幽门螺杆菌的耐药性分析

目的:分析幽门螺杆菌(Hp)菌株对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、呋喃唑酮的耐药情况,并探讨Hp对克拉霉素耐药与23S rRNA基因点突变的关系.方法:分离培养Hp,药敏纸片法进行药敏实验,按酚-氯仿法提取Hp的DNA,PCR方法扩增23S rRNA基因中的片段,用限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测克拉霉素耐药菌株的点突变.结果:Hp菌株对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、呋喃唑酮的耐药率分别为9.3%、18.6%、53.5%、0%;8个克拉霉素耐药的Hp菌株有7个存在23S rRNA基因的A2143G点突变,进行PCR-RFLP的29个敏感菌株均无23S rRNA的点突变.结论:Hp菌株对甲硝唑耐药率高,对克拉霉素、阿莫西林和呋喃唑酮敏感;23S rRNA基因A2143G点突变与Hp对克拉霉素的耐药相关.     

重庆地区分离幽门螺杆菌对克拉霉素耐药性研究

目的:了解重庆地区幽门螺杆菌(Heliobacter pylori,Hp)对克拉霉素的耐药情况,探讨Hp对克拉霉素耐药的分子机制.方法:分离培养获得96株Hp.采用琼脂稀释法进行体外抗生素敏感试验,检测Hp对克拉霉素的最低抑菌浓度(Minimalinhibitory concentration,MIC),拟定克拉霉素MIC>2μg/ml为耐药菌株.比较城市和农村的差异.挑选克拉霉素耐药Hp1O株,提取细菌DNA,用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)分析探讨克拉霉素耐药机制.结果:重庆地区Hp对克拉霉素的耐药率为29.17%.城市和农村耐药率无统计学差异(P>0.05).10株克拉霉索耐药菌株23S rRNA基因功能区V PCR扩增片段,均被Bsa I酶切,未被Bbs I酶切,提示1O株在2143位点有A→G突变.结论:重庆地区Hp对克拉霉素的耐药率较高,且城市和农村无显著差异.大多数克拉霉素耐药Hp存在23SrRNA基因功能区V 2143位点A→G突变.     

幽门螺杆菌对克拉霉素耐药机制的研究

目的明确幽门螺杆菌(heliobacter pylori,Hp)对克拉霉素的耐药情况进而探讨Hp对克拉霉素耐药机制。方法分离培养获得96株Hp。采用琼脂稀释法进行体外抗生素敏感试验,检测Hp对克拉霉素的最低抑菌浓度(minimalinhibitory concentration,MIC),拟定克拉霉素MIC>2μg/m L为耐药菌株。比较城市和农村的差异。挑选克拉霉素耐药Hp10株,提取细菌DNA,用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)分析探讨克拉霉素耐药机制。结果 Hp对克拉霉素的耐药率为25%,城市和农村耐药率差异无统计学意义(P>0.05)。16株克拉霉素耐药菌株23S r RNA基因功能区V PCR扩增片段,均被BsaⅠ酶切,未被BbsⅠ酶切,提示16株在2143位点有A→G突变。结论 Hp对克拉霉素的耐药率较高,且城市和农村无显著差异。大多数克拉霉素耐药Hp存在23Sr RNA基因功能区V 2143位点A→G突变。     

幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性和基因型的同一性

目的 明确克拉霉素耐药的幽门螺杆菌(Hp)菌株耐药性和基因型的混合感染情况.方法 从16株对克拉霉素耐药的Hp混合菌落菌株中各随机挑选10个单菌落,转代扩菌后,用琼脂稀释法测定单菌落对克拉霉素的最低抑菌浓度(MIC),CTAB/NaCl方法提取单菌落的DNA,用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)检测其点突变,随机扩增的多态性DNA(RAPD)方法比较各菌落的基因型.结果 来自16个耐药Hp菌株的共160个单菌落均对克拉霉素耐药,且都存在23 S rRNA基因的点突变.来自同一患者的克拉霉素耐药菌株的10个单菌落具有相同的RAPD指纹图谱,与亲代混合菌落菌株也有相同的RAPD指纹图谱.结论 克拉霉素耐药的Hp菌株中未发现耐药性或基因型的混合感染存在.     

