孕妇弓形虫感染的研究进展

弓形虫病（Toxoplasmosis）是由刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）寄生于人体脑、眼、肺脏、心脏、淋巴结等组织引起炎性破坏性病变的寄生虫病。     

孕妇弓形虫感染的研究进展

弓形虫病（Toxoplasmosis）是由刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）寄生于人体脑、眼、肺脏、心脏、淋巴结等组织引起炎性破坏性病变的寄生虫病。     

刚地弓形虫RH株速殖子在HeLa细胞系体外培养的实验观察

目的 建立稳定高效的刚地弓形虫RH株速殖子(以下简称弓形虫速殖子)体外培养模型。 方法 ①将HeLa细胞（1×10⁴个）接种置于细胞培养皿内底部的盖玻片,12 h后将纯化的弓形虫速殖子接种于细胞培养皿（1×10⁴个/皿）,继续培养0.5～96 h,观察弓形虫速殖子在HeLa细胞内增殖情况;②将纯化的弓形虫速殖子接种于HeLa细胞后分为2组,一组于37 ℃分别培养24～120 h后,移入25 ℃培养120 h;另组于37 ℃培养48 h后,移入25 ℃分别培养72～168 h,观察不同温度和时间对弓形虫速殖子产率和活虫率的影响;③当培养的HeLa细胞80%发生细胞融合时更换速殖子培养液,同上法12 h后接种纯化的弓形虫速殖子进行培养,当80% HeLa细胞被感染增殖的弓形虫速殖子涨破时,收集、计数弓形虫速殖子,并用其感染（3×10⁶个/瓶）新的HeLa细胞,观察其连续传代情况;④每隔5代取弓形虫速殖子,腹腔接种昆明小鼠（3×10⁶个/只）,观察小鼠存活时间、评价该体外培养条件对弓形虫速殖子毒力的影响。 结果 接种弓形虫速殖子96 h后HeLa细胞均被感染及涨破,培养弓形虫速殖子30代（3～4 d为1代）增殖稳定,每代获得弓形虫速殖子1×10⁷～5×10⁷个,增殖5～20倍。各代弓形虫速殖子对昆明小鼠的平均致死时间为5.80～6.40 d, 毒力未见减弱(P>0.05)。HeLa细胞接种弓形虫速殖子,于37 ℃培养72 h后,移至25 ℃培养120 h,其产率高达40倍以上,活虫率为90%以上,仅残留极少量Hela细胞。 结论 刚地弓形虫RH株速殖子可在HeLa细胞中增殖并长期稳定传代。     

弓形虫感染对中枢神经影响的研究进展

刚地弓形虫是我国重要的食源性寄生虫之一,对人类身体健康造成严重危害。孕期感染造成胎儿发育异常、流产、死胎等不良孕产结果,先天感染是婴幼儿发育迟缓、智力障碍的重要因素,弓形虫感染还与成年人一系列神经精神症状(特别是精神分裂症)密切相关,可能与弓形虫偏向损害中枢神经系统的现象有关。复杂的生活史造成临床症状的多样性,给明确诊断和正确治疗带来巨大困扰。本文综述弓形虫感染对中枢神经系统的影响。     

