实时荧光核酸恒温扩增技术在淋球菌检测中的应用分析

目的采用统计学方法评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)在临床淋球菌检测中的应用。方法以淋球菌培养法为标准对照,采用实时荧光核酸恒温扩增技术同时对150例疑似患者的生殖道拭子标本和尿液标本进行检测,对结果进行统计学分析比较,并用PCR法进行验证。结果使用SAT检测的生殖道拭子和尿液阳性检出均为110例,培养法阳性检出为108例,其中培养法检出阴性的2例通过PCR验证为阳性。两种取样方式的SAT检测法和培养法三者阳性率差异均无统计学意义(P0.05);以培养法为金标准,SAT检测拭子的敏感度为100.0%,特异度为95.2%;SAT检测尿液标本的敏感度为100.0%,特异度为95.2%。结论采用实时荧光核酸恒温扩增技术对生殖道拭子和尿道标本的检测效果与培养法相比,阳性率高,敏感度较高,且尿道标本收集方法比较简便,患者依从性好,可代替拭子道取样方法,此方法可在临床推广应用。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在泌尿生殖道淋病中的应用

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术（SAT）检测泌尿生殖道淋病的灵敏度、特异度以及监测疗效的实用性。方法回顾性分析12816例因怀疑泌尿道淋球菌感染需行淋球菌检测受试者临床资料,其中淋球菌培养检测6323例,基于SAT开发的淋球菌核酸检测试剂盒（NG-SAT）检测7107例,比较2种检测方法的阳性率;再以淋球菌培养法为金标准,计算同时行以上2种检测的614例患者NG-SAT检测尿液样本的灵敏度和特异度;对2种检测结果有差别的标本,进行荧光定量DNA杂交及聚合酶链反应法（FQ-PCR）复测与分析;对检测结果阳性的患者进行头孢曲松治疗,待症状消失后3d再次行以上2种检测。结果NG-SAT检测尿液标本的灵敏度为100.0%,特异度为98.2%。2种检测结果有差别的标本7份,均为SAT检测阳性、淋球菌培养阴性;FQ-PCR复测结果显示6份阳性、1份阴性。179例患者经头孢曲松治疗后,NG-SAT检测阳性15例,淋球菌培养阳性7例。结论NG-SAT检测尿液中淋球菌简便、准确,且能准确判断预后,值得临床推广应用。     

实时核酸恒温扩增技术在奈瑟菌感染检测中的应用

目的探讨实时核酸恒温扩增技术(SAT法)在淋病奈瑟菌感染检测中的应用价值。方法取153例疑似淋病奈瑟菌感染的女性患者宫颈分泌物标本采用直接涂片法、分离培养法及SAT法进行淋病奈瑟菌检测,同时对对应的153份尿液标本也进行SAT法的淋病奈瑟菌检测,对结果进行比较分析。结果淋病奈瑟菌检测中直接涂片法阳性率为31.4%,分离培养法阳性率为47.7%,SAT法阳性率为51.6%,SAT法与分离培养法检测淋病奈瑟菌阳性率差异无统计学差异(P>0.05),而直接涂片法淋病奈瑟菌阳性率较低,与分离培养法比较,差异有统计学意义(P<0.01);以分离培养法作为金标准,SAT法的检测敏感性为95.9%(70/73),特异性为88.8%(71/80);采用SAT法对153例患者的拭子标本和尿液标本进行检测,两者检测结果的符合率为100%。结论 SAT法检测女性宫颈分泌物拭子标本和尿液标本中的淋病奈瑟菌敏感性高、特异性强,能有效提高检出率;以尿液代替拭子标本,采样方便。     

体外核酸扩增技术检测沙眼衣原体和淋球菌采用不同标本的比较分析

目的 探讨体外核酸扩增技术(NAATs)检测不同标本沙眼衣原体(CT)和淋球菌(NG)的价值.方法 选取2019年1月至2020年6月于本院就诊的3926例疑似STD女性患者为研究对象,无菌操作采集尿液和宫颈拭子标本,采用NAATs法测定CT、NG.比较尿液和宫颈拭子标本中CT感染率、CT感染率一致性,并分析CT感染年龄分布情况.结果 尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染率比较差异无统计学意义;Kappa检验显示,尿液和宫颈拭子标本中CT、NG感染的一致性良好(Kappa值=0.814、0.856,P=0.000、0.000);CT感染多发生于31～40岁人群,其次为41～50岁人群;NG感染多发生于>50岁人群,其次为41～50岁人群.结论 NAATs能检出不同标本中CT、NG感染情况,并及时发现合并感染,为临床诊治提供参考,进而改善患者预后.     