北京地区幽门螺杆菌耐药情况及其变化趋势

目的 了解北京地区幽门螺杆菌（Hp）对甲硝唑、克拉霉素及阿莫西林的耐药情况及其变化趋势。方法 从来自胃镜室的159例有上胃肠道症状的患者取得胃窦黏膜组织,经微需氧条件培养获得临床分离的Hp菌株,采用E-试验的方法测定Hp对甲硝唑、克拉霉素及阿莫西林的最低抑菌浓度（MIC）。结果 北京地区Hp对甲硝唑和克拉霉素的耐药率分别为：1999-2000年36．0％（18／50）和10．0％（5／50）,2001-2002年43．1％（47／109）和18．3％（20／109）,甲硝唑和克拉霉素的混合耐药率为：1999-2000年10．0％（5／50）,2001-2002年14．7％（16／109）,仅发现1株阿莫西林耐药菌株（1／49）。结论 北京地区Hp对甲硝唑的耐药率较高且呈逐年上升的趋势,对克拉霉素的耐药菌株及混合耐药菌株也较为常见,阿莫西林耐药菌株罕见。     

幽门螺杆菌基因分型及耐药检测寡核苷酸芯片的制备及鉴定

目的探讨应用寡核苷酸芯片简单快速检测幽门螺杆菌(HP)感染并对其致病性相关的基因型及耐药性同时进行检测的方法,并进行鉴定。方法根据Hp的致病性将其分为cagA 和cagA-两种基因型,通过检测23SrRNA基因是否发生点突变判断其对克拉霉素的耐药性。应用寡核苷酸芯片技术对临床标本的Hp进行基因分型和耐药性检测,并制备相应的寡核苷酸芯片。通过构建的野生型模板和突变模板证实制备的寡核苷酸芯片的准确性。结果制备的寡核苷酸芯片可准确地将Hp分为cagA 和cagA-两种基因型,并能够通过检测23SrRNA基因中4种常见的、与克拉霉素耐药性密切相关的点突变,判断幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性。结论应用寡核苷酸芯片可快速检测Hp感染并同时对其致病性相关的基因型及耐药性进行检测。     

幽门螺杆菌毒力基因与克拉霉素耐药基因突变相关性

目的 分析浙江省台州地区幽门螺杆菌（helicobacter pylori,Hp）cagA和VacA为主的毒力基因型分布,探讨其与克拉霉素耐药基因突变类型的关系。方法 招募存在上消化道症状患者,并行胃镜检查活检患者胃黏膜组织。通过Hp分离培养方法,培养出216株Hp。采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测并分析cagA和VacA的分型情况。采用PCR扩增和Sanger测序技术检测克拉霉素耐药基因（23S rRNA）2142和2143位碱基点突变情况。结果 CagA基因的阳性检出率为99.54%（215/216）,其中CagA-D为95.83%（207/216）、CagA-C为3.70%（8/216）。VacA基因阳性检出率为97.22%（210/216）,s1、s2、m1、m2亚型分别为97.22%（210/216）、0、35.19%（76/216）、60.65%（131/216）。本研究发现,浙江省台州地区毒力基因以CagA-D和VacAs1 m2型为优势基因型。此外,23S rRNA基因2142和2143位点均未突变的有93株。突变的有123株,其中A2142G位点突变4株、A2143G位点突变119株。毒力基因型与23S rRNA基因2142和2143位点突变类型无相关性（P>0.05）。结论 台州地区为HP高毒力地区,且以CagA-D和VacAs1 m2型为主,其分布与克拉霉素耐药基因突变无密切相关性。     

粪便23SrRNA基因检测判断幽门螺杆菌感染及克拉霉素耐药性的临床价值

目的探讨粪便23SrRNA基因检测判断幽门螺杆菌（Hp）感染以及克拉霉素耐药性的临床价值。方法选取2018年1至12月因上消化道疾病于杭州市萧山区第一人民医院就诊、13C呼气试验阳性的患者86例，同时行胃黏膜组织培养联合药敏试验以及粪便23SrRNA基因检测，对比两种方法的Hp阳性率以及对克拉霉素的耐药情况。粪便23SrRNA基因检测的假阴性样本予以16SrRNA高通量测序进行验证。结果粪便23SrRNA基因检测阳性率为79.07%（68/86），显著高于胃黏膜组织培养阳性率65.12%（56/86）（P＜0.05）。药敏试验克拉霉素耐药率为23.21%（13/56），低于粪便23SrRNA基因检测克拉霉素耐药率32.35%（22/68）。与胃黏膜组织培养相比，粪便23SrRNA基因检测检出Hp阳性的灵敏度为96.43%（54/56），特异度为53.33%（16/30），对克拉霉素耐药的灵敏度为92.31%（12/13），特异度为78.05%（32/41），与药敏结果一致率为81.48%（44/54），Kappa值为0.581，提示一致性强度中等。结论粪便23SrRNA基因检测具有较高的Hp阳性率和克拉霉素耐药灵敏度，可用于胃镜检查不耐受或13C呼气试验阳性胃黏膜组织培养阴性患者的Hp检测。     

