银杏叶对黄曲霉毒素B1诱发大鼠肝癌IGF-ⅡmRNA及蛋白表达影响的观察

目的：动态观察银杏叶提取物（EGb761）在抑制黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发大鼠肝癌（HCO）过程中对肝组织相关基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平的影响,从分子生物学水平揭示银杏叶抗癌的机制及其效果。方法：将70只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为AFB1组（25只）、AFB1＋EGb761组（25只）及对照组（20只）。在诱发大鼠HCC过程中,分别于第13周、33周及53周对大鼠进行肝组织活检;实验至第73周处死全部动物取肝组织。利用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法动态检测肝组织中IGF-ⅡmRNA及相应蛋白的表达情况。结果：AFB1组原发性HCC发生率为58．8％（10／17）;AFB1＋EGb761组发生率为29．4％（5／17）;对照组为0（o／16）。AFBl＋EGb761组HCC发生率显著低于AFB1组（P〈0．05）。AFBl＋EGb761组肝组织IGF_2mRNA及相应蛋白表达扮平在第53周及73周较AFB1组均显著下降,差异有统计学意义,P％0．05。结论：银杏叶提取物（EGb761）具有抑制AFBl致大鼠HCC的作用。其机制可能与调控肝细胞增殖基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平有关。     

银杏叶提取物对AFB1所致大鼠肝癌基因P16Ink4a mRNA及蛋白表达的影响

  目的  动态观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract, EGb761)在抑制黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发大鼠肝癌过程中对肝组织相关基因P161nk4a mRNA表达水平的影响, 进一步从分子生物学水平揭示银杏叶提取物抗癌的机制及其效果。  方法  将70只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为3组: AFB1组(25只), AFB1+EGb761组(25只)及对照组(20只)。在诱发肝癌过程中, 分别于第13、33及53周对大鼠进行肝组织活检; 至第73周处死全部动物取肝组织。应用实时荧光定量PCR和Westernblot技术动态检测肝组织中P16Ink4a mRNA及相应蛋白的表达情况。  结果  AFB1组原发性肝癌发生率为58.8%(10/17);AFB1+EGb761组为29.4%(5/17);对照组为0(0/16) AFB1+EGb761组肝癌发生率显著低于AFB1组(P < 0.05)。AFB1+EGb761组的肝组织P16Ink4amRNA及相应蛋白表达水平在第53周及第73周时均明显高于AFB1组, 差异有统计学意义(P < 0.05)。  结论  银杏叶提取物(EGb761)具有抑制AFB1致大鼠肝癌的作用。其机制可能与调控肝细胞抑癌基因P16Ink4a mRNA表达水平有关。      

银杏叶提取物对黄曲霉毒素B1所致大鼠肝癌相关蛋白表达影响的研究

目的:探讨银杏叶提取物(extract761 from Ginkgo giloba,EGb761)对黄曲霉毒素B1(aflatox B1,AFB1)致大鼠肝癌后相关蛋白表达的影响。方法:71只大鼠随机分为AFB1组(28只),AFB1+EGb761组(29只),空白对照组(14只)。第64周观察大鼠肝癌发生率,应用免疫组化法检测硫酸乙酰肝素类蛋白聚糖(MXR7)、环氧化酶(COX-2)以及细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制蛋白(p16)的表达情况。结果:AFB1组肝癌发生率明显高于AFB1+EGb761组(76%vs28%),χ2=10.602,P<0.05,对照组无肿瘤发生。AFB1+EGb761组MXR7蛋白含量明显低于AFB1组〔(1.488±1.178)vs(5.133±2.725)〕,F=18.638,P<0.001;AFB1+EGb761组p16蛋白含量明显高于AFB1组〔(2.456±1.014)vs(1.533±0.856)〕,F=24.091,P=0.03,AFB1组COX-2蛋白含量为3.305±0.566;AFB1+EGb761组为2.704±0.431,F=9.352,P=0.783。结论...     

