下调miR-10a表达对人胰腺癌细胞AsPC-1迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-10a表达对人胰腺癌AsPC-1细胞迁移和侵袭力的影响及其作用机制.方法 构建针对miR-10a的小干扰RNA（miR-10a-siRNA）,转染处理人胰腺癌AsPC-1细胞,同时设阴性对照siRNA（NC-siRNA）组和空白对照组.采用荧光实时定量PCR法检测3组细胞中miR-10a的表达水平,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭能力,ELISA法检测各组癌细胞培养上清液中基质金属蛋白质酶13（MMP-13）含量.结果 对照组、NC-siRNA组和miR-10a-siRNA组AsPC-1细胞miR-10a表达水平分别为1.05±0.08、1.03 ±0.06、0.02±0.01,穿膜细胞数分别为（150±2.6）、（145±2.2）、（62±1.8）个,培养上清中MMP-13表达量分别为（108.5±2.8）、（107.8±2.5）、（35.8±1.5） pg/ml,miR-10a-siRNA组均显著低于对照组和NC-siRNA组,差异均有统计学意义（P值均＜0.01）.对照组、NC-siRNA组和miR-10a-siRNA组AsPC-1细胞的迁移后间距分别为（385 ±15）、（395±13）、（736±18）μm,miR-10a-siRNA组显著大于对照组和NC-siRNA组,差异有统计学意义（P值均＜0.01）.结论 下调miR-10a表达可抑制胰腺癌AsPC-1细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与MMP-13表达下调有关.     

血清miR-34a水平与阿尔茨海默病及认知功能障碍的相关性

目的 探讨阿尔茨海默病(AD)患者血清miR-34a水平的意义及其与认知功能障碍的相关性.方法 收集2018年10月至2020年1月于南阳市第二人民医院就诊的老年AD患者和轻度认知功能障碍(MCI)患者各60例,纳入同期体检健康老年人60例为对照组.采用定量反转录酶-聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测三组受试者血清m...     

miR-101在胰腺癌组织中的表达以及对胰腺癌细胞ASPC-1增殖的影响

目的 观察miR-101在胰腺癌组织中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖的影响.方法 采用实时定量PCR方法 检测miR-101在胰腺癌组织、癌旁组织和胰腺癌细胞株ASPC-1中的表达.通过基因重组技术构建miR-101的表达载体peGFPc1-miR-101,应用脂质体将其转染到ASPC-1细胞,荧光显微镜检测转染效率;实时定量PCR检测转染细胞miR-101的表达水平,以癌旁正常胰腺组织为1,折算成相对倍数;MTT法检测转染细胞的增殖率.利用在线软件targetScan预测miRNA可能的靶基因.结果 miR-101在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株ASPC-1中相对表达量分别为55%和39%,较癌旁正常胰腺组织显著降低(P＜0.01).peGFPc1-miR-101转染ASPC-1细胞后,miR-101表达增加,为对照组的19.8倍(P＜0.01),癌细胞增殖率明显降低,最低仅为原代细胞的26%(P＜0.01).EZH2基因是miR-101影响胰腺癌细胞增殖活力的可能靶基因.结论胰腺癌组织miR-101低表达,它可能通过抑制EZH2的表达调控细胞的增殖.     

血清miR-146a与miR-34a表达水平对ACS冠脉病变及预后评估价值

目的:探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清miR-146a、miR-34a表达水平及临床价值。方法:选取2018年2月-2019年7月在内蒙古医科大学附属医院行冠状动脉(冠脉)造影术的100例ACS患者为研究对象,同期选取100例体检人群为对照组。造影结果行Gensini评分,将ACS患者分为轻度组(47例)、中度组(34例)、重度组(19例)。采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-146a、miR-34a表达水平。随访患者1年内主要不良心血管事件(MACE)发生情况。结果:ACS 3组患者血清miR-146a、miR-34a表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);重度组miR-146a、miR-34a表达水平高于中度组与轻度组,并且中度组miR-146a、miR-34a表达水平高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访1年,MACE亚组血清miR-146a、miR-34a表达水平高于非MACE亚组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ACS患者血清miR-146a、miR-34a呈高表达,并与冠脉病变程度密切相关。     

