谈谈HPLC法色谱柱的维护保养

<正>高效液相色谱法最常用的色谱柱填充剂为化学健合硅胶。反相色谱系统使用非极性填充剂,以十八烷基硅烷健合硅胶为常用,正相色谱系统使用极性填充剂,以硅胶常用。它的性能直接影响待测物的保留行为和分离效果。也就是说色谱柱是HPLC的心脏部分,在使用时对其维护和保养是相当重要的,以免出现不良情况。这里就色谱柱的维护保养谈一下。     

反相制备色谱分离酪丝亮肽拟似物

本文介绍了以反相C18制备色谱柱分离强极性小肽拟似物的方法。采用BuCHI中压制备系统，以水-甲醇为梯度洗脱体系，并配合HPLC检测，结果成功分离纯化了三个活性拟肽化合物，纯度达97％以上。该法简便、分离效果好，可用于该类小肽化合物的分离制备。     

监测金霉素生产和质量控制的高压液相色谱法

某些四环素类化合物,尤其是金霉素,在不同的反相高压液相色谱法(HPLC)中或多或少会有拖尾峰出现。反相柱的性能取决于所使用的硅胶的性质及键合技术,所以必需精心选择反相填充物。对于分离某种化合物很理想的固定相,对另一种化合物则未必适宜。在试验中,分离性能亦随层析条件和溶质的变化而不同。     

XBridge HILIC液相色谱柱问世

2008年6月18日，马萨诸塞州米尔福德-沃特世公司（WAT：NYSE）XBridge^TM分析色谱柱系列从今天起将增加一个新成员-XBridge HILIC色谱柱。此产品能够有效地提高极性化合物的保留，而如果用传统反相色谱柱，则极性化合物保留很弱。     

蜈蚣胃蛋白酶解物体外抗凝活性肽类的分离与分析

目的采用凝胶过滤色谱和C18反相色谱对蜈蚣胃蛋白酶解物的抗凝活性部分进行分离和纯化,并检测其相对分子质量分布范围。方法光谱法收集各凝胶色谱并分离各流分;用活化部位的凝血活酶时间(APTT)作为指标,检测各流分体外的抗凝活性;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测其相对分子质量的分布范围。结果经过滤色谱和C18反相色谱纯化后得到了抗凝活性成分,并测得成分中的相对分子质量的分布范围在568~1126之间。结论凝胶过滤色谱和C18反相色谱对蜈蚣胃蛋白酶解物的抗凝活性部分进行分离和纯化后,抗凝活性组分是小分子肽类。     

反相高效液相色谱法在血药浓度测定中的应用

近20多年来临床药学得到了迅速发展,要深入开展临床药学研究,测定药物在血液中的浓度至关重要.血药浓度测定目前已经采用的方法有紫外分光光度法、荧光法、气相色谱法、高效液相色谱法、气质联用法、酶免疫分析法、放射免疫分析法和荧光免疫分析法等.本文仅就反相HPLC 法在血药浓度测定和TDM 中的应用综述如下。反相HPLC 法是以非极性填料为固定相,用极性较大的溶剂为流动相进行药物的分离测定.该法适用于分离测定各类非极性和弱极性药物.固定相经常使用ODS 色谱柱。流动相用极性较强的甲醇、水、乙腈等。这些溶剂易纯化,比起正相HPLC 法中使用的有机溶剂价格低廉.反相HPLC 法在血药     

高效液相色谱法AtlantisC18反相色谱柱检测生物样品中儿茶酚胺的研究

采用了AtlantisC18反相色谱柱（适用于分离极性分子的反相色谱柱），成功地分离了去甲肾上腺素（NA），肾上腺素（A），多巴胺（DA）等儿茶酚胺（CAs）类物质，研究了CAs在AtlantisC18和NovlepakC18柱的保留特性，比较了流动相中离子对试剂辛烷基磺酸钠（B8）浓度对CAs容量因子k’的作用，确认采用AtlantisC18柱分离CAs，色谱条件优化空间更大，更适于复杂生物样品分析。色谱条件：AtlantisC18柱，电化检测，流动相：NaH2PO4 50mmol／L、柠檬酸钠50mmol／L缓冲液-乙腈（体积比（75：25），检测限（S／N=2）在0．93—2．43pg，绝对回收率均在98．02％以上，样品日内RSD1．5％以下。方法精密、准确。     

