脑心清片对脂多糖诱导的BV-2 细胞的抗炎及抗凋亡作用

目的：通过研究脑心清片（NXQ）对脂多糖（LPS）诱导的小胶质细胞（BV-2）的炎症因子及凋亡细胞的表达作用,探讨脑心清片对脑卒中的抗炎及抗细胞凋亡的作用。方法：采用LPS 诱导的BV-2 细胞作为体外神经炎症模型,用脑心清片进行干预,用ELISA 检测促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量水平;采用Western Blot 法检测IL-6、IL-1β和TNF-α、p-Akt、p-Erk、Bax、Bcl-2 的蛋白表达水平。结果：LPS 刺激BV-2 细胞24 h 之后,IL-6、IL-1β和TNF-α炎症因子表达水平明显升高（P<0.01）,NXQ 预处理后,IL-1β含量在10、20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组均有显著性的差异（P<0.05,P<0.05）,IL-6、TNF-α含量在20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组均有统计学意义（P<0.05）;LPS 刺激BV-2 细胞24 h 之后,IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,NXQ 预处理后,能呈现浓度依赖性的降低这些蛋白的表达水平,并且在10、20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组均有显著性的差异（P<0.05,P<0.01）;LPS 刺激BV-2 细胞24 h 之后,p-Akt、p-Erk 蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,NXQ 预处理后,能呈现浓度依赖性的升高这些蛋白的表达水平,并且在10、20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组均有显著性的差异（P<0.01,P<0.01）;LPS 刺激BV-2 细胞24 h 之后,促凋亡蛋白Bax 表达水平明显升高（P<0.01）,NXQ 预处理后,Bax 蛋白表达水平下降,
并且在20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组有统计学意义（P<0.05）。LPS 刺激BV-2 细胞24 h 之后,抗凋亡蛋白Bcl-2 表达水平明显降低（P<0.01）,NXQ 预处理后,Bcl-2 蛋白表达水平呈现浓度依赖性的升高,并且在10、20 μmol·L-1 时相对于LPS 处理组均有统计学意义（P<0.05,P<0.05）。结论：脑心清片对脂多糖诱导的小胶质细胞产生的炎症和毒性具有一定的调节作用,通过调节炎症因子的表达和激活Akt/Erk 通路,具有抗炎和抗细胞凋亡作用,进一步阐明了脑心清片抗脑卒中的作用机理。     

高糖活化小鼠小胶质细胞BV-2模型的建立

目的 观察高糖（Glu）对小鼠神经小胶质细胞BV-2活化的影响。方法 将BV-2细胞分成：正常对照组（25mmol/L Glu）,脂多糖组（1μg/ml LPS）,高糖组（75mmol/L Glu）,培养24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT检测细胞活力,激光扫描共聚焦显微技术、Western blot法及实时荧光定量PCR技术检测BV-2活化的标志物CD11b的表达。结果 高糖组、LPS组细胞活力与正常对照组相比差异均无统计学意义（P >0.05）;高糖组BV-2 CD11b蛋白含量较正常对照组显著升高（P<0.01）,与LPS组类似（P >0.05）;高糖组BV-2 CD11b-mRNA值较正常对照组显著升高（P<0.01）,且显著高于LPS组（P<0.01）。结论 75mmol/L高糖培养BV-2 24h,在不影响细胞活力的条件下,可显著上调BV-2活化标志物CD11b蛋白及mRNA表达,作用与LPS相当。     

