碱性成纤维细胞生长因子在烟草烟雾诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨烟草烟雾提取物对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及碱性成纤维细胞生长因子在其中的作用。方法按不同浓度烟草烟雾提取物(0、2.5%、5%、10%和20%)分为对照组、低浓度、中等浓度、高浓度和过高浓度烟草烟雾提取物组刺激血管平滑肌细胞,采用MTT法观察细胞增殖变化,免疫细胞化学法测定碱性成纤维细胞生长因子和增殖细胞核抗原蛋白的表达,同时用逆转录-聚合酶链反应法检测碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达。用筛选出的最适烟草烟雾提取物浓度处理大鼠血管平滑肌细胞不同时间(0、4、8、12 h和24 h)后,检测碱性成纤维细胞生长因子mRNA及碱性成纤维细胞生长因子和增殖细胞核抗原蛋白的变化。用碱性成纤维细胞生长因子抗体和最适浓度烟草烟雾提取物干预血管平滑肌细胞24 h后检测细胞增殖及碱性成纤维细胞生长因子和增殖细胞核抗原蛋白表达的变化。结果 (1)与对照组相比,低浓度烟草烟雾提取物组(P0.05)和中浓度组血管平滑肌细胞增加明显(P0.01),而高浓度组和过高浓度组与对照组比较差异无显著性(P0.05)。碱性成纤维细胞生长因子mRNA、蛋白和增殖细胞核抗原蛋白在对照组中有少量表达,低浓度烟草烟雾提取物组表达增加(P0.01),中浓度烟草烟雾提取物组达到高峰,高浓度和过高浓度烟草烟雾提取物组仍高于对照组(P0.01)。(2)对照组(不加烟草烟雾提取物组即0 h组)血管平滑肌细胞中有少量碱性成纤维细胞生长因子mRNA、蛋白和增殖细胞核抗原蛋白表达。低浓度烟草烟雾提取物刺激4 h后细胞内碱性成纤维细胞生长因子mRNA、蛋白和增殖细胞核抗原蛋白表达增加(P0.01),碱性成纤维细胞生长因子mRNA于8 h达高峰;碱性成纤维细胞生长因子和增殖细胞核抗原蛋白于12 h达高峰。(3)碱性成纤维细胞生长因子抗体可显著抑制5%烟草烟雾提取物诱导的血管平滑肌细胞增殖和碱性成纤维细胞生长因子、增殖细胞核抗原蛋白表达增加。结论低浓度和中浓度烟草烟雾提取物对大鼠血管平滑肌细胞的促增殖作用逐渐增加;高浓度和过高浓度组时促增殖作用反而减弱。烟草烟雾提取物可能是通过增加碱性成纤维细胞生长因子的表达促进大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

辣椒素对高盐致大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究辣椒素对高盐诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用。方法组织贴壁法培养原代大鼠血管平滑肌细胞,根据MTT结果绘制大鼠血管平滑肌细胞的生长曲线,大鼠血管平滑肌细胞传至第4代去血清同步化24 h,不同浓度辣椒素(0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L)进行高盐培养72 h,MTT比色法检测大鼠血管平滑肌细胞增殖情况,选取抑制血管平滑肌细胞增殖的辣椒素浓度进行后续实验。CCK-8检测渗透压对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞增殖周期,免疫荧光染色法和Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,实时荧光定量PCR检测瞬时受体电位家族香草醛1型受体(TRPV1)mRNA的表达,Western blot检测瞬时受体电位家族香草醛1型受体的蛋白表达。结果 MTT结果显示,辣椒素浓度为10μmol/L时大鼠血管平滑肌细胞增殖开始受抑制,100μmol/L时抑制作用增强(P0.05),选取10μmol/L辣椒素进行后续实验。CCK-8结果显示,高盐组细胞明显增殖,而甘露醇组、正常组和高盐+辣椒素组无差异。流式细胞仪测得高盐组G0/G1、G2/M期细胞比例减少(P0.05),S期细胞比例增多(P0.05);与高盐组比较,高盐+辣椒素组G0/G1、G2/M期细胞比例增加(P0.05),S期细胞比例下降(P0.05)。免疫荧光及Western blot结果显示,高盐组增殖细胞核抗原阳性细胞核增多,蛋白表达增加(P0.05),而高盐+辣椒素组增殖细胞核抗原阳性细胞核减少,蛋白表达减少(P0.05)。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示高盐组瞬时受体电位家族香草醛1型受体mRNA及蛋白表达减少(P0.05),辣椒素组则增加(P0.05)。结论辣椒素可抑制高盐所致的大鼠血管平滑肌细胞增殖,其作用机制可能与激活瞬时受体电位家族香草醛1型受体表达有关。     

