大连市肠道病毒71型基因特征分析

目的 了解大连市手足口病病原体肠道病毒71型(EV71)的VP1区段的基因特征.方法 用RT-PCR方法从手足口病患者临床标本中扩增EV71的VP1基因全序列,利用软件进行同源性分析和构建系统发生树.结果 测序获得的9株病毒基因与C4亚型代表株具有较高的核苷酸和氨基酸序列同源性.在系统进化树上,9株病毒基因与C4基因亚型代表株处于同一分支.结论 大连市EV71病毒株属C4亚型.     

肠道病毒71型IgM EIA检测方法评价

目的 评估EIA试剂检测肠道病毒71型的准确性.方法 对2008年手足口病阳性标本,用EV71-IgM试剂与PCR检测、中和试验等比较不同地区EV71阳性标本的检出符合情况.结果 EV71-IgM试剂对EV71感染的急性期标本有较好的检出性,对不同地区的阳性标本检出良好,与高效价的中和阳性标本及病毒分离PCR阳性有较好对应性,检出时间早,灵敏度高,特异性为98.6%.结论 采用传统的酶联免疫法检测EV71,操作简单快速,对发病1～2 d的患者即可检出,适合作为临床EV71感染诊断的辅助手段.     

肠道病毒EV71手足口病43例临床分析

目的探讨肠道病毒EV71型手足口病临床特点和治疗。方法对2010年3月1日~6月30日在清远市人民医院经粪便检测证实为EV71病毒感染手足口病患儿的临床特点及治疗进行临床分析。结果手足口病1期15例,占34.6%,2期10例,占23.2%,3期14例,占32.5%,4期4例,占9.3%,41例手足口病患儿经过治疗,大多获得满意效果,2例因神经源性肺水肿、肺出血死亡。结论肠道病毒EV71具有明显嗜神经特性,易引起严重的中枢神经感染,如脑干脑炎,神经源性肺水肿,肺出血等危重表现,甚至死亡。     

实时荧光定量PCR快速检测肠道病毒EV71

目的建立荧光定量PCR技术用于检测肠道病毒EV71。方法临床诊断或疑似为手足口病病例的咽拭子或肛拭子387份,采用荧光定量PCR技术检测EV71病毒的感染情况。结果 EV71病毒的感染率为50.90%。年龄为2个月～6岁,其中,男性为231例,感染率为51.95%（120/231）;女性为156例,感染率为49.36%（77/156）,最小感染者5个月,最大感染者6岁。结论实时荧光定量PCR技术可用于肠道病毒EV71的检测,有利于感染者的早发现并对患者治疗提供依据。     

荆门地区肠道病毒EV71型感染的流行病学调查

目的探讨肠道病毒EV71型在湖北荆门地区手足口病流行病学中的重要意义。方法收集2008年荆门地区手足口病临床诊断病例682份,对该病发生地区、时间、人群分布进行统计;分离102份血清、粪便、咽拭子及疱疹液标本的病毒并运用RT-PCR扩增技术对其病原学进行检测。结果该市2008年手足口病城区发病率为113.55/l0万,农村发病率为49.26/10万,城区发病显著高于农村（P〈0.01）;流行季节以春季及初夏为主;病原学检查主要为EV71;2-3岁年龄段多发。结论手足口病流行具有明显的地域、时间、年龄等特点;EV71病毒是手足口病实验室诊断病例的主要病原。     

肠道病毒71型（EV71）对ICR小鼠的感染

目的 研究肠道病毒71型经不同途径感染不同日龄ICR小鼠后的感染状况,了解肠道病毒71型的感染特点,为了解EV71小鼠感染机制和模型制备提供实验信息和技术支撑.方法 分别通过口腔途径、颅腔途径、肌肉途径及腹腔途径感染1日龄、7日龄及3 ～ 4周龄SPF级ICR小鼠,定期安乐动物,采集各器官组织进行病原学诊断,确定EV71病毒感染情况;同时建立一步RT-PCR、病毒分离、IFA及IEA等方法.结果 经腹腔途径感染成年鼠出现竖毛、弓背、消瘦症状,其他各途径感染小鼠感染后未见竖毛、弓背、觅食减少、体重减轻、精神呆滞及神经系统症状.颅腔注射3 ～ 4周龄ICR小鼠能在脑组织检测到病毒RNA,腹腔注射和肌肉注射1日龄乳鼠能在肌肉组织和肠道检测到病毒RNA,其中,肌肉组织病毒分离可检测到活病毒.本研究同时建立了分子生物学、血清学方法,为今后研究其它适合EV71的动物模型奠定了基础.结论 临床分离的EV71毒株通过口腔接种、颅腔、肌肉、腹腔注射途径感染1日龄、7日龄及3 ～ 4周龄SPF级ICR小鼠的疾病程度和病毒检出不同,ICR乳鼠及成年鼠可作为该病毒感染机制、病毒体内分布等基础研究,但用作EV71动物模型应用,感染程度尚不十分理想.     

