黄芩苷完全抗原的合成鉴定及其多克隆抗体的制备

目的:研究黄芩苷作为一种半抗原分子,通过与载体蛋白偶联形成完全抗原后,使免疫动物血清中产生特异性抗体的可能性,为进一步建立黄芩苷的免疫分析测定方法提供实验依据。方法:采用活性酯法将黄芩苷(BAL)与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备黄芩苷完全抗原(BAL-BSA),并采用红外吸收光谱法、SDS-PAGE法、MALDI-TOF-MS法对其进行鉴定。用此完全抗原免疫动物制备抗血清,通过间接ELISA法检测其抗体效价。结果:完全抗原BAL-BSA中BAL与BSA的偶联比为3∶1;用此完全抗原免疫的家兔产生针对BAL的多克隆抗体,抗体效价最高可达1∶8000。结论:成功合成了BAL的完全抗原BAL-BSA,且该抗原具有良好的反应原性与免疫原性。     

MBS和戊二醛连接hPTH载体特异抗体及载体抗体的比较研究*

目的:比较间-马来酰亚胺苯甲酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)和戊二醛连接人甲状旁腺激素(hPTH)载体后抗体的产生效果。方法:MBS法和戊二醛一步法分别将hPTH(1-84)与载体牛血清白蛋白(BSA)连接后作为免疫原免疫家兔;间接ELISA法比较两组兔中特异性hPTH(1-84)抗体和BSA抗体的产生,并使用免疫吸收和亲和层析吸附清除BSA抗体,对清除情况进行比较。结果:MBS组抗hPTH(1-84)抗体效价总体上高于戊二醛组,抗载体BSA抗体效价低于戊二醛组;MBS组在同一时间hPTH(1-84)抗体效价高于BSA抗体,戊二醛组获取的抗血清中BSA抗体效价则明显高于hPTH(1-84)抗体。MBS组经亲和层析吸附BSA抗体被清除完全,戊二醛组经免疫吸收和亲和层析吸附仍有残留BSA抗体。结论:采用MBS法连接半抗原载体制备hPTH(1-84)抗体,降低了载体抗体的影响,提高了hPTH(1-84)抗体的特异性,可应用于hPTH药理作用和代谢途径等研究工作中。     

抗α1-抗胰蛋白酶多克隆抗体的制备、纯化和鉴定

目的 用α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)免疫家兔以产生多克隆抗体,并对产生的抗体进行有效地纯化和效价鉴定,建立抗α1-AT多克隆抗体的生产工艺.方法 按照常规方法免疫健康家兔进行抗α1-AT多克隆抗体的制备,用ELISA检测血清抗体效价.处死抗血清效价合格的家兔,取血、离心,获取抗血清.联合应用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法对抗血清进行纯化,纯化的多克隆抗体经15%十二烷基硫酸钠.聚丙烯酰胺凝胶电泳分析纯度后,用ELISA测定效价.结果 ELISA检测表明,家兔产生的抗α1-AT多克隆抗体效价大于105.联合应用辛酸-硫酸铵沉淀法和A蛋白亲和层析法进行纯化获得了纯度高、活性好的抗α1-ATT多克隆抗体.结论 成功建立了抗α1-AT多克隆抗体的生产和纯化工艺.     

活泼酯法合成绿原酸人工抗原及其鉴定

目的人工合成绿原酸(chlorogenic acid,CGA)完全抗原并进行鉴定,为制备绿原酸单克隆抗体奠定基础。方法采用活泼酯法,将绿原酸分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和卵白蛋白(ovalbumin,OVA)进行偶联,用紫外扫描法、SDS-PAGE电泳法进行鉴定;间接ELISA法测定免疫小鼠血清抗体效价。结果经紫外扫描法和电泳法检测,CGA与载体蛋白成功偶联,免疫小鼠后获得的多抗血清效价达到1×106。结论成功合成绿原酸完全抗原,可用于绿原酸单克隆抗体的制备。     

重组人sCR1多克隆抗体制备及纯化鉴定

目的制备原核表达人sCR1多克隆抗体并对其进行鉴定。方法提取人总RNA进行RT-PCR扩增合成cDNA,以cDNA为模板,构建重组表达质粒pET28a-sCR1。在大肠杆菌中表达人sCR1融合蛋白作为免疫原制备兔多抗。采用ELISA法检测抗体效价,免疫亲和层析法纯化后,进行SDS-PAGE鉴定分析。结果sCR1表达融合蛋白免疫家兔制备的兔抗人sCR1多克隆抗体,可特异地识别人sCR1融合蛋白。结论纯化复性后的sCR1融合蛋白作为抗原免疫家兔,有较好的抗原性和免疫原性,成功地制备出兔抗人sCR1多克隆抗体,并有较高的效价及特异性。为进一步大量表达纯化及临床免疫学检测方法的键立奠定了基础。     