非小细胞肺癌组织miR-34a的表达及其对H1299细胞增殖的影响

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中miR-34a的表达情况及其对NSCLC细胞系H1299增殖的影响。方法 RT-PCR方法检测miR-34a在NSCLC组织和NSCLC细胞系H1299中的表达情况。克隆形成实验及MTT增殖实验检测miR-34a对NSCLC细胞系H1299增殖能力的影响;生物信息学方法预测miR-34a可能的功能性靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的功能性靶基因。Western印迹检测miR-34a对预测靶基因表达的影响。结果相比正常组织而言,NSCLC组织和细胞系H1299中miR-34a表达均显著下降(P0.05);转染miR-34a可显著抑制NSCLC细胞系H1299的增殖能力(P0.05),而转染miR-34a抑制剂可增加NSCLC细胞系H1299的增殖能力(P0.05)。生物信息学预测显示Notch1是miR-34a可能的功能性靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western印迹结果显示转染miR-34a可显著抑制NSCLC细胞系H1299中Notch1的表达。结论 miR-34a可通过调节Notch1的表达,进而抑制NSCLC细胞的增殖。     

冠心病病人血清miR-34a、miR-145表达与冠状动脉病变程度的关系及相关机制研究

目的:探讨冠心病病人中miR-34a、miR-145表达与冠状动脉病变程度的关系及相关机制。方法:选取2018年3月—2019年5月本院收治的冠心病病人60例作为冠心病组,健康志愿者60名作为对照组。对冠状动脉造影检查结果进行Gensini评分,根据分值差异将冠状动脉狭窄程度分为轻度组(<50分,29例)、中度组(50～90分,19例)、重度组(>90分,12例)。记录1年内心血管不良事件发生情况,并分为心血管不良事件组(13例)和非心血管不良事件组(47例)。纳入本研究后,采集次日清晨受试者外周静脉血4 mL,分离血浆,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-34a、miR-145表达水平。常规培养人血管内皮细胞株,分为正常对照组、IL-6组、空载体转染组、miR-34a低表达组、miR-34a高表达组,检测沉默信息调节因子1(SIRT1)mRNA及蛋白表达水平。另将人血管内皮细胞株分为正常对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组、空载体转染组、miR-145低表达组、miR-145高表达组,检测胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)mRNA及蛋白表达水平。结果...     

血浆miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p和miR-30a-3p水平与早发冠心病的相关性及其初筛价值

目的]探讨血浆miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p和miR-30a-3p水平与早发冠心病(PCAD)的相关性及其对PCAD的初筛价值。[方法]根据纳入标准及排除标准,纳入6例明确诊断的PCAD患者作为PCAD组,纳入6例健康受试者作为对照组,收集PCAD组和对照组血液,提取血清样本并保存,使用DNBseq平台检测两组血清中miRNA水平,筛选差异水平显著的miRNA。根据纳入标准及排除标准,收集78例PCAD患者、75例晚发冠心病患者和69例健康对照者的血液并对筛选的miRNA进行实时荧光定量PCR验证。分析PCAD患者冠状动脉造影报告,采用Gensini评分评估冠状动脉病变的严重程度。Spearman相关性检验分析有关miRNA水平与冠状动脉狭窄程度的相关性。ROC曲线分析血浆miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p及miR-30a-3p水平对PCAD的诊断价值,多因素Logistic回归分析PCAD发生的影响因素。[结果]DNBseq平台分析显示,差异表达miRNA 33个,其中上调miRNA 17个,下调miRNA 16个,差异水平最为显著的5个miRNA分别为miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p、miR-424-3p和miR-30a-3p;实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,PCAD患者血浆miR-1228-5p升高1.7倍,miR-34a-5p升高1.4倍,miR-192-5p升高0.7倍,miR-30a-3p升高2.5倍(P＜0.05),两组间血浆miR-424-3p水平差异无统计学意义(P＞0.05);血浆miR-1228-5p和miR-34a-5p水平与PCAD患者冠状动脉狭窄程度均呈正相关(r＝0.307,P＝0.004;r＝0.238,P＝0.036);ROC曲线分析显示,miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p和miR-30a-3p诊断PCAD的ROC曲线下面积分别为0.903、0.832、0.731及0.798,其联合诊断PCAD的ROC曲线下面积为0.990,95%CI为0.976～1.000。[结论]PCAD患者血浆miR-1228-5p、miR-34a-5p、miR-192-5p和miR-30a-3p水平显著升高,其联合检测诊断PCAD具有较高的准确性,有望成为初筛PCAD的新型生物标志物。     

miR-34a介导的阿魏酸对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 探讨不同剂量阿魏酸对人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及机制.方法 皮下接种Hela细胞,建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,成功后随机分为模型组(注射生理盐水组)、阿魏酸低剂量组〔25 mg·(kg·d)〕、中剂量组〔50 mg/(kg·d)〕和高剂量组〔100 mg/(kg·d)〕各5只.腹腔注射给药,连续处理28 d...     

miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响。方法选取初治原发性老年鼻咽癌患者83例,正常鼻咽黏膜组织40例作为对照组,培养人鼻咽癌CNE-2细胞株,根据转染物不同将细胞分为miR-34b转染组、阴性对照组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测老年鼻咽癌及对照组组织中miR-34b表达以及不同转染组细胞中miR-34b表达,MTT比色法检测不同转染组细胞增殖能力,检测细胞黏附能力,Transwell法检测不同转染组细胞侵袭能力。结果老年鼻咽癌组织中miR-34b相对表达量为(0.64±0.09),显著低于对照组的(0.94±0.12),差异有统计学意义(t=14.410,P<0.001);miR-34b在老年鼻咽癌组织中相对表达量与临床分期、T分期、N分期和淋巴结转移有关(P<0.001);miR-34b转染组细胞中miR-34b相对表达量为(0.85±0.10),显著高于阴性对照组和空白对照组,分别为(0.52±0.08)和(0.50±0.07),差异有统计学意义(F=243.329,P<0.001);与阴性对照组和空白对照组相比,miR-34b转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.05);miR-34b转染组黏附细胞数显著高于阴性对照组和空白对照组,而侵袭细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.001)。结论 miR-34b在老年鼻咽癌组织中呈低表达,上调miR-34b表达可减少细胞增殖,增加细胞黏附能力,抑制细胞侵袭能力,有望成为提高鼻咽癌对放射治疗敏感性的目的基因。     

膀胱移行细胞癌E2F3、miR-17-5p、miR-20a的表达及相关性分析

目的检测E2F3、miR-17-5p、miR-20a在膀胱癌中的表达情况,分析E2F3与miR-17-5p、miR-20a之间是否存在关联性。方法荧光定量RT-PCR法检测不同病理分级膀胱移行细胞癌组织和细胞系5637、T24中miR-17-5p、miR-20a和E2F3基因的表达,Western blot检测E2F3蛋白的表达。结果与正常膀胱黏膜比较,膀胱移行细胞癌组织及5637、T24细胞系中E2F3、miR-17-5p和miR-20a均高表达（P〈0.05）。E2F3表达随着病理分级的升高逐步增多,miR-20a表达随病理分级的升高有降低趋势。5637细胞系相对T24细胞系高表达E2F3（P〈0.05）。结论膀胱移行细胞癌中miR-17-5p、miR-20a和E2F3均高表达,miR-20a和miR-17-5p的表达与E2F3的增高密切相关。     

MicroRNA-200b在吉西他滨诱导的胰腺癌细胞株MiaPaCa-2上皮间质转化中的作用

目的 探讨MicroRNA-200b (miR-200b)在吉西他滨诱导的胰腺癌MiaPaCa-2细胞上皮间质转化(EMT)过程中的作用.方法 应用不同浓度的吉西他滨诱导MiaPaCa-2细胞,选择50％细胞生长抑制时的药物浓度(IC50),获取耐药MiaPaCa-2细胞.采用脂质体法将miR-200b和无意义小分子片段(阴性对照)分别转染MiaPaCa-2细胞,再用IC50的吉西他滨诱导细胞,获取转染miR-200b的耐药MiaPaCa-2细胞及阴性对照的耐药MiaPaCa-2细胞.倒置显微镜下观察细胞形态变化;Transwell小室测定细胞侵袭能力;实时定量PCR检测细胞miR-200b表达;蛋白质印迹法检测细胞E-cadherin、Vimentin、Zeb1、Zeb2蛋白表达.结果 吉西他滨处理后细胞体积逐渐缩小,呈纺锤样,细胞间连接减少,伪足增多,呈现间质细胞特征.耐药MiaPaCa-2细胞的穿膜数从亲本细胞的(26±3)个上升至(85±6)个,Vimentin、Zeb1、Zeb2表达分别上升至亲本细胞的(1.87±0.17)、(2.57±0.21)、(5.24±0.83)倍,miR-200b表达下降至亲本细胞的(0.36±0.01)倍,E-cadherin表达下降至亲本细胞的(0.47±0.05)倍.而转染miR-200b的耐药MiaPaCa-2细胞的穿膜数下降至(42±4)个,Zeb1、Zeb2表达下降至阴性对照的耐药MiaPaCa-2细胞的(0.36±0.07)、(0.08±0.01)倍.结论 吉西他滨诱导胰腺癌MiaPaCa-2细胞过程中细胞出现EMT,其机制可能与miR-200b表达下调有关.     