男性尿道炎的沙眼衣原体,解脲支原体及淋球菌检测分析

男性尿道炎的沙眼衣原体、解脲支原体及淋球菌检测分析温州医学院微生物学教研究室（３２５０２７）林巧爱张奕雄＊陈向敏周丽萍张丽芳包其郁男性尿道炎临床症状和体征较为明显，容易作出诊断，但引起男性尿道炎的病原体日趋复杂，且存在混合感染的问题。本文对１８０例男...     

RNA恒温扩增法在肺炎支原体检测中的应用

目的 探讨RNA恒温扩增法检测肺炎支原体的可行性及其应用价值.方法 采集2016年5~7月在我院住院治疗的200例患急性呼吸道感染儿童咽拭子,分别用RNA恒温扩增法和PCR荧光探针法进行肺炎支原体检测,分别计算两种检测方法的检出率,根据公式计算灵敏度和特异性,并进行统计学分析.结果 RNA恒温扩增法检出肺炎支原体17例,检出率为8.5%,PCR荧光探针法检出肺炎支原体18例,检出率为9.0%,两种方法的检出率比较差异无统计学意义(P>0.05);RNA恒温扩增法与PCR荧光探针法相比灵敏度为88.9%、特异度为99.5%.结论 RNA恒温扩增法与PCR荧光探针法检出率相当,具有较高的灵敏度和特异度,可以作为一种新的方法用于肺炎支原体临床检测.     

恒温扩增技术在儿童下呼吸道感染中的临床应用

目的 评估恒温扩增快速检测技术在儿童下呼吸道感染中的临床应用价值。方法 选取收集的300例儿童下呼吸道感染患者,收集其痰液(包含吸取痰)样本,采用恒温扩增快速核酸检测技术和培养法同时进行病原学检测,统计两种检测方法的病原体检出情况。结果 恒温扩增技术阳性检出率为75%,高于病原分离培养的检出率25.87%,两种方法检出结果不具一致性,且恒温扩增技术对混合感染样本检出率49.33%,高于传统培养法检出率5.97%。结论 相较于传统培养法,恒温扩增芯片法检测技术灵敏,阳性率更高,可以辅助临床快速、准确判断下呼吸道感染的致病原,从而采取有针对性地用药和治疗。     

恒温扩增法检测肺炎支原体RNA临床应用研究

目的 研究恒温扩增法检测肺炎支原体(MP)RNA对临床诊断儿科患者MP感染的应用价值。 方法 收集2016年10月-2017年7月安徽医科大学第二附属医院临床住院急性呼吸系统感染178例患儿咽拭子/痰标本及血清标本,其中咽拭子/痰液标本同时检测MP-DNA及MP-RNA,血清标本检测MP-Ab。根据患儿病程分为A组(病程 ≤ 10 d)和B组(病程>10 d),分别以MP-Ab、MP-DNA检测为参考比较恒温扩增法检测MP-RNA在各组间的阳性率差异,并评估其灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。应用SPSS 21.0统计软件对数据进行统计分析。 结果 MP-DNA、MP-Ab与MP-RNA总体阳性率差异无统计学意义。A组中,MP-RNA阳性率(37.8%)高于MP-Ab阳性率(22.9%),B组中MP-RNA阳性率(10.6%)低于MP-Ab阳性率(23.1%),差异有统计学意义(P=0.003,P=0.001)。与MP-DNA结果相比,MP-RNA阳性率差异无统计学意义。分别以MP-Ab、MP-DNA为参考方法评估MP-RNA的总体灵敏度为0.63/0.79、特异度为0.91/0.96、阳性预测值为0.67/0.85、阴性预测值为0.89/0.94。其中A组的灵敏度、特异度分别为0.94/0.88、0.79/0.90。 结论 恒温扩增法检测MP-RNA具有较好的临床诊断效能,可应用于MP感染的早期临床诊断。      