红景天苷对高原红细胞增多症模型大鼠骨髓CD71+有核红细胞凋亡的影响

目的：探讨红景天苷对高原红细胞增多症（HAPC）模型大鼠骨髓CD71+有核红细胞（RBC）凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法：45只SD雄性大鼠随机分为对照组（海拔1 500 m条件+NaCl溶液）、模型组（海拔5000m条件+NaCl溶液）和药物组（海拔5 000 m条件+0.15 g·kg-1·d-1红景天苷）,每组15只。检测各组大鼠血常规中RBC数、血红蛋白（Hb）水平和红细胞比容（HCT）水平,流式细胞术检测各组大鼠骨髓CD71+有核RBC百分率、骨髓CD71+有核RBC凋亡率、骨髓CD71+有核RBC中线粒体膜电位（MMP）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达水平,Western blotting法检测各组大鼠骨髓CD71+有核RBC中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9 (Caspase-9)蛋白表达水平。结果：与对照组比较,模型组大鼠外周血中RBC数、Hb水平和HCT水平均升高（P<0.01）,骨髓CD71+有核RBC百分率和骨髓CD71+有核RBC凋亡率升高（P<0.01...     

丙泊酚对小胶质细胞炎症因子的影响及其机制研究

目的 探讨丙泊酚对小胶质细胞炎症因子的影响及其机制。方法 将小胶质BV-2 细胞分为对照组、丙泊酚组、脂多糖（LPS）组、LPS+ 丙泊酚组,对照组细胞加入PBS 液,丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μmol/L,LPS 组细胞加入LPS 1μg/ml,LPS+ 丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μmol/L+LPS 1μg/ml。采用MTT 比色实验测定细胞活性,采用酶联免疫吸附法测定细胞上清液中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,采用逆转录- 聚合酶链反应测定细胞p38MAPK 和TLR4mRNA 的表达,采用Western blot 检测细胞p38MAPK 和TLR4 蛋白表达量。结果 LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞活性低于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞活性高于LPS 组（P <0.05）;LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平高于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平低于LPS 组（P <0.05）;LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞p38MAPK、TLR4 mRNA 和蛋白表达量高于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚 组小胶质细胞p38MAPK、TLR4 mRNA 和蛋白表达量低于LPS 组（P <0.05）;丙泊酚组和对照组小胶质细胞各指标比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 丙泊酚能抑制小胶质细胞过度活化和炎症反应,其机制可能与丙泊酚可下调TLR4-p38MAPK 信号通路有关。     

西洋参茎叶总皂苷抑制氧糖剥夺/复氧引起的BV-2小胶质细胞炎性活化作用及其机制研究

目的：研究西洋参茎叶总皂苷（PQS）对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）引起的小鼠BV-2小胶质细胞炎性活化的抑制作用，并初步阐明其作用机制。方法：BV-2细胞分为对照组、OGD/R组、PQS各剂量+OGD/R组。对照组细胞在常规条件下培养；OGD/R组细胞在OGD/R条件下培养；PQS各剂量+OGD/R组细胞给予PQS(30、60、90μg/mL)预处理后，转入OGD/R条件培养。通过酶联免疫法检测上清液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的含量，通过CCK-8法检测PQS对OGD/R条件下细胞增殖活性的影响，流式细胞术检测胶质细胞活化标志蛋白离子钙结合适配器分子1(Iba-1)和酸性溶霉菌糖蛋白（CD68）的表达，Western blot检测核因子-κB(NF-κB)p65磷酸化及其抑制因子NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)和NF-κB抑制因子（NKRF）蛋白的表达。结果：OGD/R诱导能够明显增加BV-2细胞上清液中炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量（P<0.01），增强BV-2细胞对数期增殖活性（P<0.0...     

PPARγ激动剂对雄性大鼠脑出血后血肿周围小胶质细胞极化的影响

目的 通过建立大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage, ICH)模型,研究PPARγ激动剂(罗格列酮)对雄性SD大鼠脑出血后血肿周围小胶质细胞(M1、M2)极化的影响。方法 将48只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组(Control)、脑出血模型组(ICH)、氯化钠干预组(NaCl)、罗格列酮干预组(RSG),每组12只。用大鼠自体血建立ICH模型;各组大鼠分别于6、24、48、72 h时间点进行神经功能评分(Longa评分),采用免疫组化和光密度法检测血肿周围组织CD16、CD206表达情况。结果 各时间点ICH组的Longa评分均高于NaCl组(P<0.05)。各时间点RSG组的Longa评分均低于ICH组(P<0.05)。脑出血造模后6 h RSG组CD16表达(0.226±0.004)较Control组(0.210±0.004)、ICH组(0.221±0.004)和NaCl组(0.220±0.005)的表达均显著升高(P<0.05)。脑出血造模后24 h RSG组CD206表达(0.204±0.004)较Control组(0.184±...     