手足口病EV71型与其他肠道病毒型患者心肌酶谱结果分析

目的 比较EV71型与其他肠道病毒型手足口病患者心肌酶谱结果是否有差异,为临床医师诊治EV71型感染的手足口病提供参考依据.方法 选取我院感染性疾病科收治的手足口病患儿89例,应用RT-PCR法检测患儿咽拭子肠道病毒类型,分为肠道病毒71型(EV71)组和其他肠道病毒感染组,分析2组患者心肌酶谱结果.结果 2组患儿心肌酶谱各项检测结果比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 EV71型与其他型肠道病毒手足口病感染患者心肌酶谱检测结果无差异,不能用心肌酶谱来评估EV71型肠道病毒感染以及患者病情的严重性.     

肠道病毒EV71型手足口病的临床观察及护理

目的总结98例肠道病毒EV71型手足口病患儿的病情观察及护理要点,以利早期发现重症病例,降低患儿的病死率,预防并发症。方法对收治的98例肠道病毒EV71型手足口病患儿,其中病情较重和危重的16例早期转院治疗,对82例予积极治疗和精心护理。结果82例患儿痊愈出院,无发生医院感染及死亡病例。结论系统的病情观察及精心的护理,可防止本病的传播,早期诊断、早期治疗可提高治愈率,防止并发症的发生。     

上海市虹口区预防接种不良反应主动与被动监测情况分析

目的：为了解预防接种不良反应主动与被动监测情况，为AEFI监测体系提供科学依据。方法：采用对照比较的方法分析虹口区2005年1-9月主动与被动监测预防接种不良反应情况。结果：主动监测的发热、硬结、红肿反应发生率为731．53／10万、414．53／10万、170．69／10万显著高于被动监测73．78／10万、8．20／10万、16．40／10万，主动监测的过敏性皮疹反应率105．67／10万，显著高于被动监测6．56／10万。门诊自身前后比较，4-9月主动监测的发热、硬结、红肿反应发生率显著高于1-3月28．06／10万、56．12／10万、28．06／10万；1-3月被动监测异常反应为0,4-9月主动监测异常反应发生率为113．79／10万。结论：主动监测预防接种不良反应，敏感性高，特异性好，对于完善国家对异常反应的经济补偿政策：正确评估接种疫苗后可能发生的不良反应事件．并提出预防和处理建议．都具有重要意义。     

长江中下游三所城市143例71型肠道病毒的基因特征分析

目的 了解长江中下游三城市肠道病毒71型（EV71）基因型的分布状况.方法 利用逆转录半巢式PCR的方法检测三所城市143份临床诊断为手足口病患儿的血清和咽拭子标本.结果 143份标本中检测到阳性EV71 RNA33份（23％）;经过测序证实33份标本均为EV71 C4型.结论 三所城市的手足口病主要由C型EV71病毒引起.不同城市间EV71病毒存在一定的变异.     

我国疫苗安全保障系统的完善——基于上市后安全风险监测视角

随着系列疫苗安全事件相继曝出,疫苗的安全问题被推到舆论的风口浪尖,反映出我国疫苗安全监管体系中尚存在漏洞.本文对山西、山东2次疫苗案件的发生原因和暴露出的问题进行深层剖析,指出我国在疫苗上市后安全风险监测中存在的问题,并通过对美国被动、主动监测疫苗上市后安全风险方式的梳理,基于上市后安全风险监测视角,从预防、预警、应急处置三方面提出完善我国疫苗安全保障系统的具体建议.     

