65例早期宫颈癌耐药基因产物与临床预后关系的初步探讨

目的:探讨耐药基因产物P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-s-转移酶(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、胸苷酸合成酶(TS)在宫颈癌中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测65例宫颈癌中P-gp、TopoⅡ、GST-π、TS的表达,并分析其与临床预后之间的关系.结果:P-gp的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),与UICC分期、局部复发无关(P>0.05);TopoⅡ的表达与淋巴结转移、局部复发有关(P<0.05),与肿瘤分化程度、UICC分期无关(P>0.05);GST-π的表达与各个指标之间均有关(P<0.05);TS与淋巴结转移、UICC分期有关(P<0.05),与局部复发、肿瘤分化无关(P>0.05)。经多因素Cox比例风险模型分析显示:局部复发、淋巴结转移及TopoⅡ、GST-π的表达与宫颈癌患者术后生存率有关(P<0.05)。结论:联合检测宫颈癌中P-gp TopoⅡ、GST-π、TS对判断宫颈癌的预后十分必要;局部复发、淋巴结转移及TopoⅡ、GST-π的表达可作为宫颈癌患者独立的预后因素。     

子宫颈癌组织三磷酸腺苷肿瘤体外药物敏感试验及其与耐药蛋白表达的关系

目的探讨三磷酸腺苷肿瘤体外药物敏感试验（ATP-TCA）用于检测宫颈癌组织对化疗药物敏感性的可行性,分析耐药蛋白P糖蛋白（P—gp）、谷胱甘肽巯基转移酶π（GST-π）、胸苷酸合成酶（as）的表达与ATP-TCA结果的关系。方法采用ATP—TCA对35例宫颈癌患者的新鲜癌组织进行体外药物敏感试验,分别检测宫颈癌组织对紫杉醇、顺铂、博来霉素、吉西他滨、5氟尿嘧啶、依立替康6种化疗药物的敏感性;采用免疫组化法检测35例宫颈癌患者癌组织中p-gp、GST-π、TS蛋白的表达;分析ATP-TCA结果与P-gp、GST-π、鸭蛋白表达的关系。结果（1）35份宫颈癌标本中,32份标本成功进行了ATP-TCA检测,ATP—TCA的可评价率为91％。宫颈癌组织对药物的敏感率分别为紫杉醇88％（28／32）、5氟尿嘧啶72％（23／32）、吉西他滨62％（20／32）、顺铂19％（6／32）、博来霉素16％（5／32）、依立替康12％（4／32）。（2）GST-π、鸭蛋白的高表达率[分别为66％（21／32）、44％（14／32）]与宫颈癌组织体外对顺铂、5氟尿嘧啶的耐药有相关性（P=0．011、P=0．022）,P-gp蛋白的阳性表达率[41％（13／32）]与宫颈癌组织体外对紫杉醇、5氟尿嘧啶、吉西他滨、顺铂、依立替康、博来霉素的耐药无相关性（P＞0．05）。结论ATP-TCA可用于宫颈癌患者个体化化疗的药物筛选。GST-π、鸭蛋白可能是预测宫颈癌患者对顺铂、5氟尿嘧啶耐药的标志物。     

环氧合酶-2、bcl-2蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的:探讨宫颈鳞癌组织中环氧合酶(COX-2)、bcl-2蛋白的表达及其与宫颈癌临床分期、病理分级、淋巴转移的关系。方法:采用免疫组化法对40例宫颈癌组织中COX-2和bcl-2蛋白的表达进行检测分析,以10例正常宫颈组织作为对照。结果:COX-2和bcl-2蛋白在正常宫颈组织中阳性表达率均为0(0/10)。COX-2在宫颈原位癌、Ⅰ~Ⅱ期及Ⅲ期的阳性表达率分别为50.0%、54.5%和66.7%,宫颈鳞癌及正常宫颈组织组之间比较差异有显著性(P<0.05),宫颈原位癌、宫颈鳞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期间差异无显著性(P>0.05)。COX-2在Ⅰ~Ⅱ期宫颈鳞癌表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。bcl-2在宫颈原位癌、宫颈鳞癌Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ期癌细胞胞浆中未着色,但在癌间质有不同程度染色。bcl-2在宫颈癌及正常宫颈组织组之间差异有显著性(P<0.05)。宫颈原位癌、宫颈癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期间差异无显著性(P>0.05)。bcl-2与癌细胞分化程度及淋巴结转移无关(P>0.05)。COX-2与bcl-2在宫颈鳞癌组织中表达无相关性(P>0.05)。结论:COX-2和bcl-2蛋白在正常宫颈组织中均不表达。COX-2在宫颈鳞癌中的表达与临床分期和病理分级无关,与淋巴结转移有关。二者在宫颈癌中的表达无相关性。检测宫颈鳞癌组织中COX-2的表达有利于早期诊断及估计宫颈癌患者的预后。     

