鉴别乙型肝炎病毒野菌株及E阴性突变株的新方法

同是检测乙型肝炎病毒野毒株及２种ＨＢｅＡｇ阴性空株。用聚合酶链反应方法，以人为改变核苷酸序列的２对引物，自乙型肝炎患者血清ＤＮＡ中，同时扩增出１４８ｂｐ及１０２ｂｐ两种产物，根据限制性内切酶Ｂｓｕ３６０２８１和ＡｆｌⅢ对ＰＣＲ产物消化片段长度多态性的分析，鉴别ＨＢＶ野毒株Ｍ０与２种Ｅ阴性突变株Ｍ１，Ｍ２。     

恒温核酸扩增方法的建立及其扩增产物的鉴定

目的建立一种快速、简便的恒温核酸扩增（ＮＡＳＢＡ）方法。方法用由ＡＭＶＲＴａｓｅ、ＲＮａｓｅＨ、Ｔ７ＲＮＡ聚合酶以及相应的缓冲成分组成的恒温扩增系统，对４例丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ区ＲＮＡ序列进行扩增，并通过Ｎｏｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交及限制性内切酶对扩增产物进行鉴定。结果经９０分钟或１８０分钟反应后均可扩增出预期大小的产物，放射自显影在预期位置出现阳性杂交信号。扩增产物经聚合酶链反应（ＰＣＲ）及内切酶ＳｍａⅠ消化后产生预期大小的１４４ｂｐ和３５９ｂｐ的片段，第１次ＰＣＲ产物经转录实验后与ＮＡＳＢＡ直接扩增的产物具有较好的同源性。结论ＮＡＳＢＡ法是一种快速简便的核酸扩增方法，此法扩增出的产物具有良好的特异性。     

大肠埃希菌耐环丙沙星gyrA基因突变的研究

目的了解临床分离大肠埃希菌耐环丙沙星ｇｙｒＡ基因突变情况。方法用环丙沙星浓度梯度法试条检测临床分离大肠埃希菌最低抑菌浓度（ＭＩＣ），聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ｇｙｒＡ基因喹诺酮耐药决定区，扩增产物片段长度为６６８ｂｐ，用限制性内切酶ＨｉｎｆⅠ消化ＰＣＲ产物，行８％聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果共检测大肠埃希菌４１株，１４株ＭＩＣ在０．２５～０．５μｇ／ｍｌ的菌株，未检出耐药性突变位点；４株ＭＩＣ在１～２μｇ／ｍｌ的菌株（２株ＭＩＣ为１μｇ／ｍｌ、１株为１．５μｇ／ｍｌ，１株为２μｇ／ｍｌ）均出现ｇｙｒＡ基因突变；耐药菌２３株（１株ＭＩＣ为１６μｇ／ｍｌ，其余≥３２μｇ／ｍｌ）也均发生ｇｙｒＡ基因突变。结论临床分离大肠埃希菌对环丙沙星耐药性与ＨｉｎｆⅠ酶切位点突变密切相关，低水平耐药菌株ｇｙｒＡ基因发生突变具有一定临床意义。     

抗—HBc阴性的乙肝病毒携带者血清学分析

１９９４年间检测的乙肝病毒（ＨＢＶ）感染者９６６５人份，ＨＢｓＡｇ阳性中１４６例抗－ＨＢｃ阴性，，其中ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ同时阳性的１３９例，占９５．２％，对其随访观察，ＡＬＴ正常，抗－ＨＢｃ－ＩｇＭ均阴性、ＨＢＶ－ＤＮＡ及ＨＢｃＡｇ检出率均为１００％；４０例随访１年后，血清学指标无变化。结果提示，抗－ＨＢｃ阴性的ＨＢＶ携带者，非近期感染或活动性病变；体内ＨＢＶ复制活跃，具有较强的传染性。可能的     

对超广谱β-内酰胺酶检测方法学评价的几点建议

超广谱 β 内酰胺酶 (ＥＳＢＬｓ)是由质粒介导 ,主要由克雷伯菌属和大肠埃希菌等肠杆菌科细菌产生 ,产生菌的耐药谱扩展至三代头孢和氨曲南[1] 。克拉维酸等酶抑制剂对其有效。大部分ＥＳＢＬｓ属于ＡｍｂｌｅｒＡ类 ,位于Ｂｕｓｈ等[2 ] 功能分类方案 2ｂｅ群 ,少数属于ＡｍｂｌｅｒＤ类 ,位于Ｂｕｓｈ 2ｄ群。Ａ类ＥＳＢＬｓ分为两群 :ＴＥＭ和ＳＨＶ衍生和非ＴＥＭ和ＳＨＶ衍生ＥＳ ＢＬｓ。最常见的ＥＳＢＬｓ由ＴＥＭ 1、2和ＳＨＶ 1突变而来 ,利用基因突变研究氨基酸一级结构和功能的关系是目前ＥＳＢＬｓ基础研究的热点[3 ] 。非Ｔ…     