银杏叶提取物对黄曲霉毒素B_1诱发大鼠肝癌过程中生物标志物的影响

目的:探讨银杏叶提取物(extract 761 from Ginkgo biloba,EGb761)对黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)在大鼠体内代谢的影响.方法:经AFB_1和EGb761不同处理,获得AFB_1组、AFB_1+EGb761组和空白对照组3组大鼠,分别于实验第14、28及42周给予抽血及肝活检,并于第64周全部处死.观察大鼠肝癌发生率,用分光光度法检测肝组织Ⅰ相酶CYP450和Ⅱ相酶GST活性,用高效液相色谱法检测血清AFB_1-赖氨酸加合物水平,以及应用免疫组织化学法检测8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)蛋白表达情况.结果:肝癌诱发率在AFB_1+EGb761组明显低于AFB_1组(P<0.001),而对照组无肿瘤发生;EGb761对Ⅰ相代谢酶CYP450及Ⅱ相代谢酶GST活性无明显影响.血清AFB_1-赖氨酸加合物的最高水平(4 356.01 pg/mg albumin)发生于实验第14周的AFB_1组.在实验第14、42周时EGB761显著抑制了血清AFB_1-赖氨酸加合物的形成,抑制率分别为13.07% (P＝0.033)、73.63% (P＝0.002).在各检测点的8-OHdG蛋白表达强度显示,AFB_1+Egb 761组均显著低于AFB_1组(P<0.05).结论:EGb761阻断AFB_1致肝癌发生的主要机制可能不完全是通过影响肝脏Ⅰ、Ⅱ相代谢酶活性的途径实现的.EGb761能够抑制AFB_1-赖氨酸加合物的形成,降低8-OHdG蛋白的表达,减轻DNA的氧化损伤,这可能是其最终抑制或延缓AFB_1诱发肝癌发生、发展的机制之一.     

黄曲霉毒素诱发大鼠肝细胞癌过程中细胞外调节蛋白激酶信号转导通路的动态变化

目的:探讨细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal regulated kinase, ERK)信号转导通路在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生、发展过程中的变化及其作用.方法:以SD大鼠为研究对象,随机分为空白对照组和实验组, 实验组腹腔注射黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1),分别于实验第12、20、36和46周进行肝活检,58周时处死大鼠并剖腹获取肝组织及肿瘤组织,对所有标本均进行常规病理组织学检测后,采用RT-PCR和Western 印迹法分别检测所获取组织中ERK1和ERK2 mRNA及蛋白的表达.结果:实验组46周时发现首只罹患HCC的大鼠,实验结束时实验组共有30只大鼠存活,其中24只大鼠发生HCC,6只大鼠无任何肿瘤发生;空白对照组11只大鼠均无肿瘤发生.RT-PCR检测发现,发生肿瘤、未发生肿瘤及空白对照组大鼠肝组织在实验不同时期的ERK1和ERK2 mRNA的表达水平无明显差异(P>0.05);但发生肿瘤大鼠的HCC组织ERK1和ERK2 mRNA表达水平较发生肿瘤前各时间点活检肝组织有明显上升(P<0.01),且较癌旁肝组织、同期无癌大鼠及空白对照组大鼠肝组织的表达明显上调(P<0.05).Western 印迹法检测结果发现,HCC组织p-ERK1及p-ERK2蛋白的表达较癌旁肝组织、发生肿瘤前各时期肝组织及无癌大鼠肝组织明显上升(P<0.01).结论:在HCC发生早期ERK1和ERK2处于相对正常的状态,而在癌变期ERK1和ERK2信号转导通路表现出异常激活状态,提示ERK1和ERK2信号转导通路可能参与了HCC的发生与发展.     

银杏叶提取物对诱发性大鼠肝癌前病变的影响

目的：探讨银杏叶提取物对黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发的大鼠肝癌前病变的影响。方法：71只大鼠随机分为3组：AFB1组、银杏叶提取物干预组、正常对照组。前2组予AFB1造模,银杏叶提取物干预组在造模的期间给予银杏叶提取物喂食大鼠。于实验第14、28、42及55周给予留取静脉血并予肝活检并于第64周全部处死大鼠,观察大鼠AFP的变化及肝脏γ-GT灶发生情况。结果：银杏叶提取物干预组大鼠血清AFP以及肝组织γ-GT灶的数量和大小均显著低于AFB1模型组（P=0.000）。结论：银杏叶提取物可减少AFB1诱发大鼠肝脏γ-GT灶的数量和大小以及延缓延缓血清AFP的升高,具有明显抑制AFB1诱发大鼠肝癌前病变的作用。     