泉州地区性病门诊患者中淋球菌和非淋球菌性尿道炎感染情况分析

<正>为了解泉州地区性病门诊患者中淋球菌和非淋球菌性尿道炎感染情况,更好地预防和控制性传播疾病(STD)的传播,特对我院2010-2011年性病门诊患者中淋球菌和非淋球菌性尿道炎感染情况进行汇总,现报告如下。1资料和方法1.1检查对象2010-2011年在我院进行门诊性病检查的患者共4 741人,其中男1 689人,女3 052人。1.2检查方法女性患者取宫颈后穹窿部分泌液,男性患     

男性非淋菌性尿道炎念珠菌的检测及临床分析

目的了解男性非淋菌性尿道炎（NGU）患者的念珠菌感染情况及临床特点。方法对198例男性NGU患者及65例正常对照的尿道分泌物标本进行念珠菌培养，就结果结合临床作分析。结果198例NGU患者标本中18例培养出念珠菌，阳性率为9．09％；65例正常对照组中，1例培养出念珠菌，阳性率为1．54％。两组差异有显著性（P〈0．05）。结论念珠菌感染可能是男性NGU的一个致病因子，其患者有一定的临床特点。     

Clinical diagnostic performance of the simultaneous amplification and testing methods for detection of the Mycobacterium tuberculosis complex for smear-negative or sputum-scarce pulmonary tuberculosis in China

Background Early detection of pulmonary tuberculosis （PTB） is a big challenge in smear negative and sputum scarce patients in China.Simultaneous amplification and testing methods for detection of the Mycobactedum tuberculosis （MTB） complex （SAT-TB assay） is a novel molecular technique established in our hospital.This method has a high sensitivity and specificity in the lab.In this study,the clinical diagnostic performance of this method in smear-negative or sputum-scarce PTB suspects was investigated and evaluated.Methods Two hundred smear negative and 80 sputum-scarce patients were recruited in this study.Samples that included sputum or bronchial washing fluid were collected and sent for both bacteria culture and SAT-TB assay.Diagnosis for these patients was based on the comprehensive evaluation of chestX-ray/CT study,histology examination,lab results,and treatment response.Sensitivity,specificity,positive predictive value （PPV） and negative predictive value （NPV） for each diagnostic test were investigated and calculated using confirmed tuberculosis （TB） and non-TB cases.The time required for detection of MTB was also measured for each method.Results Ninety-two patients （33％） were diagnosed as definitive TB,112 patients （40％） were probable PTB,and 76 （27％） were non-TB.The sensitivity,specificity,PPV,and NPV of SAT-TB in smear-negative PTB suspects were 93％ （95％ CI,84％-98％）,98％ （95％ CI,90％-100％）,98％ （95％ Cl,91％-100％）,and 93％ （95％ CI,83％-98％）.In sputum scarce PTB suspects,the sensitivity,specificity,PPV,and NPV of the SAT-TB assay on bronchial washing fiuids were 90％ （95％Cl,74％-98％）,100％ （95％ Cl,85％-100％）,100％ （95％ Cl,88％-100％）,and 88％ （95％ CI,69％-97％）.The accuracy of the SAT-TB assay is consistent with the bacteria culture assay.The median time required for detecting MTB in the SAT-TB assay was 0.5 day,which was much faster than bacteria culture （28 days）.Conclusions The SAT-TB assay is a fast and accurate method for the detection of MTB.It can be widely applied in the clinic and be an asset in early detection and management of PTB suspects,especially in those patients who are smear negative or sputum scarce.     

