微小RNA-16逆转上皮性卵巢癌顺铂耐药的研究

目的:研究微小RNA-16(miR-16)在人上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其与顺铂耐药的关系。方法:脂质体lipofectamine2000介导miR-16成熟体模拟物(mimics)及阴性对照片段(NC)分别转染人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP。实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-16的表达;蛋白印迹法检测细胞中Bcl-2蛋白、c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的顺铂半数抑制浓度(IC50);caspase-3活性检测试剂盒检测细胞内caspase-3酶的活性;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:(1)SKOV3/DDP细胞顺铂耐药指数(RI)为5.33;(2)SKOV3/DDP细胞中miR-16表达水平明显低于SKOV3细胞,约为后者的1/10(P=0.000),转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞中miR-16水平升高约660倍(P=0.001);(3)SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量较SKOV3细胞明显升高,转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量明显降低(P<0.01);(4)SKOV3/DDP细胞转染miR-16 mim-ics后,顺铂IC50(14.19±0.06)较转染NC组(22.52±0.60)明显降低(P=0.002),且顺铂作用后caspase-3的酶活力单位也明显升高(P=0.000);(5)顺铂(20μg/ml)作用24h、48h后,SKOV3组凋亡率明显高于SKOV3/DDP组,转染miR-16 mimics的SKOV3/DDP细胞凋亡率约为转染NC细胞的1.5倍(P<0.01)。结论:miR-16可能通过靶向下调上皮性卵巢癌细胞Bcl-2蛋白,并协同调节c-myc蛋白的表达,增强卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,发挥逆转耐药的作用。     

沉默NAC-1基因对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤化疗敏感的影响

目的:探讨核转录因子NAC-1基因沉默对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤化疗敏感性的影响。方法:采用LV4-LUC-GFP慢病毒转染建立NAC-1基因沉默SKOV3/DDP细胞株,将细胞接种到免疫缺陷小鼠皮下,建立人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤模型,给予顺铂化疗,比较NAC-1基因沉默对SKOV3/DDP在裸鼠体内增殖的影响。取肿瘤组织进行转录组测序,利用Illumina平台进行转录组mRNA测序,筛选差异表达基因,并进行GO和KEGG功能注释和富集分析,揭示NAC-1基因影响移植瘤化疗敏感的可能分子机制。使用STRING数据库构建DEGs编码蛋白互作网络,筛选MCC算法、Degree算法、Closeness算法3种算法共有基因作为关键基因,使用Metascape网站在线分析这些共同基因的基因功能。结果:与对照组相比,抑制NAC-1基因后裸鼠皮下肿瘤体积变小,重量减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。转录组学分析显示,抑制NAC-1基因导致肿瘤组织中460个基因显著下调,568个基因显著上调。差异基因(DEGs)在多项GO富集类别中具有显著差异,如...     

ATP7B siRNA阳离子纳米脂质体逆转卵巢癌细胞株顺铂耐药的体内外实验研究

目的:探讨负载P型铜转运ATP酶(ATP7B)、小干扰RNA (siRNA)阳离子纳米脂质体( ATP7B/DC-Lip)逆转卵巢癌细胞株SKOV3顺铂(DDP)耐药的作用及意义.方法:通过DDP梯度诱导法构建卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP,利用细胞增殖抑制实验测定其耐药指数.薄膜分散法制备ATP7B/DC-Lip并测定其各项纳米表征.利用细胞增殖抑制实验和裸鼠体内实验分别检测ATP7B/DC-Lip的体内外抗肿瘤效果.结果:成功构建了卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP,ATP7 B/DC-Lip在体外条件下可以分别沉默75％(48小时)和78％(72小时)的ATP7B蛋白表达.在体内外抑制肿瘤生长实验的结果显示,当转染ATP7 B/DC-Lip后,体外条件下SK-OV3/DDP的IC50显著下降为3.51±0.93 μg/ml(n=6);体内DDP耐药型肿瘤模型中DDP+ATP7B/DC-Lip组的肿瘤大小较其他组明显更小(P＜0.05).结论:ATP7B/DC-Lip可以逆转卵巢癌细胞株SKOV3的DDP耐药,可能作为一种有效的纳米药物用于治疗DDP耐药性卵巢癌.     