CHD1L、ECRG4蛋白在早期宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的:探讨CHD1L、ECRG4蛋白表达与早期宫颈鳞癌恶性生物学行为的关系。方法:免疫组化SP法检测48例宫颈鳞癌、40例宫颈鳞状上皮内病变(SIL)及20例正常宫颈组织中CHD1L、ECRG4蛋白的表达情况及定位分布,并结合宫颈鳞癌患者临床病理资料进行分析。结果:CHD1L蛋白在正常宫颈组织、SIL、宫颈鳞癌组织中呈递增表达,而ECRG4蛋白则呈递减表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。早期宫颈鳞癌组织中,CHD1L蛋白阳性率与肿瘤FIGO分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤分化程度无关(P>0.05);ECRG4蛋白阳性率仅与肿瘤分化程度呈负相关(P<0.05),而与患者年龄、FIGO分期及淋巴结转移无相关性(P>0.05)。Spearman等级相关分析表明,宫颈鳞癌中CHD1L与ECRG4蛋白表达水平呈负相关(r=-0.402,P<0.05)。结论:CHD1L与ECRG4负相互作用,共同参与了宫颈鳞癌的发生与恶性化过程,有望成为监测宫颈鳞癌进展的潜在分子标记物。     

卵巢肿瘤中谷胱甘肽S转移酶的表达及其生物学意义

谷胱甘肽S转移酶(GSTs)是一组与人体解毒功能有关的同功酶系,目前对其亚型GST-π的研究最为广泛。体外试验显示GSTs与顺铂、烷化剂和阿霉素的耐药性相关。应用免疫组化法和生化法分析人体卵巢肿瘤,发现卵巢恶性肿瘤中GST-π的表达水平明显高于良性肿瘤,化疗药物可诱导卵巢癌细胞中GST-π表达水平升高。卵巢恶性肿瘤的GST-π表达与临床分期、残余瘤、组织学类型和分化程度均无关,而与耐药性和预后的关系目前尚有争议。     

宫颈鳞癌组织中结缔组织生长因子及转化生长因子-β1的表达及临床意义

目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)蛋白、转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,特别是与盆腔淋巴结转移的关系。方法:应用Power Vision免疫组织化学染色法检测正常宫颈组织(10例)、CINⅡ~Ⅲ组织(20例)和宫颈鳞癌组织(98例)中CTGF蛋白及TGF-β1蛋白的表达情况,并比较两种蛋白的阳性表达率与宫颈鳞癌的不同临床病理因素间的关系及其与盆腔淋巴结转移的关系。结果:1CTGF蛋白、TGF-β1蛋白在正常宫颈、CINⅡ~Ⅲ、宫颈鳞癌中的阳性表达率呈现递增的趋势,三者比较差异有统计学意义(P0.05)。2宫颈鳞癌中CTGF蛋白表达与TGF-β1蛋白表达之间呈正相关(r=0.643,P0.05)。3宫颈鳞癌组织中CTGF、TGF-β1蛋白的阳性表达率在不同的组织学分化程度、盆腔淋巴结有无转移和不同临床分期间比较,差异有统计学意义(P0.05)。4多因素非条件Logistic回归分析示:CTGF蛋白、年龄、组织分化程度及肿瘤直径是影响宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移的独立危险因素(P0.05)。结论:CTGF蛋白、TGF-β1蛋白参与宫颈鳞癌的恶性程度进展,且CTGF可作为宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移的独立危险因素之一。     

