不同温度顺铂热化疗对卵巢癌细胞株SKOV3的影响

目的:研究不同温度的顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV3的增殖抑制效应及S100A4 mRNA表达的影响。方法:以体外培养的人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SK-OV3为研究对象,按不同的热疗温度,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞抑制率;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期分布;用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组S100A4 mRNA的表达。结果:(1)各组细胞抑制率均较阴性对照组增加(P0.05),43℃组作用最明显(P0.01);(2)FCM分析细胞周期显示各组细胞与对照组比较,G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降(P0.05),细胞生长阻滞于G0/G1期;(3)RT-PCR结果显示,不同温度作用后S100A4 mRNA的表达均低于阴性对照组(P0.01),以43℃组表达最低。结论:不同温度的顺铂热化疗均可抑制卵巢癌细胞株SKOV3增殖及下调S100A4 mRNA的表达,从而抑制其侵袭转移,以43℃时作用最显著。     

卵巢癌顺铂耐药的分子机制研究进展

顺铂耐药是卵巢癌术后复发和预后不良的重要原因之一,卵巢癌的顺铂耐药机制复杂,除抑癌基因、癌基因、耐药相关基因的改变处,还涉及染色体改变、细胞解毒过程及DNA损伤修复能力的增强以及细胞骨架、热休克蛋白表达异常等,对其分子机制的了解有助于指导卵巢癌临床治疗方案的选择。     

CTHRC1对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及机制研究

目的:探究胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及其相关机制。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞株A2780、SKOV3及顺铂耐药细胞株A2780/DDP、SKOV3/DDP中CTHRC1蛋白表达水平。慢病毒lenti-sh CTHRC1转染SKOV3/DDP细胞,下调CTHRC1表达水平。CCK-8法检测沉默CTHRC1后SKOV3/DDP细胞增殖情况及顺铂半数抑制浓度(IC_(50))的变化。Western blot法检测转染后SKOV3/DDP细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况及Akt、STAT3的磷酸化水平。结果:与A2780和SKOV3细胞相比,顺铂耐药细胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP细胞中CTHRC1蛋白表达水平相对较高(P0.05)。靶向下调CTHRC1表达后,SKOV3/DDP-sh CTHRC1细胞的增殖能力无明显变化,但顺铂的IC_(50)显著降低(P0.01),Akt、STAT3磷酸化水平受到抑制,Bcl-2表达水平降低(P0.05)。结论:CTHRC1可能通过Akt、STAT3信号通路,调节抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,继而影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。     

腹腔注射顺铂治疗卵巢癌

增加肿瘤与抗癌药物的接触,能提高治疗有效率和存活时间。人类许多肿瘤局限于腹腔、(如卵巢癌和间皮瘤)。腹腔注射(IP)药物增加了这些部位的肿瘤与药物直接接触的机会。药动学研究认为,许多药物通过腹腔给药可显示出不少药理学方面的优点。进一步了解腹腔化疗的原理并应用于临床,能改善病人存活。本文对腹腔化疗药理学原理及应用顺铂腹腔给药治疗卵巢癌进行综述。腹腔药动学将IP治疗视为三室模型。药物直接进入肿瘤所在的腔内为第一室;然后被吸收入血液中(血浆)为第二室;再分布到与血液接触的所有其它组织为第三室。总的药物作用以测定血药浓度时间曲线下面积(AUC)计算。可用腹腔/血浆AUC比说明药物直接注入腹腔内的优点。药物注入     

顺铂、维拉帕米和环孢菌素诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 探讨顺铂（ＤＤＰ）,维拉帕米（ＶＰ）及３′－酮基－去甲基苏氨酸１－缬氨酸２－环孢菌素（ＰＳＣ８３３）诱导卵巢癌细胞凋亡的作用机理。方法 以人卵巢癌亲代细胞株ＣＯＣ１及其耐ＤＤＰ亚细胞株ＣＯＣ１／ＤＤＰ为材料,根据所加药物的不同分为ＤＤＰ组,ＶＰ组,ＰＳＣ８３３组,ＤＤＰ联合ＶＰ组,ＤＤＰ联合ＰＳＣ８３３组和对照组,计算各组细胞生长抑制率,细胞凋亡率同时进行细胞周期分析。结果 ＤＤＰ联合ＶＰ组     

顺铂诱导人卵巢癌AO10／17细胞凋亡的实验研究

目的 探讨顺铂是否通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制肿瘤生长，以及细胞凋亡和细胞周期、细胞内外钙离子浓度的关系。方法 应用顺铂处理ＡＯ１０／１７细胞，ＨＥ染色观察细胞形态学改变；琼脂糖凝胶电泳观察ＤＮＡ降解，以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的改变及细胞内钙离子的变化。结果 在顺铂作用下，ＡＯ１０／１７细胞呈凋亡改变，ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时细胞周期发生特定的改变，细     

