去除αGal抗原的猪红细胞输入猕猴体内的初步研究

目的探讨经α-半乳糖苷酶(AGL)去除了αGal抗原的猪红细胞输注给灵长类动物的可能性。方法使用AGL体外去除猪红细胞表面的αGal抗原,应用流式细胞术和配血试验检测修饰效果:用FITC标记此红细胞,将AGL酶解的pRBCs与未酶解的pRBCs分别输注给使用免疫抑制剂(眼镜蛇毒因子及地塞米松)预注射的猕猴;流式细胞仪检测计算输注红细胞在猕猴体内的存活率,同时检测受试猕猴的血生化及尿液指标。结果AGL有效清除了猪红细胞表面的αGal抗原,使其与猕猴血清的凝集反应减弱。未酶解的pRBCs在猕猴体内存活<0.5h。AGL酶解后的猪红细胞输注后2h在猕猴体内有29%存活,8h猕猴体内仍可检测到荧光标记的pRBCs。结论AGL能有效清除猪细胞表面的αGal抗原,减弱HAR,延长异种移植物的存活时间。     

猪红细胞表面抗原化学修饰后应用于异种输血的初步体外研究

目的使化学修饰的猪红细胞(pRBC)呈现出与人红细胞(hRBC)相似的血清学特性,减弱或消除人体对pRBC的免疫排斥。方法采用双修饰法即rSα-GalE酶解法(100U/mL的rSα-GalE处理)修饰改造pRBC表面的Gal抗原,再用mPEG包裹法(3mmol/L的mPEG-BTC)修饰遮蔽pRBC的non-αGal表面抗原。结果修饰后的pRBC与人混合血浆的盐水交叉配血试验为阴性;修饰后pRBC的结构、功能等指标基本正常。结论经rSα-GalE和mPEG双修饰法修饰改造的pRBC呈现出与hRBC相似的血清学特性。     

牛、猪红细胞表面异种抗原改造的比较

把动物红细胞输用给人,即异种输血,可以缓解目前血源紧张的矛盾,但牛和猪的红细胞与人的血浆发生强烈的凝集反应,不能直接输用.本研究首次对牛和猪红细胞表面抗原进行修饰改造,并对改造后的猪、牛红细胞进行比较,从而为开拓丰富来源、安全有效的人血代用品奠定基础.使用基因重组的咖啡豆α-半乳糖苷酶清除牛和猪红细胞表面的主要异种抗原-α-Gal抗原,结合使用化学材料甲氧基聚乙二醇（mPEG）修饰遮蔽牛和猪红细胞表面的非主要异种抗原-non-αGal抗原,以实现对牛和猪红细胞表面异种抗原的改造.结果：改造后的牛、猪红细胞与人混合血浆的盐水凝集反应消失,具有和人红细胞相似的血清学特征;牛红细胞比猪红细胞脆性低,异种抗原的表达量低,及其他的一些特征说明牛红细胞比猪红细胞更适合作为人红细胞代用品.结论：改造后的牛红细胞与人血浆相匹配,有可能成为人红细胞代用品.     

新型α-半乳糖苷酶清除动物红细胞表面αGal抗原的研究

异种抗原αGal是引起异种移植免疫排斥反应的重要原因之一。脆弱类杆菌来源的α-半乳糖苷酶是一种新型的糖苷酶,能够切除支链多糖和直链多糖末端的αGal残基。本研究探讨新型α半乳糖苷酶清除红细胞表面αGal抗原的作用。利用新型的基因重组α-半乳糖苷酶酶解牛、猪、狗、兔红细胞上的异种抗原,并用流式细胞术分析细胞表面的αGal抗原。结果表明,动物红细胞表面的异种抗原αGal被完全或部分清除。结论:新型α-半乳糖苷酶可以用来清除异种红细胞上的αGal抗原,对降低异种移植引起的超急性排斥反应具有潜在意义。     

猪红细胞血型抗原修饰异种输血的研究进展

异种器官移植所取得的突破性进展为异种输血的研究带来了曙光。人与猪的红细胞的血清学和生物化学特性有许多相似之处，因此猪就成为实现异种输血最具有可能性的红细胞供体，猪红细胞上存在异种抗原，包括αGal抗原和non-αGal抗原。αGal抗原和人血清中天然存在的抗αGal抗体结合后引起的免疫排斥反应在抗体介导的凝集反应中起主要作用。但是non-αGal抗原和人血清中天然存在的抗non-αGal抗体结合引起的免疫排斥反应作用也不能低估，经特定修饰，改造以及的猪红细胞，是来源丰富的异种血源。     