双氢青蒿素抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 观察双氢青蒿素(dih ydroartemisinin,DHA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及其机制.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,用不同浓度DHA(0.5、1、2、4μmol/L)处理细胞,CCK-8检测细胞活性;选取lμmol/L DHA干预细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;RT-PCR检测iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平;ELISA检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平;Western blot检测NF-κB、IκBα及TLR4的蛋白表达.结果 低剂量的DHA(＜2μmol/L)对BV-2细胞活性无明显影响(P＞0.05),DHA可抑制LPS引起的BV-2细胞形态变化,DHA抑制活化的BV-2细胞iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达(P＜0.01),减少IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子释放(P＜0.01),明显降低TLR4的蛋白表达,减少细胞质内IκBα的表达,并抑制NF-κB向核内移位(P＜0.01).结论 DHA可能通过作用于TLR4/NF-κB通路,抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活,从而抑制炎症因子的产生,发挥抗炎作用.     

青蒿琥酯对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞激活的抑制作用

目的 观察青蒿琥酯对脂多糖（LPS）诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应的抑制作用.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,观察青蒿琥酯（0.5、1.5、3.5 μmol/L）对细胞的作用.MTT检测细胞活性;Griess试剂法检测一氧化氮（NO）的释放;Western Blot检测核转录因子κB（NF-κB）的蛋白表达.结果 青蒿琥酯减少了活化的BV-2小胶质细胞NO的释放,降低了核内NF-κB的蛋白表达.结论 青蒿琥酯可能通过抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活从而抑制NO的产生,发挥抗炎作用。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨参芪调肾方改善CSE诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制

目的：基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨参芪调肾方（SQTS）改善香烟烟雾提取物（Cigarette smoking extract, CSE）诱导小鼠肺泡巨噬细胞（MH-S）炎症反应的作用机制。方法：以MH-S细胞为研究对象，通过CCK-8法分析SQTS对MH-S细胞的安全性及药效浓度；随后MH-S分为空白组、模型组（8%CSE）和SQTS低、中、高剂量组（40、80、160 mg/L）。ELISA检测细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6含量；DCFH-DA荧光探针法检测细胞中ROS水平；Westernblot检测TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白的表达，使用TLR4抑制剂TAK-242验证SQTS在TLR4/NF-κB/NLRP3通路上的作用。结果：与空白组比较，CSE组细胞活力降低，炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加（P<0.05）,ROS荧光表达水平显著升高（P<0.01）,TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白表达明显增加（P<0.05）；与模型组比较，参芪调肾方各剂量组细胞活力升高，以上各指标表达水平均有所降低（P&l...     

骨髓间充质干细胞抑制小胶质细胞介导的炎症反应

目的 研究骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMMSCs）对小胶质细胞介导的炎症反应的抑制作用。方法：实验分为四组：组一：小胶质细胞（BV-2)生长于DMEM(High Glucose)培养液中;组二：BV-2细胞生长于加入脂多糖（LPS）的上述培养液中;组三：BV-2细胞、BMMSCs共培养于加入LPS的上述培养液中;组四：骨髓间充质干细胞（BMMSCs）生长于加入LPS的上述培养液中。观察BV-2细胞的生长状态、电镜超微结构变化及其分泌的炎症因子TNF-α表达量的变化。结果：光镜下BV-2细胞密度依次为：组一>组三>组二,组四中BMMSCs生长状态良好;电镜下可见组二BV-2细胞内出现大量肿胀及空泡化的线粒体、内质网等细胞器,少见生长活跃多核仁细胞,同时可见大量崩解细胞,组三细胞状态明显好于组二;BV-2细胞分泌的炎症因子TNF-α表达量依次为组二>组三>组一>组四。结论 BM-MSCs抑制小胶质细胞介导的炎症反应,进而发挥神经保护作用。     