慢性弓形虫感染大鼠海马蛋白质组的研究北大核心CSCD

目的观察慢性弓形虫感染大鼠海马组织的蛋白质组的表达与变化。方法将6只雄性SD大鼠随机分成健康对照组和弓形虫感染组,每组3只。感染组每鼠腹腔注射4×107个弓形虫RH株速殖子,对照组注射等量生理盐水,于感染后第5天,尾静脉采血,吉氏染色验证大鼠感染情况。感染10周后,分离大鼠海马组织,抽提蛋白,并采用双向凝胶电泳分离,考马斯亮蓝染色后用PDQuest1.0软件进行图像分析,从胶中选取分离蛋白质点,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,获取肽质量指纹图谱(PMF),采用Mascot软件检索SwissProt数据库鉴定蛋白质。结果血涂片结果证实,感染组大鼠均感染成功。感染组和对照组大鼠海马组织经双向凝胶电泳分离后,分别检出蛋白斑点数(311±19)个和(327±13)个,对2张电泳图进行匹配后发现有16个蛋白斑点在2组大鼠海马组织中的含量有明显变化,其中5个蛋白斑点在感染组大鼠海马蛋白双向电泳图谱中消失,11个蛋白斑点在2组大鼠海马组织中含量发生了3倍以上的变化,其中感染组上调4个,下调7个。有差异表达的16个蛋白斑点经质谱鉴定和数据库检索,发现9个蛋白,分别为磷酸激酶1、类烯醇化酶、谷氨酰合成酶、肌酸激酶、B型肌酸激酶、ATP合酶、线粒体顺乌头酸酶、肌动蛋白和未命名蛋白,前3个蛋白在感染组上调,其余6个下调。结论共获得9个慢性弓形虫感染大鼠与健康大鼠海马组织差异表达蛋白。     

家蝇抗菌肽体外抗弓形虫的效果观察

目的 观察家蝇幼虫和蛹抗菌肽对弓形虫速殖子的抑制作用. 方法 采用损伤加感染的方法,诱导家蝇幼虫和蛹大量产生抗菌肽,通过研磨、低温高速离心等方法获得抗菌肽粗提物,分别用磷酸缓冲液(PBS)调整为4 mg/ml、2 mg/ml和1 mg/ml并作用于弓形虫速殖子,24 h后,通过血细胞计数法和扫描电镜观察两种粗提物对弓形虫速殖子的抑制作用. 结果 幼虫抗菌肽组和蛹抗菌肽组速殖子存活率均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其抗弓形虫作用随着抗菌肽浓度的减小而减小;扫描电镜观察,对照组弓形虫速殖子外型完整,表面平滑,抗菌肽组速殖子则虫体膨胀.表面凹凸不平. 结论 从家蝇幼虫和蛹中提取的抗菌肽都有抗弓形虫作用,幼虫抗菌肽效果更好.     

南京市特殊人群弓形虫感染调查

目的 了解南京市特殊人群弓形虫感染情况,为特殊人群弓形虫病防控提供参考依据。方法 2015年9-11月选取南京市HIV/AIDS病人、肿瘤患者、孕妇、畜禽养殖及畜产品加工人员等4类特殊人群作为调查对象,采用酶联免疫吸附试验检测血清抗弓形虫特异性抗体。结果 南京市4类特殊人群弓形虫总感染率为10.2%,其中IgG抗体阳性率为10.2%,IgM抗体阳性率为0.5%。HIV/AIDS患者、畜禽养殖及畜产品加工人员、孕妇和肿瘤病人抗弓形虫抗体阳性率分别为12.2%、11.3%、4.0%和13.0%,差异无统计学意义（[χ2] = 5.668,P = 0.130）。男性调查对象抗弓形虫抗体阳性率高于女性（15.3% vs. 5.8%;[χ2] = 10.213,P = 0.001）,不同年龄组（[χ2] = 9.501,P = 0.023）、不同文化程度（[χ2] = 9.850,P = 0.043）和不同职业调查对象抗弓形虫抗体阳性率差异无统计学意义（[χ2] = 8.983,P = 0.062）。结论 南京市特殊人群弓形虫感染率较高,后续工作应有针对性地加强对特殊人群的健康教育干预。     