α-半乳糖苷酶酶解制备通用红细胞的动物实验研究

目的　观察酶解对猕猴红细胞形态及功能的影响 ,评价酶解后通用红细胞的安全性。方法　以基因重组的α 半乳糖苷酶体外酶解猕猴类人B型抗原 ,并以改良吸收放散试验鉴定酶解效果 ,检测酶解前后猕猴红细胞的形态和功能变化 ,流式细胞仪测定酶解红细胞在受体内的 2 4h存活率及半衰期 ,监测受体回输前后不同时期的血液、尿液生化指标。结果　经α 半乳糖苷酶酶解后的红细胞其B抗原被清除 ,形态及功能与酶解前无明显变化 ,在受体内的 2 4h存活率为 84 .6 %和 6 8.1 % ,半衰期为 7d和 8d ,血液、尿液等主要生化指标亦正常。结论　α 半乳糖苷酶酶解对猕猴红细胞的形态和功能无不良影响 ,酶解后红细胞输给异体猕猴是安全的     

mPEG-SPA对红细胞A、B抗原的遮蔽及稳定性初步研究

目的探讨mPEG-SPA修饰对A、B、AB三种血型红细胞上A、B抗原的遮蔽效果及稳定性。方法采用合适浓度的mPEG-SPA修饰不同血型红细胞,并分别保存在O型血浆中以观察红细胞凝集情况、保存在原血浆和MAP液中以测定游离血红蛋白。结果连续保存45d,显微镜下观察mPEG-SPA修饰的红细胞在O型血浆中未见凝集,在原血浆中保存21d时血浆游离血红蛋白≤0.29g/L;在MAP液中保存35d时游离血红蛋白≤1g/L。结论在保存期内,经mPEG-SPA化学修饰的A、B、AB三种血型红细胞的抗原遮蔽效果稳定、游离血红蛋白指标均符合临床输血要求。     

ABO血型改造制备通用型红细胞

血型改造的理论基础、研究意义及国外研究进展ABO血型系统是临床输血最重要的血型系统,在所有的输血死亡事故中,每年因ABO血型不相合而导致的输血死亡事故居首位,约为69.7%[1].     

去除α1，3-半乳糖转移酶的猪红细胞用于人类输血的研究[英]／Rouhani FJ…／／Transfusion

背景猪是人类潜在的红细胞供血源，但由于其红细胞表面存在半乳糖-α，3-半乳糖(Gal)抗原决定基，而人类有抗-Gal，因此这是猪红细胞应用于人体的一个主要障碍。最近，去掉猪的α，3-半乳糖转移酶基因，使其红细胞表面不表达Gal抗原决定基(Gal-／-)，已经成为可能。设计和方法在体外，从Gal-／-猪采取的红细胞暴露于未经致敏的人血清．或狒狒血清，     

利用孕妇外周血中胎儿有核红细胞行无创产前性别诊断的初步研究

目的建立一种利用孕妇外周血中分选出的胎儿有核红细胞（FNRBC）进行无创伤性产前诊断的有效方法。方法收集5例妊娠7～9周的人流妇女的绒毛及外周血20ml,采用抗-CD45和抗ε链双标细胞,流式细胞仪分选CD45dim的细胞经显微挑选出ε-链免疫荧光抗体阳性的胎儿有核红细胞,再采用单细胞多重置换扩增技术（MDA）进行全基因组扩增,以扩增产物为模板,常规PCR检测Alphoid基因片段,确定胎儿性别,与绒毛PCR结果比较。结果抗-ε链、抗-CD45双标记的5例标本流式分选CD45dim细胞后,所有标本均观察到血红蛋白ε链阳性细胞。怀有2例男性和1例女性孕妇的外周血分选出的阳性细胞经MDA和PCRAlphoid基因片段扩增,显示1例全基因组扩增失败;1例诊断为男胎,1例为女性,与绒毛PCR性别检测结果完全符合。结论ε-抗体、CD45双标的CD45dim细胞经流式分选后结合显微操作技术从母血中挑选出ε-血红蛋白阳性细胞,经全基因组扩增可以有效获取足够量的研究模板,保证后续分析的准确性,可应用于性连锁遗传疾病的无创性产前诊断。     

保存前去除白细胞对浓缩红细胞保存质量影响研究

为了研究保存前去除白细胞对不同方法制备的浓缩红细胞 (RCC)保存质量的可能影响 ,分别取分离血浆后所得浓缩红细胞 (RCC1)和分离富含血小板血浆后所得含少量血浆的浓缩红细胞 (RCC2 )各 8袋 ,每袋等量分为两份 :过滤组和对照组。过滤组在保存当天用去白细胞滤器过滤 ,然后按常规方法 4℃保存 35天 ;对照组直接 4℃常规保存 5周。每周取样本测定平均红细胞体积 (MCV)、平均红细胞血红蛋白含量 (MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度 (MCHC) ,血浆K+浓度和乳酸脱氢酶 (LDH) ,游离血红蛋白 (FHb)和红细胞ATP水平 ,同时做细菌培养污染监测。结果表明 :两种方法制备的RCC在过滤组与对照组中MCV ,MCH和MCHC无显著差别 ;红细胞ATP水平在保存第 0 ,1,2和 3周过滤组与对照组无显著差异 ,第 4和 5周过滤组红细胞ATP水平低于对照组 (P <0 .0 5 ) ;在保存过程中过滤组K+水平低于对照组 ,除了RCC1在保存第 0 ,1,2和 3周与对照组无显著差别外 ,均有显著差异 (P <0 .0 5 )。过滤组血浆LDH释放量显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,在分离血小板后制备的RCC2这种差别更为明显。在保存期间RCC2组血浆的FHb水平过滤组显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而RCC1两组间FHb水平无显著差异。各组细菌培养均为无细菌生长。结论 :保存前去白细胞过     