幽门螺杆菌耐药菌株流行情况及其耐药机制

随着抗菌药物广泛用于幽门螺杆菌 (HelicobacterpyloriHp)感染 ,其耐药性问题日益突出。就全球而言 ,克拉霉素的耐药水平在 0 %～ 1 3 % ,且有逐年上升的趋势。Hp对克拉霉素的耐药性是由于 2 3SrRNA上点突变引起克拉霉素与核糖体结合力下降所致。甲硝唑的耐药水平在发展中国家和发达国家间存在显著差异 ;在女性中的耐药水平明显高于男性。Hp对甲硝唑的耐药性是由于rdxA基因上点突变引起Hp还原能力下降所致。Hp对其他抗生素耐药性的研究较少 ,其耐药水平也较低。目前 ,Hp耐药性是Hp治疗失败的主要原因 ,因此当前之急是探讨耐药机制、开发新药和研制疫苗     

幽门螺杆菌对6种抗生素的耐药性及其机制的研究

目的了解幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）对6种常用抗生素的耐药状况，探讨耐甲硝唑rdxA基因突变与耐药性的关系。方法分离培养76株Hp，以琼脂稀释法检测Hp对甲硝唑、替硝唑、四环素、克拉（红）霉素、阿莫西林、利福平的最小抑菌浓度（Mininum Inhibitory Concentration，MIC），再用PCR方法扩增甲硝唑耐药相关基因rdxA,DNA测序分析敏感株和耐药株耐药基因的序列与耐药性的关系。免疫印记（westem Blotting）分析耐药基因的表达与耐药性的关系。结果武汉地区人群Hp对甲硝唑、替硝唑、四环素、克拉（红）霉素、阿莫西林、利福平的耐药率分别为67．1％、43．4％、3．9％、11．8％、17．1％和10．5％；甲硝唑耐药基因序列分析表明rdxA基因有插入或点突变；Western Blot显示耐药株和敏感株的rdxA基因的表达有差异。结论幽门螺杆菌对6种抗生素有较高的耐药率，rdxA基因突变导致基因表达水平改变，导致Hp对甲硝唑耐药。     

粪便H.pylori 23SrRNA基因突变检测方法的建立及临床价值

目的采用非侵入性巢式PCR扩增方法对H.pylori感染病人粪便标本进行H.PYlofi 23SrRNA基因突变检测，探讨建立快速诊断克拉霉素耐药方法的可行性并对其临床价值进行评价。经^14C呼气试验及粪便抗原检测证实H．pylori阳性48例、阴性10例入选。方法应用巢式PCR扩增H.pylori 23SrRNA基因片段，Bsal、Bbsl限制性酶切2143G、2142G位点，并进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析和基因测序。结果48例H．pylofi感染患者，38例粪便中扩增出H．pylori 23SrRNA425bp产物，阳性扩增率为79．2％，其中3例被Bsal切开，表明存在2143A→G的突变，无1例被Bbsl识别，表明无2142A→G的突变，所有突变株均经测序证实。该方法敏感性79．2％、特异性100％。结论粪便中H.pylori 23SrRNA突变基因的检测是一种简便、灵敏、非创伤性的克拉霉素检测耐药性方法。     

阿奇霉素耐药淋球菌菌株的耐药机制分析和分子流行病学特征

目的 探讨阿奇霉素耐药淋球菌菌株的分子流行病学特征,分析耐阿奇霉素淋球菌的耐药机制.方法 对36株耐阿奇霉素淋球菌[最小抑菌浓度(MIC)≥1 mg/L]的核糖体23SrRNA、mtrR基因及核糖体蛋白L4/L22基因进行PCR扩增测序分析,寻找可能的突变位点,比较耐药基因突变在中度耐药组(MIC 1~64 mg/L)和高度耐药组(MIC ≥256 mg/L)间的差异.采用NG-MAST对基因序列进行分型,获得阿奇霉素耐药菌株的基因型别及分布特征.结果 高度耐药淋球菌菌株核糖体23SrRNA的4个等位基因均有A2143G的突变,中度耐药菌株中有3株(8 mg/L≤MIC≤32 mg/L)核糖体23SrRNA 4个等位基因为C2599T突变.36株阿奇霉素耐药菌株中鉴定出28个不同的序列型别(ST),其中16个为新发现的ST,2个未分型.结论 淋球菌核糖体23SrRNA基因不同位点突变可能与阿奇霉素不同程度的耐药相关,A2143G突变可能导致高度耐药,C2599T可能与中度耐药有关,mtrR基因G45D的突变可能参与阿奇霉素耐药.通过NG-MAST分型显示阿奇耐药菌株的基因型具有多样性,且覆盖范围也较为广泛;经过系统进化树推断por581基因型有较大可能影响阿奇霉素高度耐药.     

