lncRNA HOTAIR在宫颈癌组织及HeLa细胞中的表达及其生物学功能研究

目的 探讨长链非编码RNA HOTAIR在宫颈癌组织中的表达及其生物学功能.方法 选取简阳市人民医院2014年8月至2016年7月收治并手术治疗的宫颈癌患者47例,采用实时荧光定量PCR检测患者癌组织及癌旁正常宫颈组织中HOTAIR RNA的相对表达量;以人宫颈癌Hela细胞为研究材料,应用小RNA干扰技术下调宫颈癌Hela癌细胞HOTAIR RNA表达,分别应用CCK-8实验、Wound Healing实验检测小干扰RNA下调HOTAIR表达前后Hela细胞增殖和迁移能力变化情况.结果 HOTAIR在宫颈癌患者癌组织与癌旁正常宫颈组织中的相对表达量分别为(6.89±2.12)与(4.02±1.89),癌组织显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组细胞相比,外源性小干扰RNA可显著敲低Hela细胞中HOTAIR的表达并影响其增殖和迁移(P<0.05).结论 宫颈癌患者癌组织中HOTAIR表达水平高于癌旁正常宫颈上皮;HOTAIR可能参与了宫颈癌细胞增殖和迁移等生物学功能.     

PKM2基因对胆管细胞癌迁移､侵袭及增殖的影响

目的:检测M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)组织中的表达情况,探讨PKM2下调对胆管癌细胞迁移?侵袭及增殖的影响?方法:实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色分别检测胆管癌及对应癌旁组织标本中PKM2的mRNA和蛋白表达水平?利用慢病毒表达载体系统在胆管癌细胞株HuCCT-1?HCCC-9810中下调PKM2,分别用划痕实验?Transwell细胞侵袭实验和CCK-8比色法检测细胞迁移?侵袭及增殖能力?结果:胆管癌组织中PKM2的mRNA和蛋白表达水平明显高于对应癌旁组织?经qRT-PCR和Western blot方法证实稳定转染PKM2 shRNA的胆管癌细胞中PKM2的mRNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P < 0.05),与空载对照组(PKM2-NC)和正常对照组(PKM2)相比,实验组细胞(PKM2-shRNA)的迁移?侵袭及增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P < 0.05)?结论:胆管癌组织中PKM2表达明显高于癌旁组织,PKM2 shRNA能有效地降低胆管癌细胞中PKM2基因的表达,PKM2基因沉默可以抑制HuCCT-1?HCCC-9810细胞的迁移?侵袭及增殖?     

钙黏蛋白家族基因CDH3通过PI3K/AKT通路影响宫颈癌肿瘤细胞的生长

目的 探究钙黏蛋白(cadherin, CDH)家族基因CDH3在宫颈癌发展中的作用。方法 从TCGA数据库获取宫颈癌患者数据,通过R软件分析在宫颈癌组织中钙黏蛋白家族基因的表达情况,筛选出表达上调的基因并与宫颈癌预后相关基因取交集,确定目的基因;收集10例宫颈癌患者手术切除的癌组织和癌旁组织,用qPCR检测样本内目的基因表达水平;通过CCK8和Transwell实验检测目的基因表达水平对宫颈癌细胞系(HeLa和C33A)的增殖、迁移和侵袭能力的影响;通过Western blot实验和KEGG通路分析研究目的基因对PI3K/Akt信号通路的影响。结果 CDH3在宫颈癌患者组织中高表达,其表达水平与宫颈癌患者的预后生存相关。qPCR结果显示CDH3在宫颈癌癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织。敲低CDH3可抑制HeLa和C33A细胞的增殖、迁移和侵袭。CDH3的敲低和过表达可分别造成宫颈癌细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白水平降低和增加。结论 CDH3与宫颈癌的发展有关,可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