肝癌组织GPC-3 mRNA和IGF-Ⅱ mRNA表达及其临床意义的研究

目的:探讨人肝细胞癌(HOC)组织GPC-3 mRNA和胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)mRNA的表达夏其与肿瘤发生发展的关系.方法:RT-PCR法检测70例HCC组织、癌旁肝组织和18例正常肝组织中GPC-3 mRNA和IGF-ⅡmRNA的表达.结果:HOE组织GPC-3阳性率(82.85%)及其mRNA表达水平(0.596±0.205)均明显高于癌旁组织(34.28%,0.428±0.137),P<0.01;HOC组织IGF-Ⅱ阳性率(92.86%)及其mRNA表达水平(0.750±0.309)也均明显高于癌旁组织(81.43%,0.648±0.237),P<0.05,GPC-3 mRNA和IGF-Ⅱ mRNA在HOC组织中的表达水平均与肿瘤直径、肿瘤分化程度和肝外转移等明显相关,而与临床分期、门静脉癌栓、肿瘤个数、血清AFP水平及术后复发等无明显关系.GPC-3 mRNA和IGF-Ⅱ mRNA在HOC组织中的表达呈正相关,r=0.281,P=0.038;而两者在癌旁肝组织的表达不相关.结论:HCC组织中GPC-3及IGF-Ⅱ高表达,可促使HCC细胞增殖,与HCC的发生发展密切相关.     

大鼠实验性肝癌发生过程中存活素基因表达的动态观察

目的动态观察大鼠实验性肝细胞肝癌(HCC)不同发生发展阶段中存活素(survivin)基因的表达状态。方法采用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测大鼠HCC不同时期survivin的表达。结果黄曲霉毒素(AFB1)诱发大鼠HCC形成的最早时间在第46周,46周后,实验组存活的大鼠HCC发生率为54.9%(28/51),58周存活的大鼠HCC发生率为64.9%(24/37)。实验组HCC、癌旁肝组织survivin蛋白阳性率分别为41.7%和54.2%,两者差异无统计学意义(P>0.05)。而相应的大鼠,在46周之前及无肿瘤形成的大鼠和正常对照组无survivin蛋白表达。58周时,大鼠HCC中survivin mRNA的表达水平明显高于同期无肿瘤形成大鼠和正常对照肝组织(P均<0.01);相应癌旁肝组织亦明显高于同期无肿瘤形成大鼠和对照肝组织(P均<0.01);HCC与癌前活检肝组织比较,差异有统计学意义(P<0.01)。12、20、36和46周时,有肿瘤形成大鼠活检肝组织与正常对照组大鼠同期活检肝组织比较,survivin mRNA表达差异均有统计学意义(P均< 0.01)。结论survivin基因在HCC组织中高表达,提示该基因对HCC的发生发展起重要作用,检测HCC组织中survivin基因的表达,可能对HCC诊断有参考价值。     

黄曲霉毒素诱导大鼠肝细胞癌变中JNK1的变化

目的 观察黄曲霉毒素诱导大鼠肝细胞癌变过程中JNK的变化,进一步了解JNK1信号转导通路在肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）发生发展过程中的作用。方法 取雄性4周龄SD大鼠77只为研究对象,随机分为实验组66只,空白对照组11只。实验组应用黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）诱发大鼠肝细胞癌,空白对照组大鼠,按正常饲养方法饲养,两组大鼠分别于实验第12、20、36、46周进行肝组织活检,58周时处死取肝。所有标本均进行常规病理组织学检测,并应用RT-PCR、Western blot分别检测癌组织及肝组织JNK1 mRNA及JNK1活性蛋白质水平。结果 实验组大鼠46周时发现首例肝癌,存活至实验结束并发生肝癌的大鼠共24只,6只无任何肿瘤发生,空白对照组大鼠11例均未发生肿瘤。实验组及空白对照组大鼠均可检出不同程度的JNK1 mRNA表达,其中肝癌组织较癌旁组织及正常肝组织明显增强（P<0.05）。Western blot结果显示,实验组中无癌大鼠20周、出癌大鼠36周始即有不同程度p-JNK1活性表达,并随着AFB1作用时间延长阳性率明显增加,且无癌大鼠p-JNK1检出的时间较出癌大鼠早;半定量分析表明无癌大鼠肝组织p-JNK1活性较同期出癌大鼠肝组织及肝癌组织增强,在实验第46周及58周时尤其明显（P<0.01）。结论 在AFB1诱导肝细胞癌的过程中JNK信号通路处于激活状态,JNK信号通路的激活可能起到抑制HCC的作用,如JNK信号通路激活时间较早、强度较大可阻止HCC的发生。     