绒癌耐药细胞系的建立及获得性耐药机制的研究

目的采用目前治疗绒癌最常用的药物诱导建立绒癌的耐药细胞系,比较不同药物引起耐药机制的差异.方法采用浓度梯度递增法和间歇诱导法,分别用5-FU,MTX,VP-16诱导绒癌细胞系JEG-3,建立相应耐药细胞系,采用MTT法测定耐药细胞系对5-FU、MTX、KSM、VP-16和Taxol的耐药指数,用RT-PCR测定亲本细胞及各耐药细胞系耐药相关基因如肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST-π)、二氢叶酸还原酶(DHFR)和多药耐药基因(MDR-1)的mRNA表达,比较各种细胞生长曲线,细胞群体倍增时间.结果JEG-3细胞系在诱导耐药细胞前即有LRP、MRP、GST-π、DHFR的共表达,诱导耐药后上述各基因的表达无明显变化.诱导耐药前JEG-3细胞无MDR1的表达,用VP-16、5-FU间歇诱导的方法诱导形成的耐药细胞系有MDR-1表达,且耐药指数增加.结论JEG-3耐药细胞系耐药性的产生与MRP、LRP、GST-π、DHFR表达的关系不密切,而与MDR1的表达有关.     

HSP70在子宫颈鳞癌中的表达及与P53、c-myc表达的关系

目的 :探讨热休克蛋白 70 (heatshockprotein 70 ,HSP70 )在宫颈鳞癌组织中的表达 ,以及它与抑癌基因p5 3、原癌基因c myc表达之间的关系。方法 :采用免疫组化SABC法检测正常宫颈上皮组织、癌前病变宫颈上皮组织和浸润性宫颈鳞癌组织中HSP70、P5 3蛋白、c myc蛋白的表达 ,并分析其相互关系。结果 :HSP70在正常宫颈上皮组织、癌前病变宫颈组织和浸润性宫颈鳞癌组织中的免疫组化记分呈递增趋势 ,两两相比差异有显著性。HSP70免疫组化记分随鳞癌组织分化程度降低而升高。浸润性宫颈鳞癌中P5 3蛋白阳性组和c myc蛋白阳性组HSP70组织化学记分分别高于P5 3阴性组和c myc阴性组。结论 :HSP70表达与宫颈鳞癌发生发展有关 ,且与较低分化程度有关。HSP70可能通过与P5 3蛋白和c myc蛋白之间某种相互作用参与宫颈鳞癌的发生发展     

ALDH1和ABCG2在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义

目的:检测肿瘤干细胞标志物乙醛脱氢酶1(ALDH1)和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)在不同程度宫颈病变组织中的表达情况。方法:应用免疫组化SP法检测76例宫颈鳞癌、52例宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、37例慢性宫颈炎患者的石蜡组织中ALDH1和ABCG2的表达情况,并进行比较分析。结果:1ALDH1和ABCG2在慢性宫颈炎、HSIL、宫颈鳞癌组织中的阳性表达率分别为5.41%(2/37)和8.11%(3/37)、23.08%(12/52)和28.85%(15/52)、53.95%(41/76)和61.84%(47/76),两者在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率明显高于HSIL组织、慢性宫颈炎组织,差异均有统计学意义(P0.05)。2ALDH1在宫颈鳞癌中表达水平与肿瘤分化程度、是否存在淋巴结转移有关(P0.05),ABCG2在宫颈鳞癌中表达水平与宫颈癌的临床分期、肿瘤细胞的分化程度及是否有淋巴结转移有关(P0.05)。3宫颈鳞癌组织中ALDH1和ABCG2表达水平水平呈正相关(r=0.535,P0.05)。结论:ALDH1和ABCG2在宫颈鳞癌的表达升高,可能在宫颈鳞癌的发生、发展、转移中起作用。ALDH1和ABCG2在宫颈鳞癌的发展过程中可能起协同作用。     