水蛭素变异物1活性多肽基因的化学合成及克隆

为了解决天然水蛭素来源匮乏问题，我们采用基因工程技术进行重组水蛭素的研究。根据水蛭素变异物１（ＨＶ１）的氨基酸序列，选择在原核细胞中高表达的密码子，设计了２２１个碱基对长度的ＨＶＩＤＮＡ片段。分１４个寡核苷酸片段进行化学合成，各片段连接成ＨＶ１全基因后，经ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ切点克隆入ｐＵＣ１８／１９质粒，转化大肠杆菌ＪＭ１０５，蓝白菌落法筛选阳性克隆。限制性内切酶实验及ＤＮＡ序列分析证实了ＨＶ１全基因的正确性，克隆成功。并且获得活性表达。     

e抗原阴性乙肝患者HBV—DNA检出率与临床疾病状态的关系

研究肝病患者ｅ抗原转阴后病毒复制情况以及ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率与临床疾病状态的关系。方法采用ＰＣＲ技术对１０８例ｅＡｇ阴性、ＨＢｓＡｇ阳性肝病患者进行血清ＨＢＶ－ＤＮＡ分析，同时进行肝功能指标检测。结果５０．９％的患者体内仍存在乙肝病毒复制。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性无症状携带者２７．８％、慢迁肝４５．８％、慢活肝７７．８％、肝硬化５６．５％、肝癌３７．５％。ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性组ＡＬＴ值为１３８．６±１０２．８ＩＵ，而ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性组为３４．２±３０．２ＩＵ。结论ｅＡｇ阴性乙肝病毒感染者中仍有相当一部分存在乙肝病毒复制。慢性活动性肝炎患者ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率最高。但是疾病发展到晚期，病毒复制能力又开始下降。     

肝癌患者血清乙型肝炎病毒标志物和抗丙型肝炎病毒抗体的检测及其相互关系

采用ＥＬＩＳＡ法检测１４０例肝癌患者血清ＨＢＶ－Ｍ和抗－ＨＣＶ，以５６例非肝病组做对照。抗－ＨＣＶ肝癌组阳性率３２．１％，对照组８．９％，两组差异有极显著性（ｐ＜０．００５）。ＨＢＶ－Ｍ在肝癌中ＨＢｓＡｇ阳性率为６９．３％，ＨＢｅＡｇ１９．２％，抗－ＨＢｅ６２．１％，抗－ＨＢｃｌｇＭ５５．４％，总阳性率９１．４％。抗－ＨＣＶ阳性率在ＨＢＶ－Ｍ阳性组和阴性组间差异无显著性。结果表明，ＨＢＶ和ＨＣＶ均与肝癌有关。但ＨＣＶ次于ＨＢＶ，可能是通过调节ＨＢＶＤＮＡ表达及整合而起促癌作用。     

慢性乙肝患者PBMC的增殖反应,NK细胞活性及血清中TNF …

目的：了解ＨＢＶ感染后细胞免疫及ＴＮＦ－α，ｓＩＬ－２Ｒ在其中所起作用，探讨慢性乙肝患者的细胞免疫状态，方法：对７６例慢性乙肝患者及２７例健康献血员，以＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测ＰＢＭＣ对不同抗原的增殖反应和ＮＫ细胞活性及应用ＥＬＩＳＡ方法测定血清中ＴＮＦ－α，ｓＩＬ－２Ｒ结果：慢性乙肝患者ＰＢＭＣ对ＨＢｓＡｇ增殖反应阳性者，ＰＨＡ的增殖指数明显高于ＨＢｓＡｇ增殖反应阴性者（Ｐ〈０．０１），ＮＫ细胞     

各类乙型肝炎患者自身混合淋巴细胞反应的研究

用氚标胸腺嘧啶核苷掺入法检测１０２例各种类型乙肝病毒感染者自身混合淋巴细胞应，结果表明：除ＨＢｓＡｇ携带者及慢性迁延性肝炎患者ＡＭＬＲ接近正常对照外，其它类型ＨＢＶ感染者ＡＭＬＲ均有不同程序降低，尤其以重症肝炎和肝硬化降低明显。     