甘草酸人工抗原的合成鉴定及免疫原性分析

目的制备中药甘草的活性成分甘草酸(GA)的人工抗原及抗血清,为制备GA的单克隆抗体、并建立快速检测GA的酶联免疫吸附测定(ELISA)提供技术基础。方法将GA与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联起来制得完全抗原后,经基质辅助激光解吸飞行时间质谱鉴定其相对分子质量,用此抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,并通过间接ELISA法和竞争ELISA法检测其抗体效价和特异性。结果合成的人工抗原GA-BSA中GA与BSA的结合比约为7∶1;免疫小鼠得到特异针对GA的多抗血清,GA抗体的效价为1∶8000。结论成功地合成了GA的人工抗原,且该抗原有较好的免疫原性,可应用于建立GA的免疫分析方法。     

恩诺沙星抗体免疫检测条件的建立

目的 制备恩诺沙星(ERLX)的多克隆抗体,以期建立通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测恩诺沙星抗体的效价和优化快速检测方法.方法 将牛血清白蛋白(BSA)和鸡血清白蛋白(OVA)偶联成功的恩诺沙星完全抗原(BSA-ERLX和OVA-ERLX)免疫新西兰家兔得到的血清分别保存在4、-20和-70℃半年后,用ELISA方法确定抗原包被的最适浓度、血清(一抗)的效价、一抗的最适稀释倍数及二抗的最适稀释倍数.首先将抗原包被浓度分为三组:20、10和5μg/ml,确定最适包被浓度,并在此基础上确定血清的效价和血清的最适稀释倍数.结果 不同温度下保存的BSA-ERLX和OVA-ERLX抗体的最适抗原包被浓度均为10μg/ml.在4、-20和-70℃保存的BSA-ERLX的抗体效价分别为12800、25600和25600:一抗的最适稀释倍数分别是:800、800和1600,二抗最适稀释倍数为1000.OVA-ERLX的效价在4、-20和-70℃分别为3200、6400和6400;一抗的最适稀释倍数分别为800、1600、1600,二抗的最适稀释倍数均为1000.结论 不同温度下保存的BSA-ERLX比OVA-ERLX抗体效价均高,综合考虑认为,-20℃保存的BSA-ERLX抗体,更加适合于进行ELISA检测.     

茯苓多糖PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ作为疫苗佐剂的免疫原性

目的研究茯苓多糖(PCP)中PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ作为疫苗佐剂的免疫原性。方法 1采用钥孔戚血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白分别与PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ连接制备免疫抗原KLHPCP-Ⅰ和KLH-PCP-Ⅱ及筛选抗原BSA-PCP-Ⅰ和BSA-PCP-Ⅱ。KLH-PCP-Ⅰ和KLH-PCP-Ⅱ分别与弗氏佐剂联用id免疫家兔2次,ELISA检测家兔血清中抗多糖抗体。2PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ单独im免疫小鼠2次,ELISA检测小鼠血清中抗多糖抗体。3PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ为佐剂分别配伍重组乙肝病毒表面抗原(HBs Ag)和猪繁殖与呼吸综合征病毒灭活疫苗(PRRSV)im或sc免疫小鼠2次,ELISA检测小鼠血清中抗多糖抗体。结果1KLH-PCP-Ⅰ或KLH-PCP-Ⅱ与弗氏佐剂联用免疫2次,可产生抗KLH和抗多糖抗体。2PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ单独im免疫小鼠2次,检测出低水平Ig M抗体,未检测出IgG抗体。3HBs Ag或PRRSV抗原联用PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ免疫小鼠2次,未检出抗多糖IgG抗体。结论 PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ本身免疫原性较弱,作为疫苗佐剂可能具有良好的安全性。     

抗体夹心酶免疫吸附法测定重组E.coli水蛭素HV3研究

将重组E. coli水蛭素HV3和BSA交联后免疫豚鼠和家兔,DEAE-纤维素柱层析纯化IgG.用这两种抗体和酶标二抗羊抗兔IgG-HRP建立三抗体夹心酶联免疫吸附法,测定重组E. coli水蛭素HV3的含量.本测定方法的线性范围为0～2 ng/ml,灵敏度为0.04 ng/ml.建立的三抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli水蛭素HV3具有良好的精密度、回收率、灵敏度和特异性.     