胰腺癌MiR-224的表达与细胞增殖和凋亡

目的:分析miR-224在胰腺癌组织中的表达,探讨其在胰腺癌细胞增殖、细胞周期及凋亡中的意义.方法:采用TagMan MGB探针法定量分析40例原发性胰腺癌及对应的癌旁组织MiR-224的表达;利用反义技术降低胰腺癌细胞(Aspc-1和Bxpc-3)中miR-224的表达;采用MTT比色法检测细胞增殖的改变,利用流式细胞技术检测胰腺癌细胞周期和凋亡情况.结果:在40例胰腺癌病例中,43%(17/40)的胰腺癌组织miR-224表达明显高于癌旁组织(P<0.05);反义miR-224转染胰腺癌细胞Aspc-1和Bxpc-3后,miR-224的表达明显降低,Aspc-1和Bxpc-3胰腺癌细胞生长受到明显抑制,其生长主要停滞在G0/G1期,而S期和G2/M期细胞的比例下降;另外降低miR-224的表达,Aspc-1和Bxpc-3胰腺癌细胞早期凋亡明显增加.结论:miR-224在胰腺癌组织中表达上调,降低其表达能明显抑制Aspc-1和Bxpc-3细胞的生长和诱导细胞早期凋亡增加,miR-224有可能成为胰腺癌基因表达调控的新靶点.     

S-腺苷甲硫氨酸抑制miR-34a依赖的肺癌转移的作用

目的探讨S-腺苷甲硫氨酸抑制miRNA-34a依赖的肺癌转移机制。 方法选取肺癌细胞A549,分别采用0、50、100、200、500 μM的S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAMe)刺激A549细胞并检测miR-34a以及下游STAT3信号通路的表达情况,同时检测不同刺激条件下A549细胞的侵袭转移情况;实时荧光定量(real-time fluorescence quantification, qPCR)检测miR-34a、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin、Vimentin的mRNA表达水平;Western Blot实验检测STAT3、p-STAT3、β-actin的表达水平;Transwell实验检测A549细胞的侵袭能力变化。 结果随着SAMe浓度的增加,miR-34a的表达水平呈梯度增加,与对照组相比,经t检验分析,差异有统计学的意义(P<0.05);Western Blot实验显示,与对照组相比,500 μM SAMe刺激后,下游的p-STAT3蛋白水平下降,总STAT3和内参蛋白β-actin水平不变;qPCR结果显示,随着药物浓度的增加,表皮蛋白E-cadherin、α-catenin的mRNA水平上升,间质蛋白N-cadherin、Vimentin的mRNA水平下降;Transwell实验显示经50、100、200、500 μM的SAMe刺激后,A549细胞的侵袭转移抑制率分别为18.70%、31.24%、47.66%、58.46%,与对照组相比,经t检验分析,差异有统计学的意义(P<0.05)。 结论SAMe可通过抑制miR-34a依赖的下游STAT3信号通路抑制肺癌细胞的侵袭转移,提示SAMe在肺癌侵袭转移过程中发挥重要作用。     

血清miR-21、miR-148b、miR-200a、miR-200b在原发性肝癌患者中的表达及临床诊断意义

目的研究原发性肝癌(HCC)患者血清中微小RNA(miR)-21、miR-148b、miR-200a、miR-200b的表达及临床诊断意义。方法应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测西南医科大学附属医院收治的93例HCC患者(病例组)、48例肝脏良性病变(良性组)、48例慢性肝病患者(慢性肝病组)和50例健康体检者(对照组)血清中miR-21、miR-148b、miR-200a、miR-200b的表达。统计学分析各指标与临床病理特征之间的关系,受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的诊断价值。结果病例组血清miR-21与miR-200b表达显著高于良性组、慢性肝病组及对照组(均P<0.05),miR-200a与miR-148b表达显著低于良性组、慢性肝病组及对照组(均P<0.05)。HCC患者血清miR-21与miR-200b表达与病理分期、病理分级及肿瘤直径有关(均P<0.05),与性别、年龄、有无肝硬化及乙型肝炎病毒(HBV)抗原是否阳性无关(均P>0.05)。血清miR-200a与miR-148b表达与病理分期、病理分级有关(均P<0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、有无肝硬化及HBV抗原是否阳性无关(均P>0.05)。miR-21、miR-148b、miR-200a、miR-200b及四项指标联合的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.821、0.668、0.772、0.734、0.922。联合诊断的敏感性和特异性均高于任一单一指标。结论HCC患者血清miR-21与miR-200b表达上调,而miR-200a与miR-148b表达下调。并且其表达与病理分期、病理分级有关,联合检测血清miR-21、miR-148b、miR-200a、miR-200b有希望成为新的诊断HCC的肿瘤标志物。     