ERCC1 Ⅷ外显子剪接变异对卵巢癌细胞顺铂耐药的影响

目的:探讨ERCC1 Ⅷ外显子剪接变异对卵巢癌细胞顺铂耐药的影响。方法:分别构建缺失Ⅷ外显子和野生型的ERCC1表达载体pD-DE(含突变型ERCC1基因)和pD-WE(野生型ERCC1),脂质体转染法转染A2780细胞,Western blot检测ERCC1表达水平研究该剪接变异对ERCC1基因表达水平的影响。MTT法检测肿瘤细胞的顺铂耐药性,彗星实验检测转染后细胞DNA的损伤修复情况。结果:成功构建重组质粒pD-DE和pD-WE;Western blot结果显示,该剪接变异未显著影响ERCC1表达;转染pD-DE的细胞与转染pD-WE的细胞相比,明显降低了顺铂的耐受性与细胞DNA损伤修复的能力。结论:ERCC1 Ⅷ外显子剪接变异降低卵巢癌细胞DNA损伤修复能力和对顺铂的耐药性。     

单己糖神经酰胺与卵巢癌顺铂耐药性关系的研究

目的　研究单己糖神经酰胺 (ceramidemonohexoside ,CMH)与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1 DDP细胞的顺铂耐药性的关系 ,及其在COC1 DDP细胞凋亡中的作用。方法　分别提取、纯化COC1 DDP细胞 (用浓度为 1 2 5、5μmol L的米非司酮处理前、后 )和卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1细胞的中性鞘糖脂 ,用高效薄层层析、凝胶光密度成像系统分析细胞中CMH的相对含量。将COC1 DDP细胞分为 :顺铂 ( 0 1、0 2 5、0 5、1 2 5、2 5μg ml)组、米非司酮 ( 1 2 5、2 5、5、10、2 0 μmol L)组、顺铂 ( 0 1～2 5μg ml) +米非司酮 ( 1 2 5、5μmol L)组 ,用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测各组细胞的生存率、琼脂糖凝胶电泳检测各组细胞DNA的变化、透射电子显微镜观察各组细胞的形态变化。结果　COC1 DDP细胞中CMH的相对含量为 ( 3 7 1± 3 3 ) % ,明显高于COC1细胞的 ( 14 1± 1 4) % (P <0 0 0 1) ;COC1 DDP细胞分别经 1 2 5、5μmol L米非司酮处理后 ,CMH的相对含量下降到 ( 2 6 6± 2 6) %和 ( 17 5±0 7) % ,分别与米非司酮处理前比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5,0 0 0 1)。MTT法检测显示 ,米非司酮浓度在 5μmol L以下时 ,对COC1 DDP细胞不产生明显的抑制作用 (P >0 0 5) ;顺铂 +米非司酮组COC1 DDP细胞抑制率较     

ERK1/2在曲普瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂耐药中的作用

目的：研究曲普瑞林在抑制卵巢癌OVCAR3细胞增殖的同时可否逆转顺铂耐药，并探讨MAP-ERKl／2在其中的变化及调节机制。方法：筛选建立耐顺铂的亚细胞系OVCAR3-DDP；采用M1Tr、流式细胞术及Westernblot比较不同浓度下顺铂、曲普瑞林及两药联合对耐药卵巢癌OVCAR3-DDP细胞生长的影响，测定ERKl／2蛋白的表达。结果：卵巢癌OVCAR3-DDP细胞耐药指数为3．87；顺铂与曲普瑞林联合化疗增敏倍数为2．23；ERKl／2蛋白活性在顺铂处理组升高，在曲普瑞林处理组、顺铂与曲普瑞林联合处理组降低。结论：曲普瑞林增加了卵巢癌OVCAR3-DDP细胞对顺铂的敏感性，此作用可能与细胞内ERKl／2信号转导通路有关。     

核苷酸切除修复与卵巢癌顺铂耐药

DNA操作修复能力增强是导致卵巢顺铂耐药的主要原因之一。由铂-DNA加合物引起的DNA损伤修复主要通过核苷酸切除修复途径，该签字径涉及多种蛋白，包括损伤识别、切开、切除、修复合成和DNA连接等5个步骤，大量基础和临床研究表明核苷酸切除修复基因表达水平的增加与卵巢癌顺铂耐药相关联。应用基因治疗、化疗增效液晶或联合化疗抑制肿瘤细胞的DNA修复能力将增加卵巢癌患者顺铂敏感性。     

