Smad在牙本质涎磷蛋白基因表达中的作用

目的：研究Smad蛋白在牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因表达中的作用。方法：细胞培养,瞬时转染和报告基因检测。结果：转化生长因子β1(transforning growth factor-β1,TGF-β1)抑制DSPP基因启动子活性。过表达野生型Smad3蛋白显著增强了TGF-β1对DSPP基因表达的转录抑制,而过表达Smad3突变型蛋白则显著抑制了TGF-β1对DSPP基因启动子活性的影响。过表达Smad2野生型或突变型蛋白对TGF-β1抑制DSPP基因启动子活性无明显影响。结论：Smad3在介导TGF-b1对DSPP基因的转录调控中发挥重要的作用.     

牙本质涎磷蛋白的研究进展

牙本质涎磷蛋白及其蛋白剪切产物—牙本质涎蛋白和牙本质磷蛋白是在牙本质发育、矿化中起重要作用的非胶原蛋白.关于牙本质涎磷蛋白的结构、功能、表达以及翻译后修饰等均有大量的研究,使之对牙本质涎磷蛋白的认识不断深入.本文就近年来关于牙本质涎磷蛋白的研究现状作一综述.     

Cbfa1在Smad3调控牙本质涎磷蛋白基因转录过程中的作用

目的：研究转录因子核心结合因子a1（Cbfa1）在Smad3分子调控牙本质涎磷蛋白（DSPP）基因表达中的作用。方法：培养MDPC-23细胞,通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Cbfa1对TGF-β1调控目的基因dspp转录的影响。结果：Cbfa1可以抑制DSPP启动子的活性,TGF-β1可以降低Cbfa1对DSPP的抑制作用,当Cbfa1与Smad3共同作用于DSPP启动子时,对DSPP转录活性的抑制作用更强。Cbfa1的两个亚型Osf2和PEBP2αA在DSPP转录调控过程中可能发挥的功能不完全一致。结论：转录因子Cbfa1可以与Smad3共同作用,调控DSPP基因启动子的转录表达。     

c-Jun、c-Fos对人牙本质基质蛋白1基因转录调控作用的研究

目的观察c-Jun和c-Fos对人牙髓干细胞（human dental pulp stem cells,HDPSCs）牙本质基质蛋白1（dentin matrix protein 1,DMP1）基因转录活性的影响。方法将pRSV-c-Jun和pRSV-c-Fos瞬时转染至HDPSCs中,检测转染后不同时间c-Jun、c-Fos蛋白的表达变化。将重组报告基因载体pGL3-P-505～＋86与pRSV-c-Jun、pRSV-c-Fos分别共转染至细胞中,报告基因检测系统检测荧光素酶活性变化。结果瞬时转染c-Jun、c-Fos后,蛋白主要表达于HDPSCs细胞胞浆中,并且在转染48h后表达量均达到最高值;c-Jun和c-Fos能够降低pGL3-P-505～＋86的荧光素酶活性,c-Jun降低DMP1启动子区-505～＋86bp片段的荧光素酶活性更为显著（P〈0.05）。结论 c-Jun和c-Fos可降低人DMP1基因转录活性,是HDPSCs向成牙本质细胞方向分化重要的调节因子,DMP1基因启动子序列-110～-100bp区可能是c-Jun、c-Fos有效作用位点。     

牙本质涎磷蛋白在小鼠体外培养软骨细胞中的表达

目的:探讨牙本质涎磷蛋白(DentinSialophosphoprotein ,DSPP)在体外培养的软骨细胞中的表达。方法:采用免疫组化方法,检测培养的第3代小鼠鼻软骨细胞中DSPP的表达。结果:培养细胞胞浆呈阳性着色。结论:DSPP可在体外培养的软骨细胞中表达。     

牙本质涎磷蛋白在小鼠牙齿发育中的表达

目的：通过检测牙胚发育不同阶段牙本质涎磷蛋白（ｄｅｎｔｉｎ ｓｉａｌｏｐｈｏｐｒｏｔｉｅｎ,ＤＳＰＰ）的表达情况,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法：采用免疫组织化学染色技术,上鼠牙齿发育各阶段标本中ＤＳＰＰ的表达。结果：ＤＳＰＰ的蛋白表达始于钟状中期,在内釉细胞和正在极化的成牙本质细胞中表达,牙体组织形成开始,则转至成牙本质细胞下至牙冠硬组织完全形成。此阶段在成釉细胞有反复表达。牙齿萌发时,该蛋     

