转化生长因子—β和重组人骨形成蛋白—2刺激骨膜成骨的实验研究

目的：探讨骨膜成骨的细胞来源及分子机制．方法：将转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）和重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）分别与陶瓷化牛骨（ＣＢＢ）复合后，种植于小鼠股骨附近的肌肉间隙内．植入后３，５，７，１４，２１ｄ取材，光镜观察股骨的组织学变化并测量第１４日标本的股骨厚度．结果：植入ｒｈＢＭＰ－２／ＣＢＢ后第５日，骨膜内未分化间充质细胞聚集增生，第７日可见软骨生成．植入ＴＧＦ－β／ＣＢＢ第７日，骨膜内见大量软骨及膜内骨形成．第１４日，上述两种植入物骨膜内均见新骨形成活跃，新生骨小梁增多，其周围有成骨细胞．第２１日，骨膜内的新生骨均趋向成熟并与宿主股骨相连．新生骨的厚度二组间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）．结论：骨形成蛋白和ＴＧＦ－β在体内均具有扩散作用并可刺激骨膜成骨．二者在骨膜内的靶细胞不同．骨形成蛋白诱导骨膜中间层的未分化间充质细胞向骨细胞系分化；ＴＧＦ－β刺激骨膜深层的骨祖母细胞、成骨细胞等的增殖和功能活跃．     

人重组骨形态发生蛋白-2和β转化生长因子在诱导成骨中的协同作用

目的:对人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和β转化生长因子(TGF-β)在诱导成骨的协同作用进行探讨. 方法:210只BALB/c小鼠随机分为3组,每组70只,试验侧均位于右后肢,设立rhBMP-2/牛松质骨载体、单纯牛松质骨载体为对照组. 分别于术后12 h～21 d共11个时间点取材,观察其诱导成骨过程. 结果:rhBMP-2/TGF-β/牛松质骨载体组在诱导间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成方面均早于rhBMP-2/牛松质骨载体组,成骨量优于rhBMP-2/牛松质骨载体组,其碱性磷酸酶水平高峰较对照组提前,其组织钙含量明显高于对照组(P<0.05). 而单纯牛松质骨载体组在21 d 仅出现了少量增殖的间充质细胞. 结论:rhBMP-2和TGF-β在诱导成骨调节中存在着协同作用.     

转化生长因子-β1对骨形态发生蛋白诱导成骨的促进作用

目的：我们通过观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ,TCF－β1）和骨形态发生蛋白(bone morpho-genetic protein,BMP)共同修复骨缺损,达到进一步阐明BMP诱导成骨机制的目的,方法：实验采用日本大耳白兔左尺骨中段12mm骨缺损实验模型,分为实验组,对照组和空白组,缺损内分别植入BMP／TGF－β1／载体,BMP／载体,载体,通过X线,组织学及电镜对比观察三组骨缺缶修复情况,结果：实验组骨缺损无论是骨痂出现还是骨接发生时间均较对照组明显提前,空白组骨缺损形成骨不连,实验组成骨细胞和软骨细胞无论出现的时间,数量和功能活跃程度均优于对照组,电镜观察见成骨细胞,软骨细胞内线粒体丰富,内质网增多,而对照组则相对较少,软骨细胞内线粒体丰富,内质网络增多,而对照组则相对较少,结论：TGF－β1具有促进BMP诱导成骨的作用,TGF－β1通过促进间充质细胞分裂增殖为BMP提供靶细胞,促进成骨细胞及软骨细胞的分裂增殖,促进骨细胞合成产生I型胶原,促进基质钙化,碱少骨吸收等作用来促进BMP的诱导成骨。     

β—TCP／rhBMP—2复合物异位诱导小鼠成骨的扫描电镜观察

检测β－ＴＣＰ／ｒｈＢＭＰ－２复合物的异位秀导成骨能力。方法：自制β－ＴＣＰ与ｒｈＢＭＰ－２复合后植入小鼠股后肌袋，单纯β－ＴＣＰ植入对侧作对照，术后１，２和４ｗｋ分别取材作扫描电镜和光镜观察。结果：实验组有大量新生软骨和骨形成，随着时间的推移，生成量逐渐增多。     