男性非淋菌性病病原体DNA检测及意义

目的了解男性性病患者中,非淋菌性病病原体感染情况,同时达到病人早诊断、早治疗的目的。方法采用PCR法对1258例患者进行CT、UU、HSVⅡ、MH、HPV-DNA的检测。结果1258例标本中,CT阳性325例(占25.83％)、UU阳性187例(占14.86%)、SVⅡ阳性177例(占14.07％)、MH阳性132例(占10.49％)、HPV阳性107例(占8.50％)。结论 PCR法检测非淋菌性病病原体DNA是诊断非淋病性尿道炎可靠、快速、科学的方法。     

聚合酶链反应技术在检测淋球菌性尿道炎中的应用

对８４例疑诊尿道感染患者通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术进行尿休本的淋球菌特异性检测。结果：阳性２８例（３３．３％）阴性５６例（６６．７％）．在ＰＣＲ阳性患者中，１８例为伴有尿道分泌物的急性患者，均进行涂片染色及分离培养，结果１２例阳性，６例阴性；１０例为无尿道分泌物慢性患者，未发现涂片及培养阳性而ＰＣＲ阴性者。实验结果表明同常规方法相比，ＰＣＲ技术在淋球菌性尿路感染，尤其对慢性感染患者具有特异、敏感的诊断价值。     

核酸序列依赖扩增联合分子信标对曲霉菌感染的检测效果

目的建立快速、灵敏、特异的定量检测曲霉菌感染的诊断方法。方法以烟曲霉菌、黄曲霉菌及黑曲霉菌的孢子配制菌液,提取RNA后,采用核酸序列依赖扩增(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)联合分子信标(molecular beacon,MB)技术进行荧光检测,并对该方法进行灵敏度和特异性分析。结果扩增过程中累计荧光量达到设定的荧光阈值所需循环数与标本中霉菌孢子量的对数存在线性相关关系(y=-10.7x+81.6,r=0.988)。将含有梯度数量霉菌孢子的标本提取总RNA后进行检测,可建立相应标准曲线。该方法的灵敏度可达到1个孢子;对照菌株(金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌)与曲霉菌提取总RNA经扩增后的产物进行电泳分析,发现仅曲霉菌出现特异性条带。结论 NASBA结合分子信标检测曲霉菌具有灵敏度高、特异性强的特点,具有潜在利用价值,有望成为曲霉菌感染的临床诊断方法。     

解脲支原体培养72h以上标本的检测在非淋菌性尿道炎诊断中的意义

[背景]探讨培养解脲支原体(UU)72 h以上标本的检测在非淋菌性尿道炎诊断中的意义.[病例报告]采用分离培养法对172例非淋菌性尿道炎患者进行UU检测,培养72 h内检测出UU阳性者为38例(22.1%),72~120 h之内为9例(5.2%).[讨论]大多数标本培养24~48 h时可获得阳性结果,但对48 h内出现阴性结果的标本仍要培养72 h以上对非淋菌性尿道炎的诊断有意义.     

环介导恒温扩增技术快速检测大肠杆菌O157特异基因的建立

目的 建立环介导的恒温扩增快速检测大肠杆菌O157的方法。方法 采用环介导的恒温扩增反应（LAMP）技术扩增大肠杆菌O157特异性基因,并与传统PCR比较。结果与传统的PCR技术相比,LAMP法更加简便快速、且在等温条件下进行,具有更高的灵敏性;特异性100%。结论 该方法具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速,不需要复杂仪器设备、为临床检测大肠杆菌O157提供了一个快速简便的新方法。     

环介导等温核酸扩增检测缓冲液成分的探索

目的 探索环介导等温扩增(LAMP)检测反应体系缓冲液,为我国野战/灾害等紧急输血的血液筛查提供技术支持.方法 通过对LAMP体系不同组分的梯度分析对检测结果的影响进行研究.结果 扩增效率随着反应体系内Mg2+浓度的增高而降低;LAMP反应的扩增效率随着反应体系内Betain浓度的增高而增高.随着Calcein浓度的降低,LAMP反应体系内的绿色荧光逐渐减弱.结论 建立的反应体系具有较好的反应灵敏度及特异性,与成品化的试剂相似,可适用于临床血液病原体筛查.