调节细胞自噬增强卵巢癌顺铂敏感性的体外研究

目的:探讨细胞自噬与上皮性卵巢癌顺铂耐药的关系及调节细胞自噬对卵巢癌顺铂耐药的影响。方法:应用MTT法、MDC荧光染色法及激光共聚焦显微镜技术,观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株自噬现象;通过自噬特异性抑制剂3-MA作用,了解3-MA对卵巢癌细胞胞浆内自噬体的抑制作用及抑制细胞自噬对卵巢癌顺铂敏感性的影响。结果:SKOV3细胞株顺铂IC50值为3.330μg/ml,SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为14.152μg/ml。3-MA联合顺铂作用后SKOV3细胞株的顺铂IC50值为3.312μg/ml,其对顺铂的敏感性无明显影响(P=0.221),SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为6.386μg/ml,提示3-MA可提高上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性(P=0.000)。MDC荧光染色及激光共聚焦显微镜观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株胞浆自噬体的形成情况,顺铂能够诱导自噬体的生成,在3-MA作用下,SKOV3/DDP细胞株顺铂诱导的自噬体荧光强度变小,而SKOV3细胞株自噬体的荧光强度变化不大。结论:细胞自噬活性增强与上皮性卵巢癌顺铂耐药有关,抑制细胞自噬活性可以部分逆转上皮性卵巢癌SKOV3/DDP顺铂耐药,但不改变顺铂敏感型细胞SKOV3对顺铂的敏感性。     

共载STAT3 siRNA与顺铂纳米脂质体逆转卵巢癌细胞株耐药的实验研究

目的探讨共载信号转导和转录激活子3(STAT3)si RNA与顺铂(DDP)纳米脂质体(STAT3/DDP-Lip)对耐药性SKOV3/DDP卵巢肿瘤的逆转与治疗作用。方法采用薄膜法制备共载脂质体并测定其纳米表征,利用Western-blot及RT-PCR法检测STAT3/DDP-Lip体外对STAT3的干扰效果,通过细胞杀伤实验与裸鼠体内抑瘤实验分别评价STAT3/DDP-Lip的体内外抗肿瘤作用。结果成功构建了共载si RNA和DDP的纳米脂质体,体外条件下STAT3/DDP-Lip处理后耐药细胞的STAT3蛋白相对表达量下降为0.225;STAT3/DDP-Lip对SKOV3耐药细胞的IC50值为3.75μg/ml,耐药逆转倍数为7.51;体内耐药卵巢癌治疗中,STAT3/DDP-Lip能显著抑制肿瘤体积[(215±122)mm3],与空白对照组[(1 316±140)mm3]比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论 STAT3/DDP-Lip可以在体内外抑制DDP耐药性卵巢癌SKOV3细胞株生长。     

CTHRC1对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及机制研究

目的:探究胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及其相关机制。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞株A2780、SKOV3及顺铂耐药细胞株A2780/DDP、SKOV3/DDP中CTHRC1蛋白表达水平。慢病毒lenti-sh CTHRC1转染SKOV3/DDP细胞,下调CTHRC1表达水平。CCK-8法检测沉默CTHRC1后SKOV3/DDP细胞增殖情况及顺铂半数抑制浓度(IC_(50))的变化。Western blot法检测转染后SKOV3/DDP细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况及Akt、STAT3的磷酸化水平。结果:与A2780和SKOV3细胞相比,顺铂耐药细胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP细胞中CTHRC1蛋白表达水平相对较高(P0.05)。靶向下调CTHRC1表达后,SKOV3/DDP-sh CTHRC1细胞的增殖能力无明显变化,但顺铂的IC_(50)显著降低(P0.01),Akt、STAT3磷酸化水平受到抑制,Bcl-2表达水平降低(P0.05)。结论:CTHRC1可能通过Akt、STAT3信号通路,调节抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,继而影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。     