宫颈鳞癌组织C-Fos、PDGFR蛋白的表达及意义北大核心CSCD

目的探讨宫颈鳞癌组织C-Fos、PDGFR蛋白的表达及意义。方法选取2015年1月至2017年10月河北省承德医学院附属医院保存的宫颈癌组织58例,宫颈上皮内瘤变(CIN)组织47例,正常宫颈组织43例,采用免疫组化染色检测C-Fos、PDGFR蛋白阳性表达,western blot检测C-Fos、PDGFR蛋白表达量。结果宫颈癌组织C-Fos和PDGFR蛋白阳性表达率分别为58.62%和62.07%,C-Fos和PDGFR蛋白表达量分别为(0.987±0.221)和(0.872±0.206),明显高于CIN和正常宫颈组织(P <0.05);CIN组织C-Fos和PDGFR蛋白阳性表达率分别为21.28%和27.66%,C-Fos和PDGFR蛋白表达量分别为(0.344±0.157)和(0.550±0.214),明显高于正常宫颈组织(P <0.05);Ⅲ～Ⅳ期宫颈癌C-Fos和PDGFR蛋白表达量分别为(1.012±0.220)和(1.012±0.220),明显高于Ⅰ～Ⅱ期宫颈癌(P <0.05);中低分化宫颈癌PDGFR蛋白表达量为(0.892±0.184),明显高于高分化宫颈癌(P <0.05);宫颈癌组织C-Fos和PDGFR蛋白表达量无相关性(P>0.05)。结论宫颈鳞癌组织C-Fos、PDGFR蛋白表达明显高于CIN和正常宫颈,与临床分期和分化程度具有一定的相关性,可能在宫颈癌发生过程中发挥一定的作用。     

GST-π和DNATopoⅡ在晚期宫颈癌组织中的表达

目的：探讨谷胺甘肽Ｓ－转移酶、脱氧核糖核酸拓扑Ⅱ的表达与晚期宫颈癌化疗的关系。方法：应用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测２８份晚期宫颈癌组织化疗前后ＧＳＴ－π和ＤＮＡＴｏｐｏⅡ的表达。结果：化疗前２８份宫颈癌组织中ＧＳＴ－π过表达１７份（６０．７１％),ＤＮＡ ＴｏｐｏⅡ低表达１６份（５７．１４％）;化疗后ＧＳＴ－π过表达２４份（８５．７１％）,ＤＮＡ ＴｏｐｏⅡ低表达１８例（６４．２８％）。化疗前后ＧＳＴ－π的表达差异有显著性（Ｐ＜0．05）,ＤＮＡ ＴｏｐｏⅡ的表达差异无显著性（Ｐ＞０．０５）,二者表达有相关性（Ｐ＝０．０１９）。ＧＳＴ－π过表达和ＤＮＡＴｏｐｏⅡ低表达与患者的化疗反应呈负相关（Ｐ＝０．０１４,Ｐ＝０．０３８）。结论：ＧＳＴ－π过表达与宫颈癌内在性耐药和获得性耐药有关,ＤＮＡ TｏｐｏⅡ低表达只与宫颈癌内在性耐药有关。ＧＳＴ－π和ＤＮＡ TｏｐｏⅡ的表达均能很好地预测晚期宫颈癌患者的化疗耐药与反应。     

Tumor Response to Neoadjuvant Chemotherapy Correlates with the Expression of P-Glycoprotein and PCNA but Not GST-π in the Tumor Cells of Cervical Carcinoma

Objective.To identify the clinicopathological and chemoresistant factors predicting the response to neoadjuvant chemotherapy and the patient prognosis in high-risk cervical carcinomas.Methods.We retrospectively reviewed 47 patients with locally advanced or bulky cervical carcinoma treated with two courses of intraarterial infusion of cisplatin, doxorubicin, mitomycin C, and 5-fluorouracil (5-FU), followed by radical hysterectomy at our hospital between 1988 and 1995. Expressions of the chemoresistance-related proteins, such as P-glycoprotein, glutathioneS-transferase π (GST-π), and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in the tumor cells, were examined by immunohistochemistry using pretreatment biopsy specimens. These results were compared with the chemotherapeutic response, which was evaluated by magnetic resonance imaging (MRI) and histopathology. Outcome of the patients was also studied.Results.Chemotherapeutic effect of either complete (CR) or partial (PR) response on MRI was obtained in 36 of the 47 (86%) patients. Poor response to chemotherapy was significantly correlated with P-glycoprotein expression (P< 0.005) and low PCNA labeling (P< 0.05), but not GST-π expression in the tumor cells. Independent prognostic factors for patient survival were parametrial involvement and lymph node metastasis. Neither the expression of GST-π nor PCNA was correlated with the patient survival.Conclusion.Assessment of the expression of P-glycoprotein and PCNA is potentially useful for the prediction of tumor response to neoadjuvant chemotherapy for cervical carcinomas.     

