深圳口岸出入境人群登革病毒抗体水平调查

〔目的〕了解深圳口岸出入境人员的登革病毒抗体水平。〔方法〕随机抽样810名出入境人员进行登革病毒血清学检测。〔结果〕检出37例登革病毒IgG抗体阳性者,阳性率为4.57%。〔结论〕来自登革热流行区的入境人员登革病毒IgG抗体阳性率高达42.86%,表明应加强对出入境人员进行登革病毒血清学检查,严防输入性病例的发生。     

中越河口-老街双边口岸地区伊蚊监测及人群登革热血清学调查

目的对中越河口-老街双边口岸地区伊蚊及人群登革病毒抗体水平进行调查,预测双边登革热流行趋势。方法2016年4-10月,在云南省河口和越南老街口岸采用人工诱蚊法、幼蚊指数调查法、集卵器法监测伊蚊;用RT-PCR检测伊蚊携带黄病毒属病毒情况;用ELISA法检测出入境体检人群登革病毒Ig G抗体。结果人工诱蚊法捕获的成蚊均为白纹伊蚊,河口口岸平均蚊密度为9.9只/(人·h),老街口岸平均蚊密度为14.5只/(人·h)。河口4-5月布雷图指数BI5,其他监测月份中越双边BI均5。河口6、10月,越南老街5、6、10月的诱蚊诱卵指数MOI=10~20;7-9月,双边MOI20。伊蚊样本的黄病毒属检测为阴性。从203份健康体检人群血清样本中检出登革病毒Ig G阳性9份,阳性率4.43%。结论越南老街口岸登革热流行风险高于河口口岸,登革热从河口口岸输入风险较高。     

贵阳口岸及周边地区人群登革病毒感染情况调查

为了解贵阳口岸及周边地区人群登革病毒感染状况,采用ELISA法对755份血清样本进行登革病毒抗体检测.从中检出登革病毒抗体阳性55例,阳性率为7.28%.贵阳机场工作人员、兴义机场工作人员、册亨县居民登革病毒IgG抗体阳性率分别为7.5%、4.5%和7.2%.不同地区、不同民族、不同年龄组人群登革病毒IgG抗体阳性率差异无统计学意义(这P>0.05).由于存在登革病毒感染,口岸检验检疫机构应加强对口岸地区人群和蚊媒的监测力度,强化登革热的防控措施,密切关注登革热的疫情动态.     

珠海市部分注册猪场日本脑炎调查研究

〔目的〕了解珠海市部分注册养猪场猪群和从业人员的日本脑炎病毒血清抗体水平,预测人群日本脑炎的流行趋势。〔方法〕采用酶联免疫吸附法(ELISA),猪群检测血清IgG抗体,人群检测血清IgM抗体。〔结果〕2005年从珠海市的4个注册养猪场采集了1318份猪血清进行了日本脑炎病毒血清IgG抗体检测,结果抗体阳性率为37.1%;不同年龄段的猪群阳性率不同,分别为幼猪39.4%;中猪46.3%;成猪39.5%以及大猪30.3%。幼猪、中猪、成大、猪在不同月份血清抗体阳性率各不相同,幼猪群7月份阳性率稍高(52.3%),6月份次之(46.3%);中、成、大猪均为6月份阳性率高,分别为74.7%和43.5%。4个养猪场132名从业人员未能检出日本脑炎IgM抗体。〔结论〕研究结果表明养猪场猪群存在着日本脑炎病毒的隐性感染或曾经感染过,但感染率不高。应采取积极的预防措施,防止人群和猪场日本脑炎的发生与流行。     