多西紫杉醇对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤的抑制作用及其与顺铂、曲妥珠单抗联合作用的探讨

目的:观察多西紫杉醇(Docetaxel,又名多西他赛,商品名泰素帝)对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤的抑制作用,并观察其与顺铂和(或)曲妥珠单抗(Trastuzumab,商品名赫赛汀)联用的抑制作用差异。方法:将SKOV3细胞悬液接种于裸鼠右侧腋窝皮下,成功建立人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤模型后,随机将荷瘤裸鼠分为8组,即顺铂组、赫赛汀组、泰素帝组、顺铂+赫赛汀组、顺铂+泰素帝组、赫赛汀+泰素帝组、顺铂+赫赛汀+泰素帝组和对照组,每组4只。顺铂按3 mg/kg、赫赛汀按30 mg/kg、泰素帝按5 mg/kg每周1次经尾静脉给药,连续6周,每周测量1次小鼠肿瘤的长、短径及小鼠体质量,用药结束后1周处死小鼠,计算抑瘤率,肿瘤组织HE染色观察细胞凋亡,TUNEL技术检测凋亡指数,免疫组织化学方法检测肿瘤组织中Ki-67的表达情况。结果:(1)泰素帝能明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞裸小鼠移植瘤的生长,且分别与顺铂、赫赛汀联合后对肿瘤生长的抑制作用更明显,顺铂+赫赛汀+泰素帝组对肿瘤生长的抑制作用最明显;(2)泰素帝单药组肿瘤细胞凋亡指数较对照组显著升高,且分别与顺铂、赫赛汀联合后肿瘤细胞凋亡指数更高,顺铂+赫赛汀+泰素帝组肿瘤细胞凋亡指数最高;(3)泰素帝单药组肿瘤组织中Ki-67的表达率较对照组显著下降,且分别与顺铂、赫赛汀联合后肿瘤组织中Ki-67的表达率下降更明显,而顺铂+赫赛汀+泰素帝三联组肿瘤组织中Ki-67的表达率下降最明显。结论:(1)泰素帝能够有效抑制人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤的生长,其可能的机制是通过下调Ki-67等的表达而抑制肿瘤的增殖活性,并诱导肿瘤细胞凋亡;(2)泰素帝分别与顺铂、赫赛汀间具有协同作用,而泰素帝、顺铂、赫赛汀三药联合应用能更有效地抑制肿瘤生长。     

奥曲肽逆转人耐顺铂卵巢癌细胞耐药性及其机制研究

目的观察奥曲肽(octreotide,OCT)逆转人耐顺铂卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药性的作用,并探讨其机制。方法 2009年7月至2010年1月于东南大学医学院中心实验室进行本实验。MTT法及流式细胞术观察顺铂、奥曲肽联合作用后人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP增殖与凋亡的变化。实时荧光定量PCR检测奥曲肽对SK-OV3/DDP细胞生长抑素受体-2(somatostatin receptor-2,SSTR2)、多药耐药基因-1(multiple drug resistance-1,MDR1)、多药耐药相关蛋白-2(multidrug resistance related protein-2,MRP2)mRNA表达的影响。结果奥曲肽与顺铂有协同抗卵巢癌耐顺铂细胞增殖的效应,奥曲肽在质量浓度2.5～20mg/L能显著降低顺铂的IC50(P<0.05),提高细胞的凋亡率(P<0.05)。SKOV3/DDP细胞有SSTR2mRNA表达,但奥曲肽对SSTR2mRNA表达的调节作用不明显,奥曲肽显著降低SKOV3/DDP细胞MRP2mRNA的表达(P<0.05),作用呈剂量依赖性,但对MDR1mRNA的表达没有影响。结论奥曲肽可以与卵巢癌细胞表面SSTR2结合,发挥抗增殖、促凋亡等作用,并可能通过降低卵巢癌细胞MRP2的表达逆转顺铂耐药性。     