重组人骨形态发生蛋白诱导异位成骨的病理学观察

目的：本文报告了重组人骨形态发生蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）在小鼠肌肉内诱导异位成骨的生物学作用，方法：将大肠杆功表达的ｒｈＢＭＰ－２成熟肽植入小鼠股部肌肉。结果：植入ｒｈＢＭＰ－２后ｄ１就有间充质细胞向植入区内聚集；ｄ５出现典型的软骨细胞；ｄ７钙化开始；ｄ１０形成雏形的骨髓腔，ｄ１４骨髓腔内出现幼稚的造血细胞；２１ｄ－３０ｄ形成大量网状骨小梁、骨单位、在骨小梁间隙出现骨髓细胞。结论：大肠杆菌中表达     

骨形态发生蛋白-2及转化生长因子-β2在大鼠角膜成长过程中的表达

目的 探讨转化生长因子-β(TGF-β)超家族成员骨形态发生蛋白-2(BMP-2)及转化生长因子-β2(TGF-β2)在正常大鼠角膜生长发育过程中的表达及作用.方法 用免疫组织化学方法观察TGF-β超家族成员BMP-2及TGF-β2分别在大鼠胚胎17 d,出生当天,出生后4、7、10 d和11周角膜蛋白水平的表达.结果 BMP-2和TGF-β2在大鼠胚胎17 d时有表达,于出生当天至出生后10 d及成年鼠角膜生长发育过程中呈动态变化过程.结论 TGF-β超家族成员BMP-2及TGF-β2在鼠角膜的表达随着角膜的生长发育而调节,BMP-2可能与角膜的生长发育及维持出生后角膜的动态平衡有关.     

TGF-β诱导体内成骨效应

目的：β转化生长因子（ＴＧＦ┐β）可诱导间充质细胞合成软骨特异性蛋白聚糖和Ⅱ型胶原，刺激成骨细胞的增殖及胶原合成．本实验旨在探讨牛血小板ＴＧＦ┐β在体内的成骨活性．方法：以牛血小板为原料，采用酸醇抽提方法，提取血小板蛋白．经柱层析纯化出其中分子质量为２５ｋｕ的ＴＧＦ┐β．在小鼠股骨中下段前方骨膜下注射ＴＧＦ┐β溶液２０μｌ（含ＴＧＦ┐β４００ｎｇ）；每日一次，最长连续注射１０次．结果：骨膜下注射ＴＧＦ┐β，注射后第３日，骨膜间充质细胞增殖、软骨细胞分化；第７日开始软骨细胞大量增殖，并有软骨内化骨效应；第１４日，大量新生骨痂形成；随后骨改建，出现板层骨．结论：骨膜下注射ＴＧＦ┐β导致局部新生骨质形成过程与正常骨折愈合时相一致，表明外源性的ＴＧＦ┐β可以启动骨生成过程；意味着ＴＧＦ┐β在骨折修复及骨移植方面有潜在性应用前景     

TGF—α诱导体内成骨效应

目的：β转化生长因子（ＴＧＦ－β）可诱导间充质细胞合成软骨特异性蛋白聚糖和Ⅱ型胶原，刺激成骨细胞的增殖及胶原合成。本实验旨在探讨牛血小板ＴＧＦ－β在体内的成骨活性。方法：以牛血小板为原料，采用酸醇抽提方法，提取血小板蛋白。经柱层析纯化出其中分子质量为２５ｋｕ的ＴＧＦ－β。在小鼠股骨中下段前方骨膜下注射ＴＧＦ－β溶液２０μｌ（含ＴＧＦ－β４００ｎｇ）；每日一次，最长连续注射１０次。结果：骨膜下注射Ｔ     