CCT亚基γ基因在AFB_1诱发大鼠肝癌过程中表达的变化

目的探讨AFB1诱发肝癌过程中CCT亚基γ基因蛋白的表达及其意义。方法 45只Wistar大鼠随机分为AFB1组和对照组,AFB1组以200μg/kg体重腹腔注射AFB1,第13周、第33周和第53周对大鼠进行肝活检,第73周处死全部动物并取肝组织。用免疫组化法检测AFB1诱发肝癌过程中不同时期CCT亚基γ基因蛋白的表达情况。结果在第73周AFB1组CCT亚基γ基因蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。同一组不同时段比较,随着诱癌的进行,CCT亚基γ基因蛋白表达上调,第73周AFB1组CCT亚基γ基因蛋白的表达水平不仅明显高于第13周,而且亦高于第33周(P<0.01)。其余各组和同组不同时段之间CCT亚基γ基因蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。AFB1组中发生肝癌的动物肝组织CCT亚基γ基因蛋白表达率为100%(10/10),显著高于同期对照组CCT亚基γ基因蛋白的表达率30%(3/10)(P<0.05)。结论 AFB1诱癌过程中CCT亚基γ基因蛋白表达上调,CCT亚基γ基因蛋白有可能参与了肝细胞癌的发生和发展。     

银杏叶提取物对AFB1致HepG2细胞毒性保护作用的观察

目的:研究银杏叶提取物(EGb761)对AFB1致HepG2细胞毒性的保护作用。方法:以MTT实验检测AFB1对HepG2细胞的生长抑制率,再以MTT、FCM等实验,观察EGb761预处理后对AFB1诱导HepG2细胞存活率的影响,然后通过硫代巴比妥酸(TBA)法及二氛荧光素双乙酸(DCFH-DA)法检测细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)及氧化代谢产物活性氧簇(ROS)水平,以观察EGb761对AFB1毒性引起的HepG2细胞活性保护作用及对脂质过氧化的抑制作用。结果:AFB1显著降低HepG2细胞活力,IC50为15μg/mL。EGb761能显著增加AFB1处理后的细胞活力,以219μg/mLEGb761预处理在24、48和72h均提高了AFB1(15μg/mL)处理的细胞存活率,分别提高了28%、47%及47%,P值均<0.01;在3个时间点都明显抑制了AFB1诱导的MDA的形成及ROS的水平,P值均<0.01。结论:EGb761对AFB1致HepG2细胞损伤具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、对抗脂质过氧化有关。     

银杏叶提取物通过调控NF-κB信号通路抑制神经胶质瘤U87细胞增殖和侵袭

[目的]评价银杏叶提取物(EGb761)对神经胶质瘤U87细胞的生长与侵袭的影响,并进一步分析EGb761对U87细胞作用的分子机制。[方法]体外培养人神经胶质瘤U87细胞,给予不同浓度(0、100、200、400mg/L)银杏叶提取物干预(24h、48h、72h)后,采用CCK-8技术检测EGb761对U87细胞增殖的影响。Transwell小室和流式细胞凋亡技术分析EGb761对U87细胞侵袭和凋亡的影响;Western blot检测EGb761处理后U87细胞内NF-κB与cyclin D1、 iNOS和COX-2蛋白的表达变化。[结果]银杏叶提取物可有效抑制神经胶质瘤U87细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡;Western blot提示EGb761干预的U87细胞内NF-κB与cyclin D1、 iNOS、COX-2蛋白的表达均明显下调。[结论] EGb761抑制神经胶质瘤U87细胞的生长增殖和侵袭能力,其可能是通过NF-κB信号通路而发挥抗肿瘤作用的。     