ERCC1基因与卵巢上皮癌细胞铂类耐药相关性探讨

目的 检测切除修复交叉互补1（ERCC1）基因在人卵巢上皮癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3／DDP及其亲本细胞株SKOV3中的表达,探讨ERCC1基因在卵巢上皮癌顺铂耐药中的意义以及有效沉默ERCC1基因能否有效逆转SKOV3／DDP细胞对DDP耐药。方法 于2013-2014年在南方医科大学采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western印迹法检测 ERCC1 mRNA和蛋白在SKOV3／DDP及SKOV3细胞中的表达。人工构建3个靶向沉默ERCC1基因的短发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体,慢病毒载体法转染至SKOV3／DDP细胞,RT-PCR和Western印迹法检测ERCC1基因水平并挑选沉默效果最佳的表达载体。RT-PCR和Western印迹法检测稳定转染后SKOV3／DDP细胞中ERCC1基因的表达,CCK-8法检测转染细胞对DDP的耐药性。结果 SKOV3／DDP细胞中ERCC1 mRNA和蛋白的表达量明显高于SKOV3,差异有统计学意义(P<0.01)。稳定转染ERCC1 shRNA后的SKOV3／DDP细胞,ERCC1的mRNA及蛋白的表达量明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞活性检测提示特异性沉默ERCC1基因能增加SKOV3/DDP 细胞对顺铂的敏感性(P<0.05)。结论 ERCC1基因在SKOV3／DDP细胞中的表达明显升高,有效沉默ERCC1 基因能有效逆转SKOV3/DDP细胞对DDP耐药,增加卵巢上皮癌DDP耐药细胞对DDP的敏感性,为卵巢上皮癌耐药的治疗提供新靶点。     

MG132对卵巢上皮性癌裸鼠移植瘤生长的影响及联合顺铂作用效应的研究

目的:探讨蛋白酶体抑制剂MG132应用于卵巢上皮性癌裸鼠移植瘤的新型治疗及联合顺铂协同抗肿瘤的潜在价值和可行性。方法:建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,20只裸鼠随机平均分为4组,每日腹腔内注射给药1次,共7日。对照组(0.2 ml的0.9%氯化钠液),MG132组(2 mg/kg),顺铂组(1 mg/kg),联合组[MG132(2 mg/kg)+顺铂(1 mg/kg)]。移植瘤模型建立4周后比较各组移植瘤质量抑制率,IHC、FIA、Western blot、RT-PCR检测各组肿瘤促凋亡基因(Caspase3)、自噬基因(Beclin1)的表达情况。结果:1顺铂组、MG132组、联合组对移植瘤的瘤质量抑制率分别为15.38%、53.85%、88.46%,顺铂联合MG132理论相加的瘤质量抑制率为60.95%;2IHC、FIA、Western blot检测:与对照组相比,顺铂组、MG132组、联合组Beclin1、Caspase3阳性表达均明显增强,其中联合组阳性表达更强。3RT-PCR检测:顺铂组、MG132组、联合组的Beclin1、Caspase3 mRNA表达均明显高于对照组(P0.05);且联合组又高于顺铂组、MG132组(P0.05)。结论:MG132对卵巢上皮性癌裸鼠移植瘤生长具有抑制作用,且与顺铂联合治疗卵巢癌具有协同抗肿瘤效应,有望成为治疗顺铂耐药型难治性卵巢癌的一种有效抗肿瘤药物。     