肝癌50例临床分析

本文观察分析了１９９１年３月至１９９２年１２月收治的原发性肝癌５０例，其中有家族肿瘤史者５例占１０％，ＨＶＢ－Ｍ阳性的肝炎患者显著多于ＨＢＶ－Ｍ阴性的患者。ＨＢＶ－Ｍ感染血清免疫反应类型以ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ，抗－ＨＢｃ三项同时阳性者多见，占３２％。     

丙型肝炎病毒包膜蛋白基因片段的克隆与表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ和基因重组技术，从湖南地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中克隆了ＨＣＶ包膜蛋白基因片段（Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１），经与已知基因型的ＨＣＶ－１，ＨＣＶ－Ｊ，ＨＣＶ－Ｊ６和ＨＣＶ－Ｊ８进行核苷酸序列的比较分析，这些基因片段属１ｂ型ＨＣＶ基因。将克隆基因重组于表达质粒ＰＭＡＬ－ＣＲＩ中，在大肠杆菌内进行高效表达，获得了融合蛋白ＭＢＰ－Ｅ１，ＭＢＰ－Ｅ２／ＮＳ１，经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析证实这些融合蛋白具有ＨＣＶ的特异抗原活性，提示这些融合蛋白可用于ＨＣＶ感染的临床诊断和发病机理的研究。     

乙型肝炎患者血清抗HBs独特型抗体免疫复合物的检测

用聚乙二醇沉淀，胰蛋白酶处理乙型肝炎（乙肝）患者血清后，再用酶联免疫吸附法检测检样中的含抗ＨＢｓ独特型抗体免疫复合物（抗ＨＢｓ－Ａｂ＿２－ＩＣ）。结果发现，乙肝患者血清中ＩｇＧ、ＩｇＭ类抗ＨＢｓ－Ａｂ，－ＩＣ检出总阳性率分别为：急性乙型肝炎１４．５％（９／６２），慢性活动性肝炎２１９％（２８／１２８），慢性迁延性肝炎１２．５％（２／１６）。抗ＨＢｓ－Ａｂ＿２－ＩＣ阳性者的抗ＨＢｓ独特型抗体检出率８４．１％（３３／３９），且乙型肝炎病毒的血清学标志阳性率显著高于抗ＨＢｓ－Ａｂ＿２－ＩＣ阴性者。表明，乙肝患者体内存在抗ＨＢｓ－Ａｂ＿２－ＩＣ，抗ＨＢｓ独特型抗体（抗ＨＢｓ－Ａｂ＿２）可能通过与抗ＨＢｓ结合，削弱和影响抗ＨＢｓ中和、清除乙肝病毒抗原的作用。     

乙型肝炎五种标志物模式及其表面抗原稀释度与原发性肝癌的相…

为探讨乙肝五种标志物模式及ＨＢｓＡｇ在血清中的稀释度与原发性肝癌（ＨＣＣ）间的相关民生，我们采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）和反向血凝法分别检测了３９例ＨＣＣ病人血清乙肝标志物（ＨＢＶ－Ｍ）和ＨＢｓＡｇ稀释度，结果发现３５例ＨＢＶ－Ｍ阳性病例中，大三阳（ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ，抗－ＨＢＣ阳性）仅占２２．８％，而小三阳（ＨＢｓＡｇ，抗－ＨＢＣ，抗－ＨＢＣ阳性）却占了６２．８％，３３例ＨＢｓＡｇ阳性的     

HCV感染基因型病毒复制程度与肝病关系的研究

采用限制性内切酶Ｓａｕ３Ａｌ和ＨａｅⅢ对５４例ＲＴ－ＰＣＲ法ＨＣＶＲＮＡ阳性的５＇ＮＣ区扩增产物进行酶切分型；ＰＣＲ滴定法半定量分析ＨＣＶＲＮＡ含量。结果显示４种酶切类型：ＨＣＶⅠ型感染３．７％（２／５４），ＨＣＶⅡ型感染７７．８％（４２／５４），ＨＣＶⅢ、Ⅳ型感染１１．１％（６／５４），ＨＣＶⅠ、Ⅱ／Ⅲ、Ⅳ型混合感染７．４％（４／５４），ＨＣＶⅡ型感染阳性率在ＡＨ、ＣＡＨ、ＬＣ三组间无显著差异（     