蜂胶水提液对人脐动脉平滑肌细胞增殖作用的影响

目的 观察蜂胶水提液对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖作用的影响.方法 贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞,用50、100和200 mg/L蜂胶水提液进行干预.细胞计数法检测人脐动脉平滑肌细胞数量;流式细胞仪检测细胞周期;免疫细胞化学法观察增殖细胞核抗原;分光光度计检测培养液中超氧化物歧化酶及丙二醛的含量;用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测细胞凋亡.结果 100 mg/L和200mg/L的蜂胶水提液能减少血管紧张素Ⅱ对细胞的增殖作用,增加G0/G1期细胞的百分比,降低增殖细胞核抗原阳性率,蜂胶各浓度组总超氧化物歧化酶活力升高,而丙二醛含量降低,凋亡指数降低(P<0.01).结论 一定浓度的蜂胶水提液能抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖;机制可能与蜂胶水提液影响细胞增殖周期、抑制增殖细胞核抗原的表达、提高人脐动脉平滑肌细胞抗氧化能力有关.     

半边莲生物碱抑制内皮素诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖

目的研究半边莲生物碱对内皮素诱导的血管平滑肌细胞增殖的作用。方法用内皮素1剌激大鼠主动脉平滑肌细胞增殖,以细胞计数试剂盒计数细胞个数、氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入检测DNA的合成量、免疫细胞化学技术观察增殖细胞核抗原的表达活性作为细胞增殖的指标,并应用台盼兰拒染、乳酸脱氢酶检测观察半边莲生物碱的细胞毒性反应。结果内皮素1(10-7mol/L)可明显促进细胞增殖(与对照组相比,P<0.01);半边莲生物碱和BQ-123均可抑制内皮素1所诱导的细胞增殖(与内皮素1组相比,P<0.05);半边莲生物碱的抑制作用与浓度存在明显的依赖关系,但对活细胞数目和乳酸脱氢酶释放量均没有影响(P>0.05)。结论半边莲生物碱(50~200 mg/L)可浓度依赖性地抑制内皮素1所诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖,且此抑制作用并非是通过细胞毒性作用实现的。     

γ-干扰素对大鼠血管平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原表达的影响

为观察γ 干扰素对血管平滑肌细胞增殖的影响及探讨其作用机制 ,培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,以γ 干扰素 (5 0 0ku L)刺激血管平滑肌细胞 2 4h后 ,通过氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法及Western杂交印迹法观察γ 干扰素作用 2 4h对大鼠血管平滑肌细胞DNA合成及增殖细胞核抗原表达的影响。结果发现γ 干扰素明显抑制 10 %胎牛血清刺激血管平滑肌细胞引起的增殖细胞核抗原表达增多及氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷掺入增高 (P <0 .0 1) ,表明γ 干扰素具有较强的抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用。     