circRNA＿0031269调控miR-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移

目的 探讨circRNA＿0031269调控mi R-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移。方法 选取深圳市南山区前海蛇口自贸区医院2020年3月—2021年4月妇科肿瘤专科收治的40例宫颈癌患者,经手术治疗切除的癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶联反应（quantitativereal-time PCR,q RT-PCR）检测不同组织中circ RNA＿0031269和mi R-127-3p的相对表达;双荧光素酶报告基因检测观察circRNA＿0031269和miR-127-3p的靶向关系。采用MTT、Transwell细胞实验检测宫颈癌细胞增殖、迁移能力。结果 癌组织中circ RNA＿0031269表达高于癌旁组织,mi R-127-3p表达低于癌旁组织（P<0.05）;miR-127-3p过表达可降低WT-circ RNA0031269的荧光酶活性,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;anti-miR-127-3p过表达可抑制He La细胞增殖、迁移,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;抑...     

KLF4在宫颈癌生长及转移表达的研究

目的:探讨Kruppel样因子(KLF4)在宫颈癌生长情况及对宫颈癌细胞转移表达能力的影响。方法:收集宫颈癌手术患者癌和癌旁组织样本,采用免疫印迹实验(Western blot)、免疫组织化学、定量PCR法对宫颈癌组织、正常宫颈组织以及宫颈原位癌组织样本中KLF4表达进行检查,并分析表达结果与病理特征的关系。结果:不同组织中KLF4阳性细胞率具有统计学差异,其中正常宫颈组织以及宫颈原位癌组织中阳性细胞率均为100%,宫颈癌组织中阳性细胞率为58.8%。与正常宫颈组织相比,宫颈癌以及宫颈原位癌组织强阳性细胞率明显偏低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组织中KLF4的mRNA以及蛋白的表达明显低于宫颈原位癌组织,且差异具有统计学意义(P<0.05)。KLF4随着分化程度的下降,蛋白表达阳性率也随之降低;而随着临床上分期的升高蛋白表达阳性率降低,但其间差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论:KLF4因子可能为一种抑癌因子,抑制肝癌细胞的侵袭和迁移,有望成为宫颈癌未来诊断以及治疗的潜在靶标。     

核因子E2相关因子1过表达抑制宫颈癌细胞增殖及迁移

目的:初步探究核因子E2相关因子1(nuclear factor erythroid 2-related factor 1,Nrf1)在宫颈癌组织中的表达及其过表达对宫颈癌细胞增殖以及迁移的影响。方法:通过TCGA数据分析Nrf1在人宫颈癌及正常宫颈组织中的表达水平差异;检索OncoLnc网站,比较Nrf1高表达与低表达宫颈癌患者的生存率;采用qRT-PCR检测11对宫颈癌及癌旁组织中Nrf1 mRNA的表达水平。通过慢病毒转染方式构建Nrf1过表达宫颈癌HeLa、SiHa细胞株,以及对应的空载体细胞株;采用qRT-PCR及蛋白免疫印迹实验分别检测细胞株内Nrf1的mRNA和蛋白表达水平;采用EdU细胞增殖实验、细胞克隆形成实验、Transwell细胞迁移实验以及细胞划痕愈合实验检测宫颈癌细胞的增殖和迁移。结果:TCGA数据分析显示,宫颈癌组织中Nrf1 mRNA表达水平明显低于正常宫颈组织(P<0.01);OncoLnc网站分析显示,Nrf1高表达组患者生存率明显高于Nrf1低表达组(P<0.05);qRT-PCR结果显示,Nrf1 mRNA在宫颈癌组织中的表达水平显著低...     