小鼠牙本质涎磷蛋白在大肠杆菌的表达和纯化

目的：在大肠杆菌中表达牙本质涎磷蛋白,并对重组蛋白进行纯化,为进一步制备抗牙本质涎磷蛋白抗体和功能研究奠定基础。方法：构建ＤＳＰＰ－ ｐＰｒｏＥＸＨＴｃ 表达载体,重组子以大肠杆菌ＢＬ２１ 为宿主细胞进行诱导表达,表达产物经镍－ 次氮基三乙酸（Ｎｉ－ ＮＴＡ）柱进行亲和层析纯化。结果：工程菌经２０ｈ 诱导后,在ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ上出现一条新的蛋白带,Ｍｒ１０７ ×１０３ 左右,经Ｎｉ－ ＮＴＡ 柱纯化后获得纯度为９５ ％ 的小鼠牙本质涎磷蛋白。结论：获得Ｍｒ １０７×１０３ 的牙本质涎磷蛋白。     

正畸牙根吸收与龈沟液中牙本质涎磷蛋白和牙本质涎蛋白相关性的实验研究

目的 探讨大鼠龈沟液中牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质涎蛋白(DSP)的表达与实验性牙移动所致牙根吸收的关系.方法 36只健康Wistardd大鼠随机分成3组:对照组、轻力组、重力组.以上颌切牙为支抗,轻力组和重力组分别以0.392、0.98 N力拉右侧上颌第一磨牙向近中移动.加力7 d后,提取龈沟液,制备实验牙及其...     

小鼠牙胚、软骨组织中牙本质涎磷蛋白基因的克隆

目的：从小鼠牙胚、软骨组织中克隆牙本质涎磷蛋白基因（dentin sialophosphoprotein,DSPP)。方法：采用RT-PCR方法,从小鼠牙胚及软骨组织中克隆DSPP基因片段,将所得片段装入载体pGEM-TEasyVector进行序列测定。结果：从两种组织中均获得719bp的特异性片段,序列分析表明,与已发表的DSPP序列99.7%同源。结论：成功地从小鼠牙胚。软骨中克隆到DSPP基因部分序列。结果提示：除牙齿组织外,DSPP还可在软骨中表达,它可能并非是检测成牙本质细胞的特异性指标。     

小鼠牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的克隆和序列测定

目的　克隆并测定小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因上游启动子的序列。方法　提取成年Balb/c鼠基因 组DNA,设计引物,通过聚合酶链反应(PCR)得到小鼠牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的序列。再将目的片段定向 连入T载体,酶切鉴定并测序。结果　将小鼠牙本质涎磷蛋白基因上游启动子序列分3段克隆,分别得到997 bp、 1 004 bp及674 bp大小的目的片段。连入载体后,酶切结果测定重组质粒成功。其测序结果与小鼠基因组染色体 位置5q21处的相应序列99%一致。结论　成功克隆到牙本质涎磷蛋白基因上游启动子的序列,为进一步研究 DSPP基因的转录调控机制奠定了基础。     

牙本质涎磷蛋白反义核酸对牙胚超微结构的影响

目的　探讨牙本质涎磷蛋白(DSPP)在牙胚发育和矿化中的作用及其机制。方法　胎龄为17 d Balb/C 胎鼠上颌第一磨牙,分为2组,对照组牙胚置于无血清BGJb半固定培养基中培养;DSPP反义核酸组牙胚置于含有 30μmol/L,长15 bp的DSPP反义寡核苷酸的半固体培养基中培养。牙胚体外培养10 d后,进行透射电镜观察。结果　2组牙胚牙尖处成牙本质细胞中均含有大量的细胞器,线粒体肿胀,粗面内质网扩张,且DSPP反义核酸组成牙本质细胞中粗面内质网扩张更为明显;胞外基质超微结构显示:对照组胶原纤维聚集成束,排列具有一定的方向, 牙尖基质带平均厚度为3μm ;DSPP反义核酸组胶原纤维粗细不等,排列紊乱,牙尖基质带平均厚度为2·5μm。结论　DSPP可能通过控制成牙本质细胞正常的分泌功能、胶原纤维的正常形态和排列在牙胚生长、矿化中起重要作用。     

c-Fos和RANKL在大鼠实验性根尖周炎中表达的相关性研究

目的：观察大鼠实验性根尖周病变过程中c-Fos和RANKL的表达与分布。方法：将25只Wistar大鼠下颌第一磨牙开髓,分别于术后0,7,14,21,28d取下颌骨,制备组织切片后用免疫组织化学的方法检测c-Fos和RANKL的表达与分布。结果：c-Fos和RANKL在正常根尖周组织中偶见表达;术后14d两者表达上升至高峰;术后21～28d两者数量明显减少。自0～28d,c-Fos和RANKL的表达呈正相关。结论：c-Fos和RANKL在大鼠实验性根尖周病变中表达呈正相关,可能共同参与根尖周炎的病变过程。     