红细胞血型血清学试验中溶血现象的消除

目的 研究红细胞血型血清学试验中溶血的原因及排除方法。方法 检测被抗－A和抗B－致敏的红细胞出现溶血的影响因素,并观察用自制SAN型保养液配制的试剂红细胞应用和保存效果。结果 在常规血清学试验时,孵育时间愈长、温度愈高,则溶血发生频率也增加。该文SAN型保养液配制的试剂红细胞在试验中不出现溶血和弱凝集现象。结论 在ABO反定型和交叉配血试验前,应采用适当的保养液悬浮红细胞,防止出现溶血和弱凝集现象。     

甲氧基聚乙二醇遮蔽红细胞表面抗原制备通用型血液的初步研究

目的 :探讨mPEG遮蔽红细胞表面抗原、制备通用型血液的可能性。方法 :使用mPEG修饰人红细胞 ,观察其对红细胞的影响。结果 :随着mPEG剂量的增高 ,红细胞的A、B和D抗原逐步减弱。在一定浓度下mPEG修饰不影响红细胞的形态、结构、功能及变形性 ,然而高浓度的mPEG修饰可能会使红细胞寿命缩短。结论 :尽管还有很多问题需要解决 ,mPEG修饰法制备通用型血液具有进一步研究的价值     

Serum and Red Blood Cell Magnesium Levels in Juvenile Migraine Patients

Recently an important role for magnesium in establishing the threshold for migraine attacks has become evident. Accordingly, we measured serum and red blood cell magnesium levels in juvenile migraine patients with and without aura interictally. In comparison with normal subjects, migraineurs had significantly lower serum and red blood cell magnesium levels.     

mPEG修饰红细胞Rh抗原稳定性的研究

本研究旨在探究mPEG修饰的红细胞Rh抗原的稳定性。利用红细胞膜蛋白SDS—PAGE电泳技术分析mPEG修饰后红细胞膜蛋白与mPEG结合情况，用红细胞血影凝集实验及40cCPD保养液保存的修饰红细胞与匹配血液体外混血实验，观察mPEG修饰后红细胞Rh抗原被遮蔽的稳定性。结果发现：不同保存时间的mPEG修饰的红细胞在模拟输血（即混血前后）的血型保持不变，同时mPEG修饰的红细胞在保存过程中游离血红蛋白水平正常，并且混血后经37℃孵育的mPEG修饰的红细胞游离血红蛋白水平低于不混合的修饰的红细胞。比较分析PEG特异的碘染和考马斯亮蓝染的显色图谱发现，特殊的碘染显示出mPEG与红细胞膜蛋白结合的条带，mPEG—SPA与红细胞膜蛋白结合后导致蛋白分子迁移速度发生改变。mPEG修饰的红细胞血影凝集实验证实，修饰红细胞在质膜裂损后mPEG仍有效地遮蔽抗原。结论：mPEG—SPA不论在红细胞膜蛋白被单独提取后，还是膜破损后以及存活状态下，均能与红细胞膜蛋白稳固结合。     

冰冻干燥红细胞超微结构的分析

本研究的目的是探讨冰冻干燥红细胞在电镜下的形态变化。全血采自健康献血者 ,实验分为 3组。组 1:新鲜红细胞 ,4℃保存不超过 2 4小时 ;组 2 :红细胞中加入终浓度为 35 %的甘油 ,- 80℃保存 2 4小时 ;组 3:红细胞经过预处理 ,冰冻干燥 16小时。对解冻红细胞或水化重悬冰冻干燥的红细胞进行计数 ,电镜下观察 3组红细胞超微结构 ,并对电镜下红细胞平均直径、平均光密度及积分光密度进行图像分析。平均光密度及积分光密度代表细胞内血红蛋白的相对含量。结果表明 ,冰冻干燥后红细胞回收率为 5 3% ,红细胞具有圆盘状的结构。组 1红细胞平均直径(μm)、平均光密度及积分光密度分别为 4 .7± 0 .4 ,0 .14± 0 .0 2 ,1.5 8± 0 .4 6 ;组 2红细胞平均直径 (μm)、平均光密度及积分光密度分别为 4 .6± 0 .7,0 .14± 0 .0 2 ,2 .35± 0 .6 4 ;组 3红细胞平均直径 (μm)、平均光密度及积分光密度分别为 4 .4± 0 .4 ,0 .17± 0 .0 5和 2 .35± 0 .4 6。对电镜下红细胞平均直径、平均光密度及积分光密度数据进行统计学处理 ,三元方差分析的Wilks′Lambda检验显示 ,组 3与组 2之间无显著差异 ,组 3与组 1相比较差异显著。结论 :冰冻干燥红细胞具有相对完整的超微结构 ,平均直径及血红蛋白的含量与冰冻保存红细胞相