转化生长因子β1在下颌骨牵引成骨过程中的作用

目的 :研究TGF β1在不同时期下颌骨牵引成骨过程中表达水平的变化 ,探讨其可能发挥的作用。 方法 :恒河猴 16只 ,10只行单侧下颌骨牵引 ,6只行双侧下颌骨牵引 ,采用下颌角部骨截开术 ,5d间歇期后以每天0 .5mm× 2次的速度牵引 ,共 15d。分别于牵引完成时、牵引后 2、4、6、12周时处死一组动物。将牵引区骨块制作脱钙石蜡切片 ,进行HE染色及TGF β1免疫组化染色。结果 :牵引完成后早期阶段 ,TGF β1阳性着色颗粒广泛分布于牵引区的纤维血管基质、成骨细胞及成软骨细胞中 ,尤其是在截骨断端的血肿区 ,TGF β1的阳性着色最强。在稳定期 ,牵引区TGF β1的阳性着色逐渐减弱 ,主要见于胶原纤维矿化、成骨细胞形成类骨质的区域 ,且主要位于血小板、血管内皮细胞及成骨细胞胞浆中。牵引完成后 12周 ,除骨髓腔中纤维血管基质可见少量TGF β1的阳性着色颗粒外 ,在骨外膜、骨基质及骨细胞内已见不到明显的TGF β1的阳性着色。结论 :TGF β1活跃参与了牵引区新骨的形成过程 ,它在刺激和诱导骨前体细胞及原始间充质细胞增殖分化 ,促进牵引区成骨细胞及血管内皮细胞增生方面可能发挥了重要作用。     

神经生长因子协同重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨的研究

目的在重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位成骨过程中,局部应用神经生长因子(NGF),探讨NGF对BMP诱导成骨的作用.方法 ICR小鼠36只,随机分为实验组和对照组,于右侧股后部肌间隙内植入rhBMP-2胶原复合物.术后第3天开始,连续7 d,在实验组和对照组rhBMP-2植入部位,分别注射NGF和磷酸盐缓冲液(PBS).术后第10、20和30天取材,进行放射学、生化和组织学检测.结果两组均于术后第10天有新骨形成,但实验组新骨生成量明显大于对照组;术后第10和第20天,实验组局部组织碱性磷酸酶活性明显高于对照组;术后各时间段实验组局部组织钙和磷含量均明显高于对照组;术后第30天,实验组骨组织胶原纤维排列明显较对照组规则.结论 NGF具有协同rhBMP-2诱导成骨的作用.     

β转化生长因子诱导骨生成时局部IL—1α基因表达与定位

目的：观察β－转化生长因子（ＴＧＦ－β）启动骨膜下新生骨生成局部白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）的基因表达与细胞定位。方法：在小鼠股骨骨膜下注射骨生成局部ＩＬ－１α在生成骨过程各阶段的基因表达与细胞定位。结果：４ｄ时，ＩＬ－１α主要定位于骨膜下增生的间充质细胞和纤维母细胞，７ｄ时，主要由幼稚的新生软骨细胞表达，１４ｄ及２１ｄ时，原始骨小梁周过的成骨细胞表达ＩＬ－１αｍＲＮＡ。长骨部分骨髓细胞在各期有     

神经生长因子协同重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨的研究

目的在重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位成骨过程中,局部应用神经生长因子(NGF),探讨NGF对BMP诱导成骨的作用。方法ICR小鼠36只,随机分为实验组和对照组,于右侧股后部肌间隙内植入rhBMP-2胶原复合物。术后第3天开始,连续7d,在实验组和对照组rhBMP-2植入部位,分别注射NGF和磷酸盐缓冲液(PBS)。术后第10、20和30天取材,进行放射学、生化和组织学检测。结果两组均于术后第10天有新骨形成,但实验组新骨生成量明显大于对照组;术后第10和第20天,实验组局部组织碱性磷酸酶活性明显高于对照组;术后各时间段实验组局部组织钙和磷含量均明显高于对照组;术后第30天,实验组骨组织胶原纤维排列明显较对照组规则。结论NGF具有协同rhBMP-2诱导成骨的作用。     