泰素帝对人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤的抑制作用及其与顺铂、赫赛汀联合作用的探讨

目的：1．观察多西紫杉醇（Docetaxel,又名多西他赛,商品名：泰素帝 Taxotere）对人卵巢癌SKOV3细胞裸小鼠移植瘤的抑制作用,并初步探讨其作用机制;2．观察泰素帝及其联合顺铂（diammine dichloro platinum,DDP）或（和）曲妥株单抗（Trastuzumab,商品名：赫赛汀 Herceptin）对人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤的抑制差异。方法：成功建立人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤模型后,随机将荷瘤裸鼠分为8组：①顺铂组,②赫赛汀组,③泰素帝组,④顺铂+赫赛汀组,⑤顺铂+泰素帝组,⑥赫赛汀+泰素帝组,⑦顺铂+赫赛汀+泰素帝组,⑧对照组,每组4只。顺铂按3mg/kg、赫赛汀按30mg/kg、泰素帝按5mg/kg每周一次经尾静脉用药,连续六周,每周测量一次小鼠肿瘤的长、短径及小鼠体重,用药结束后一周处死小鼠,计算抑瘤率,肿瘤组织HE染色观察细胞凋亡、Tunel技术检测凋亡指数、免疫组化技术检测肿瘤组织中Ki-67的表达情况。结果：1.泰素帝能明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞裸小鼠移植瘤的生长,且分别与顺铂、赫赛汀联合后对肿瘤生长的抑制作用更明显,而顺铂+赫赛汀+泰素帝三联组对肿瘤生长的抑制作用最明显;2. 泰素帝单药组肿瘤细胞凋亡指数较对照组显著升高,且分别与顺铂、赫赛汀联合后肿瘤细胞凋亡指数更高,而顺铂+赫赛汀+泰素帝三联组肿瘤细胞凋亡指数最高;3. 泰素帝单药组肿瘤组织中Ki-67的表达率较对照组显著下降,且分别与顺铂、赫赛汀联合后肿瘤组织中Ki-67的表达率下降更明显,而顺铂+赫赛汀+泰素帝三联组肿瘤组织中Ki-67的表达率下降最明显。结论：1．泰素帝能够有效抑制人卵巢癌SKOV3裸小鼠移植瘤的生长。其可能的机制是通过下调Ki-67等的表达而抑制肿瘤的增殖活性,并诱导肿瘤细胞凋亡。2．泰素帝分别与顺铂、赫赛汀间具有协同作用,而泰素帝、顺铂、赫赛汀三药联合应用能更有效的抑制肿瘤生长。     

Expression of platelet-derived growth factor and activated receptor in clinical specimens of epithelial ovarian cancer and ovarian carcinoma cell lines

OBJECTIVES: We determined the expression of platelet-derived growth factor (PDGF), PDGF-receptor (PDGF-R), and phosphorylated PDGF-R (p-PDGF-R) on tumor cells and tumor-associated endothelial cells in clinical specimens of human ovarian carcinoma and human ovarian cancer cells growing in culture and in the peritoneal cavity of nude mice. METHODS: Ten specimens of high-grade serous ovarian carcinoma were analyzed using immunohistochemistry (IHC). IHC was used to detect ligand and receptor expression in the human ovarian cancer cells from Hey A8 and SKOV3ip1 growing in culture. Cells from these lines were also implanted orthotopically into the peritoneal cavity of nude mice. IHC was used to determine ligand and receptor expression in tumors that formed in the peritoneal cavity. RESULTS: All 10 evaluable samples expressed both PDGF AA and BB on tumor cells. Tumor cells were positive for PDGF-Ralpha in 10/10 samples, PDGF-Rbeta in 8/10 samples, p-PDGF-Ralpha in 6/10 samples, and p-PDGF-Rbeta in 4/10 samples. p-PDGF-Ralpha was positive in 4/10 tumor-associated endothelial cell samples and p-PDGF-Rbeta was positive in 3/10 samples. Human ovarian cancer cells expressed PDGF, PDGF-R, and p-PDGF-R when growing in culture or in the peritoneal cavity of nude mice. PDGF-R and p-PDGF-R were also present on tumor-associated endothelial cells as demonstrated by simultaneous staining with CD31 antibody. CONCLUSIONS: PDGF and the corresponding receptors were expressed in autochthonous human ovarian cancer lesions on both tumor cells and tumor-associated endothelial cells. The ligand and receptor were also present on Hey A8 and SKOV3ip1 human ovarian cancer cells growing in vitro and in the peritoneal cavity of nude mice.     