双氢青蒿素对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞TLR/MyD88信号通路的影响研究

背景　类风湿关节炎（RA）的发病机制复杂,已有研究证实Toll样受体（TLR）在RA的发病中起关键作用,其表达于树突状细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞等细胞表面,识别病原体不同的分子结构,进而上调炎性细胞因子和趋化因子,激活细胞内的信号转导通路,引起宿主细胞发生自身炎性反应,在自身免疫性疾病中发挥重要作用。目的　观察双氢青蒿素（DHA）对RA患者外周血单个核细胞（PBMCs）TLR4/MyD88信号通路及蛋白表达的影响。方法　选取2017年10月-2018年12月于内蒙古科技大学包头医学院第二附属医院就诊的活动期RA患者10例为观察组,同时随机选取本院体检中心健康体检者10例为对照组。取两组外周血PBMCs分离培养,将PBMCs分为5组,每组设5个复孔。（1）对照组：健康志愿者外周血PBMCs,不给予干预TLR介导的信号通路;（2）RA组：RA患者外周血PBMCs,不给予干预TLR介导的信号通路;（3）TLR2抑制剂组：RA患者外周血PBMCs,给予100 μg/L的TLR2抑制剂干预TLR介导的信号通路;（4）DHA低剂量组：RA患者外周血PBMCs,给予200 μmol/L的DHA干预TLR介导的信号通路;（5）DHA高剂量组：RA患者外周血PBMCs,给予1 000 μmol/L的DHA干预TLR介导的信号通路。检测并比较5组TLR2阳性率、TLR2 mRNA、MyD88 mRNA、TLR2、MyD88、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及白介素6（IL-6）水平。结果　RA组TLR2阳性率高于对照组、TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2阳性率高于DHA高剂量组（P<0.05）。RA组TLR2 mRNA、MyD88 mRNA高于对照组、TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2 mRNA、MyD88 mRNA高于DHA高剂量组（P<0.05）。TLR2抑制剂组、RA组、DHA低剂量组、DHA高剂量组TLR2、MyD88高于对照组（P<0.05）。RA组TLR2、MyD88高于TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TLR2、MyD88高于DHA高剂量组（P<0.05）。TLR2抑制剂组、RA组、DHA低剂量组、DHA高剂量组TNF-α、IL-6水平高于对照组（P<0.05）。RA组TNF-α、IL-6水平高于TLR2抑制剂组（P<0.05）;DHA低剂量组TNF-α、IL-6水平高于DHA高剂量组（P<0.05）。结论　DHA可抑制RA患者的PBMCs中TLR2、MyD88表达和上清液中TNF-α及IL-6水平,可能与其可抑制TLR4/MyD88信号通路介导的炎性反应有关。     

TLR-4 介导的固有免疫在类风湿关节炎模型大鼠发病过程中的意义

[摘要] 目的 研究弗氏完全佐剂性关节炎（AIA） 大鼠外周血单核细胞（ PBMC） Toll 样受体4 （Toll-like receptor 4,TLR4）的表达及其与关节炎评分的关系。方法 流式细胞仪测定CD14+TLR4+细胞占CD14+细胞的比例和TLR4-PE的平均荧光强度（MIF） ;RT-PCR 法测定PBMC TLR4 mRNA 的表达量。比较造模后15d与正常对照组和造模后25d 时CD14+TLR4+/CD14+、MIF及其TLR4 mRNA 表达量的差异,并分析关节炎评分与TLR4 MIF的相关性。结果 在造模后15 d ,CD14+ TLR4+/CD14+、TLR4 MIF和PBMC TLR4 mRNA 的表达较正常对照组和造模后25 d 明显增高（P<0.01）,而且TLR4 MIF 与关节炎的评分有明显的相关性（15d：r=0.826,P<0.01;25d：r=0.688, P<0.05）。但造模后25d,CD14+TLR4+/CD14 +、TLR4 MIF和PBMC TLR4 mRNA的表达与正常对照组和造模前相比无统计学意义（P>0.05）。结论 TLR4 与AIA 发病有密切关系,提示固有免疫反应在类风湿性关节炎（RA）及其他自身免疫性疾病的发病中有重要的作用。     