胰腺癌循环微小核糖核酸载体的研究

目的 寻找胰腺癌循环微小核糖核酸（miRNA）的载体.方法 常规培养、传代胰腺癌细胞SW1990、BxPC3,采集6例胰腺癌患者及6例健康体检者（对照组）的血清.应用梯度离心方法获取血清和细胞培养上清中的微囊泡（MV）.采用蛋白质印迹法检测RNA诱导沉默复合体的核心元件Ago2蛋白和MV的标志性蛋白CD63,采用荧光定量PCR方法检测MV包裹的和游离的miRNA.结果 胰腺癌细胞株培养上清的MV中含有Ago2、CD63蛋白.胰腺癌组、对照组的血清及MV中均存在miR-20a、miR-21、miR-24、miR-25、miR-191、miR-483-5p,但以MV包裹的量较多,且胰腺癌组MV包裹的miRNA量与对照组不完全一致,其中miR-20a、miR-24、miR-191分别为对照组的（2.93±0.29）、（2.73±0.46）、（2.39±0.51）倍,差异均有统计学意义（F值分别为75.97、25.80、12.94,P＜0.05或＜0.01）.结论 MV是胰腺癌循环miRNA的主要载体.     

Clobenpropit enhances anti-tumor effect of gemcitabine in pancreatic cancer

AIM: To evaluate the anti-tumor effect of clobenpropit, which is a specific H₃ antagonist and H₄ agonist, in combination with gemcitabine in a pancreatic cancer cell line.METHODS: Three kinds of human pancreatic cancer cell lines (Panc-1, MiaPaCa-2, and AsPC-1) were used in this study. Expression of H₃ and H₄ receptors in pancreatic cancer cells was identified with Western blotting. Effects of clobenpropit on cell proliferation, migration and apoptosis were evaluated. Alteration of epithelial and mesenchymal markers after administration of clobenpropit was analyzed. An in vivo study with a Panc-1 xenograft mouse model was also performed.RESULTS: H₄ receptors were present as 2 subunits in human pancreatic cancer cells, while there was no expression of H₃ receptor. Clobenpropit inhibited cell migration and increased apoptosis of pancreatic cancer cells in combination with gemcitabine. Clobenpropit up-regulated E-cadherin, but down-regulated vimentin and matrix metalloproteinase 9 in real-time polymerase chain reaction. Also, clobenpropit inhibited tumor growth (gemcitabine 294 ± 46 mg vs combination 154 ± 54 mg, P = 0.02) and enhanced apoptosis in combination with gemcitabine (control 2.5%, gemcitabine 25.8%, clobenpropit 9.7% and combination 40.9%, P = 0.001) by up-regulation of E-cadherin and down-regulation of Zeb1 in Panc-1 xenograft mouse.CONCLUSION: Clobenpropit enhanced the anti-tumor effect of gemcitabine in pancreatic cancer cells through inhibition of the epithelial-mesenchymal transition process.     

miR-551b-3p在胰腺癌细胞和组织中的表达及其临床意义

目的研究miR-551b-3p在胰腺癌细胞和组织中的表达,探讨其在胰腺癌发生发展中的临床意义。方法利用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测4种胰腺癌细胞和正常胰腺导管上皮细胞,以及76对胰腺癌组织和癌旁组织中miR-551b-3p的表达水平,并对miR-551b-3p的表达与胰腺癌患者临床病理学特征进行分析。结果 miR-551b-3p在PANC-1、Aspc-1、SW1990和Miapaca-2四种胰腺癌细胞中的相对表达量分别为(0.125±0.012)、(0.179±0.005)、(0.672±0.025)、(0.577±0.019),低于其在正常胰腺导管上皮细胞HPDE6C-7中的相对表达量,差异有统计学意义(P0.05)。在胰腺癌组织和癌旁组织中miR-551b-3p的ΔCt值分别为(7.254±0.112)和(3.993±0.098),差异有统计学意义(P0.001)。TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期胰腺癌组织中miR-551b-3p的ΔCt值分别为(4.343±0.032)、(5.325±0.112)、(6.987±0.098)和(9.132±0.212),差异有统计学意义(P0.001)。有淋巴结转移和无淋巴结转移患者的胰腺癌组织中miR-551b-3p的ΔCt值分别为(8.492±0.021)和(6.676±0.103),差异有统计学意义(P=0.012)。高、中、低分化胰腺癌组织中miR-551b-3p的ΔCt值分别为(5.349±0.092)、(6.129±0.112)、(8.454±0.065),差异有统计学意义(P=0.002)。结论 miR-551b-3p的表达与胰腺癌的分化程度、淋巴结转移以及TNM分期相关。miR-551b-3p可能是提示胰腺癌临床进展的潜在标志物。