IQ结构域GTP酶激活蛋白3表达对宫颈癌细胞增殖和转移的影响

目的 探讨宫颈癌组织及细胞系中IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQGAP3)的表达及其对宫颈癌细胞增殖、凋亡和转移的影响。 方法 应用免疫组化和定量PCR检测IQGAP3在宫颈癌组织及癌旁组织中的表达,利用siRNA敲低IQGAP3在宫颈癌细胞CaSki和HeLa中的表达,通过MTT法和流式细胞术分别检测IQGAP3表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,通过Transwell检测IQGAP3表达对宫颈癌细胞迁移的影响,从而探讨IQGAP3在宫颈癌细胞的增殖、凋亡及迁移过程中的作用。 结果 IQGAP3在宫颈癌组织及细胞中高表达,高表达IQGAP3的患者预后较差(χ2=6.15, P=0.01);敲降IQGAP3在宫颈癌细胞CaSki和HeLa的表达后,宫颈癌细胞的增殖受到抑制,凋亡增加,细胞迁移减少,E-cadherin表达增加,N-cadherin表达下调(P均<0.001)。 结论 IQGAP3在宫颈癌组织中表达上调,在宫颈癌细胞增殖和转移过程中发挥重要作用;IQGAP3通过诱导上皮细胞-间充质转变(EMT),促进宫颈癌细胞的转移。     

TRIM14对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭及上皮——间充质转化的影响及其作用机制

目的：探讨三结构域蛋白14(TRIM14)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮—间充质转化（EMT）的影响及相关作用机制。方法：收集40例宫颈癌患者的宫颈癌组织及癌旁正常宫颈组织标本，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测TRIM14基因表达。体外培养宫颈癌HeLa细胞，将TRIM14小干扰RNA(si-TRIM14)转染至HeLa细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖，划痕实验检测细胞迁移，Transwell小室法检测细胞侵袭，Western blotting法检测EMT相关蛋白和单磷酸腺苷蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶蛋白（m TOR）信号通路相关蛋白表达。结果：宫颈癌组织中TRIM14 mRNA表达水平显著高于癌旁正常宫颈组织（P<0.05）。与si-NC组比较，si-TRIM14组细胞增殖活性、细胞迁移率、侵袭细胞数目均降低，E-cadherin蛋白表达量升高，N-cadherin、Vimentin、Snail1蛋白表达量均降低（P<0.05）。si-TRIM14组细胞中p-AMPK/AMPK比值高于si-NC组，pmTOR/mTOR比值低于si-NC组（P&l...     

PDSS2在肝细胞癌中的表达及对肝癌细胞生长和侵袭的影响

目的探讨异戊二烯基二磷酸合酶第二亚基(PDSS2)在肝细胞癌组织及肝癌细胞株中的表达水平变化及对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用定量RT-PCR检测肝细胞癌组织、癌旁非癌肝组织、正常肝组织以及肝癌细胞株、正常肝细胞株PDSS2 m RNA表达水平,并分析肝细胞癌组织PDSS2 m RNA表达水平与患者临床病理特征的关系。将PDSS2表达质粒、阴性对照质粒分别转染Huh7肝癌细胞(另设空白对照,即未处理的Huh7细胞),并用MTT法检测Huh7肝癌细胞增殖能力变化,流式细胞术检测凋亡变化,Transwell法检测迁移及侵袭能力变化。结果肝细胞癌组织PDSS2 m RNA表达水平明显低于配对的癌旁非癌肝组织及正常成人肝组织,配对的癌旁非癌肝组织PDSS2 m RNA的表达水平也明显低于正常成人肝组织(P0.05);Huh7、Hep3B和Bel-7402肝癌细胞PDSS2 m RNA表达水平均明显低于HL-7702正常肝细胞。与高表达PDSS2 m RNA者比较,低表达PDSS2m RNA的肝癌患者中其癌组织分化程度较差者(Edmondson gradeⅢ-Ⅳ)比例及存在门静脉癌栓者比例均较高;而肝细胞癌组织PDSS2 m RNA表达水平与其他临床病理参数之间,包括年龄、性别、肿瘤大小、甲胎蛋白水平均无明显相关性。与空白及阴性对照组比较,转染pc DNA3.1-PDSS2质粒的Huh7肝癌细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡显著增加,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制。结论 PDSS2其表达下调参与肝细胞癌的发生发展,并且与肝细胞癌的恶性生物学特征相关;上调PDSS2表达可以抑制肝癌细胞生长和侵袭能力,PDSS2可能成为潜在的基因治疗靶点。     