南方五省口岸蚊类携带虫媒病毒调查

[目的]掌握南方口岸蚊媒携带病毒的本底资料,为蚊传疾病的预防控制工作提供依据。[方法]采用电动吸蚊器人工法和捕蚊磁场自动法采集南方5省口岸各类蚊虫。采集到的蚊类超低温送至实验室,研磨处理后用荧光PCR方法检测登革病毒、乙脑病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒等重要蚊媒病毒,结果阳性的标本进一步进行PCR扩增和核苷酸序列测定分析;蚊标本研磨液同时用C6／36细胞进行虫媒病毒分离培养,出现细胞病变后分别用黄病毒科、甲病毒科各自的通用引物进行鉴定;对未能鉴定的未知病毒进一步用随机PCR方法进行扩增、克隆、序列测定、Blast搜索。[结果]从南方5省口岸采集到各类蚊虫12575只,鉴定后共分成254组。各组标本经荧光PCR方法检测,结果登革病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒均为阴性;检测到2份福建省来源三带喙库蚊的标本乙脑病毒核酸阳性,经乙脑病毒E基因引物PCR扩增、测序分析证实为GⅠ型病毒。254份标本经C6／36细胞分离培养出现42份细胞病变,用黄病毒科、甲病毒通用引物PCR扩增,均未得到特异片段。选取1份典型病变的细胞培养物进行随机PCR鉴定,结果发现了1种潜伏于C6／36细胞中的浓核病毒。[结论]南方5省口岸蚊媒中可能未携带登革病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒等重要蚊媒病毒,只有少量蚊虫携带乙脑病毒,蚊虫体内检测到的GⅠ型乙脑病毒属于福建省首次发现,出现病变的C6／36细胞可能是由自身潜伏的1种C6／36细胞浓核病毒引起。     

西尼罗病毒蚊媒的种类、研究进展及监控措施

西尼罗病毒(WestNilevirus,WNV)属黄病毒科(Flaviviridae),与日本脑炎病毒(JapaneseEncephalitisvirus)、墨累河谷病毒(MurrayValleyEncephalitisvirus)、昆津病毒(Kunjin virus)、圣·路易斯脑炎病毒(St.LouisEncephalitisvirus)同属于日本脑炎病毒群。该病毒能引发西尼罗热和致死性的西尼罗病毒性脑膜脑炎等〔1,2〕。目前北美、中东、欧洲、非洲、西亚和中亚已报道有WNV,澳大利亚和东南亚也出现了与WNV高度同源的昆津病毒。英国《焦点》月刊2004年2月号文章中把WNV与埃博拉病毒(Ebolavirus)、拉沙热病毒(Lassavirus)、马尔堡病…     

珠海登革病毒分离株的型别鉴定与序列分析研究

[目的]了解珠海市部分人群和入境船员中登革热的流行情况和珠海市流行的登革病毒株的型别和序列特征。[方法]分别采用胶体金快速法、酶联免疫吸附试验(ELISA)对登革热抗体进行检测；采用细胞培养和逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)技术进行病毒鉴定,并对其结构蛋白基因序列进行克隆、测序及同源性分析。[结果]来自东南亚国家船舶的船员血清中登革病毒IgM抗体检出率为4．40％,IgG抗体为20．33％,其阳性样本经RT-PCR扩增,结果为阴性。而对本室保存的2001年珠海散发的登革热患者阳性血清,经用C6/36细胞培养分离出1株登革病毒,用登革病毒通用引物和Ⅱ型特异性引物,扩增出相应的片段,证实为登革Ⅱ型病毒；该分离株(DV2-1)的基因序列与其他9株登革Ⅱ型病毒进行系统发育关系的分析,结果显示分离株(DV2-1)与GD08/98株、FJ11/99株、16681株位于相近的分支,其中与1998年广东流行株GD08/98株系统进化关系最近。[结论]2001年珠海地区登革热的散发流行为登革Ⅱ型病毒所致,推测其可能是输入性传染。     