表皮生长因子受体在血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨表皮生长因子受体在血管紧张素Ⅱ促大鼠血管平滑肌细胞增殖效应中的作用。方法用反义表皮生长因子受体寡核苷酸脂质体复合物转染SD大鼠血管平滑肌细胞,用逆转录聚合酶链反应、Western-Blot-ing分别检测转染后表皮生长因子受体mRNA及蛋白的表达情况,用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验检测血管平滑肌细胞的增殖情况。结果反义组大鼠血管平滑肌细胞表皮生长因子受体mRNA表达(0.18±0.03)较正义组(0.61±0.11)及对照组(0.66±0.09)明显减少(P<0.05),反义组大鼠血管平滑肌细胞表皮生长因子受体蛋白的表达(43.1±8.4)较正义组(92.6±10.5)及对照组(100.7±11.3)明显减少(P<0.05);反义组细胞的氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率(1055.1±95.7)较正义组(1882.4±129.7)及对照组(2013.3±121.3)明显降低(P<0.05)。结论表皮生长因子受体在血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖中起重要作用。     

水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的兔胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制.选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞,在与凝血酶(4.0 ku/L)共同孵育的条件下,分别给予水蛭素(6.0 ku/L)和肝素(6.O ku/L)进行干预.通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞周期,免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达.结果发现,重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖,其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关.     

阿司匹林对脂多糖诱导的大鼠平滑肌细胞增殖的影响

目的观察阿司匹林对脂多糖(LPS)诱导的体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法采用组织贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞,选3-9代细胞用于实验。用乳酸脱氢酶活性测定法进行细胞毒性试验,观察阿司匹林加入对细胞有无毒性。采用四唑盐比色法计数不同浓度阿司匹林处理下,LPS诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖数量的变化。用流式细胞仪检测分别加入LPS和阿司匹林2mmol/L后大鼠血管平滑肌细胞周期变化。结果与对照组比较,阿司匹林5mmol/L组细胞上清液中乳酸脱氢酶活性无明显升高(P>0.05)。阿司匹林(0.5、1、2mmol/L)呈剂量依赖性的抑制大鼠主动脉平滑肌细胞的增值,实验显示2mmol/L浓度的阿司匹林在培养第五天时抑制的效果最大,与LPS组比较有极显著的差异。与LPS组比较,阿司匹林(2mmol/L)可使细胞静止期/DNA合成前期(Go/G1)的大鼠主动脉平滑肌细胞所占比例显著升高,而DNA合成期(S期)细胞所占比例显著降低。结论阿司匹林能呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖,并将细胞抑制在G0/G1。     

罗格列酮抑制体外培养大鼠血管平滑肌细胞的增殖和迁移作用

目的 探讨罗格列酮对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及迁移行为的影响.方法 组织贴块法原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞,胞浆内免疫组织化学染色鉴定细胞.取第5代纯化细胞无血清培养使细胞同步,用血小板源性生长因子BB或碱性纤维细胞生长因子诱导细胞增殖和迁移,之前不加或加入罗格列酮(1、5和10μmol/L)进行预处理.应用免疫组织化学染色法检测细胞核内增殖细胞核抗原的表达,流式细胞仪分析细胞周期分布,Boyden趋化小室观测细胞迁移能力.结果 罗格列酮能够显著抑制血小板源性生长因子BB或碱性纤维细胞生长因子诱导的平滑肌细胞核内增殖细胞核抗原的表达,抑制细胞由G0/G1期向S期的转变,抑制细胞在Boyden室间的迁徙,且呈明显的荆量依赖关系(P<0.0001).结论 罗格列酮能够抑制血小板源性生长因子BB或碱性纤维细胞生长因子诱导的血管平滑肌细胞的增殖和迁移.     