联合使用反相液相色谱,柱切换以及两性离子交换-反相亲水性相互作用混合模式色谱-质谱法分析抗生素中的杂质

建立并优化了一种二维柱切换、高效液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）系统,用于分析抗生素及其有关物质。在一维色谱中,采用两性离子交换-反相亲水性相互作用（ZIC-RP-HILIC）混合模式色谱柱对目标杂质进行分离,并采用液质联用技术（LC-MS/MS）进行检测。在二维色谱中,采用常规的反相LC色谱柱对供试品及其杂质进行分析。ZIC-RP-HILIC混合模式色谱系统的流动相为一种适用于LC-MS/MS的可挥发性缓冲盐,能够提高杂质的离子化效率,便于对目标杂质进行结构解析。直接采用ZIC-RP-HILIC-MS系统,对使用离子对反相色谱分离的抗生素杂质进行定性分析。ZIC-RP-HILIC混合模式色谱与反相LC色谱系统之间的正交性,进一步保证了杂质检测的全面性。此方法的优势体现在对青霉素V钾,苯唑青霉素钠、头孢曲松钠的杂质分析中。另外,该方法便于进行抗生素的杂质谱分析,并可用于其它药物的杂质分析。     

红霉素A和相关物质在聚（苯乙烯—丁二烯苯）上的液相色谱

近来,已有硅基反相液相色谱(LC)法分析红霉素A(EA)及其有关物质的报道。硅基反相用酸调节,以便改进分离。应用老的反相方法仅仅对常规分析是适宜的,当仅有几个样品要分析时,老方法太麻烦。该法另一个缺点是EA和红霉素E(EE)之间分离取决于固定相牌号与老化。EE与红霉素B(EB)、红霉素C(EC)都是市售红霉素样品的杂质。然而,当在红霉素与相关物质能很好分离的中性或微碱性pH时,硅基反相不很稳定。聚(苯乙烯—丁二烯苯)(PSDVB)在宽的pH范围(pH1～3)是稳定的,较高pH流动相不影响固定相。窄孔(100×10~(-10)m)PSDVB固定相已用于红霉素和相关物质的液相色谱,但是分离不满意。然而窄孔     

高效液相色谱法在合成多肽分离与纯化中的应用

近年来，多肽药物化学形成并迅速发展成为药物化学的重要分支。而随着分离纯化技术的进展，又大大加快了新活性多肽的发现和合成速度。在多肽合成中．许多杂质显示与产物类似的性质，随着肽链的增长，分离的难度也增大，因此纯化的方法和工艺显得异常重要。本文综述了凝胶过滤色谱、离子交换色谱和反相色谱等高效液相色谱技术在合成多肽分离与纯化中的设计和应用。     

一些酸性药物在正相硅胶/反相洗脱色谱中保留机理研究

用液相色谱法中“溶质计量置换保留模型”(SDM-R)的两个线性公式,分析了正相硅胶/反相洗脱色谱体系中酸性药物分子与固定相和流动相分子间的相互作用机理,研究了流动相pH值、离子强度、温度和强溶剂浓度改变对溶质保留的影响。从而阐明了酸性药物的保留机理为一种以反相色谱为主的与正相色谱共存的混合保留机理。此方法可以作为药物制剂和中药材中酸性药物成分的分离测定方法。     

提高高效液相色谱法定性准确性的方法探讨

目的：考察影响高效液相色谱中溶质相对保留时间的因素，并尝试更好的保留时间偏差校正方式。方法：以C18柱为例，运用甲醇一水体系，以苯／萘、甲苯／萘的相对保留时间及相对容量因子为评价指标，考察反相液相色谱系统中可能影响溶质保留行为的因素，包括色谱柱填料、填装工艺、批号、柱效、仪器、流动相比例、流速等。并以乙酰螺旋霉索的分析为例，比较相对保留时间法和相对容量因子法的校正效果。结果：对溶质的相对保留时间影响较大的是色谱柱填料、流动相比例和仪器，丽填装工艺、批号、柱效、流速等因素则影响不大。与相对保留时间法比较，相对容量因子法在校正溶质保留行为的偏差方面，效果更好。在实际样品分析时，同一类色谱柱表现出的选择性基本一致。结论：采取以下方法可以提高高效液相色谱的定性准确性：（1）对色谱柱分类，并选择同一类色谱柱进行实验；（2）用相对容量因子代替相对保留时间校正溶质的保留行为：（3）严格控制流动相的比列．     