S100A4蛋白在妇科恶性肿瘤中的研究进展

S100A4蛋白是钙结合蛋白家族成员之一,其通过对钙离子的调节及与靶蛋白的相互作用在体内发挥多种生物学作用,如参与细胞周期活动、细胞分化、肿瘤生长以及细胞外基质分泌活动等过程。近年大量研究表明,S100A4蛋白在多种肿瘤中呈现高表达且具有细胞和组织的分布特异性,并与肿瘤的浸润和转移密切相关,因而备受关注。就S100A4蛋白的分子生物学特点,在调节肿瘤细胞的转移方式和功能方面及其在妇科肿瘤中的作用做文献综述。     

S100A4蛋白在妇科恶性肿瘤中的研究进展

S100A4蛋白是钙结合蛋白家族成员之一,其通过对钙离子的调节及与靶蛋白的相互作用在体内发挥多种生物学作用,如参与细胞周期活动、细胞分化、肿瘤生长以及细胞外基质分泌活动等过程。近年大量研究表明,S100A4蛋白在多种肿瘤中呈现高表达且具有细胞和组织的分布特异性,并与肿瘤的浸润和转移密切相关,因而备受关注。就S100A4蛋白的分子生物学特点,在调节肿瘤细胞的转移方式和功能方面及其在妇科肿瘤中的作用做文献综述。     

卵巢上皮性癌ERCC1表达与顺铂化疗耐药关系的研究

目的:探讨卵巢上皮性癌组织中ERCC1表达水平与顺铂化疗耐药的相关性。方法:应用免疫组化SP法检测42例卵巢癌组织中ERCC1的表达并分析其与顺铂化疗耐药的关系。结果:卵巢癌组织ERCC1表达水平与卵巢上皮性癌患者年龄、手术分期及组织学类型无关,而与卵巢上皮性癌患者以顺铂为基础联合化疗的耐药性有关。卵巢癌化疗耐药组ERCC1的阳性表达率为77.27%,明显高于敏感组35.00%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ERCC1在卵巢上皮性癌组织中的表达水平与顺铂化疗耐药有关。     

卵巢浆液性交界性肿瘤中S100A4、bcl-2、clusterin、K-ras的表达及临床意义

目的:探寻卵巢浆液性交界性肿瘤(SBOT)中clusterin、bcl-2、K-ras及S100A4的表达特点及变化规律,并与相应的良、恶性肿瘤比较,为诊断及鉴别诊断SBOT提供更有效的辅助指标。方法:免疫组化法分析30例SBOT中S100A4、bcl-2、clusterin、K-ras的表达及它们的相关性,并以囊腺瘤和囊腺癌各30例为对照。结果:S100A4、clus-terin、K-ras在浆液性肿瘤的表达随着恶性程度增高呈增加趋势,bcl-2则相反。有腹水患者clusterin阳性率明显高于无腹水者(P=0.0235);有腹膜种植的患者S100A4阳性率明显高于无腹膜种植者(P=0.0242)。且两者表达呈正相关。结论:S100A4高表达往往提示肿瘤的恶性程度高。clusterin与S100A4结合有可能成为能预测卵巢浆液性肿瘤病情发展及指导临床治疗的有价值标记物。     

S100A4蛋白和上皮钙粘素在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的:探讨S100A4蛋白和上皮钙粘素(E-cad)在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测65例宫颈鳞癌组织和10例正常宫颈组织中S100A4蛋白和E-cad的表达水平。结果:(1)宫颈鳞癌组织中S100A4蛋白和E-cad的表达率分别为35.4%(23/65)和33.8%(22/65);与正常宫颈组织比较,差异具有显著性(P<0.01);(2)S100A4蛋白在宫颈鳞癌中的表达与临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05);与组织学分级无关(P>0.05);E-cad表达与淋巴结转移和组织学分级有关(P<0.05),与临床分期无关(P>0.05);(3)S100A4蛋白和E-cad在宫颈鳞癌组织的表达呈负相关(r=-0.257,P<0.05)。结论:S100A4蛋白和E-cad与宫颈鳞癌浸润和转移相关;S100A4蛋白可作为判定宫颈鳞癌临床病理特征的重要指标之一。     

Combination chemotherapy with epirubicin and cisplatin in ovarian carcinoma

Summary Combination chemotherapy with epirubicin-cisplatin was employed after surgical treatment in 67 women with ovarian carcinoma. 50 mg/m² of epirubicin and cisplatin each were administered at monthly intervals. The response rate was correlated with the clinical stage and the residual disease. Tumor regression (CR+PR) was observed in 63.6% of patients with stage III disease, and in 50% of those with stage IV disease. Furthermore, complete or partial responses were obtained in 86.4% of patients with a residual deposit of 2–5 cm, and in 33.3% of women with a residual deposit exceeding 5 cm in diameter. Anemia occurred in 47.8%, leukopenia in 43.3%, and thrombocytopenia in 4.5% of the patients. No cardiotoxicity was recorded.     