水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的免胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制。选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞，在与凝血酶(4．0ku／L)共同孵育的条件下，分别给予水蛭素(6．0ku／L)和肝素(6．0ku／L)进行干预。通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性，流式细胞术检测细胞周期，免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达。结果发现，重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖，其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关。     

纤维蛋白原诱导大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及趋化

目的观察不同浓度纤维蛋白原对体外培养的血管平滑肌细胞增殖、趋化和随机迁移的影响,探讨其致动脉粥样硬化的可能作用及其机制。方法采用胶原酶消化法培养大鼠主动脉平滑肌细胞,用BrdU掺入法和细胞计数法观察其增殖能力,刮伤实验及慢速显微摄像技术检测其随机迁移能力,微孔滤膜法观察其趋化性,Western印迹法检测其明胶酶A的表达,明胶酶谱分析其分泌的明胶酶活性。结果细胞计数(r=0.860,P<0.05)和BrdU掺入实验(r=0.880,P<0.05)发现0.2gL～3.2gL纤维蛋白原呈剂量依赖性地促进血管平滑肌细胞增殖,其中0.4、0.8、1.6和3.2gL纤维蛋白原作用48h,细胞计数依次为(6.32±0.39)×107L、(10.63±0.25)×107L、(12.31±0.44)×107L和(13.59±0.43)×107L,BrdU掺入率依次为5.2%±2.2%、17.5%±2.0%、21.5%±2.3%和25.5%±2.5%,与对照组[分别为(5.63±0.34)×107L和2.0%±0.8%]比较差异均有显著性(P<0.01)。微孔滤膜法趋化实验发现0.2gL～3.2gL纤维蛋白原呈剂量依赖性地促进血管平滑肌细胞趋化(r=0.957,P<0.01)。刮伤实验中细胞迁移速度及慢速显微摄像单细胞随机迁移速度在纤维蛋白原组及对照组细胞均无明显差别(P>0.05)。Western印迹及明胶酶谱发现纤维蛋白原促使血管平滑肌细胞明胶酶A的表达及活性上调。结论纤维蛋白原可能通过促进血管平滑肌细胞增殖和趋化在动脉粥样硬化发生过程中起重要作用。     

葛根素抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的　观察葛根素对T诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法　建立凝血酶(T)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖模型,以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定的方法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。结果　T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4小时末达峰,且T浓度在0 . 1U/L～1 . 0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖与DNA合成。结论　葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖。     

糖基化终产物对平滑肌细胞增殖及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响

目的探讨糖基化终产物对大鼠平滑肌细胞增殖以及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响。方法体外分离培养大鼠平滑肌细胞,以不同浓度(50、100、200和400mg/L)糖基化终产物作用于平滑肌细胞不同时间(0、4、8、16、24、48、72和96h),MTT法观察糖基化终产物对平滑肌细胞增殖的影响,逆转录聚合酶链反应测定纤溶酶原激活物抑制剂1基因的表达。结果不同浓度的糖基化终产物作用8h均对平滑肌细胞增殖无影响,以后各时间点不同浓度的糖基化终产物均导致平滑肌细胞增殖,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。糖基化终产物作用不同时间均可使平滑肌细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂1基因水平升高,且随着浓度升高而增加(分别为0.85±0.05、0.97±0.05、1.08±0.12和1.41±0.05),与对照组(0.80±0.03)比较差异有显著性(P<0.05)。结论糖基化终产物诱导血管平滑肌细胞增殖并增加纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达是糖尿病患者易患动脉粥样硬化的可能原因。     