精胺对辐射所致氧化损伤H9c2心肌细胞的影响研究

背景　恶性肿瘤的发病率不断上升,放疗所致的正常器官的辐射损伤难以避免,精胺是具有极高生物活性的一种多胺类物质,研究证明外源性精胺具有一定的活性氧清除剂作用,而心脏作为常见的辐射损伤器官,外源性精胺对辐射损伤的心肌细胞的影响研究较少。目的　探讨精胺对辐射所致氧化损伤H9c2心肌细胞的影响。方法　2018年12月至2020年12月,取对数生长期的H9c2心肌细胞加入精胺,分为100 μmol/L组、200 μmol/L组、400 μmol/L组,空白对照组为加等量不含药物的培养液,采用CCK8溶液计算各组细胞培养12、24、48 h的存活率。根据前期筛选结果将体外培养的H9c2心肌细胞分为空白对照组（单纯DMEM培养基）、单纯辐射组（单纯X线照射）、辐射+100 μmol/L精胺组及辐射+200 μmol/L精胺组;各组用医用直线加速器进行照射,X线照射后继续培养0、12、24、48 h,计算细胞凋亡率。使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,荧光显微镜拍摄各组细胞照射后状态,丙二醛（MDA）试剂盒检测各组细胞MDA水平,总超氧化物歧化酶（T-SOD）试剂盒检测各组细胞的SOD活性。结果　100 μmol/L组、200 μmol/L组、400 μmol/L组24 h细胞存活率高于12、48 h（P<0.05）。处理时间12 h：空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、200 μmol/L组及400 μmol/L组（P<0.05）;100 μmol/L组、200 μmol/L组细胞存活率高于400 μmol/L组（P<0.05）。处理时间24 h：空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、400 μmol/L组（P<0.05）;100 μmol/L组细胞存活率低于200 μmol/L组,高于400 μmol/L组（P<0.05）;200 μmol/L细胞存活率高于400 μmol/L组（P<0.05）。处理时间48 h：空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、200 μmol/L组及400 μmol/L组（P<0.05）;100 μmol/L组细胞存活率低于200 μmol/L组,高于400 μmol/L组（P<0.05）;200 μmol/L组细胞存活率高于400 μmol/L组（P<0.05）。处理时间0 h：辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组细胞凋亡率高于空白对照组（P<0.05）;辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组细胞凋亡率高于单纯辐射组（P<0.05）;辐射+200 μmol/L精胺组细胞凋亡率低于辐射+100 μmol/L精胺组（P<0.05）。处理时间为12、24、48 h细胞凋亡情况同处理时间为0 h。空白对照组0 h细胞凋亡率低于12、48 h（P<0.05）,12 h细胞凋亡率低于24 h（P<0.05）,24 h细胞凋亡率低于48 h（P<0.05）。辐射+200 μmol/L精胺组24 h细胞凋亡率低于0 h、12 h和48 h（P<0.05）,12 h细胞凋亡率低于0、48 h（P<0.05）,24 h细胞凋亡率低于48 h（P<0.05）。辐射+100 μmol/L精胺组24 h细胞凋亡率低于0、48 h（P<0.05）,12 h细胞凋亡率低于0、48 h（P<0.05）。单纯辐射组0 h细胞凋亡率低于12、24、48 h（P<0.05）;12 h细胞凋亡率低于24、48 h（P<0.05）;24 h细胞凋亡率比48 h低（P<0.05）。处理时间为12 h时：空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义（P<0.05）;单纯辐射组比辐射+100 μmol/L精胺组细胞及辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性高,比辐射+100 μmol/L精胺组细胞MDA水平低（P<0.05）;辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）。处理时间为24 h时：空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义（P<0.05）;单纯辐射组比辐射+100 μmol/L精胺组及辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低,比辐射+200 μmol/L精胺组细胞MDA水平高（P<0.05）;辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）。处理时间为48 h时：空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义（P<0.05）;单纯辐射组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）;辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）。给予X线照射24 h后,空白对照组H9c2心肌细胞形态呈长梭形,细胞核形态完整,染色均匀;辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组的H9c2心肌细胞出现不同程度的变化,如细胞形态变圆、细胞核碎裂、染色不均匀等,其中200 μmol/L精胺组的细胞形态最接近空白对照组细胞,变化程度较轻。结论　精胺对辐射导致的心肌细胞的氧化损伤具有保护作用,且其保护作用与浓度及时间有关,在一定浓度范围内高浓度精胺的保护能力更强,各浓度精胺处理24 h时的细胞保护能力最强。     