大鼠肝癌形成过程MCM7基因动态变化

目的：4g讨MCM7基因在黄曲霉毒素B1（AFB1）实验诱发大鼠肝癌过程中的动态变化及意义。方法：将70只雄性4周龄Wistar大鼠随机分为AFB1组（50只）和对照组（20只）,AFB1组腹腔注射AFB1,对照纽则给予溶媒二甲基亚砜。在诱发肝癌过程中,分别于第13、33和53周对大鼠进行肝活检;实验至第73周处死全部大鼠取肝组织;采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和免疫组化方法检测肝组织中MCM7rnRNA和蛋白的表达情况。结果：AFB1组肝细胞癌发生率为44．1％（15／a4）,对照组为0（0／16）,AFB1组显著高于对照组,χ^2=8．093,P〈0．001。随着大鼠肝癌的形成,MCM7mRNA和蛋白的表达水平逐步升高,AFB1组第53和73周显著高于第13和33周,F值分别为55．632和207．253,P值均〈0．001;对照组各时间点的表达较低且变化不大。免疫组化结果显示,AFB1组第53周McM7蛋白阳性表达率为26．7％且以弱阳性为主,第73周MCM7蛋白阳性表达率为100％且多为强阳性,阳性表达率和表达强度均比其他时间点的高,两者比较差异均有统计学意义,P值均〈0．001。结论：MCM7表达水平随着肝癌的形成逐渐上升,且在肝癌组织中表达最高,MCM7有可能是参与肝癌形成的关键基因,但其详细机制有待进一步探讨。     

肝细胞癌组织中β-Catenin的表达与第三外显子突变的关系

背景与目的:广西南部是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)高发地区,也是粮食受黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)污染较重的地区.β-Catenin 的异常表达与多种肿瘤有关.而AFB1是诱发HCC的重要因素.本研究旨在探讨AFB1高暴露地区HCC患者癌组织中β-Catenin基因突变及表达情况.方法:用基因直接测序、RT-PCR、免疫组化和Western blot等方法,检测52例来自广西南部AFB高暴露地区HCC患者癌、癌旁组织和18例非肝癌肝组织中β-Catenin基因的表达.结果:癌组织中未见β-Catenin基因第三外显子的突变.β-Catenin mRNA 在癌、癌旁和正常肝组织中的表达分别为0.42±0.24、0.20±0.16和0.23±0.12,癌组织中的表达显著高于癌旁组织或正常肝组织(P＜0.01);免疫组化染色癌组织中阳性率为55.8%(29/52),显著高于癌旁组织[36.5%(19/52)](P＜0.05).β-Catenin蛋白表达与肝外转移、术后复发、门静脉癌栓和临床分期有关(P＜0.05),而mRNA的表达与上述临床参数均无明显关系(P＞0.05).结论:β-Catenin在HCC组织中高表达,但其异常表达不是由基因第三外显子上GSK-3β磷酸化位点的突变引起.     