c-Jun调控成釉细胞Amelotin基因表达的研究

目的:通过过表达及knockdown c-Jun基因,观察小鼠成釉细胞中釉成熟蛋白(amelotin)的表达变化,以初步确定c-Jun对amelotin的调控作用。方法:①应用免疫组化和细胞免疫荧光方法观察体内外成釉细胞中的c-Jun及amelotin的表达情况;②RT-PCR获得c-Jun基因,克隆至pcDNA3.1/myc-hisA,瞬时转染成釉细胞,real time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响;③化学合成c-Jun siRNA,瞬时转染成釉细胞,re-al time RT-PCR观察其对amelotin表达的影响。结果:①体内外成釉细胞中c-Jun和amelotin均有表达,c-Jun主要在成釉细胞胞核中表达,amelotin在成釉细胞和釉质全层均有表达;②成功构建c-Jun真核重组表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-c-Jun,转染成釉细胞后amelotin mRNA表达水平显著上升;③成功沉默c-Jun,amelotin在转染c-Jun siRNA组表达水平显著下降。结论:在成釉细胞中,c-Jun在转录水平调控amelotin基因的表达。     

活性氧/c-Jun氨基末端激酶/核因子-κB信号分子通过调控凋亡参与牙周炎诱导肝损伤

目的 牙周炎和非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的发生发展与活性氧（ROS）的大量积累密切相关。ROS参与调控c-Jun氨基末端激酶（JNK）/核因子-κB（NF-κB）信号分子的激活,当该信号分子被ROS过度激活后可引发机体内环境紊乱。因此,本研究旨在探究ROS/JNK/NF-κB信号分子在牙周炎诱导肝损伤中的作用机制。 方法 将12只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组和牙周炎组,在牙周炎组大鼠双侧上颌第一磨牙颈部进行钢丝结扎构建牙周炎模型,8周后检查大鼠牙周临床指标并处死,Micro-CT重建牙槽骨三维结构并分析牙槽骨吸收情况,组织病理学分析牙周及肝组织的病理改变,MitoSOX red试剂检测肝组织中ROS含量,生化试剂盒检测肝功指标和氧化应激生物标志物,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肝组织中NF-κB、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、BCL2-Associated X的蛋白质（Bax）和B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）mRNA表达水平,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测肝组织中磷酸化c-Jun氨基末端激酶（P-JNK）、JNK、NF-κB、Bax、Bcl-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白表达水平,末端脱氧核苷酸转移酶dUTP缺口末端标记（TUNEL）染色法检测肝细胞凋亡。 结果 Micro-CT结果显示,牙周炎组大鼠牙槽骨骨质吸收明显,且釉牙骨质界到牙槽嵴顶的距离明显大于对照组。组织病理学结果显示,牙周炎组大鼠牙周组织内可见大量炎症细胞浸润和牙槽骨明显吸收;肝组织结构破坏,可见大量气球样变和红色脂滴形成。MitoSOX red染色结果显示牙周炎组肝组织中ROS含量明显升高。生化检测结果显示,牙周炎组血清中谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）含量升高;肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）含量降低,丙二醛（MDA）含量升高。qRT-PCR和Western blot结果显示,牙周炎组肝组织中IL-6、TNF-α、Bax和NF-κB mRNA及P-JNK/JNK、NF-κB、Caspase-3和Bax蛋白表达水平较对照组显著上升,而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平下降。TUNEL染色结果显示牙周炎组肝组织中凋亡细胞数量明显增多。 结论 ROS/JNK/ NF-κB信号分子通过调控细胞凋亡参与牙周炎诱导肝损伤。     

卵黄高磷蛋白调控生物玻璃对牙本质的再矿化

目的:探讨卵黄高磷蛋白(PV)调控生物活性玻璃对脱矿牙本质再矿化的能力.方法:制备120片牙本质切片,随机分为6组,A组为对照组(SBF模拟体液),B组为100 mg/L PV,C组为500 mg/L PV,D组为SBF+生物活性玻璃(BG),E组为100 mg/L PV+BG组,F组为500 mg/L PV+BG组....     

Assessment of c-Jun, c-Fos and cyclin D1 in premalignant and malignant oral lesions

Some oral cancers are known to develop from dysplastic oral epithelium. In the present study, the expression of c-Jun, c-Fos, and cyclin D1 proteins in oral epithelial lesions with different degrees of dysplasia, and in oral squamous cell carcinomas (OSCCs) was evaluated. Eighteen cases of mild dysplasia, 23 cases of moderate to severe dysplasia and 24 OSCCs were studied immunohistochemically. Additionally, 15 sections of oral mucosa without any evidence of dysplasia were included in the study. Results: c-Jun expression increased according to the degree of oral dysplasia, with the greatest expression found in OSCC. c-Fos expression was intense in normal mucosa, reduced in mild dysplasia and high in moderate to severe dysplasia and in OSCCs. Cyclin D1 was expressed in only a few cases of moderate to severe dysplasia and in most of the OSCCs. Statistical analysis showed a correlation between the three proteins and the degree of epithelial alteration. The present results indicate a possible role of c-Jun and c-Fos in malignant transformation of oral mucosa.