNA提纯方法。     

石蜡包埋组织PCR检测中DNA提取方法的比较及改进

目前,PCR常用于新鲜组织或细胞提取标本中的核酸分子的检测,较少用于检测石蜡包埋的陈旧组织中的DNA,其主要原因是后者核酸的提取较为困难。针对这种情况,我们在对文献报道的几种石蜡包埋组织提取DNA的方法进行了比较的基础上,进行了改进,提高了石蜡包埋组织提取DNA进行PCR的阳性率,现介绍如下。     

石蜡包埋组织提取DNA不同条件下的PCR扩增

背景：在甲醛固定石蜡包埋组织的制作及保存过程中会对DNA造成损害,提取的DNA在用于PCR扩增时部分结果并不理想。 目的：比较分析石蜡包埋组织中提取DNA应用于PCR反应的影响因素。 方法：从10.0 μm×2、10.0 μm×4和10.0 μm×5石蜡包埋食管癌组织切片中提取DNA,以0.05,0.1,0.2 μg模板DNA量扩增内参基因β-actin,PCR反应循环次数分别为35,40,45次,分析影响PCR反应的因素。 结果与结论：琼脂糖凝胶电泳结果显示以10.0 μm×2组织切片量,PCR反应循环次数40次,PCR反应模板DNA量      0.05 μg扩增取得的目的基因DNA的质量最高。说明减少石蜡包埋组织用量和减少模板DNA量有助于获得高质量的PCR反应条带,且PCR反应循环次数应大于40次,小于45次,再增加循环次数,则意义不大。 关键词：石蜡包埋组织;提取DNA;PCR反应;循环次数;模板DNA doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.11.017     

利用相差显微镜观察FISH检测石蜡包埋组织切片的理想酶消化程度

自1969年发展至今FISH检测技术操作程序得到了极大简化[1],临床病理科已广泛应用.石蜡包埋组织切片的FISH检测流程中,酶消化是关键步骤.理想的酶消化状态是获得清晰易判读的杂交信号.然而国内大多数实验室在判断酶消化是否达到理想状态尚缺乏简便有效的手段.许多工作人员根据文献报道或试剂盒推荐估计酶消化时间,在酶消化后染DAPI于荧光显微镜下观察消化是否达到理想状态,既浪费荧光染料又增加了汞灯的损耗,且操作烦琐.而事实上国外实验室FISH检测已多采用相差显微镜来判断酶的消化程度.本文现就采用相差显微镜观察判断FISH检测石蜡包埋组织切片的酶消化程度的有效性作一探讨.     

硬质酸石蜡包埋组织观察

本实验采用取10％甲醛、Bouin液分别固定新鲜兔的肾上腺和肺，常规脱水。取硬质酸按比例加入石蜡。置入恒温箱内溶解，然后放入彻底脱水组织，取消用二甲苯和石蜡完成对组织透明、浸蜡。用石蜡包埋、常规切片、染色。显微镜下观察；用甲醛固定的组织切片符合教学用片要求，而用Bouin液固定的则存在大量针尖大小的颗粒。     

石蜡包埋组织分子病理学研究进展

近年来,随着分子生物学技术的发展,人们越来越多地应用手术切除标本分析DNA改变,进而为某些疾病的诊断、预后评估以及防治研究等方面提供了分子水平的证据,也为病理学科的发展开辟了又一新的方向。 基因分忻依赖于高质量的DNA。过去主要限于从新鲜或冰冻组织和细胞中提取,而     

硬质酸石蜡包埋组织观察

制作组织切片时,用二甲苯混合石蜡对组织透明,其二甲苯对操作人员的危害众所周知,特别是加温二甲苯时挥发很大,对人体的危害更严重。20世纪80年代有人用硬质酸混合石蜡完成对病理组织的透明和浸蜡,这种方法减少了使用二甲苯。我们用这种方法制作正常组织切片并进行了观察。