人肠道病毒71型感染致重症手足口病的危险因素分析

目的 探讨肠道病毒71型感染导致重症手足口病的危险因素。方法 选取2015年5月至2017年10月间我院感染科收治的EV71型手足口病患儿140例为研究对象,依据临床分期标准分为普通病例组95例和重症病例组45例,收集并比较两组患儿一般资料、临床表现、实验室指标等,采用多因素Logistics回归分析判断影响手足口病重症化的危险因素。结果 两组患儿的性别、年龄、BMI间比较差异无统计学意义（P>0.05）;两组患儿的ALT、AST、脑脊液葡萄糖浓度比较差异无统计学意义（P>0.05）,但重症病例组的WBC [（12.65±3.51）×10⁹/L vs （9.16±3.44）×10⁹/L]、CRP[（10.67±4.75）mg/L vs（6.58±3.04） mg/L]、热程[（7.46±2.21）d vs（2.93±1.22）d]、热峰[（38.91±0.35） ℃ vs（38.34±0.45） ℃]、血糖[（8.40±0.78） mmol/L vs（5.96±1.14） mmol/L]、CK-MB[（17.84±1.57）U/L vs（15.75±1.64）U/L]、NP[53.47（31.50~70.22）% vs 46.89（29.44~67.01）%]、肢体抖动（37.78% vs 9.47%）、脑脊液蛋白质浓度[319.63（211.40~463.53）mg/L vs 224.82（172.24~396.91）mg/L]、脑脊液细胞数[（18.74±5.62）×10⁶/L vs （4.87±2.03）×10⁶/L]均较普通病例组显著升高,脑脊液氯化物水平[（117.52±2.84）mmol/L vs （119.75±3.09）mmol/L]较普通病例组显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）;多因素Logistics回归分析发现,热程延长（OR=8.812）、热峰升高（OR=682.359）、血清CRP（OR=1.920）、CK-MB水平升高（OR=6.299）以及脑脊液蛋白质浓度升高（OR=1.014）是手足口病重症化的独立危险因素（P<0.05）。结论 EV71感染手足口病重症化与患儿年龄、性别无关,与热程、热峰、CRP、CK-MB、脑脊液蛋白质浓度呈正相关,可作为判断EV71感染手足口病重症化的独立危险因素。     

EV71型手足口病疫苗的效果评价

目的了解EV71型手足口病疫苗的效果。方法收集2009～2018年手足口病疫情资料,资料来源于国家疾病监测信息管理系统。2016年8月开始购进疫苗,2016～2018年疫苗接种数由各县区上报,病原学结果自2012年开始检测,收集2012～2018年病原学结果。回顾性分析手足口病资料。通过观察2016～2018年EV71型手足口病疫苗的接种数与发病情况的关系,评价疫苗的效果。结果发病年龄主要集中在1岁组和2岁组,分别占40.44%和25.72%。2012年EV71构成比为24.42%,2013年65.57%,2014年22.03%,2015年59.29%,2016年18.70%,2017年32.20%,2018年10.29%,2013年、2015年、2017年EV71是优势菌株。2016年病例数5333例,发病率62.74/10万,2017年病例数是3991例,发病率46.29/10万,2018年病例数4823例,发病率55.21/10万。2017年EV71型重症病例仅有5例,比2013年15例下降66.7%,比2015年19例下降73.68%。2012～2018年手足口病重症病例中EV71型平均阳性率是81.67%。结论 5岁以内特别是1～2岁组是发病的高峰期,2017年EV71是优势菌株。2017年发病率和发病数均低于2016年和2018年。EV71病毒易致重症,2017年EV71流行强度和重症数低于2013年和2015年。虽然接种EV71型手足口病疫苗不能预防所有类型的手足口病,只对EV71型手足口病有效,但能降低发病率和重症率,是目前最经济、最有效的预防手段。     

Dynamic change of mother-source neutralizing antibodies against enterovirus 71 and coxsackievirus A16 in infants

Background Enterovirus 71 （EV71） and coxsackievirus A16 （Cox A16） are major causative agents for hand, foot and mouth disease （HFMD）. Studies indicate that the frequent HFMD outbreaks result in a few hundreds children＇s death in China in recent years. The vaccine and other research for HFMD need to be developed urgently. The aims of our study were： to explore dynamic development of mother-source neutralizing antibodies against EV71 and Cox A16 in infants from Jiangsu Province, China, and to provide the fundamental data for further establishing of corresponding immunization course. Methods Peripheral blood samples were collected from 133 of parturient women once immediately before delivery and their infants at two and seven months of age. Method of micro-dose cytopathogenic effect was used to measure neutralizing antibodies against EV71 and Cox A16, respectively. Results Seropositive rates of anti-EV71 and anti-Cox A16 in prenatal women were 79.7% （106/133） and 92.5% （123/133）, respectively; geometric mean titers （GMTs） were 29.0 and 61.9; 75.9% （101/133） prenatal women were both positive in anti-EV71 and anti-Cox A16; seropositive rates of anti-EV71 and anti-Cox A16 were 25.6% （34/133） and 38.3% （51/133） in infants at two months of age; GMTs were 12.3 and 18.0, respectively. GMTs of anti-EV71 were significantly higher for infants at seven months （82.6） compared with that at two months （P 〈0.05）, showing infants had inapparently infected by EV71 during two to seven months. Although only one offspring （0.75%） at seven months was found having anti-Cox A16 transfered from maternal, this observation suggested no maternal antibody may remain in infants at seven months. Conclusions The prevalence of EV71 and Cox A16 were relatively high in Jiangsu Province. Bivalent vaccine against both EV71 and Cox A16 should be developed, and the ideal time point for prime immunization for infants is around 2-5 months of age.     