家兔精液传播弓形虫的实验研究

目的 了解弓形虫能否通过精液传播，并探讨雌兔阴道不同健康状态对精液传播弓形虫的影响。 方法 8只健康新西兰雄兔经腹腔分别感染1×10⁵个RH株弓形虫速殖子，分别于感染前、后用假阴道采集雄兔精液，每周将采集到的精液混合液化后0.1 ml/只， 分别经宫腔内人工受精管感染4组阴道健康状态不同的成年新西兰雌兔（阴道正常组、阴道损伤组、滴虫性阴道炎组和霉菌性阴道炎组）， 共采集8周，将所得8份混合精液分别感染8次。每次受精后第2～3天耳缘静脉采血2 ml， 分别用ELISA和PCR检测血清抗弓形虫抗体和全血中弓形虫B1基因片段。 结果 ELISA结果显示，雌兔在初次受精后第16天可检测到抗弓形虫抗体，第1～4组抗体阳性家兔数分别有2、1、3和1只，ELISA阳性率为25.9％（7/27）。PCR检测最早在受精后3 d和最晚51 d可扩增出弓形虫B1基因片段200 bp， 第1～4组阳性家兔数分别有2、1、2和0只，PCR阳性率为18.5%（5/27）。其中两种检测结果均为阳性的3只。 结论 弓形虫可通过精液感染雌兔。雌兔的阴道健康状态对经精液感染弓形虫无影响。     

弓形虫感染与精子膜功能完整性的研究

目的　探讨弓形虫感染对精子膜功能的影响。方法　将 1 79例弓形虫检测的不育男性分为抗弓形虫抗体(ATAb)阳性组 (53例 )和阴性组 (1 2 6例 ) ,对其精液做低渗膨胀试验 ,进行对照分析。结果　ATAb阳性组的精子总膨胀率(44 50± 8 69)明显低于ATAb阴性组 (58 2 5± 9 48,P <0 0 1 ) ;ATAb阳性组 g型精子总膨胀率 (1 0 75± 3 2 2 )明显低于ATAb阴性组 (1 6 0 2± 6 2 8,P <0 0 1 )。结论　弓形虫感染对精子膜功能有明显影响 ,是弓形虫引起男性不育的原因之一     

常青胶囊抗弓形虫速殖子实验研究

目的 观察常青胶囊体外抗弓形虫速殖子的效果。方法 常青胶囊设高、中、低3个剂量组。用生理盐水浸泡不同剂量的常青胶囊,各取上清液1.5 ml,加入2.5×10⁴弓形虫速殖子,作用8h后,将速殖子腹腔接种及灌胃接种正常小鼠,观察发病情况。如不发病,同法接种传代观察发病情况,至第3代。抗弓形虫药物螺旋霉素、乙胺嘧啶及阿奇霉素3药同样各设高、中、低3个剂量组。另设生理盐水对照组。腹腔接种各药物作用的速殖子后观察小鼠发病情况。结果 常青胶囊腹腔接种组发病数(60只小鼠中2只发病),显著低于上述3药对照组及生理盐水对照组(60只小鼠发病数依次为16、10、10及60只)(P值均<0.05)。常青胶囊高、中剂量组(每组20只小鼠,发病数均为0)与低剂量组(20只小鼠,发病2只)之间差异显著(P<0.05)。传代观察,常青胶囊低剂量组腹腔及灌胃接种传第1代,20只小鼠分别有2只及1只发病。螺旋霉素低剂量组传第2代,20只小鼠中2只发病,乙胺嘧啶低剂量组传第3代,20只小鼠有1只发病。结论 常青胶囊体外抗弓形虫作用优于传统临床抗弓形虫药物,杀虫效果与剂量呈正相关。     

刚地弓形虫速殖子与鼠星形胶质细胞体外共培养的实验观察

原代培养星形胶质细胞,待其长至培养皿的80%时,将星形胶质细胞与弓形虫速殖子(细胞与虫体的比例为1∶10)共培养0～72h,吉氏染色观察星形胶质细胞和弓形虫速殖子的变化。共培养1h,此时定为0点,再培养0～48h,单磺酰戊二胺染色在荧光显微镜下观察星形胶质细胞内自噬囊泡的变化。结果发现共培养1h时,弓形虫速殖子开始进入星形胶质细胞,并出现荧光颗粒;8h星形胶质细胞内荧光颗粒最多;12h后显著减少,星形胶质细胞开始被破坏;48h星形胶质细胞内荧光颗粒消失;72h大部分星形胶质细胞已被涨破,留下大量增殖的弓形虫速殖子。说明自噬在弓形虫速殖子体外感染星形胶质细胞的过程中是受到抑制的。     