In vitro studies of 5-FU sensitivity on uterine cervical cancer cell lines--comparison between squamous cell carcinoma and adenocarcinoma

In order to improve the postoperative survival rate of patients with cervical cancer, we have treated them with adjuvant chemotherapy (oral Tegafur) and proved this treatment to be useful. However, the prognosis of cervical adenocarcinoma cases has not been improved yet. In this study, 5-FU sensitivity, morphological changes and DNA metabolism of cultured cervical cancer cells were examined using OMC-1 and OMC-4 cell line originating from cervical squamous cell carcinoma and adenocarcinoma, respectively. The EC 50 (Effective Concentration for 50% Cell Kill) of 5-FU on OMC-1 and OMC-4 cells after 96 hours of incubation with 5-FU was 0.13 micrograms/ml and 9.1 micrograms/ml, respectively. The morphological changes were more prominent in OMC-1 cells than in OMC-4 cells after 192 hours of incubation with 0.1 micrograms/ml of 5-FU. The incorporation of 3H-deoxyuridine into the DNA was inhibited more significantly in OMC-1 cells than in OMC-4 cells even at a low concentration of 5-FU. The intracellular FdUMP and thymidylate synthetase (TS) inhibition rate of OMC-1 and OMC-4 after 96 hours of incubation with 0.1 microgram/ml of 5-FU was 4.7 pmol/g and less than 2.6 pmol/g, 58.7% and 60.0%, respectively. These results suggest that 5-FU sensitivity of cervical adenocarcinoma cell line (OMC-4) is lower than that of cervical squamous carcinoma cell line (OMC-1) and it may owe much not to the TS inhibition rate but to the intracellular FdUMP.     

卵巢癌组织谷胱甘肽S转移酶-π表达与耐药关系的研究

目的 :研究卵巢癌GST -π表达与化疗耐药及预后的关系。方法 :采用免疫组织化学方法检测 6 8例卵巢上皮癌GST -π的表达 ,分析GST -π表达与化疗耐药及预后之间的关系。结果 :卵巢上皮癌GST -π的总阳性率为 6 9.1% ,GST -π表达与一般临床病理参数无相关性。GST -π阳性和阴性病例对化疗的反应率分别为 2 9.8%和 90 .5 %(P <0 .0 0 5 )。GST -π阳性患者的预后明显比阴性者差 (P =0 .0 0 4 )。结论 :卵巢癌GST -π表达在耐药形成中起重要作用 ,GST -π可作为估计卵巢癌患者预后的独立标志物     

丹参酮Ⅱa对人绒毛膜癌甲氨蝶呤耐药细胞株JAR/MTX作用的体外研究

目的探讨丹参酮Ⅱa对人绒毛膜癌甲氨蝶呤耐药细胞系（JAR/MTX）的杀伤与逆转耐药效应及与甲氨蝶呤（MTX）的协同增效作用。方法根据对JAR/MTX的不同处理分为空白组、DMSO溶媒组、MTX组和丹参酮Ⅱa组。采用HE染色进行显微镜下各组细胞形态学观察;电化学发光法测定药物作用前后各组细胞β-人绒毛膜促性腺激素（β-hCG）水平;免疫组化染色法测定各组细胞热休克蛋白27（HSP27）及谷胱甘肽转移酶（GST-π）表达;MTT法检测丹参酮Ⅱa作用前后半数抑制浓度并计算其逆转耐药倍数。结果丹参酮Ⅱa组药物作用24h可见细胞核肿胀,核膜皱缩及消失,核分裂象减少及坏死,而MTX组细胞坏死不明显。GST-π主要在细胞质中表达,HSP主要在细胞核中表达。丹参酮Ⅱa组药物作用24h后HSP27的表达率为20.20%、GST-π的表达率为16.30%,与空白组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;丹参酮Ⅱa组药物作用24h后β-hCG为（23.04±11.32）U/L,与空白组[（358.80±19.00）U/L]比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;丹参酮Ⅱa与MTX配伍作用于JAR/MTX细胞后的逆转耐药倍数为5.3。结论丹参酮Ⅱa对人绒毛膜癌耐药细胞株JAR/MTX具有杀伤与逆转耐药的效应,丹参酮Ⅱa可使JAR/MTX细胞HSP27及GST-π的表达明显下调,并且与MTX同时应用具有协同增效作用。     