长链非编码 RNAFBXL19-AS1通过下调 miR-223表达增加宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力

摘要:目的 明确 F-box富含亮氨酸的重复蛋白19反义 RNA1(F-boxandleucinerichrepeatprotein19antisense RNA1,FBXL19-AS1)与微小 RNA-223(microRNA-223,miR-223)对宫颈癌生物学行为的影响,并探讨 FBXL19-AS1是 否对 miR-223具有调节作用。方法 利用实时荧光定量聚合酶链反应检测 FBXL19-AS1与 miR-223在44例宫颈癌样 本与细胞系的表达。利用荧光原位杂交技术检测 FBXL19-AS1的定位。利用寡核苷酸片段干扰 FBXL19-AS1与过表 达 miR-223。应用 CCK-8法检测细胞增殖能力。细胞划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。 蛋白质印迹法检测各蛋白的表达量。应用荧光素酶报告基因实验检测FBXL19-AS1对 miR-223的调节作用。结果 与 癌旁组织及 End1/E6E7细胞相比,癌组织及 HeLa细胞 FBXL19-AS1表达量上调而 miR-223表达量下调,二者呈负相 关(均P<0.05)。FBXL19-AS1定位于细胞质。FBXL19-AS1表达与肿瘤大小、淋巴结转移、宫颈侵袭深度以及 FIGO 分期相关(均P<0.05)。干扰FBXL19-AS1显著降低 HeLa细胞增殖、迁移和侵袭能力。过表达 miR-223显著降低 HeLa细胞增殖,迁 移 和 侵 袭 能 力。FBXL19-AS1 通 过 海 绵 吸 附 方 式 下 调 miR-223 表 达。干 扰 miR-223 部 分 逆 转 干 扰 FBXL19-AS1对 HeLa细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。结论 FBXL19-AS1通过下调 miR-223表达增加宫颈癌细胞 的增殖、迁移和侵袭能力。     

人乳头瘤病毒E6蛋白通过上调氯离子蛋白通道5的表达促进宫颈癌细胞迁移

目的: 探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）E6蛋白与氯离子通道蛋白5（chloride voltage gated channel 5,CLCN5）之间的关系以及CLCN5对宫颈癌细胞迁移的影响。方法: 采用RNA干扰技术敲低HPV E6基因,实时荧光定量PCR（RT qPCR）和蛋白质印迹法检测敲低HPV E6后宫颈癌HeLa细胞中CLCN5 mRNA及蛋白的表达水平。通过PCR扩增CLCN5基因片段,并将其克隆至表达载体pCDNA3.1 3×Flag（简称pCDNA3.1）质粒中,构建重组质粒pCDNA3.1 CLCN5。将目的质粒pCDNA3.1 CLCN5及其对照pCDNA3.1质粒分别转染宫颈癌HeLa细胞,蛋白质印迹法检测CLCN5蛋白的表达。Transwell迁移实验检测过表达CLCN5对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响。同时,将CLCN5的小干扰RNA及其阴性对照分别转染宫颈癌HeLa细胞,Transwell迁移实验检测敲低CLCN5对宫颈癌HeLa细胞迁移的影响。结果： RT qPCR和蛋白质印迹检测结果显示,敲低HPV E6可显著降低CLCN5的mRNA和蛋白表达水平。质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pCDNA3.1 CLCN5构建成功。蛋白质印迹检测结果显示CLCN5蛋白在宫颈癌HeLa细胞中被有效过表达或敲低。Transwell迁移实验结果表明,过表达CLCN5可促进宫颈癌细胞的迁移,敲低CLCN5可抑制宫颈癌细胞的迁移。 结论： HPV E6蛋白通过上调CLCN5的表达促进宫颈癌细胞迁移。     