应用双抗原夹心法检测抗－HCV抗体

目的建立检测抗－ＨＣＶ抗体的双抗原夹心酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法。方法用基因工程手段，在大肠杆菌中表达ＨＣＶ抗原表位与大肠杆菌噬菌体ＭＳ２ＤＮＡ聚合酶（ＭＳ２－Ｐｏｌ）的融合蛋白，纯化后作为包被抗原，可溶性表达的ＨＣＶ抗原表位与霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）的融合蛋白经辣根过氧化物酶标记后作为酶结合物，建立双抗原夹心ＥＬＩＳＡ。结果ＭＳ２－Ｐｏｌ融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达并进行了纯化，所建立的双抗原夹心ＥＬＩＳＡ系统用于检测１４份ＨＣＶ阳性血清样品，抗－ＨＣＶ抗体检出率１００％；检测２１份ＨＣＶ阴性血清，没有假阳性结果。ＣＴＢ抗体不干扰反应。结论双抗原夹心法与采用二抗的ＥＬＩＳＡ系统具有相近的灵敏度和更好的特异性。可以避免由于二抗干扰带来的非特异性。     

用重叠延伸聚合酶链反应制备鸭乙型肝炎病毒基因点突变

目的制备含鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）前核心区终止密码突变的基因片段，以对此基因突变作有关生物学研究。方法用重叠延伸聚合酶链反应（ＯＥ－ＰＣＲ）制备含此人工定向点突变的基因片段；用不对称聚合酶链反应（ａｓｙ－ＰＣＲ）制备单链ＤＮＡ模板作测序。结果凝胶电泳显示ＯＥ－ＰＣＲ产物与克隆ＤＨＢＶＤＮＡ酶切片段位置一致，测序证实该点突变存在。结论用ＯＥ－ＰＣＲ作人工定向基因突变，不需要克隆制备单链模板及筛选阳性克隆，２天内即可出结果，较传统方法简便、快速、有效。     

乙肝标志物中ＨＢｓＡｇ“阴性”结果的探讨

我们随机对在我院就诊患的５６１２份血清标本进行了乙肝标志物（ＨＢＶＭ）五项指标（ＨＢｓＡｇ、抗—ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗—ＨＢｅ、抗—ＨＢｃ）的检测，并着重对ＨＢｓＡｇ阴性而其他标志物阳性的血清标本进行了探讨，同时观察了ＨＢｓＡｇ的滴度与其他标志物阳性的关系。     

检测乙型肝炎表面抗原的一步法试剂的钩状效应分析

卫生部下发的《血站管理办法 (暂行 )》中规定 ,对献血者血液乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)检测的质量标准是“ＨＢＶ表面抗原(ＨＢｓＡｇ)酶免疫吸附法 (ＥＬＩＳＡ) :阴性” ,但未要求用一步法还是二步法检测。目前 ,国内检测ＨＢｓＡｇ绝大多数采用ＥＬＩＳＡ中的双抗体夹心双位点一步法。用该方法检测ＨＢｓＡｇ ,当标本中的ＨＢｓＡｇ浓度过高时 ,会因钩状效应 (Ｈｏｏｋ)现象出现假阴性 ,而造成漏检 ,增加输血传播ＨＢＶ的风险度 ,严重威胁输血安全。ＨＢＶｅ抗原 (ＨＢｅＡｇ)和ＨＢＶ核心抗体 (ＨＢｃＡｂ)两项阳性时 ,大多数ＨＢｓＡｇ都…     

丙型肝炎病毒NS5A区插入序列因子的初步研究

研究丙型肝炎病毒ＮＳ５Ａ区插入序列（ＩＳ） 因子及其来源。以ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＨＣＶ ＮＳ５Ａ区第６８７１至７１２１ 区段， 对扩增产物进行核苷酸测序并与ＨＣＶ－Ｊ株相应区段序列相比较。结果发现ＨＣＶ ＮＳ５Ａ 区插入一个４８ ｂｐ 的ＩＳ因子， 将ＩＳ因子与ＨＣＶ－Ｊ株全核苷酸序列进行同源性对照， 发现该片段来源于ＨＣＶ Ｅ１区。该研究首次报告了ＨＣＶ ＮＳ５Ａ区有来自Ｅ１区的漂移基因片段， 并对其临床和生物学意义进行了初步讨论。