卡培他滨对高表达HER-2/neu卵巢癌裸鼠的治疗作用

目的:探讨卡培他滨对高表达HER-2/neu卵巢癌裸鼠的治疗作用。方法:66只雌性健康裸鼠皮下接种人卵巢癌SKOV3细胞,建立试验模型。根据用药情况将裸鼠分成两组:对照组(塞来昔布灌胃治疗,33只)和观察组(塞来昔布联合卡培他滨灌胃治疗,33只)。比较两组SKOV3细胞的生长抑制率、肿瘤体积及肿瘤抑制率,同时观察两组裸鼠的p53标记指数、HER-2/neu标记指数。结果:观察组的细胞生长抑制率为(65.11±0.86)%,高于对照组(40.38±0.58)%,差异有统计学意义(P0.01)。观察组的肿瘤抑制率高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。观察组裸鼠的p53标记指数、HER-2/neu标记指数均低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:卡培他滨在高表达HER-2/neu卵巢癌裸鼠的治疗中作用显著,能有效抑制肿瘤细胞的生长,作用机制可能是卡培他滨能调控p53、HER-2/neu基因表达。     

c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染对裸鼠人卵巢癌皮下移植瘤形成的抑制作用

目的 探讨c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)联合转染,对人卵巢癌细胞株SKOV3,在裸鼠皮下移植瘤形成过程中的抑制作用。方法 共分7组：Ⅰ组(正常对照)、Ⅱ组[c-erbB-2正义寡核苷酸(SODN)]、Ⅲ组(c-raf-1 SODN)、Ⅳ组(c-erbB-2 ASODN)、V组(c-raf-1 ASODN)、Ⅵ组(全剂量联合)、Ⅶ组(半剂量联合)。根据不同分组条件将相应寡核苷酸导入SKOV3细胞株内,然后接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。结果 Ⅱ、Ⅲ组与对照组成瘤能力比较,差异无显著性,Ⅳ、V组的成瘤能力明显降低,Ⅵ组与Ⅶ组的成瘤能力最低,Ⅵ组与Ⅶ第1次出现肉眼可见肿瘤的时间分别为13．7d和15．2d,最大抑瘤率分别为61．1％和71．3％。结论 反义寡核苷酸联合转染,对卵巢癌细胞的成瘤能力和肿瘤生长抑制作用更明显。     

miR-101通过调节p-ERK1/2蛋白表达对SKOV3/DDP细胞行为活性的影响

目的:探讨miR-101表达对上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP行为活性的影响及相关作用机制。方法:上调SKOV3/DDP细胞中miR-101表达水平。RT-PCR法检测SKOV3/DDP细胞中miR-101 mRNA表达水平,CCK-8检测SKOV3/DDP细胞的顺铂敏感性,划痕实验检测SKOV3/DDP细胞的迁移力,Transwell实验检测SKOV3/DDP细胞侵袭力,Annexin V-FITC/PI流式细胞实验检测SKOV3/DDP细胞凋亡率,Western blot法检测SKOV3/DDP细胞p-ERK1/2、波形蛋白(Vimentin)、钙粘蛋白E(E-cadherin)及Caspase-3蛋白表达水平。结果:与各对照组比较,miR-101组SKOV3/DDP细胞miR-101mRNA表达水平明显升高(P0.05),顺铂敏感性明显增加,IC50显著降低(P0.05);划痕距离明显增宽(P0.05),透膜细胞数显著减少(P0.05);细胞凋亡率显著增高(P0.05),p-ERK1/2及Vimentin蛋白表达水平降低(P0.05),E-cadherin及Caspase-3表达水平显著升高(P0.05)。结论:高表达的miR-101可抑制SKOV3/DDP细胞中p-ERK1/2蛋白表达,同时抑制细胞行为活性,促进顺铂诱导的细胞凋亡。     

Inhibition of hypoxia-inducible factor 1alpha expression and tumor growth in SKOV3 ovarian cancer model by sirolimus