MiR-218在宫颈癌组织中的表达及对HeLa细胞凋亡及转移的影响

目的 探讨miR-218在宫颈癌组织中的表达,以及对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测23 例正常子宫颈组织和114 例宫颈癌组织中miR-218 mRNA的表达,分析与临床病理特征的关系;HeLa细胞分为3组:对照组（细胞不转染）、转染空脂质体阴性对照组(NC组)和 转染miR-218类似物 (miR-218M组)。MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移; qRT-PCR和Western blot分别检测Bcl-2、Bax、NF-κB和E-cadherin mRNA和蛋白表达。结果 miR-218 mRNA在宫颈癌组织中表达下调,在宫颈癌不同病理类型、分期分级、有无淋巴结转移及间质浸润深度间表达差异有统计学意义（P Bax mRNA和蛋白表达水平上调, E-cadherin mRNA和蛋白表达上调,NF-κB mRNA和蛋白表达下调。结论 MiR-218低表达可能与宫颈癌的病理分级分期等生物学行为有关,上调miR-218表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭转移。     

沉默SLP-2 可抑制人宫颈癌细胞的迁移及侵袭能力

目的研究沉默SLP-2对人宫颈癌细胞迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法用siRNA转染人宫颈腺癌Hela细胞 及宫颈鳞癌Siha细胞作为沉默组,同时设立空白对照组及阴性对照组,转染48 h后,用Western blot检测SLP-2蛋白的表达量, 用划痕实验、Transwell 实验检测沉默SLP-2 对Hela 和Siha 细胞迁移能力的影响,用基质胶Transwell 实验检测沉默SLP-2 对 Hela 和Siha 细胞侵袭能力的影响,用Western blot 检测沉默SLP-2 后Hela 和Siha 细胞上皮间质转化标志分子E-cadherin、β- catenin、vimentin及上皮间质转化上游转录因子Twist蛋白表达量的变化。结果与对照组相比,Western blot结果显示沉默组 SLP-2蛋白的表达量明显下降;划痕实验显示沉默组的划痕面积愈合率明显下降（P<0.01）;Transwell实验及基质胶Transwell实 验均显示沉默组穿过小室膜至下室的细胞数明显减少（P<0.01）;Western blot结果显示沉默组上皮细胞标志分子E-cadherin及 β-catenin表达升高,而间质细胞标志分子vimentin表达下降,表明Hela细胞和Siha细胞的上皮间质转化受到抑制;Western blot 结果显示沉默组Twist蛋白的表达量也明显下调。结论沉默SLP-2可抑制人宫颈癌细胞上皮间质转化（EMT）的发生,使宫颈 癌细胞的迁移及侵袭能力下降,其作用机制可能与下调Twist蛋白的表达有关。     

STAT2在卵巢癌中表达升高并与卵巢癌患者生存不良有关

目的 探讨信号转导及转录活化因子2（STAT2）在卵巢癌中的表达及与患者预后的相关性,并研究STAT2对卵巢癌细胞转移能力的影响和作用机制。方法 RT-qPCR分析62例新鲜冰冻卵巢癌组织和62例正常卵巢组织中STAT2的mRNA的表达,免疫组化法检测95例卵巢癌石蜡样本和33例正常卵巢石蜡样本中STAT2蛋白的表达,Kaplan-Meier法分析STAT2表达和患者的预后之间的相关性,分析Kaplan-Meier Plotter数据库中STAT2与患者预后之间的关系。Western blot检测STAT2在卵巢癌细胞株中的表达,在最高表达的A2780细胞株中干扰STAT2后,Transwell检测卵巢癌细胞迁移、侵袭能力的变化;以及下游分子EGFR表达水平的变化。结果 卵巢癌组织中STAT2 mRNA的表达高于正常卵巢组织,STAT2 mRNA表达与较差的FIGO分期相 关。免疫组化显示STAT2蛋白在卵巢癌组织中的高表达率为67.4%,高于正常卵巢组织的28.3%;卵巢癌患者中,STAT2蛋白的高表达与患者的腹水量、有无远处转移及FIGO分期相关（P<0.05）。生存分析表明高表达STAT2蛋白的卵巢癌患者的整体生存期 （P=0.021）及无进展生存期（P=0.018）较差。STAT2在卵巢癌细胞株中普遍呈高表达,A2780细胞株中表达最高,用于建立干扰细胞株;干扰STAT2后,A2780细胞迁移和侵袭能力减弱（P<0.01）,并且下游分子EGFR的mRNA和蛋白表达水平较对照组均降低。 结论 STAT2在卵巢癌中表达升高,与卵巢癌患者预后不良相关,STAT2可能通过促进EGFR的表达而促进卵巢癌的转移。     