刚地弓形虫速殖子侵入宿主细胞涉及的丝裂原蛋白激酶信号途径的研究

丝裂原蛋白激酶（MAPKs）是一类存在于所有真核细胞的丝／苏氨酸蛋白激酶,在真核细胞的信号转导过程中起着至关重要的作用。MAPKs磷酸化激活多种转录因子,影响基因表达,调节细胞增殖、分化、凋亡等过程,并在弓形虫速殖子侵入宿主细胞的信号转导中有着重要的意义。     

红霉素等四种抗生素体外抗弓形虫作用的研究

目的比较红霉素、阿奇霉素、磺胺嘧啶和大蒜素体外抗弓形虫的效果。方法用弓形虫RH株速殖子感染培养在盖玻片上的人包皮成纤维细胞(HFF),每一种药物设立2～3个浓度,分别在速殖子侵入细胞前和侵入细胞后作用于虫体,每隔1hr在倒置显微镜下观察细胞、弓形虫的形态及生长情况,3d后经吉氏染色,镜下观察,并将培养液注入小鼠腹腔,观察发病情况。结果红霉素的浓度在100μg/mL和150μg/mL时可抑制弓形虫的生长与繁殖,与剂量大小相关。阿奇霉素的浓度在20μg/mL时具有致虫体死亡的作用,>40μg/mL时对HFF有明显的毒性,其对弓形虫的作用效果与剂量大小相关。没有观察到100μg/mL、200μg/mL的磺胺嘧啶和20μg/mL、40μg/mL的大蒜素对弓形虫生长繁殖的抑制作用。结论红霉素在浓度大于100μg/mL时,可抑制弓形虫生长繁殖。阿奇霉素具有明显的杀灭速殖子的作用,但对细胞的毒性较大。磺胺嘧啶、大蒜素对弓形虫的生长抑制作用弱或无。     

刚地弓形虫入侵、诊断和免疫方面的研究进展

刚地弓形虫是严重危害人类健康的寄生虫之一，有关刚地弓形虫的生物学特性及其与宿主相互作用的机制等方面的研究成果，为弓形虫病防治研究提供了新的思路和方法。该文就近几年有关弓形虫入侵、诊断和免疫方面的研究成果进行了综述。     

Control of Toxoplasma gondii infection by athymic LEW-Whn rnu rats

In immunocompetent rats and humans infection with Toxoplasma gondii remains mostly without overt clinical symptoms, but can be fatal, if the T-cell response is impaired. For a better understanding of the lack of control of T. gondii infection under immunosuppressed conditions , congenitally athymic rats were used as the experimental model. Whereas athymic F344- Whn^rnu (F344 nude) rats die from a generalized infection during the first 3 weeks after peritoneal inoculation with 10⁶ tachyzoites of T. gondii strain NTE, LEW- Whn^rnu (LEW nude) rats and euthymic LEW rats infected with a 10-fold higher number of parasites developed chronic infection. To identify underlying mechanisms of LEW rats resistance to T. gondii infection and to investigate a possible contribution of residual T-cells to LEW- Whn^rnu rat resistance, we characterized the immune response of LEW rats by determination of cellularity and composition of lymphocyte population, antigen-specific IgG2b response as well as assays of antigen-specific proliferation and production of IL-2, IFN-γ and TNF-α. As only euthymic LEW rats developed production of antigen-specific IgG and cellular in vitro responses, these results strongly suggest that the genetic background of LEW rats permits a control of the infection independent of an adaptive immune response.     