扶正逐毒丸对免疫抑制小鼠免疫功能影响的实验研究

目的观察扶正逐毒丸对免疫抑制小鼠机体免疫功能的影响。方法将小鼠随机分为空白组、模型组（环磷酰胺＋生理盐水）、扶正逐毒丸大剂量组（环磷酰胺＋扶正逐毒丸大剂量）、扶正逐毒丸小剂量组（环磷酰胺＋扶正逐毒丸小剂量）4个组。除空白组外其他各组皮下注射环磷酰胺100mg/kg建立免疫抑制模型。给药14天后,进行CD4细胞、CD8细胞、白细胞介素8（IL-8）、白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子（TNF）检测。结果扶正逐毒丸能够提高免疫抑制小鼠CD4细胞、CD8细胞的百分数值,能够诱生免疫抑制小鼠模型机体血清中的TNF和IL-2及IL-8的含量。结论扶正逐毒丸对免疫抑制小鼠机体的免疫功能有较好的调节作用。     

柿叶黄酮对同型半胱氨酸诱导小胶质细胞细胞因子表达的影响

目的：观察柿叶黄酮对同型半胱氨酸诱导的小胶质细胞表达白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,并与银杏叶提取物EGb761进行比较。方法将体外培养的小鼠小胶质细胞（BV-2细胞）分成空白对照组、同型半胱氨酸组（Hcy）、Hcy＋EGb761组（100mg/L）和Hcy＋低、中、高（12.5、25、50μg/mL）剂量柿叶黄酮组,培养72h。应用RT-qPCR方法评价各组IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达,酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清液中上述细胞因子的蛋白浓度。结果与空白对照组比较,同型半胱氨酸组细胞内IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达和细胞培养上清液中蛋白浓度明显增加（P〈0.05）;与同型半胱氨酸组比较,Hcy＋EGb761组和Hcy＋低、中、高剂量柿叶黄酮组各细胞因子mRNA表达及培养上清液中蛋白浓度均降低（P〈0.05）,尤其是高剂量柿叶黄酮组结果与Hcy＋EGb761组作用相似。结论柿叶黄酮能抑制同型半胱氨酸诱导小胶质细胞表达IL-1β、IL-6和TNF-α,在一定浓度条件下其作用不亚于银杏叶提取物。     