AIF多克隆抗体的制备纯化和鉴定

目的制备抗AIF多克隆抗体。方法用人工合成的AIF抗原肽免疫实验动物制备多克隆抗体并纯化。利用ELISA和Western blot方法检测多克隆抗体的效价和特异性。结果实验获得的血清抗AIF抗体经间接ELISA法检测,效价达到1∶128 000。Western blot检测表明抗体效价高、特异性强。结论实验获得了高效价的特异性的抗AIF抗体,为进一步研究肿瘤的抗凋亡机制提供新的方法。     

β1肾上腺素受体肽段免疫家兔后心脏形态学的改变

目的:研究β1肾上腺素受体抗体在扩张性心肌病发病中可能的作用.方法:将14只新西兰兔随机分为两组,免疫组和对照组.β1受体肽段作为抗原,给予免疫组家兔每月一次皮下注射,免疫时程为1a.对照组除用生理盐水替代抗原外,注射过程同免疫组.ELISA法测定家兔血清中β1受体抗体效价.1a后取两组动物心肌电镜下观察.结果:免疫前两组动物及免疫后对照组动物β1受体抗体效价均很低,而免疫后免疫组动物效价明显增高.免疫1a后对照组动物心脏电镜下无异常表现;免疫组示心脏有坏死灶、心肌纤维缺失、过度收缩带出现等.结论:β1受体抗体可能在扩张性心肌病发病中起致病作用.     

海洋真菌多糖YCP多克隆抗体的制备和鉴定

多糖YCP经CDAP活化与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备了质量比(W(VSA)/W(YCP))为0.15的拟糖蛋白(YCP-BSA),用该拟糖蛋白免疫新西兰大白兔,制备了抗YCP的抗血清,采用辛酸一硫酸铵法纯化,间接EUSA测定,获得了效价为1:20000的YCP多克隆抗体.     

抗空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1多克隆抗体的制备与鉴定

目的 表达空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1,并制备针对该蛋白的多克隆抗体.方法 诱导培养工程菌E coli BL21 (DE3)表达空肠弯曲菌PEB1重组蛋白.经镍-琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化,透析并定量后,常规免疫新西兰兔.收集血清,盐析法粗提IgG,应用间接ELISA法和双向琼脂扩散试验检测抗体效价,并通过Western blot和玻片凝集试验检测抗体的特异性.结果 得到高纯度的空肠弯曲菌PEB1重组蛋白.用该蛋白免疫新西兰兔后,获得抗PEB1多克隆抗体.间接ELISA法检测抗体效价为1:2×104,双向琼脂扩散试验检测抗体效价为1:8.结论 运用纯化的空肠弯曲菌PEB1重组蛋白免疫新西兰兔,获得高效价的多克隆抗体.     

吗啡抗体对吗啡依赖小鼠纳洛酮催促戒断症状的影响

目的 :评价吗啡抗体对吗啡依赖小鼠纳洛酮催促戒断症状的影响。方法 :采用混合酸酐法制备琥珀酰吗啡 ,并分别与蓝载体 (BC ,bluecarrier)、KLH和BSA等 3种载体交联成酯 ;常规检测抗原性 ,并免疫小鼠 ,用ELISA法检测抗体滴度 ,纳洛酮催促戒断实验来评价 3种交联物对吗啡依赖性的影响。结果 :与 3种不同载体交联的吗啡酯在 5 μg·ml- 1 包板浓度时显示了良好的抗原性 ;用其免疫的 3组小白鼠的平均抗吗啡抗体滴度都超过 1∶16 0 0 0 ;对照组小鼠及BC组、KLH组、BSA组免疫小鼠在15min内跳跃次数依次为 :2 3 6 7±s 10 2 3次 ,0 88±s 1 36次 ,2 6 3±s 4 87次 ,10 0 0±s 5 71次 ,4组小鼠跳跃次数存在显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :与 3种载体交联的吗啡酯都能诱导产生高滴度的抗体 ,对吗啡诱导的成瘾性抑制作用有所不同 ,其中BC偶联的吗啡酯较其它两种载体 -吗啡酯交联获得更好的效果。     