Taxol-oligoarginine conjugates overcome drug resistance in-vitro in human ovarian carcinoma

Objective

Multidrug resistance is the major cause of failure of many chemotherapeutic agents. While resistance can arise from several factors, it is often dominated by drug efflux mediated by P-glycoprotein (P-gp), a membrane-bound polysubstrate export pump expressed at high levels in resistant cells. While co-administration of pump inhibitors and a drug could suppress efflux, this two-drug strategy has not yet advanced to therapy. We recently demonstrated that the reversible attachment of a guanidinium-rich molecular transporter, polyarginine, to a drug provides a conjugate that overcomes efflux-based resistance in cells and animals. This study is to determine whether this strategy for overcoming resistance is effective against human disease.

Methods

Tumor samples from ovarian cancer patients, both malignant ascites cells and dissociated solid tumor cells, were exposed to Taxol-oligoarginine conjugates designed to release free drug only after cell entry. Cell viability was determined via propidium-iodide uptake by flow cytometry. To analyze bystander effect, toxicity of the drug conjugates was also tested on peripheral blood leucocytes.

Results

Human ovarian carcinoma specimens resistant to Taxol in vitro demonstrated increased sensitivity to killing by all Taxol-transporter conjugates tested. These studies also show that the drug conjugates were not significantly more toxic to normal human peripheral blood leukocytes than Taxol.

Conclusions

These studies with human tumor indicate that oligoarginine conjugates of known drugs can be used to overcome the efflux-based resistance to the drug, providing a strategy that could improve the treatment outcomes of patients with efflux-based drug-resistance.     

卵巢恶性肿瘤中GST-π表达与肿瘤内在性耐药及患者预后关系的研究

目的：探讨谷胱甘肽Ｓ－转移酶π型（ＧＳＴ－π）在卵巢恶性肿瘤组织中的表达及其与肿瘤内在性耐药和患者预后的关系。方法：应用免疫组化ＳＰ法检测４５份卵巢恶性肿瘤组织和１０份正常卵巢组织中ＧＳＴ－π的表达，结合肿瘤细胞体外药物敏感试验结果和患者２ａ随访结果。结果：１．４５份卵巢恶性肿瘤组织ＧＳＴ－π阳性表达率为１００％，１０份正常卵巢组织仅２份呈弱阳性。２．１８份卵巢恶性肿瘤组织ＧＳＴ－π染色程度（＋）、（）、（）三组之间阿霉素对肿瘤细胞的抑制率有统计学差异（Ｐ＜０．０５），其中（）组抑制率明显低于（＋）组（Ｐ＜０．０５）。其余５种药物对肿瘤细胞抑制率差异无显著性（均Ｐ＞０．０５）。３．２８例Ⅲ期卵巢上皮性癌患者２ａ存活率为３９．３％，存活时间≥２ａ和＜２ａ两组ＧＳＴ－π表达差异有显著性（Ｐ＜０．０１），前者染色程度明显弱于后者。结论：ＧＳＴ－π表达在卵巢恶性肿瘤对阿霉素内在性耐药中起重要作用，而与顺铂、卡铂、５－ＦＵ、更生霉素、长春新碱内在性耐药无关。ＧＳＴ－π表达高提示卵巢癌患者预后差，可供临床评价患者预后时参考。     

端粒酶激活与上皮性卵巢癌化疗敏感性及其预后的关系

目的：探讨端粒酶活性水平对卵巢化疗疗效及预后影响。方法：以TRAP－PCR－ELISA法检测卵巢癌组织中端粒酶活性;以MTT法检测卵巢癌细胞对CDDP、ADM敏感。结果：22例卵巢癌组织中,端粒酶阴性者3例（13．64％）,阳性者19例（86．36％）。8例端粒酶活性高于2U者,PAC方案化疗有效者5例（62．5％）,11例端粒酶活性低于2U者,化疗均有效（100％）。端粒酶活性高于2U者,进展与复发或死亡5例（62．5％）,而端粒酶活性低于2U者仅1例出现复发,无死亡。结论：随着端粒酶活性增高,卵巢癌对CDDP、ADM敏感性下降。