TOLL样受体2及4在脊柱关节炎患者外周血CD14^＋单核细胞表面的表达及意义

目的观察脊柱关节炎（SpA）患者外周血CD14＋单核细胞Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的表达变化及其与临床指标的关系,探讨其在SpA的发病中的作用。方法选择2008年7月~2009年1月蚌埠医学院第一附属医院风湿免疫科确诊SpA患者71例,并选择30名健康体检者作为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血CD14＋单核细胞表面TLR2、TLR4阳性细胞的表达的百分率及平均荧光强度（MFI）。根据BASDAI评分将SpA患者组分为活动组54例（BASDAI评分〉4分）和非活动组17例（BASDAI评分≤4分）,分别比较活动组、非活动组和正常对照组三组间TLR2、TLR4阳性细胞表达百分率和MFI的差异,并分析TLR2、TLR4阳性细胞表达百分率和MFI与相关临床和实验室指标的相关性。结果 TLR2＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达百分率在活动组、非活动组及正常对照组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR2＋外周血CD14＋单核细胞表面MFI在各组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率在活动组和非活动组[（42.5±11.1）%、（32.9±9.4）%]与正常组相比[（22.3±7.5）%],差异有高度统计学意义（P〈0.01）,活动组和非活动组之间相比差异有高度统计学意义（P〈0.01）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的MFI在各组间比较差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率与ESR和IgA呈正相关（P〈0.05）,TLR2＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率与ESR和IgG呈正相关（P〈0.05）。结论 TLR4在SpA患者外周血CD14＋单核细胞表面表达有显著性变化,提示TLR4可能与SpA发生及病情存在一定的关联,TLR4和TLR2的表达可作为疾病活动度的参考指标。     

联合应用基质细胞衍生因子1、辛伐他汀及骨胶原支架进行体内异位成骨

目的：探讨使用小鼠基质细胞衍生因子1（murine stromal cell-derived factor 1, mSDF-1）结合辛伐他汀（simvastatin,SIM）以及骨胶原支架（Bio-Oss^®）构建无外加种子细胞的组织工程化骨的可行性,并检验其体内异位成骨的效果。方法：将32只ICR小鼠随机分为4组,每组8只,于小鼠颅部做皮肤切口,各组小鼠分别植入：(1)1 ∶50（体积比）的二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）/磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline,PBS）混合液+骨胶原支架（空白对照组）;(2)10^-3 mol/L SIM溶液+骨胶原支架（SIM组）;(3)200 mg/L mSDF-1溶液+骨胶原支架（mSDF-1组）;(4)10^-3 mol/L SIM+200 mg/L mSDF-1溶液+骨胶原支架（SIM+mSDF-1组）。植入1周后,连续2 d,每天分别在支架局部注射上述各组相应的溶液50 μL。饲养6周后,取出支架及其周围组织,通过软X射线投射成像及灰度测定、HE染色、免疫组织化学染色的方法,定性及定量观察其成骨效果。结果：SIM+mSDF-1组软X射线灰度值［（421 836.5±65 425.7）像素］明显高于空白对照组［（153 345.6±45 222.2）像素,P<0.01］、SIM组［（158 119.2±100 284.2）像素,P<0.01］以及mSDF-1组［（255 529.5±152 142.4）像素,P<0.05］;在SIM+mSDF-1组内可见明显的骨桥蛋白和骨钙素的表达;SIM+mSDF-1组血管丛密度［（46±8）条/mm²］明显高于空白对照组［（23±7）条/mm², P<0.01］和SIM组［（24±6）条/mm², P<0.01］。结论：使用mSDF-1结合SIM以及骨胶原支架构建的无外加种子细胞的组织工程化骨可于小鼠颅部皮下异位成骨。     

口腔鳞状细胞癌细胞TLR3表达及其配体poly(I:C)的诱导凋亡作用

目的研究口腔鳞状细胞癌细胞中Toll样受体3(TLR3)的表达及其配体poly(I:C)的生物学作用。方法 RT-PCR和流式细胞术检测口腔鳞状细胞癌细胞系CAL-27和HB中TLR3mRNA和蛋白表达。以100μg/mLpoly(I:C)处理CAL-27,分别于刺激后24、48和72h时点采用MTT比色法测定细胞活力,24h时点采用流式细胞术检测细胞凋亡;并设立空白对照。结果 CAL-27和HB中TLR3mRNA和蛋白均呈高表达。CAL-27经poly(I:C)处理后,各检测时点的细胞活力均显著低于空白对照细胞(P<0.05);细胞凋亡率明显高于空白对照细胞[(16.67±1.202)%vs(7.00±1.155)%](P<0.05)。结论口腔鳞状细胞癌细胞内高表达TLR3,其配体poly(I:C)能诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡。     