珠海地区蚊媒携带流行性乙型脑炎病毒的研究

目的 了解珠海地区蚊媒携带流行性乙型脑炎（乙脑）病毒情况，为控制乙脑在人群中的流行提供依据。方法 采集成蚊进行鉴定，并对蚊悬液采用细胞培养、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）以及荧光定量PCR技术进行病毒鉴定，并进行克隆与序列测定。结果 2005年全年在养猪场共捕获成蚊876只，经鉴定隶属4属8种，其中以三带喙库蚊（35．73％）、致倦库蚊（32．54％）和海滨库蚊（21．35％）为主。在珠海各口岸捕获的542只蚊样本中，则以白纹伊蚊为主，占82．47％，其次为致倦库蚊，占16.25％。应用荧光定量PCR技术，在珠海地区注册养猪场和口岸的蚊媒中检出1份乙脑病毒阳性样本，但强度较弱，这与珠海地区是乙脑低发地区相一致。结论 珠海地区存在乙脑的主要传播媒介，并且在蚊媒中携带有乙脑病毒，提示不能放松对乙脑的防控工作。     

大连口岸蚊媒调查及流行性乙型脑炎病毒自然感染情况研究

〔目的〕了解大连口岸蚊虫种类、生态习性及淡色库蚊、三带喙库蚊自然感染流行性乙型脑炎病毒情况。〔方法〕用帐诱法、灯诱法、采集幼虫等方法进行调查,并应用逆转录-聚合酶联反应技术（RT-PCR）进行乙脑病毒鉴定。〔结果〕大连口岸捕获蚊虫3属9种,其中按蚊属1种,伊蚊属4种,库蚊属4种。大连口岸蚊虫于5月出现,8月达到高峰,9月逐渐减少,10月消失。侵袭人类以淡色库蚊（占47.98%）、东乡伊蚊（占12.15%）和背点伊蚊（占10.41%）为多。不同场所蚊虫密度差异反映出蚊虫的不同嗜血习性,淡色库蚊、凶小库蚊和白纹伊蚊喜嗜人血;淡色库蚊同时喜嗜猪、牛血;三带喙库蚊偏嗜猪血;中华按蚊偏嗜牛血;背点伊蚊和刺扰伊蚊偏嗜猪、牛血。2007年8月中旬首先在三带喙库蚊中检出乙脑病毒,共检测70批次样本,阳性率为4.28%。〔结论〕淡色库蚊、东乡伊蚊、背点伊蚊是该地区危害人类的主要蚊种。大连口岸蚊虫自然感染乙脑病毒于8月中下旬开始,三带喙库蚊首先染毒。本调查为蚊虫防制提供了生态学依据,为预报流行性乙型脑炎的发生时间和流行强度提供了科学依据。     

2018年云南磨憨口岸蚊类种群结构及其携带病原体调查

目的调查云南磨憨口岸蚊类种群结构及其携带病原体情况及基因特征。方法2018年7月,选取磨憨口岸附近监测点,采用灯诱法、吸蚊器法采集蚊类,分类鉴定后,每100只同种蚊虫为一检测池,采用一步RT-PCR法,检测蚊携黄病毒属和甲病毒属病原体,将PCR阳性扩增产物进行测序鉴定。结果在磨憨口岸共捕获蚊类5属18种20387只,共检测202个检测池,检出黄病毒属阳性样本8份,阳性率为3.96%,NCBI BLAST比对结果均为日本脑炎病毒,采用Neighbor-Joining法(邻接法)构建系统进化树,8份日本脑炎病毒阳性样本同处一个分支,且与JEV I型参考株亲缘关系较近,相似性>98%。所有样本用甲病毒属引物检测均为阴性。结论云南磨憨口岸蚊类携带对人类致病的日本脑炎病毒,应加强口岸地区蚊类携带病原体情况的监测与防控。     

Absence of viraemia in cattle after experimental infection with Japanese encephalitis virus

Cow calves were infected with Japanese encephalitis virus (JEV) by parenteral inoculation. One batch was reinfected with JEV, followed by West Nile virus (WNV), while another batch was reinfected directly with WNV. No viraemia due to either JEV or WNV was demonstrated in any of the calves. Culex tritaeniorhynchus mosquitoes fed on 4 of the calves infected with JEV during the first 10 d had no detectable virus, nor did they transmit the virus by bite to susceptible baby chickens. In another experiment, calves did not develop viraemia after infected C. tritaeniorhynchus mosquitoes were allowed to feed on them. Neutralizing and/or haemagglutination-inhibiting antibodies against JEV were demonstrated in 6 of the 11 calves, which explains the high proportion of JE seropositives among cattle in India. All the 5 calves that were infected with WNV subsequent to JEV developed neutralizing and haemagglutination-inhibiting antibodies against WNV also. The study indicates that cattle do not play a role in the maintenance of JEV in nature.     