银杏酸的反相银化高效液相色谱法分离和测定

目的　建立银杏酸的反相银化高效液相色谱分离和含量测定方法。方法　用LC ESI MS对银杏叶中银杏酸进行鉴定,并用反相银化HPLC研究4种银杏酸的分离和含量测定。在银杏叶的乙醇浸提液中加入酸性盐溶液和少量吸附剂后,用正己烷萃取,N₂ 浓缩后的残留物进行HPLC分析。流动相为甲醇-5 %乙酸(90∶10 ) ,其中银离子浓度为0.03mol·L^-1 ,HPLC和二极管阵列检测联用对银杏酸色谱峰进行光谱分析和纯度鉴定。结果　反相银化HPLC分析银杏酸所确定的色谱峰是正确的,4种银杏酸与杂质成分均完全分离。平均回收率97.3% ,方法的精密度RSD为1.6 %。结论　反相银化HPLC是分离碳数与饱和度均不相同的同系物的有效方法,可用于银杏酸的定量分析和银杏叶生产的质量控制     

天冬酰胺键合硅胶毛细管柱分离核苷的研究

目的研究天冬酰胺键合硅胶毛细管柱对核苷的分离效果。方法制备了天冬酰胺键合硅胶毛细管电色谱填充柱,并应用于极性的核苷化合物的分析。考察了流动相组成对该色谱柱电渗流线速度的影响,讨论了极性化合物和离子化合物的分离机理。结果所制备的天冬酰胺键合硅胶固定相具有亲水相互作用。对于电中性极性物质,亲水作用是其主要的保留机制;对于强极性的核苷物质,亲水相互作用,静电相互作用,电泳作用以及氢键作用等因素共同存在。结论核苷4种组分在10min内得到了较好的分离,效果良好     

极性有机溶剂辅助阴、阳离子交换组合色谱法

目的研究极性有机溶剂辅助阴、阳离子交换色谱串接组合纯化蛋白质的可行性。方法以溶栓素为纯化对象 ,采用极性有机溶剂辅助阴、阳离子交换色谱串接组合与常规方法的纯化结果相对比。结果聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝染色法结果显示 ,以含低浓度乙醇的缓冲液进行相同的离子交换色谱 ,具有较好的分离效果。结论极性有机溶剂辅助阴、阳离子交换色谱有效串接组合是一种较好的组合纯化方式 ,但是这种方法使用的前提条件 ,是目标蛋白质在低浓度极性有机溶剂条件下仍能保持适当的活性和溶解性     

高效液相色谱分离定量麦迪霉素A1

本文采用反相高效液相色谱法，择用国产液相色谱填料，甲醇、磷酸盐缓冲液为流动相，分离定量麦迪霉素Ａ１，同时详尽地进行了色谱可变因素对色谱行为影响的探讨，从而获得较佳地分离色谱条件及满意地定量结果。     

亲水作用色谱法（HILIC）的方法开发策略及其在铂类抗癌药分析中的应用

亲水作用色谱法解决了大多数极性化合物的色谱分离问题,其已成为了包括铂类抗癌药在内的许多极性化合物的色谱分离的首选。亲水作用色谱法在极性化合物的分离与检测、药代动力学研究等的应用均日益广泛。如何高效的完成亲水作用色谱的方法开发是药物分析科学家和药代动力学科学家都面临的重要问题,然而目前还没有专门的文献对此进行系统化的整理和研究。本文以此为切入点,围绕亲水作用色谱法方法开发中的固定相选择、流动相筛选、pH值与洗脱的优化等方面,综述了亲水作用色谱（HILIC）的方法开发策略,以及其在铂类抗癌药分析中的应用。     

高效液相色谱分离定量麦迪霉素A_1

本文采用反相高效液相色谱法,择用国产液相色谱填料,甲醇、磷酸盐缓冲液为流动相,分离定量麦迪霉素A_1,同时详尽地进行了色谱可变因素对色谱行为影响的探讨,从而获得较佳地分离色谱条件及满意地定量结果。     

薄层色谱法测定阿德福韦酯有关物质

目的：建立阿德福韦酯有关物质薄层色谱检查法。方法：反相薄层色谱法，甲醇-水(3：1)为展开剂，在紫外光254nm下检视。结果：经方法学验证本法能有效分离并检测阿德福韦酯中的有关物质。最小检测限为0．1μg。结论：反相薄层色谱法避免了阿德福韦酯在硅胶薄层色谱法中发生分解的现象，且分离效果好，检测灵敏度高。     

葛根素的高效液相色谱分离和含量测定

本文用反相高效液体色谱法对葛根素进行分离和含量测定。色谱柱为partisil-10μmODS,流动相为MeOH-H₂O-CHCl₈系统,葛根总黄酮在40分钟内可以完全分离。以外标法,在254nm检测对葛根素进行含量测定。本文还报道了利用C₁₀反相制备型液体色谱柱对葛根素和与它难分离的另一组分(暂名OMe葛根素)的制备分离。