大黄素对高糖环境下系膜细胞收缩功能的影响

目的 探讨高糖环境下大黄素能否通过抑制系膜区p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的过度活化而改善系膜细胞的收缩功能。方法 培养系膜细胞,调整培养液为以下5组：正常糖组（糖浓度5.6mmol/L,NG组）、高糖组（糖浓度30mmol/L,HG组）、低质量浓度大黄素组（50mg/L大黄素+高糖,LE组）、高质量浓度大黄素组（100mg/L大黄素+高糖,HE组）和过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）抑制剂GW9662组（10μmol/L GW9662+高糖+高质量浓度大黄素,GW组）。系膜细胞收缩力以细胞收缩前后表面积的变化表示,采用Western blot和Real time PCR法测定p38MAPK的活性及PPARγ的表达水平。 结果 高糖组p38 MAPK的活性增加,系膜收缩功能明显下降（P<0.05）;大黄素组能明显抑制p38MAPK的过度活化进而改善系膜细胞的收缩功能,且具有剂量依赖性（50mg/L大黄素组p38活性降低了40%,100mg/L组降低了73%,P均<0.05）;大黄素组PPARγmRNA水平及其蛋白水平均明显升高（P均<0.05）;PPARγ抑制剂GW9662能有效地阻断大黄素所产生的保护效应（P<0.05）。结论 高糖环境下,大黄素通过激活PPARγ抑制系膜区p38MAPK的过度活化进而改善系膜细胞的收缩功能。     

过继性转移TGF-β诱导CD4＋CD25＋调节性T细胞对自然流产模型小鼠胚胎丢失率的影响

目的观察过继性转移转化生长因子-β（TGF-β）诱导生成CD4＋CD25＋调节性T细胞对自然流产模型小鼠胚胎丢失率的影响。方法从正常妊娠CBA/J孕鼠脾脏中分选CD4＋CD25-T细胞,体外经TGF-β诱导转化为CD4＋CD25＋调节性T细胞,流式细胞仪检测其对自身反应性T细胞增殖的抑制作用。实验小鼠随机分为正常妊娠组和自然流产模型组,后者根据干预方式的不同分为空白组（自然流产模型未干预）、CD4＋CD25＋T细胞组（自然流产模型过继性转移天然CD4＋CD25＋调节性T细胞）、TGF-β诱导CD4＋CD25＋T细胞组（自然流产模型过继性转移TGF-β诱导CD4＋CD25＋调节性T细胞）和对照组（自然流产模型注射CD4＋CD25-T细胞）。于孕第14日采集血样后处死小鼠。ELISA法检测血清白介素-10（IL-10）、TGF-β1和γ干扰素（IFN-γ）水平,Western blotting和Real-time PCR检测蜕膜组织Foxp3 mRNA和蛋白的表达。计算各组孕鼠胚胎丢失率。结果与空白组和对照组比较,天然CD4＋CD25＋T细胞组和TGF-β诱导CD4＋CD25＋T细胞组血清IL-10、TGF-β1水平升高,IFN-γ水平降低;蜕膜组织中Foxp3 mRNA和蛋白的表达上调;胚胎丢失率显著降低（P〈0.05）。结论向自然流产模型小鼠过继性转移TGF-β诱导生成CD4＋CD25＋调节性T细胞,可诱导小鼠体内Th1/Th2免疫反应向Th2优势偏移,降低胚胎丢失率。