弓形虫感染对雄性生殖健康影响的实验与临床研究

目的 研究弓形虫感染对雄性大鼠生育力的影响,调查男性不育患者弓形虫感染水平,探讨弓形虫感染对男性生殖健康的影响及其可能的致病机制.方法 以30只成年雄性SD清洁级大鼠为研究对象,随机分为感染组,腹腔注射弓形虫速殖子2×10~5/ml 2 ml,阿奇霉素治疗组,腹腔注射弓形虫速殖子2×10~5/ml 2 ml.感染第2天以200mg/(kg·d)剂量喂服阿奇霉素,连喂7 d;正常对照组腹腔注射灭菌生理盐水2 ml.9周后测定各组大鼠的生育力、附睾尾精子数、血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)及卵泡刺激素(FSH)水平,睾丸组织酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶X(LDH-X)和脂质过氧化物酶(LPO)活性.对169例男性不育患者和35例正常生育男性进行弓形虫感染的血清学调查,并检测精浆ACP、α-葡萄糖苷酶(α-Glu)、果糖(Fru)及NO水平.结果 3组动物与雌鼠交配后,雌鼠的受孕率、平均产仔数感染组显著低于正常对照组、阿奇霉素治疗组(P均<0.05).但胎鼠的平均身长、体重、尾长差异则均无统计学意义(P均>0.05);附睾尾精子数感染组(279.4±81.7)×10~6/g与正常对照组(380.9±121.8)×10~6/g、阿奇霉素治疗组(361.2±51.9)×10~6/g比较,差异有统计学意义(P均<0.05);精子活率感染组(48.s4±4.63)%与正常对照组(79.84±2.93)%、阿奇霉素治疗组(69.40±3.57)%比较,差异有统计学意义(P均<0.05);感染组大鼠T浓度与正常对照组、阿奇霉素治疗组相比显著性下降(P均<0.05),血清LH也有下降,FSH无明显变化;感染组ACP为(61.4±7.08)U/mg,显著低于正常对照组(79.2±17.7)U/mg和阿奇霉素治疗组(79.0±13.1)U/mg(P均0.05).169例男性不育者精浆弓形虫感染率为18.35%,显著高于正常生育男性精浆弓形虫感染率的2.86%.31例男性不育患者精浆抗弓形虫IgG抗体阳性组的精浆ACP较阴性组及正常生育组低,差异有统计学意义(P均<0.05);169例男性不育患者精浆NO为(146.68±38.87)μmol/L,显著高于35例正常生育男性的(84.92±26.72)μmol/L(P<0.01);而3组α-Glu、Fru检测结果差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 弓形虫感染对雄性生殖健康具有一定程度的影响.     

弓形虫感染的影响因素与防治策略

作为一种分布广泛的人兽共患病,弓形虫病在孕妇及免疫缺陷的宿主中可产生严重的后果。许多因素包括的社会-人口、生物-生理、生活方式等都可以影响弓形虫的感染,采取控制传染源,切断传染途径,宣传教育易感人群等措施可以有效预防弓形虫感染,这对消除弓形虫感染,特别是对孕妇及胎儿群体的的健康危害具有积极意义。     

人包皮成纤维细胞和人子宫颈癌细胞体外培养弓形虫速殖子

目的 比较弓形虫RH株速殖子在人包皮成纤维细胞（human foreskin fibroblast, HFF）和人子宫颈癌（HeLa）细胞的感染和细胞内增殖情况。 方法 分别于含一盖玻片的细胞培养皿（35 mm）内培养HFF细胞和HeLa细胞。待形成单细胞层后各加入经3 μm滤膜纯化的弓形虫RH株速殖子共培养, 分别于0.5、1、2、4、8、12、24、36、48、72和96 h取出盖玻片, 经吉氏染色镜下观察速殖子在两种细胞内的增殖情况。 结果 与HFF细胞共培养4 h后, 速殖子即可侵入HFF细胞, 1个细胞内可见数十个速殖子;24 h可见明显的假包囊, 72 h细胞被胀破。而与HeLa细胞共培养8 h后速殖子才侵入细胞, 每个细胞内可见3～5个速殖子, 48 h形成假包囊, 96 h大部分细胞被胀破。 结论 弓形虫RH株速殖子可在HFF细胞和HeLa细胞内增殖, 在HFF细胞内的增殖速度快于HeLa细胞。