石家庄市水环境中嗜肺军团菌AFLP分型研究

目的 对石家庄市水环境中分离到的嗜肺军团菌进行分子分型,研究嗜肺军团菌AFLP分型特征,为建立嗜肺军团菌分子型别库提供资料.方法 运用欧洲军团菌感染工作组(European Working Group on Legionella Infection,EWGLI)组织制定的扩增片断长度多态性分型(amplified fr...     

环境水军团菌分离培养及其表型与分子分型研究

目的探讨环境水系军团菌分离培养及其表型和分子分型鉴定方法。方法采用军团菌常规分离培养、生化试验、血清学分型和菌体脂肪酸成分分析、PCR试验、AFLP基因分型和SBT核酸测序分型鉴定等技术方法,对广东地区195份环境水系分离的226株军团菌进行表型和基因型分型鉴定。结果在广东地区195份环境水样中共检出军团菌226株,主要是嗜肺军团菌170株(75.22%),长滩军团菌21株(9.29%)、菲氏军团菌21株(9.29%)、橡树岭军团菌和茴芹军团菌各2株(0.89%),其他非嗜肺军团菌10株(4.42%)。125株军团菌细胞脂肪酸成分测定分嗜肺军团菌、橡树岭军团菌、长滩军团菌、菲氏军团菌等6种类型;54株嗜肺军团菌1型AFLP分型,分为25个基因型。7株不能用生化试验、细胞脂肪酸成分分析和AFLP分型做出鉴定的军团菌,用SBT核酸测序鉴定为菲氏军团菌2株、长滩军团菌3株和茴芹军团菌2株。结论广州地区环境水系军团菌分布以嗜肺军团菌为主,同时有橡树岭军团菌、菲氏军团菌、长滩军团菌和茴芹军团菌等多种军团菌种;SBT核酸测序鉴定有助于发现军团菌新种。     

嗜肺军团菌不同分子分型方法检测

目的采用2种分子分型方法对冷却塔水中嗜肺军团菌进行检测分析。方法分别应用扩增军团菌巨噬细胞感染力增强因子基因(Macrophage Infectivity Potentiator,MIP)后测序的分型方法以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)对48株嗜肺军团菌进行分型。结果MIP分型方法将48株嗜肺军团菌分为5类,分别为,i>L.pnuemophile-phil-1、L.pnuemophile-phil-sg3、L.pnuemophile-phil-D-15、L.pnuemophile-phil-sg10、L.pnuemophile-phil-97-2898,其中L.pnuemophile-phil-1为优势菌群,占60.4%。PFGE分型方法将48株嗜肺军团菌分为23类,无优势菌群。结论PFGE分型方法具有更高的分型能力,更有利于流行病学溯源、调查。     

军团菌分子分型方法在流行病学调查中的应用

军团病主要由嗜肺军团菌引起.在军团病暴发流行时,进行分离株的种型鉴定以及环境和患者样本分离株之间的关联性分析,对于追查传染源、准确诊断军团病、预防和控制军团菌感染有重要意义.由于传统的细菌培养和血清分型鉴定已不能满足流行病学调查研究的需要,分子分型技术的应用成为相关研究热点.文章对目前军团菌的几种常用分子分型技术(SBT、AFLP、PFGE、Ribotyping、脂肪酸分型)的原理、特点、分辨能力、重复性及应用情况作了综述.     

嗜肺军团菌基因检测及分子特征研究

目的:了解外环境水中分离的嗜肺军团菌菌株的基因特征及遗传背景。方法:40株分离株分别经血清学凝集试验、胶乳凝集试验确定为LP1型嗜肺军团菌后,利用普通PCR技术对军团菌属5S rRNA基因和嗜肺军团菌mip毒力基因的特异序列进行扩增,应用实时荧光定量PCR技术扩增嗜肺军团菌mip基因,使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对菌株进行全染色体DNA酶切电泳分型,并用BioNumerics Version 4.0软件进行聚类分析。结果:所有的菌株均带有属特异性5S rRNA基因及mip毒力基因,PFGE聚类分析结果显示大多数菌株的遗传相似度有一定差异。结论:所有菌株经普通PCR或定量PCR均相应扩增出其特征基因,PFGE聚类分析结果提示浙江省散在水系中分离的嗜肺军团菌菌株存在遗传多样性。     