RT-PCR技术在南方虫媒病毒流行病学调查中的应用

目的：调查南方地区虫媒病毒感染情况。方法：应用虫媒病毒的通用引物逆转录－聚合酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）。结果：检测１１０组骚扰阿蚊,９０组白蚊伊蚊和１８组致倦库蚊标本,分别检出１５组,９组和２组阳性标本,阳性率分别为１３．６３％,１０％,１１．１１％,１６８份发烧病人待查标本中,２８份疑似登革热血标本,１１份凝似乙型脑炎血标本和３份“不明热”血标本,均扩增出４１３ｂｐ的特异带,证实为虫媒病毒感染     

云南省耿马县孟定镇蚊虫及虫媒病毒调查

目的 :调查蚊虫种类及其带病毒情况。方法 :用吸蚊管和人诱法捕蚊 ,用C6 / 36细胞和乳鼠分离病毒 ,用血清学方法检测人血清中病毒抗体。结果 :1985年 7～ 8月捕获雌性成蚊 6属32种 94 10只 ,三带喙库蚊、棕头库蚊、中华按蚊、迷走按蚊是农村畜厩主要蚊种 ,白纹伊蚊是竹林区优势蚊种。从阿萨姆伊蚊中分离出 1株乙脑病毒。当地人血清中乙脑、登革、基孔肯雅和肾综合征出血热 (HFRS)病毒抗体阳性率依次为 39.6 8% (77/ 194 )、13.73% (14/ 10 2 )、2 0 .10 % (39/ 194 )和 0 .57% (1/ 94 )。结论 :云南耿马县孟定镇存在乙脑和其它虫媒病毒病     

四川省虫媒病毒调查研究

目的通过对四川省虫媒病毒调查,了解乙脑主要流行区蚊虫及其虫媒病毒的分布状况,为防制提供依据。方法 2006-2008年在调查点蚊虫孳生高峰期采集蚊虫标本,进行分类鉴定,并用BHK细胞分离病毒,连续3代观察细胞病变情况;收获细胞病变阳性分离物进行血清学和分子生物学鉴定;采用MEGA3.1生物学软件完成氨基酸序列和病毒进化树分析。结果三带喙库蚊和骚扰阿蚊为乙脑流行区优势种群,分离11株虫媒病毒,其中8株经IFA和RT-PCR鉴定为乙脑病毒(JEV),均属于基因Ⅰ型JEV。E基因区段核苷酸和氨基酸比较发现,8株病毒之间核苷酸和氨基酸同源性分别为98.1%～100.0%和99.7%～100.0%;与2004年四川分离株的核苷酸同源性在97.8%～99.6%,氨基酸同源性在99.3%～100.0%。另外3株病毒在BHK细胞上出现病变时间较JEV快,用20种不同种属的虫媒病毒免疫腹水IFA鉴定和相关的引物进行PCR扩增,结果均为阴性。结论在四川省乙脑流行区有5种蚊虫,其中三带喙库蚊和骚扰阿蚊为优势种群,乙脑病毒由三带喙库蚊携带,其E区核苷酸和氨基酸相对保守,有利于采取针对性防控措施。同时,分离出3株不能鉴定的虫媒病毒,提示为我国不常见种型或尚未发现的新毒种,其生物学特性和对人类的致病性有待进一步研究。     

Virus isolations from mosquitoes collected during the 1982 Japanese encephalitis epidemic in northern Thailand