自发性高血压大鼠神经肽Y-Y1受体在脑血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨神经肽Y-Y1受体激动剂[Leu~(31),Pro~(34)]-NPY对体外培养的自发性高血压大鼠(SHR)脑血管平滑肌细胞促增殖作用的影响。方法应用植块法体外培养SHR大脑动脉血管平滑肌细胞,分别用正常细胞外液、10~(-5)或10~(-8)NPY,10~(-6)硝苯地平,10~(-6)硝苯地平 10~(-6)mol/L NPY加入培养液培养细胞。用免疫荧光法检测平滑肌培养细胞中增殖核抗原(PCNA)的表达,用流式细胞仪对平滑肌细胞的S期细胞进行检测分析。结果随着[Leu~(31),Pro~(34)]-NPY浓度的增加,平滑肌细胞PCNA阳性率递增,与对照组相比其阳性率有明显差别(P<0·001)。硝苯地平明显抑制PCNA阳性率。与硝苯地平 10~(-6)mol/L NPY相比,PCNA阳性率有显著差异(5·1±0·5vs17·7±2·5,P=0·009)。随着NPY浓度增加,血管平滑肌细胞S期百分数也是增加的,10~(-5)、10~(-6)mol/L NPY组与对照组相比有差别(P<0·05)。硝苯地平组与硝苯地平 10~(-6)mol/L NPY比较,S期细胞百分数有显著差异(P=0·0023)。结论NPY-Y1受体激动剂对血管平滑肌细胞具有浓度依赖性的PCNA表达增强作用,能够提高血管平滑肌细胞S期比例。L型钙离子拮抗剂能够减弱NPY-Y1受体激动剂的促平滑肌细胞增殖作用。     

神经肽Y对血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达的诱导作用

为探讨神经肽Ｙ对血管壁平滑肌细胞凋亡相关基因表达的诱导作用,以体外培养血管平滑肌细胞模型为研究对象,运用免疫荧光组织化学技术和激光共聚焦显微镜定量研究神经肽Ｙ因管平滑肌细胞凋亡基因ｂｃｌ－２,ｂａｘ和ｆａｓ表达的影响,以阐明神经肽Ｙ参与高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病发生的分子机制。     

腹部脂肪组织分泌抵抗素样分子α促进清道夫受体表达

目的探讨腹部脂肪组织抵抗素样分子α(RELMα)mRNA及蛋白表达情况,研究其对与动脉粥样硬化密切相关的巨噬细胞清道夫受体B(CD36)及平滑肌细胞清道夫受体A(SR-A)表达的影响。方法取C57BL/6J小鼠腹部脂肪组织,体外培养巨噬细胞及平滑肌细胞,用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL,ox-LDC组)以及终浓度为3×10~(-6)mmol/L(A组)、9×10~(-6)mmol/L(B组)、2.7×10~(-5)mmol/L(C组)的RELMα刺激培养细胞,对照组加等量生理盐水刺激细胞。采用RT-PCR及免疫组织化学检测脂肪细胞内RELMα表达,采用流式细胞仪检测CD36及SR-A表达。结果小鼠腹部脂肪组织可见RELMαmRNA蛋白阳性表达。与对照组比较,ox-LDL组CD36荧光强度明显增强,SR-A表达阳性率明显升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,A、B、C组SR-A表达阳性率明显升高(P<0.05)。结论小鼠腹部脂肪组织能分泌RELMα,其不影响巨噬细胞CD36的表达,但能促进ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达,提示腹部脂肪组织可能通过RELMα,影响SR-A表达从而促进动脉粥样硬化进展。     

神经肽Y对血管平滑肌增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和c-myc基因表达的影响

以体外培养的血管平滑肌细胞模型为研究对象,在运用免疫荧光细胞组织化学技术和激光共聚焦显微镜定量研究神经肽Y的作用下,观察血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和c- myc 原癌基因表达的平均荧光值变化,以阐明神经肽Y 参与高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病发生的病理机制。结果发现,对照组中增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和c- myc 原癌基因表达的平均荧光值分别为1542.71 ±200.04 、815.28±116.48 和1620.26±174.58,神经肽Y则可促进增殖细胞核抗原、血小板源性生长因子和c- myc 原癌基因在血管平滑肌细胞中的表达,其平均荧光值分别为1648.56±232.71、1225 .46±101 .84 和1740 .35 ±205 .91,其中以血小板源性生长因子的表达差异最为明显(P< 0.01)。结果提示,神经肽Y可促进血管平滑肌细胞的增殖,并诱导血小板源性生长因子和c- myc 原癌基因表达增强。