工业循环冷却塔水嗜肺军团菌分离株分子生学特性研究

目的 了解钢铁企业工业循环冷却塔水中的嗜肺军团菌污染状况及菌株分子生物学特性.方法 于2011年3月-2012年9月对邯郸某钢铁厂相对固定的车间冷却塔水进行连续监测,进行嗜肺军团菌的定量分离培养,对分离到的菌株进行血清分型、脉冲场凝胶电泳分型、基因序列分型、毒力基因(lvh、rtxA)检测.结果 共检测117份水样,其中20份水样检出嗜肺军团菌,检出率为17.1％;菌落总数为100～50000 CFU/L,中位数为12000 CFU/L;共分离到嗜肺军团菌23株,血清型包括Lp1、Lp3、Lp5、Lp6、Lp8,并以Lp1为主(占36.1％,9/23).23株嗜肺军团菌PFGE分型得到19种不同带型,其中15种带型为国内首次发现.23株嗜肺军团菌分成20个SBT型别,有12个型别为本研究新发现.23株菌中,lvh、rtxA基因阳性的分别有20、22株,两种毒力基因全部阳性的有19株.结论 钢铁企业的冷却塔水存在嗜肺军团菌污染,菌型呈现基因多态性,同时具有独特的基因组成,并普遍具有毒力.     

石家庄市集中空调冷却塔水中嗜肺军团菌的基因序列分型研究

目的采用基因序列分型方法(sequence-based typing,SBT)研究石家庄市集中空调冷却塔水中军团菌基因特征。方法将石家庄市集中空调冷却塔水中分离出的35株Lp1血清型嗜肺军团菌提取基因组DNA,选取嗜肺军团菌7个管家基因flaA、pilE、asd、mip、mompS、proA、neuA进行PCR扩增,将扩增产物纯化后测序。测序结果上传欧盟军团菌感染工作组(EWGLI)数据库进行比对,得到基因型别(sequence type,ST),对结果进行基因序列分型和系统进化分析。结果 35株Lp1血清型嗜肺军团菌共分为4个ST型,其中1株由于neuA基因不能被扩增而未分型;1株为新的ST型,已获EWGLI分配序号(ST1021);其余为ST1型32株,ST345型1株。结论石家庄市集中空调冷却塔水中嗜肺军团菌分离株的流行以ST1型为主,ST345型和ST1021型为特有型别。SBT分型可以作为研究嗜肺军团菌进化关系的重要手段之一。     

2011年铁岭地区首次检出嗜肺军团菌

[目的]了解铁岭地区公共场所集中空调系统嗜肺军团菌污染状况。[方法]2011年10月采集铁岭地区部分公共场所集中空调冷凝水,进行嗜肺军团菌的分离培养、血清学分型及鉴定。[结果]检测4份冷凝水样品,检出4株2个血清型的嗜肺军团菌,检出率为4／4。[结论]铁岭地区公共场所集中空调冷凝水确实存在嗜肺军团菌的污染,需要引起监管部门足够的重视,以防止军团菌病的暴发流行。     

三种分子分型技术在嗜肺军团菌分型中的应用与评价

目的对脉冲场凝胶电泳方法 （PFGE）、基因序列分型（SBT）和mip基因分型方法在嗜肺军团菌分型研究中的分辨力和潜在价值进行比较和论述。方法采用PFGE、SBT和mip基因分型方法对29株嗜肺军团菌和1株标准菌株ATCC33153进行分型比较。结果 PFGE可将30株嗜肺军团菌分为5大类群,19个PFGE型,分辨力为0.9586;SBT可分为22个ST型,分辨力为0.9609;mip基因分型可分为9个型别,分辨力为0.8344。血清型LP1和LP14菌株具有相同的PFGE和mip基因型别,相同或相近的SBT型别。结论 SBT较PFGE具有稍高的分辨力,适用于全球数据库比对和进化亲缘关系的研究,结合PFGE和SBT分型方法有利于流行病学溯源分析。     

公共场所集中空调通风系统军团菌污染情况调查

目的 了解阳江市公共场所内集中空调系统冷却水嗜肺军团菌检出情况及菌型,分析和评价公共场所内发生军团菌病暴发流行的风险.方法 采集阳江市公共场所集中空调冷却水42 份,对水样进行预处理后,应用GVPC、BCYE、BCYE-cys 培养基进行嗜肺军团菌分离培养,然后进行血清分型和鉴定.结果 42 份空调冷却水中嗜肺军团菌检出率为35.7%,血清型以LP1 为主,检出率在不同季度有显著性差异,在不同类型公共场所间无明显差异.结论 阳江市公共场所集中空调冷却水中存在嗜肺军团菌,对人群构成潜在健康危害,应加强预防控制工作.