幽门螺杆菌耐药初探

目的:观察幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)对克拉霉素、呋喃唑酮的耐药情况,初步了解克拉霉素耐药菌株为原发耐药还是继发耐药,初步探讨抗H.pylori感染失败的原因是由于原有菌株未消灭还是由于感染了新的菌株.方法:从消化性溃疡及糜烂性胃炎患者的胃黏膜中分离培养出H.pylori共21株,利用纸片法进行药物敏感试验,观察耐药情况.应用随机扩增多态性DNA分析方法,进行菌株指纹图谱分析,确定抗H.pylori治疗前后菌株的同一性.结果:(1)21株H.pylori中有8株对克拉霉素耐药,1株对呋喃唑酮耐药,耐药率分别为38.1%和4.8%.(2)3对治疗前后配对菌株中,1例为原发性耐药(持续感染),1例为继发性耐药,另有1例为新菌株感染.结论:H.pylori对克拉霉素耐药率比较高,而对呋喃唑酮高度敏感.抗H.pylori感染失败的原因与菌株对克拉霉素原发性及继发性耐药有关.     

Mycoplasma pneumoniae Macrolide Resistance and MLVA Typing in Children in Beijing,China, in 2016: Is It Relevant*

ObjectiveThe aim of this study is to investigate the macrolide resistance rate and molecular type with multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis (MLVA) of Mycoplasma pneumoniae of Beijing in 2016 in pediatric patients.MethodsReal-time quantitative polymerase chain reaction (PCR) was used to identify M. pneumoniae, and MLVA was performed. The domain V of the 23S rRNA was sequenced to detect macrolide-resistant point mutations. We also investigated the activities of antibiotics against M. pneumoniae isolates in vitro.ResultsThe PCR detection rate of M. pneumoniae in children in Beijing was 40%, and the macrolide resistance rate was 66%. The A2063G mutation in the 23S rRNA V region is the dominant mutation (137/146, 93.84%), whereas the A2064G mutation is rare (9/146, 6.16%). Seventy-three samples were typed successfully by MLVA typing, including 86.3% (63/73) were MLVA type 4-5-7-2, and 13.7% (10/73) were MLVA type 3-5-6-2. No other types were found. No strains were resistant to levofloxacin or tetracycline.ConclusionIn 2016, a specific decrease in the macrolide resistance rate occurred in Beijing. The detection rate and macrolide resistance rate of outpatients are lower than those of inpatients. The A2063G mutants M. pneumoniae have high levels of resistance to erythromycin and azithromycin. The primary MLVA type is 4-5-7-2, followed by 3-5-6-2. No other MLVA types were detected. No strains resistant to tetracycline or levofloxacin were found in vitro.     

海南省幽门螺杆菌耐药性监测

目的监测海南省幽门螺杆菌（H．pylori）菌株对甲硝唑、克拉霉素、环丙沙星、四环素、阿莫西林的耐药情况。方法采取海南省各地门诊及住院胃病的胃镜活检标本326例，在微需氧环境下培养，经生化、涂片检查，鉴定为典型的H．pylori中96例获得临床分离。应用E-test方法测定H．pylori对甲硝唑、克拉霉素、环丙沙星、四环素、阿莫西林的最低抑菌浓度（MIC，mg/L）。结果96株H．pylori菌株中，甲硝唑的耐药率为82．3％（79／96），MIC范围0．016-256mg／L；克拉霉素的耐药率为26．0％（25／96），MIC范围0．016-256mg/L；环丙沙星的耐药率为21．9％（21／96），MIC范围0．02-32mg／L；四环素的耐药率为0％（0／96），MIC范围0．016～1．5mg/L；阿莫西林的耐药率为4．2％（4／96），MIC范围0．016-8mg/L；甲硝唑和克拉霉素的同时耐药率为14．6％（14／96）。不同性别间的耐药率无明显差异（P〉0．05）。结论海南地区H．pylori对甲硝唑的耐药率（82．3％）高，对克拉霉素、环丙沙星的耐药（26．0％、21．9％）有一定的比例，对阿莫西林的耐药菌株（4．2％）也已出现，未见对四环素耐药（耐药率为0％）。     

桂西地区幽门螺杆菌耐药性影响因素分析

目的 了解桂西地区幽门螺杆菌(Hp)对甲硝唑等抗菌药物产生耐药性的影响因素.方法 采集右江民族医学院附属医院2006年1月至2008年12月确诊为Hp感染患者的胃窦部黏膜标本进行Hp分离培养和鉴定,经鉴定后选择374株Hp菌株,采用纸片扩散法测定其对甲硝唑等抗菌药物的敏感性;利用单因素分析χ2检验及精确概率法分析Hp对抗菌药物耐药与患者性别、民族、疾病及年龄的关系.结果 Hp对甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐药率与患者性别、民族、疾病及年龄的关系差异无统计学意义(P>0.05).结论 Hp对甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐药与患者性别、民族、疾病及年龄无密切关系.