OBJECTIVE: To investigate the inhibitory effect of the mammalian target of rapamycin (mTOR) inhibitor, sirolimus on expression of hypoxia-inducible factor (HIF)1alpha protein and growth of ovarian carcinoma in an athymic mouse xenogeneic transplant model of ovarian cancer. METHODS: Four groups of female nude mice were inoculated subcutaneously with SKOV3 cells. After inoculation, mice were treated with saline, rapamycin alone, paclitaxel alone and sirolimus + paclitaxel. In each tumor protein expressions of HIF-1alpha, bcl-2 and apoptosis were determined by immunohistochemistry and RT-PCR. RESULTS: In sirolimus and sirolimus + paclitaxel groups protein expression of HIF-1alpha was inhibited. Tumor burden in rapamycin alone, sirolimus + paclitaxel, and paclitaxel alone was reduced by 47.9% (P < 0.05), 51.0% (P < 0.05), and 31.8% (P > 0.05) respectively compared with controls. Cell apoptosis inder in sirolimus alone (36), sirolimus + paclitaxel (40), paclitaxel alone (22), increased compared with control (15), while expression of bcl-2 decreased compared with control. CONCLUSION: Sirolimus inhibited protein expression of HIF-1alpha, increased tumor apoptosis and decreased tumor growth.     

脂质体-C-erbB_2反义寡核苷酸对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤的作用

目的：探讨经脂质体—硫代磷酸化修饰的Ｃ－ｅｒｂＢ２反义脱氧寡核苷酸（Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ）作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下的成瘤能力及形态学变化。方法：利用离体途径将Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ导入卵巢上皮癌细胞，然后接种于裸鼠皮下，观察肿瘤体积的变化，并计算抑瘤率。用透射电镜观察肿瘤形态变化。结果：经脂质体－Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低，最大抑瘤率可达４１．７％。超微结构显示实验组肿瘤细胞异染色质增多，分化增高。结论：Ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因的反义调控能降低卵巢上皮癌的成瘤能力，抑制肿瘤生长，在卵巢上皮癌的基因治疗中有一定作用     

In vivo expression and antitumor activity of p53 gene transfer with naked plasmid DNA in an ovarian cancer xenograft model in nude mice

INTRODUCTION: Abnormalities in the p53 and p16 tumor suppressor genes are one of the most common occurrences associated with human neoplasia. Consequently, restoration of wild-type p53 or p16 functions is seen as a particularly promising approach for cancer gene therapy. In vitro and in vivo data have demonstrated that virus-mediated p53 gene transfer can induce active cell death and ovarian tumor regression. AIM: To evaluate the efficiency of intratumoral injection of naked DNA in tumor growth inhibition in an ovarian xenograft model. For that purpose, plasmid vectors encoding wild-type p53 (wt-p53) or p16 alone or in combination were used. METHODS: Nude mice were injected subcutaneously with the human ovarian adenocarcinoma cell line SKOV3. Three weeks after xenograft, tumor-bearing mice were injected twice a week with plasmid vectors carrying WT-p53 and/or WT-p16 cDNA. Empty plasmids and saline buffer were used as control. Tumor growth was monitored to evaluate the inhibition potential with p53 and/or p16 restoration. RESULTS: When compared to the control, intratumoral repeated injections of naked plasmid DNA encoding wt-p53 were inhibiting tumor growth. This inhibition was not observed with p16 and no synergy could be obtained between p53 and p16. p53 expression was restored in 84% of mice injected with plasmid encoding wt-p53. p16 expression was restored in 63% of mice injected with plasmid encoding p16. CONCLUSIONS: In this report we demonstrated that: (i) naked DNA represents an efficient gene transfer in the SKOV3 xenograft model; (ii) restoration of wt-p53 gene allows tumor growth inhibition; and (iii) this inhibition could be correlated with p53 expression as seen in 84% of treated mice after repeated naked DNA injections. These results allow us to envisage naked DNA as a therapeutic adjuvant in ovarian cancer treatment, concomitantly with tumor resection and chemotherapy.