细胞凋亡和P53在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的表达

目的：探讨细胞凋亡和P53在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的作用。方法：用DNA缺口末端标记技术(TUNEL)和免疫组化技术原位观察15例正常宫颈、22例CIN*"I/Ⅱ、16例CINⅢ和52例浸润性宫颈鳞癌(ISCC)组织中细胞凋亡标记指数(A-LI)、PCNA(增殖细胞核抗原)标记指数(PCNA-LI)和P53表达阳性率及P53标记指数(P53-LI)。结果：在正常宫颈上皮未检测到凋亡细胞,随着CIN病变的进展,A-LI增高(P＜005),在ISCC,A-LI明显低于CIN(P＜001);PCNA-LI随宫颈癌各级病变的进展逐渐增高(Ｐ＜005);在正常宫颈和CINI/Ⅱ均未检测到P53表达,在CINⅢ,P53-LI明显低于ISCC(P＜001)。结论：细胞凋亡在宫颈癌发生发展过程中发挥重要作用,P53蛋白的积聚可能对细胞凋亡起抑制作用。     

绒癌耐药细胞系的建立及获得性耐药机制的研究

目的 :采用目前治疗绒癌最常用的药物诱导建立绒癌的耐药细胞系 ,比较不同药物引起耐药机制的差异。方法 :采用浓度梯度递增法和间歇诱导法 ,分别用 5 FU ,MTX ,VP 16诱导绒癌细胞系JEG 3,建立相应耐药细胞系 ,采用MTT法测定耐药细胞系对5 FU、MTX、KSM、VP 16和Taxol的耐药指数 ,用RT PCR测定亲本细胞及各耐药细胞系耐药相关基因如肺耐药蛋白 (LRP)、多药耐药相关蛋白 (MRP)、谷胱甘肽转移酶 (GST π)、二氢叶酸还原酶 (DHFR)和多药耐药基因 (MDR 1)的mRNA表达 ,比较各种细胞生长曲线 ,细胞群体倍增时间。结果 :JEG 3细胞系在诱导耐药细胞前即有LRP、MRP、GST π、DHFR的共表达 ,诱导耐药后上述各基因的表达无明显变化。诱导耐药前JEG 3细胞无MDR1的表达 ,用VP 16、5 FU间歇诱导的方法诱导形成的耐药细胞系有MDR 1表达 ,且耐药指数增加。结论 :JEG 3耐药细胞系耐药性的产生与MRP、LRP、GST π、DHFR表达的关系不密切 ,而与MDR1的表达有关。     

RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌耐药细胞Topo Ⅱα基因表达并逆转耐药的体外研究

目的 探讨RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞TopoⅡα基因的表达是否能逆转耐药.方法 (1)设计并筛选针对Topo Ⅱα基因的、沉默效果最佳的小分子干扰RNA(siRNA),将其克隆到psilencer4.1-CMV-neo载体上;将psilencer4.1-CMV-neo-Tope Ⅱα重组质粒转染至受试细胞,建立稳定转染重组质粒的细胞Topo Ⅱα siRNA(+)SKOV3/DDP.(2)采用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定稳定转染细胞中TopoⅡαmRNA和蛋白的表达;分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪和高效液相色谱法测定TopeⅡαRNA干扰前后细胞的耐药指数、细胞周期和细胞内顺铂含量的变化.结果 (1)转染psilencer4.1-CMV-neo-Topo Ⅱα质粒后能抑制SKOV3/DDP细胞中TopoⅡα基因的表达,TopeⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP和SKOV3/DDP细胞中TopoⅡα mRNA的表达水平分别为0和0.92±0.08;两种细胞中TopoⅡα蛋白的表达水平分别为0.51±0.04和1.95±0.09,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)SKOV3/DDP细胞转染Topo Ⅱα siRNA后耐药指数下降,TopoⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP和SKOV3/DDP细胞的耐药指数分别为3.46和5.05,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)TopoⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP细胞的G_0/G_1期、G_2/M期细胞比例较SKOV3/DDP细胞增加,S期细胞比例减少(P均<0.05).(4)Topo Ⅱα siRNA(+)SKOV3/DDP细胞经20 μg/ml顺铂处理24 h后,其顺铂含量(157.20 ng)较SKOV3/DDP细胞(63.99 ng)升高,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 阻断卵巢癌耐顺铂细胞中Topo Ⅱα基因的表达能逆转其对顺铂的耐受性.