蛋白质精氨酸甲基转移酶5促进人卵巢癌HO8910细胞迁移

目的: 探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶5(protein arginine methyltransferase 5,PRMT5)对人卵巢癌HO8910细胞上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)和迁移能力的影响。方法: 利用瞬时转染方法建立PRMT5过表达的HO8910细胞株,设空白对照组(野生型HO8910细胞株)、阴性对照组(转染pCMV-myc质粒)、实验组(转染pCMV-Myc-PRMT5质粒);同时采用shRNA干扰方法建立诱导型稳定敲低PRMT5基因的HO8910细胞株,设pLKO对照组(感染空载体慢病毒)、pKLO+ Dox(100 ng/mL)组、shPRMT5组(感染PRMT5 shRNA 慢病毒)和shPRMT5+ Dox(100 ng/mL)组;通过免疫印迹和qRT-PCR实验检测PRMT5 mRNA表达和干扰效率。实验分为shPRMT5组、shPRMT5+Dox组、pCMV-Myc组、pCMV-Myc-PRMT5组;Transwell实验检测细胞迁移能力;免疫印迹法检测EMT相关蛋白表达。结果： 免疫印迹和qRT-PCR验证成功建立过表达PRMT5和稳定诱导型敲低PRMT5的卵巢癌HO8910细胞株。PRMT5敲低后,卵巢癌HO8910细胞迁移能力显著下降(P均<0.01),间质标志相关分子包括基质金属蛋白酶2,波形蛋白,N-钙黏蛋白表达下调,上皮标志分子E-钙黏蛋白表达上调。此外,在卵巢癌细胞中外源表达PRMT5可显著促进HO8910细胞迁移(P均<0.05)。结论： PRMT5能够促进卵巢癌HO8910细胞EMT进程,促进细胞迁移。     

CDCP1基因重组慢病毒表达载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖与迁移的影响

目的: 构建含CUB结构域包含蛋白1（CUB domain containing protein 1,CDCP1）基因的重组慢病毒表达载体,研究CDCP1蛋白对宫颈癌细胞增殖与迁移的影响。方法: 以人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）cDNA为模板,采用PCR法扩增出CDCP1基因,将其克隆至pHAGE CMV MCS IzsGreen载体中,构建重组慢病毒表达载体pHAGE-CDCP1。将重组质粒pHAGE-CDCP1以及对照质粒pHAGE分别与包装质粒psPAX2以及包膜质粒pMD2.G共转染入人胚肾上皮细胞（293 T细胞）,48 h后收集病毒悬液,并采用梯度稀释法测定病毒滴度。将重组慢病毒CDCP1感染人宫颈癌HeLa细胞,通过免疫印迹法检测CDCP1蛋白的表达,采用CCK-8实验检测过表达 CDCP1对 HeLa 细胞增殖的影响;采用划痕实验和Transwell细胞迁移实验观察过表达CDCP1对HeLa细胞迁移能力的影响。结果： 质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pHAGE-CDCP1构建成功。重组pHAGE-CDCP1慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞后细胞状态良好,CDCP1蛋白表达水平明显增加。高表达CDCP1可以显著提高HeLa 细胞的增殖和迁移能力。结论： 过表达CDCP1能够促进宫颈癌 HeLa 细胞的增殖和迁移。     

Inhibitory effect of 2′-o-methoxyethyl-modified antisense oligonucleotides targeting vascular endothelial growth factor A on SKOV3 human ovarian cancer cells

Background  Ovarian cancers are often at an advanced stage at diagnosis because early detection is difficult. The poor prognosis of ovarian cancers highlights the crucial need to develop better therapeutic agents and strategies. The objective of this study was to investigate the inhibitory effects of a new modified antisense oligonucleotides targeting vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) in SKOV3 ovarian cancer cells.