广西原发性肝细胞癌黄曲霉毒素B1-DNA加合物表达及p53第249密码子突变分析

目的 通过研究广西地区肝癌患者中黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)-DNA加合物的表达和p53第249密码子突变情况及其关系,探讨AFB1长期暴露与人群原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生的关系.方法 实验组为广西医科大学第一附属医院肝胆外科收治的63例HCC患者行根治性手术切除的肝肿瘤组织.按肿瘤大小分为小肝癌组(≤5cm)和大肝癌组(＞5cm),同时小肝癌组包括两个亚组Ⅰ组(≤3cm)和Ⅱ组(＞3cm).另取10例来自肝移植供肝及肝外伤切除的正常肝组织作为正常对照组.通过免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测各组样本AFB1-DNA加合物的表达,并以PCR结合直接测序的方法 检测其p53第249密码子的突变情况.结果 小肝癌组的AFB1-DNA加合物阳性率最高(73.8%),显著高于大肝癌组(P=0.016).而小肝癌组p53第249密码子的突变率(35.7%)却显著低于大肝癌组(P=0.007).正常对照组AFB1-DNA加合物阳性率为50.0%,但未发现p53第249密码子存在突变.Ⅰ组与Ⅱ组之间无论是AFB1-DNA加合物阳性率还是p53第249密码子的突变率差异均无统计学意义(P1=0.676,P2=1.000).实验组中,33.3%的样本为AFB1-DNA加合物和p53第249密码子突变双阳性,22.2%的样本为AFB1-DNA加合物和第249密码子突变双阴性.结论 广西为AFB1高污染地区,正常人群普遍存在AFB1的暴露.AFB1的暴露可增加HCC的发病概率.p53第249密码子突变可能是影响AFB1相关HCC发生、发展的因素.结合AFB1-DNA加合物表达和第249密码子突变的情况,可有效地了解肝癌患者长期持续性或非持续性的AFB1暴露下DNA的累积损伤情况.     

CCT亚基γ基因在AFB1诱发大鼠肝癌过程中表达的变化

目的探讨AFB1诱发肝癌过程中CCT亚基γ基因蛋白的表达及其意义。方法45只Wistar大鼠随机分为AFB。组和对照组,AFB1组以200ug／kg体重腹腔注射AFB1,第13周、第33周和第53周对大鼠进行肝活检,第73周处死全部动物并取肝组织。用免疫组化法检测AFB1诱发肝癌过程中不同时期CCT亚基γ基因蛋白的表达情况。结果在第73周AFB1组CCT亚基γ基因蛋白表达水平显著高于对照组（P〈0．05）。同一组不同时段比较,随着诱癌的进行,CCT亚基γ基因蛋白表达上调,第73周AFB1组CCT亚基γ基因蛋白的表达水平不仅明显高于第13周,而且亦高于第33周（P〈0．01）。其余各组和同组不同时段之间CCT亚基γ基因蛋白的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。AFB。组中发生肝癌的动物肝组织CCT亚基γ基因蛋白表达率为100％（10／10）,显著高于同期对照组CCT亚基γ基因蛋白的表达率30％（3／10）（P〈0．05）。结论AFB,诱癌过程中CCT亚基γ基因蛋白表达上调,CCT亚基γ基因蛋白有可能参与了肝细胞癌的发生和发展。     

银杏叶提取物EGb761对TNF-α诱导HeLa细胞凋亡的影响

目的　初步研究银杏叶提取物EGb761对重组人肿瘤坏死因子- α(rhTNF- α)诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法　采用MTT法观察EGb761对HeLa细胞生长的影响;细胞凋亡实验分5组,即空白对照组,rhTNF -α对照组(10 0 μg/L ) ,EGb761低浓度组[rhTNF- α(10 0 μg/L) +EGb761(10mg/L) ] ,EGb761中浓度组[rhTNF -α(10 0 μg/L ) +EGb761(2 0mg/L ) ] ,EGb761高浓度组[rhTNF -α(10 0 μg/L) +EGb761(4 0mg/L) ] ,采用流式细胞术和Hoechst3 3 2 5 8荧光染色检测凋亡。结果　EGb761在5 .0～80 .0mg/L终浓度范围内对HeLa细胞生长无明显影响;流式细胞术测定各组亚倍体细胞峰积分百分率(% )为:空白对照组(5 .3 5±2 .2 ) ,rhTNF- α对照组(3 7.8±6.1) ,EGb761低浓度组(19.2±3 .4) ,EGb761中浓度组(16.5±5 .7)和EGb761高浓度组(11.3±3 .9) ;荧光染色检测各组凋亡百分率(% ) :对照组(4 .2 3±2 .0 )、rhTNF α对照组(2 7.8±4.3 )、EGb761低浓度组(14 .9±3 .4)、EGb761中浓度组(12 .1±3 .7)和EGb761高浓度组(9.61±2 .3 ) ;结果显示,EGb761在10～40mg/L终浓度范围内对rhTNF α诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用(P <0 .0 1) ,且呈剂量依赖关系。结论　EGb761能有效抑制rhTNF- α诱导的HeLa细胞凋亡。     