以CpG为佐剂的人IL-24多克隆抗体的制备

目的：采用在原核表达系统表达的人IL-24蛋白及人IL-24真核重组质粒免疫新西兰兔，制备兔抗人IL-24多克隆抗体。方法：利用IPTG诱导hIL-24在大肠杆菌中表达，纯化hIL-24重组蛋白，纯化后的蛋白经SDS—PAGE分析，同时提取hIL-24真核重组质粒，用以免疫新西兰兔，并以CpG为佐剂制备多克隆抗体。Western-blot鉴定抗体的特异性，ELISA法测定抗体效价。结果：人IL-24经IPTG诱导后可在大肠杆菌中大量表达，表达量占细菌总蛋白的30％，纯化后的蛋白纯度高；原核表达的重组蛋白和真核重组质粒免疫新西兰兔，通过抗体效价测定，获得了抗血清效价达1：640的多克隆抗体。结论：原核表达的hIL-24蛋白和hIL-24真核重组质粒均能刺激家兔产生抗体．其多克隆抗体的效价较高。     

免疫荧光菌球法快速诊断细菌性痢疾

常规培养法检查痢疾杆菌所需的时间长,敏感性低,加之痢疾菌属型别多,抗原复杂,与某些大肠杆菌有共同抗原,影响检查的特异性。为此,我们于1977年应用吸收方法制成了特异性较强的福氏痢疾杆菌荧光抗体,作了免疫荧光菌球法快速诊断菌痢的探索。材料与方法一、免疫荧光血清制备(1)用福氏1a、2a、2b、x、y及宋内氏痢疾杆菌分别免疫家兔,使血清凝集效价达1:10000以上。(2)将上述5     

大鼠脑一氧化氮合酶抗肽抗体的制备(英文)

目的:用大鼠脑一氧化氮合酶(bNOS)的一个片段免疫家兔,产生可识别该酶本身的抗体.方法:根据亲水性、抗原性及产生α-螺旋、β-折叠、和β-转角的可能性,预测肽277-287位于该酶的抗原决定簇中.肽277-287经化学合成,与血蓝蛋白交联,免疫家兔,获得抗体.特异性用ELISA.免疫组织化学和蛋白印迹分析法鉴定.结果:抗体与大鼠小脑提取液可特异性结合;免疫组织化学染色结果与NADPH-黄递酶组织化学染色结果一致.它可结合分子量约150 kDa的蛋白。结论:该抗肽抗体可专一性识别大鼠脑组织中的bNOS.     

疫苗检定用麻疹病毒抗血清的制备

目的:制备麻疹病毒抗血清,用于含麻疹病毒成分的联合减毒活疫苗的检定。方法:制备麻疹病毒Edm-3株病毒收获液,加入弗氏佐剂,对家兔和豚鼠分别经皮下多点或腹腔途径免疫3针,采血制备抗血清,经除菌过滤和补体灭活后,对抗血清进行中和效价、中和能力、细胞毒性及特异性检测。结果:用4种免疫方式制备的抗血清中和效价均高于1∶320...     

荆豆凝集素修饰的牛血清白蛋白脂质体的免疫学性质

目的对荆豆凝集素修饰的牛血清白蛋白脂质体进行免疫学评价。方法 3组小鼠分别于0、7、14、21 d口服免疫牛血清白蛋白溶液(bovine serum albumin,BSA)、BSA脂质体及荆豆凝集素修饰的BSA脂质体,建立ELISA法测定小鼠在7、14、21、28、35及42 d时体内产生的系统及黏膜免疫应答。结果与BSA溶液组相比,将抗原包裹于脂质体、尤其是荆豆凝集素修饰的脂质体中免疫小鼠后,可在小鼠血清及小肠分泌液中检测到较高的IgG及IgA水平。其中,免疫后42 d,凝集素修饰脂质体组的IgG和IgA水平分别为BSA溶液组产生相应抗体值的4.33倍和4.74倍。结论荆豆凝集素修饰脂质体口服免疫小鼠后可同时诱导机体产生黏膜及系统免疫应答,可以作为口服疫苗的载体。     

乙型肝炎抗独特型抗体疫苗无遗传限制

抗独特型抗体(抗-Id)能与由抗原激发的初始抗体在Id位点发生结合,这种抗-Id与抗原在结构上的互补使抗-Id通过模拟抗原触发宿主的免疫系统产生免疫应答。过去的试验都是在鼠类中进行的。如果抗-Id不能跨越种间障碍,那么其作为疫苗在异种动物中的价值就受到限制。作者用家兔和黑猩猩作试验。用人抗-HBsId(抗体-l)注射4只家兔,获得兔抗-Id(抗体-2)。再经亲和层折纯化。上述2只家兔注射最后一针抗体-1后14个月又分别注射