Methods  Antisense oligonucleotides targeting VEGF-A was designed, synthesized and transfected into SKOV3 ovarian cancer cells. Western blotting and real-time RT-PCR were used to analyze the inhibitory effects of antisense oligonucleotides on VEGF-A protein and mRNA expression. Transwell matrix assay was used to detect cell migration inhibition.

Results  The antisense oligonucleotides targeting VEGF-A significantly decreased VEGF-A protein and mRNA expression and inhibited cell migration in SKOV3 ovarian cancer cells.

Conclusions  This new modified antisense oligonucleotides targeting VEGF-A can decrease VEGF-A expression and inhibit cell migration in SKOV3 ovarian cancer cells. This new oligonucleotides may be a promising therapeutic agent for ovarian cancers.

     

沉默驱动蛋白KIF4A的表达对卵巢癌细胞SKOV3迁移的影响

目的  研究沉默KIF4A基因对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响。方法  检索针对KIF4A基因的小干扰RNA（siRNA）,构建shRNA表达质粒,转染人卵巢癌细胞SKOV3,通过G418筛选建立稳定低表达KIF4A的SKOV3细胞株。采用蛋白质免疫印记（Western blot）法检测shRNA对KIF4A蛋白分子的敲除效率。并通过细胞迁移实验评价低表达KIF4A对SKOV3细胞迁移能力的影响。结果  成功筛选出稳定低表达KIF4A的细胞株,选择干扰效率较高的细胞株进行实验。Transwell细胞迁移实验显示,低表达KIF4A的细胞株的迁移率较阴性对照组增长近3倍(P＜0.05)。结论   KIF4A低表达,可增强人卵巢癌细胞SKOV3的迁移能力。     

乳浆大戟抑制人宫颈癌细胞增殖迁移和诱导细胞凋亡的研究

目的 研究乳浆大戟抑制人宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和诱导细胞凋亡的作用并初步探讨其作用机制。方法 用不同稀释度的乳浆大戟提取液处理人宫颈癌SiHa细胞,MTT实验观察细胞生长抑制现象,吖啶橙染色荧光显微镜观察凋亡细胞的核形态改变并测定凋亡指数,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell法检测细胞迁移能力和侵袭能力,用分光光度法检测caspase-3和caspase-9的表达情况。结果 乳浆大戟对人宫颈癌SiHa细胞有增殖抑制作用,该作用有时间和浓度依赖性。乳浆大戟处理后的人宫颈癌SiHa细胞,凋亡指数和凋亡率均显著上升,均有时间和浓度依赖性。Transwell法检测显示,乳浆大戟提取液处理后的SiHa细胞,迁移能力和侵袭能力显著下降。分光光度法检测发现,乳浆大戟处理后的SiHa细胞中,caspase-3和caspase-9均表达增强。结论 乳浆大戟提取液具有抑制人宫颈癌SiHa细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其作用通路有caspase-3和caspase-9的参与。     

MTAl基因对宫颈癌细胞HeLa侵袭转移的影响

目的探索MTAl基因与宫颈癌细胞HeLa侵袭迁移能力的关系。方法以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含有MTAl全长基因的质粒pEGFP—C1／MTAl转染HeLa细胞,应用Westernblotting检测转染效果,细胞黏附实验检测细胞黏附能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果MTAl质粒转染的宫颈癌HeLa细胞中,MTAl蛋白的表达、黏附能力、迁移及侵袭能力均明显高于转染空载体组及未转染组（P〈0．05）.结论MTAl基因与宫颈癌细胞的侵袭迁移能力有关,MTAl基因可能成为宫颈癌治疗的一个新的靶点。