肝癌及癌前病变中p27蛋白和mRNA的表达

[目的]研究肝细胞癌(HCC)及癌前病变中细胞周期负性调控因子p27的表达及其意义.[方法]应用免疫组织化学S-P染色法和原位分子杂交法检测正常肝组织、慢性肝炎、肝硬化、癌周肝硬化和肝癌组织中p27蛋白及其mRNA的表达,并对结果进行计算机图像定量分析.[结果]p27蛋白在正常肝组织和慢性肝炎中呈低表达,在肝硬化和癌周肝硬化中表达明显增强,而在肝癌中表达明显下降,与前4组比较差异有显著性(P＜0.05).p27mRNA在非肝癌组织中表达均较强,在肝癌中表达明显减弱,与前4组比较差异有显著性(P＜0.05).正常肝组织、慢性肝炎和肝硬化中p27蛋白阳性信号主要定位于胞核,而癌周肝硬化和HCC中主要定位于胞浆.随着HCC的分化程度降低,p27蛋白和p27mRNA的表达减弱,差异有显著性(P＜0.05).[结论]p27表达下降可能参与了HCC的发生,且与HCC的分化有关.p27的胞浆定位可能与HCC的早期发生有关.     

IGF-Ⅱ、VEGF和MVD在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、血管内皮生长因子(VEGF)以及CD34抗体标记肿瘤微血管密度(MVD)在人原发性肝细胞癌(HCC)中的表达水平、临床意义及其相关性。方法应用免疫组织化学法检测50例HCC患者手术切除肝癌组织和癌旁组织标本中IGF-Ⅱ、VEGF和CD34的表达,分别对IGF-Ⅱ和VEGF表达进行积分光密度值(IOD)测定,对CD34阳性组织进行MVD计数,并结合临床资料进行统计学分析。结果 IGF-Ⅱ在HCC肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中的IOD值分别为55940.00±44570.41、83688.81±64460.15和0;VEGF的IOD值分别为37315.79±27315.09、38181.70±33391.02和2528.96±1445.21。肝癌组织、癌旁组织与正常肝组织相比,IGF-Ⅱ和VEGF的IOD值差异均有统计学意义(P<0.05);但肝癌组织与癌旁组织比较,IGF-Ⅱ的IOD值差异有统计学意义(P<0.05),而VEGF的IOD值差异无统计学意义(P>0.05)。HCC肝癌组织MVD值为42.10±20.63,癌旁组织MVD值为28.96±8.55,正常肝组织MVD值为17.70±9.67,三者差异有统计学意义(P<0.01)。IGF-Ⅱ、VEGF和MVD的表达都与淋巴结或肝内转移、病理分化程度有关(P<0.05),而与其他因素无关(P>0.05);且IGF-Ⅱ与肿瘤大小有关(P<0.05)。IGF-Ⅱ和VEGF共阳性表达组MVD值为44.24±21.22,高于IGF-Ⅱ和VEGF共阴性表达组MVD值(19.25±14.45),差异有统计学意义(P<0.05)。且IGF-Ⅱ在HCC肝癌组织中的表达与VEGF呈明显正相关(P<0.01),随着IGF-Ⅱ强度的增加,VEGF表达增强。结论 IGF-Ⅱ在HCC中表达显著增加,并可能诱导VEGF和MVD的过表达,且与HCC的侵袭性生物学行为密切相关。     

Survivin在AFB1高暴露地区肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Survivin在黄曲霉毒素B1(AFB1)高暴露地区肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用.方法:用逆转录聚合酶链反应检测来自广西南部黄曲霉毒素B1高暴露地区患者手术切除肝癌及其癌旁组织中Survivin mRNA的表达情况.结果:Survivin mRNA在55例HCC及其癌旁组织中的检出率分别为85.5%(47/55)及40.0%(22/55),两者差异有显著性(P＜0.01).Survivin mRNA在HCC组织中的表达率与临床分期(P＜0.05)和肿瘤直径(P＜0.05)相关.结论:Survivin在HCC发生发展过程中起重要作用,HCC组织中的Survivin mRNA可作为AFB1高暴露地区HCC预后不良的参考指标.