肠道病毒71型特异性单克隆抗体的制备及其在病毒鉴定中的应用

目的：建立肠道病毒71型（ EV71）特异性检测的免疫荧光方法用于病毒分离培养后的EV71鉴定,为EV71生物学特征研究和疫苗株的筛选奠定基础。方法：以EV71 VP1为免疫原制备单克隆抗体,用经测序鉴定的肠道病毒毒株建立EV71特异性免疫荧光方法;将不同地区收集的手足口病患儿的临床标本进行病毒分离,利用EV71特异性单抗进行分离培养后的病毒鉴定。结果：制备获得2株单抗,经鉴定其中1株3 E12为EV71特异性单抗;以此单抗建立的免疫荧光方法对EV71感染细胞呈阳性反应,而与柯萨基病毒A16和埃可病毒6等非EV71肠道病毒不反应。从104份手足口病临床标本中共分离到35株病毒,产生肠道病毒典型的细胞病变;用3E12特异性单抗免疫荧光鉴定分离病毒,其中29株为EV71,与RT-PCR验证结果完全一致。结论：成功制备获得EV71特异性单克隆抗体,以此单抗建立的EV71特异性免疫荧光方法敏感性高、特异性强,可用于分离培养EV71的鉴定。     

肠道病毒71感染的手足口病患儿体液免疫检濒及应用价值

目的通过测定手足口病（HFMD）患儿机体血清炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-01）、白细胞介素-6（IL-6）．免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）及补体C3、C4水平,以探讨HFMD患儿体液免疫与HFMD的关系。方法收集舟山医院妇幼保健院区2010年6月-2012年12月HFMD患儿50例,其中30例肠道病毒71（EV71）感染呈阳性,20例呈阴性。另选取同期20例健康体检儿为对照。血清免疫球蛋白如IgA、IgG,IgM和补体C3、C4水平采用放射性免疫扩散法测定,血清TNF-α、IL-6采用化学发光免疫分析法进行测定。结果EV71阳性感染的HFMD患儿血清TNF-α、IL-6、IgA、IgG、IgM及补体C3、C4水平依次为（66．0±11．2）ng／L、（44．3±7．7）ng／L、（0．50±0．37）g／L、（8．09±3．55）g／L、（1．47±0．70）g／L、（0．96±0．51）g／L、（0．21±0．07）g／L,与其他肠道病毒引起HFMD相应指标水平比较,差异无统计学意义（t=0．462、0．734、0．209、0．125、0．259、0．209、0．833,均P〉0．05）,但EV71阳性感染组血清TNF—α、IL-6、IgA、IgG、IgM和补体C3、C4水平与对照组比较,差异均有统计学意义（t=20．398、19．496、4．319、2．756、2．379、2．146、3．148,均P〈0．05）,其中IgA、IgG和补体C3、C4水平较对照组明显降低,而IgM、TNF—α、IL-6则明显升高。结论EV71感染HFMD患儿的体液免疫功能紊乱．TNF—α、IL-6参与了HFMD的病理过程,可为HFMD的临床诊断、疗效观察及预后判断提供一定的理论依据。     

手足口病毒和白细胞分类的探讨*

目的 探讨手足口病患儿血常规的特点及其在预测病情方面的价值。方法 收集2015年4月—2018年7月四川绵阳四〇四医院诊断为手足口病患儿基本信息,以及他们在四川绵阳四〇四医院患病期间的血常规检测结果,主要是白细胞（WBC）、中性粒细胞（N）、淋巴细胞（L）和单核细胞（M）,将肠道病毒71型（EV71）阳性、柯莎奇病毒A16型（CVA16）阳性与正常组的结果进行差异性分析,并采用受试者工作特征（ROC）曲线评价各指标对EV71阳性、CVA16阳性的预测价值。结果 选取手足口病患儿7?342例,病毒检出例数男性多于女性,以幼儿阶段（1～3岁）检出人数最多,学龄前阶段（>3～6岁）次之,各年龄段的检出率差异有统计学意义（P?<0.05）。EV71和CVA16阳性者WBC、L和M较正常组升高（P?<0.05）,且CVA16组的M值高于EV71组（P?<0.05）。L在EV71和CVA16中的曲线下面积（AUC）为0.865（95% CI：0.832,0.897）和0.865（95% CI：0.840,0.889）,敏感性和特异性分别为73.42%、96.55%和75.22%、96.55%。M在EV71和CVA16的曲线下面积分别为0.617和0.672,敏感性和特异性分别为48.50%、93.10%和54.74%、93.10%。结论 WBC、N、L和M对CVA16和EV71感染有一定的诊断指导价值,其中L的感染预测价值最高,M次之。在鉴别CVA16和EV71感染时,M具有一定的预测价值。     