骨碎补总黄酮对牵张成骨过程中骨形态发生蛋白-2和转化生长因子-β1表达的影响

【目的】探讨骨碎补总黄酮对家兔股骨牵张成骨的影响。【方法】选用健康家兔32只,随机分为治疗组和对照组,每组16只。行单侧股骨牵张术,以自制延长器固定。经7 d延迟期,以1 mm/d的速度牵张,2次/d,连续10 d。治疗组动物自术后第1天用骨碎补总黄酮溶液灌胃,至实验结束。固定28 d后处死动物,留取标本,行组织学观察及免疫组织化学检测。【结果】治疗组新生骨组织成熟骨质区域增大,成骨细胞数、骨小梁面积百分比均显著高于对照组,骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和转化生长因子-β1(TGF-β1)呈棕色深染,染色程度显著高于对照组。【结论】骨碎补总黄酮能有效地加速骨牵张中新生骨质的生成与成熟。     

下颌骨牵引成骨过程中转化生长因子表达

目的通过建立兔下颌骨牵引成骨实验动物模型,研究下颌骨牵引成骨过程中TGF-β1表达及意义。方法选用新西兰白兔30只,随机选取6只动物作空白对照组,24只动物右侧下颌骨植入外置式颌骨牵引器。经7d延迟期后,按1mm/d速率延长下颌骨7d,固定期8周。在延迟期第7天,牵引期第2、4、7天,固定期第1、3、6、8周分别处死3只动物,采用免疫组化、RT-PCR方法,检测TGF-β1表达变化。结果TGF-β1表达贯穿下颌骨牵引成骨全过程,下颌骨牵引成骨过程中不同时相多种组织细胞参与表达TGF-β1。TGF-β1 mRNA及其蛋白表达在牵引早期达到高峰,此后逐渐减弱。结论TGF-β1在下颌骨牵引成骨血运重建及新骨生成过程中发挥重要作用。TGF-β1可能与传导机械牵引力刺激的细胞信号传导有关,从而启动血运重建和新骨生成机制。     

碱性成纤维细胞生长因子促进rhBMP-2诱导成骨的载体

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在诱导成骨中的适宜载体。方法 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠１４０只随机分为４组,每组３５只。设立ｒｈＢＭＰ－２／ｂＦＧＦ／ＰＶＰ为实验组,ｒｈＢＭＰ－２／ｂＦＧＦ,ｒｈＢＭＰ－２／ＰＶＰ和ｒｈＢＭＰ－２３组为对照组,分虽于术后３～２１ｄ共６个时间点取材,进行组织学、Ｘ线分析以及钙含量测定,观察４组诱导成骨情况。结果 ｒｈＢＭＰ－２／ｂＦＧＦ／ＰＶＰ组在诱导间充质细胞     

碱性成纤维细胞生长因子和骨形态发生蛋白在Origami2体系中的可溶表达及二者促成骨的协同效应

目的 建立优化高效的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein,BMP-2)蛋白重组方法,阐明二者在促成骨中的协同效应.方法 优化bFGF和BMP-2成熟肽的基因序列密码子,获得适用于大肠杆菌Origami2体系表达的bFGF及BMP-2成熟肽cDNA片段;利用PCR法将bFGF成熟肽cDNA片段插入原核表达质粒pColdⅡ中,构建重组原核表达质粒pColdⅡ-bFGF;利用PCR法将BMP-2成熟肽cDNA片段插入原核表达质粒pET-30a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-BMP-2,转入大肠杆菌Origami2中表达纯化;运用双酶切、质粒测序及Western blot技术证明Origami2表达体系的构建效果;进行细胞增殖实验、碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)染色观察和体内成骨效率检测等,探索bFGF、BMP-2在促成骨中的协同效应.结果 双酶切和质粒测序鉴定证明成功构建重组大肠杆菌pColdⅡ-bFGF/Origami2和pET30a(+)-BMP-2/Origami2表达体系,Western blot检测发现蛋白正确表达.经过Ni-NTA亲和层析纯化后bFGF及BMP-2纯度高达90％.通过对二者比例的优化筛选,发现40 ng/mL bFGF +40 ng/mL rhBMP-2时,大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖效率、ALP活性及体内成骨效率最高,是二者促成骨的最优效组合.结论 成功构建高效表达的pCold Ⅱ-bFGF/Origami2和pET30a(+)-BMP-2/Origami2表达体系,实现了bFGF及BMP-2的高效表达.bFGF和BMP-2的优化联合应用具有促成骨协同效应.     