From 16 June to 15 August, 1982 CDC light traps were used to collect mosquitoes in the province of Kamphaengphet, N. Thailand. 353,042 mosquitoes comprising 59 species were collected and identified, and 345,173 were placed in pools for attempted virus isolation by inoculation of C6/36 Aedes albopictus mosquito cell cultures. Viruses were isolated from 63 mosquito pools. These comprised 56 flaviviruses, identified as 35 isolates of Japanese encephalitis (JE) virus strains, 18 strains of Tembusu (TEM) virus and three untyped flaviviruses (FLA); three alphaviruses, identified as the first isolates of Getah (GET) virus to have been made in Thailand; and four viruses which are still unidentified. Most virus isolates were from Culex tritaeniorhynchus mosquitoes collected in carbon dioxide baited light traps. JE virus was isolated only over a ten-day period and the last isolate was obtained one week before the peak of admission of human encephalitis cases at Kamphaengphet Provincial Hospital. Rapid screening of isolates grown on Ae. pseudoscutellaris (LSTM-AP-61) mosquito cells by indirect immunofluorescence using flavivirus group-specific and JE-specific monoclonal antibodies showed a high degree of correlation with plaque reduction neutralization tests. An antigen capture enzyme immunoassay (EIA) test successfully identified about 50% of the JE virus positive pools, but the method saved considerable processing time.     

浙江省蚊虫及蚊媒传染病综合监测研究

目的通过整合蚊虫及蚊媒传染病监测方案及实施,分析综合监测的可行性,探索病媒生物及相关疾病综合监测模式。方法选择2个病媒生物监测点进行调查研究,整合蚊虫及蚊媒传染病监测方案,协调机构和人员在市及县两个层面上开展综合监测,成蚊综合监测采用诱蚊灯法,监测时间为6-10月。结果在浙江省疾病预防控制中心（CDC）成立执行办公室,综合协调开展工作,宁波市单独完成蚊类密度、季节消长和蚊媒传染病综合监测,建德市完成蚊类密度、季节消长和蚊媒传染病综合监测的现场调查工作,实验室标本检测由浙江省CDC完成,对机构协调、人员数量要求较高。2009年宁波市报告疟疾48例,发病率为0.73/10万;登革热1例,发病率为0.02/10万;流行性乙型脑炎（乙脑）18例,发病率为0.28/10万,死亡1例,病死率为5.56%。建德市无疟疾、登革热及乙脑病例报告。宁波市共捕获蚊类22108只,密度为9.60只/h;建德市共捕获蚊类945只,密度为4.92只/h。宁波市以三带喙库蚊为主,占90%以上,其次为淡色库蚊,白纹伊蚊仅占0.14%;建德市则以淡色库蚊为主,其次为中华按蚊,未捕到白纹伊蚊。宁波市检测三带喙库蚊1973只,乙脑病毒荧光PCR检测有2组阳性,最小阳性率为0.10%。检测建德市库蚊225只,采用巢式PCR检测黄病毒,结果均为阴性。结论蚊虫及蚊媒传染病综合监测是可行的。建议加强蚊虫及其传播疾病的综合监测、预警、控制对策和措施的研究工作。     

应用DPO引物技术同时检测5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法

目的应用双启动寡核苷酸引物(Dual Priming Oligonucleotide,DPO)技术建立同时检测日本脑炎病毒(JapaneseEncephalitisVirus,JEV)、黄热病毒(YellowFeverVirus,YFV)、西尼罗病毒(WestNileVirus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)和登革病毒(Dengue virus,DV)5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法。方法利用Primer Premier5.0软件设计5种病毒的特异性DPO引物,对引物浓度、Mg2+浓度和退火温度进行优化,测定多重RT-PCR反应的特异性和敏感性。结果应用DPO引物技术建立的多重RT-PCR方法可特异性扩增JEV、YFV、WNV、SLEV和DV的142 bp、293 bp、377 bp、630 bp和521 bp基因片段,灵敏度分别为5 000 PFU/ml、4 500 PFU/ml、2.3×105copies/μl、2.6×104copies/μl和1.37×104copies/μl,蚊虫模拟添加实验未发生非特异反应。结论应用DPO引物技术建立的针对5种蚊媒病毒的多重RT-PCR检测方法有良好的敏感性和特异性,可以同时对JEV、YFV、WNV、SLEV和DV进行检测。