Dynamic change of mother-source neutralizing antibodies against enterovirus 71 and coxsackievirus A16 in infants

Background Enterovirus 71 (EV71) and coxsackievirus A16 (Cox A16) are major causative agents for hand, foot and mouth disease (HFMD). Studies indicate that the frequent HFMD outbreaks result in a few hundreds children's death in China in recent years. The vaccine and other research for HFMD need to be developed urgently. The aims of our study were: to explore dynamic development of mother-source neutralizing antibodies against EV71 and Cox A16 in infants from Jiangsu Province, China, and to provide the fundamental data for further establishing of corresponding immunization course.Methods Peripheral blood samples were collected from 133 of parturient women once immediately before delivery and their infants at two and seven months of age. Method of micro-dose cytopathogenic effect was used to measure neutralizing antibodies against EV71 and Cox A16, respectively.Results Seropositive rates of anti-EV71 and anti-Cox A16 in prenatal women were 79.7% (106/133) and 92.5% (123/133), respectively; geometric mean titers (GMTs) were 29.0 and 61.9; 75.9% (101/133) prenatal women were both positive in anti-EV71 and anti-Cox A16; seropositive rates of anti-EV71 and anti-Cox A16 were 25.6% (34/133) and 38.3% (51/133) in infants at two months of age; GMTs were 12.3 and 18.0, respectively. GMTs of anti-EV71 were significantly higher for infants at seven months (82.6) compared with that at two months (P <0.05), showing infants had inapparently infected by EV71 during two to seven months. Although only one offspring (0.75%) at seven months was found having anti-Cox A16 transfered from maternal, this observation suggested no maternal antibody may remain in infants at seven months.Conclusions The prevalence of EV71 and Cox A16 were relatively high in Jiangsu Province. Bivalent vaccine against both EV71 and Cox A16 should be developed, and the ideal time point for prime immunization for infants is around 2-5 months of age.     

Dynamic change of mother-source neutralizing antibodies against enterovirus 71 and coxsackievirus A16 in infants

Background Enterovirus 71 (EV71) and coxsackievirus A16 (Cox A16) are major causative agents for hand, foot and mouth disease (HFMD). Studies indicate that the frequent HFMD outbreaks result in a few hundreds children's death in China in recent years. The vaccine and other research for HFMD need to be developed urgently. The aims of our study were: to explore dynamic development of mother-source neutralizing antibodies against EV71 and Cox A16 in infants from Jiangsu Province, China, and to provide the fundamental data for further establishing of corresponding immunization course.Methods Peripheral blood samples were collected from 133 of parturient women once immediately before delivery and their infants at two and seven months of age. Method of micro-dose cytopathogenic effect was used to measure neutralizing antibodies against EV71 and Cox A16, respectively.Results Seropositive rates of anti-EV71 and anti-Cox A16 in prenatal women were 79.7% (106/133) and 92.5% (123/133), respectively; geometric mean titers (GMTs) were 29.0 and 61.9; 75.9% (101/133) prenatal women were both positive in anti-EV71 and anti-Cox A16; seropositive rates of anti-EV71 and anti-Cox A16 were 25.6% (34/133) and 38.3% (51/133) in infants at two months of age; GMTs were 12.3 and 18.0, respectively. GMTs of anti-EV71 were significantly higher for infants at seven months (82.6) compared with that at two months (P <0.05), showing infants had inapparently infected by EV71 during two to seven months. Although only one offspring (0.75%) at seven months was found having anti-Cox A16 transfered from maternal, this observation suggested no maternal antibody may remain in infants at seven months.Conclusions The prevalence of EV71 and Cox A16 were relatively high in Jiangsu Province. Bivalent vaccine against both EV71 and Cox A16 should be developed, and the ideal time point for prime immunization for infants is around 2-5 months of age.