rhBMP-2对成纤维细胞成骨表型的影响

目的：研究rhBMP－2对成纤维细胞成骨表型的影响,探讨成纤维细胞成骨条件,方法：向体外培养的成纤维细胞（NIH3T3细胞）内加入不同浓度的rhBMP-2,在第3日和第6日检测碱性磷酸酶（ALP）活性和骨钙素表达,绘制生长曲线,结果：rhBMP-2可增加成纤维细胞ALP活性,促进骨钙素表达,在rhBMP－2浓度为800ug.mL^-1和1200ug,mL^-1作用最强,rhBMP-2对细胞增殖规律无明显影响,结论：rhBMP－2可促进成纤维细胞成骨表型表达。     

转化生长因子-β及其下游信号蛋白Smad2/3和Smad7在牵张成骨中表达的研究

目的利用种植型牵张器增高兔下颌牙槽嵴,初步观察成骨过程中转化生长因子TGF-β及其下游蛋白Smad2/3和Smad7的变化规律并揭示其作用。进一步探讨牵张成骨的分子生物学机制,为使用TGF-β及其下游蛋白Smad2/3和Smad7在临床治疗中加快牵张成骨的新骨形成速度提供一定的理论基础和实验资料。方法24只成年雄性大耳白兔随机分成6组,每组4只。非手术组做为空白对照组,其余用自制的垂直牵张器按2次/天,0.5 mm/次,的速度牵张兔牙槽骨,分别于牵张后1天组、1、2、4周组、6周后处死动物取材。标本进行大体观察、X线、组织学观察和免疫组织化学的检测、通过细胞图像分析仪测定阳性面积,利用Spss14.0统计软件采用方差分析统计各组TGF-β、Smad2/3和Smad7的阳性表达。结果TGF-β及其下游信号蛋白Smad2/3和Smad7在兔下颌牵张成骨过程中,不同时期具有不同的表达,提示它们对牵张成骨新骨形成起到一定的作用。结论对兔下颌骨进行牵张成骨过程中,TGF-β以及下游信号蛋白Smad2/3和Smad7参与促进了牵张区新骨的形成。     

转化生长因子-β与骨生成

转化生长因子—β(TGF - β)是一族多种生物活性的细胞因子。在骨组织中含量丰富 ,它通过调整细胞增殖、分化及促进细胞外基质的合成 ,在骨的发生、发展和修复过程中起到重要作用     

转化生长因子 β1 和骨形态发生蛋白 -9在人骨不连组织中的表达及其临床意义

目的：检测肥大性骨不连组织与萎缩性骨不连组织中转化生长因子β1和骨形态发生蛋白-9表达的差异, 评价两种骨不连组织在成骨潜能上的区别。方法：收集2010年至2014年中南大学湘雅二医院和上海交通大学医学 院苏州九龙医院骨科住院的肥大性和萎缩性骨不连患者各20例。利用免疫组织化学SP二步法及病理图像分析软件 IPP6.0对骨不连断端间组织转化生长因子β1和骨形态发生蛋白-9的表达进行半定量分析。根据骨不连类型、患者年 龄和骨不连时间对其进行统计学分析。结果：肥大性骨不连患者中转化生长因子β1和骨形态发生蛋白-9 的吸光度值 分别为0.3236±0.0390和0.1337±0.0400,萎缩性骨不连患者中转化生长因子β1和骨形态发生蛋白-9的吸光度值分别为 0.3191±0.0369和0.1373±0.0423,两者标本中的吸光度值差异均无明显统计学意义(均P>0.05)。转化生长因子β1和骨形 态发生蛋白-9在不同年龄、不同骨不连时间中的吸光度值差异也均无明显统计学意义(均P>0.05)。结论：肥大性骨不 连组织和萎缩性骨不连组织在成骨潜能上无明显差异。