螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞P-p38MAPK和TGF-β1变化的影响

目的：研究糖尿病肾病（diabetic nephropath,DN）大鼠肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的表达及螺内酯对其的影响。方法：以高糖孵育大鼠肾小球系膜细胞（mesangial rell,MC）24h,用细胞免疫荧光法检测MC的磷酸化p38MAPK（P-p38MAPK）活性,并用ELISA检测转化生长因子-β1（TGF-β1）分泌状况。p38MAPK特异性抑制剂SB203580及不同浓度螺内酯预处理对其影响。结果：高糖激活p38MAPK,增加RMC的P-p38MAPK活性和TGF-β1的表达;SB203580显著抑制TGF-β1表达（P〈0.01）;螺内酯抑制P-p38MAPK的活化并减少TGF-β1的蛋白表达（P〈0.01）,并随浓度增高,抑制作用增强。结论：p38MAPK可能是糖尿病肾病发生的始动信号之一,螺内酯可能通过抑制p38MAPK磷酸化而减少TGF-β1分泌。     

PsL5F诱导人未分化甲状腺癌FRO细胞凋亡与细胞内ROS水平对JNK信号通路的影响

目的 研究半边旗5F(Pteris semipnnata L 5F,PsL5F)对人未分化甲状腺癌FRO细胞的凋亡诱导及其与细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平升高和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)激活的关系.方法 MTT法测定PsL5F对FRO细胞的生长抑制作用;流式细胞术与Annexin V-FITC/PI标记法联用检测PsL5F对FRO细胞的凋亡诱导;用ROS特异反应试剂CM-H2DCFDA标记在流式细胞仪上分析PsL5F对FRO细胞内ROS水平的影响;Western blot法分析PsL5F处理对FRO细胞ERK、JNK和p38MAPK磷酸化水平的影响.结果 PsL5F对FRO细胞具有显著的生长抑制作用,且呈剂量-时间依赖性;在PsL5F 100 mg/L浓度下,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻细胞的比例呈时间依赖性逐渐增加;用PsL5F处理FRO细胞,在1 h时细胞内ROS水平就表现出明显的升高,GSH可抑制PsL5F诱导的细胞内ROS水平升高和细胞凋亡到对照水平;PsL5F处理可使FRO细胞ERK、JNK和p38MAPK磷酸化而被激活,JNK抑制剂Dicumarol可减轻PsL5F诱导的细胞凋亡,ERK和p38MAPK的抑制剂PD098059和SB203580加剧PsL5F诱导的细胞凋亡.结论 PsL5F对FRO细胞的生长抑制作用是通过诱导细胞凋亡进行的;细胞内ROS水平升高起到了非常重要的作用;PsL5F处理可导致FRO细胞MAPKs信号通路激活,其中JNK信号通路是促凋亡信号,而ERK和p38MAPK作为生存信号被激活来对抗PsL5F诱导的细胞凋亡.     

MAPKs信号通路参与疼痛中枢敏感化的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)对细胞内信号转导非常重要,在调控神经系统可塑性和炎性反应中发挥着重要作用。MAPKs家族由细胞外信号调节激酶(ERK),p38和c-Jun氨基末端激酶(JNK)组成。组织和神经损伤后它们通过特定的细胞内机制增强疼痛的敏感性。伤害性刺激所引起的脊髓背角神经元ERK的磷酸化在中枢敏感化中起着重要作用。它通过多种神经递质受体,并利用不同第二信使通路调节谷氨酸受体活性、K+通道和诱导基因的转录。神经损伤后ERK、p38和JNK引起脊髓神经胶质细胞炎症/疼痛介质的合成,从而增强疼痛敏感。通过对MAPK信号传导通路特异性抑制剂的研发可能为疼痛治疗增加新的思路。     

Resistin对人肾小球系膜细胞表型和功能的作用及机制研究

目的研究巨噬细胞因子抵抗素（Resistin）过度表达对高糖刺激作用下人肾小球系膜细胞p38MAPK信号通路的影响,探讨Resistin调控肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质积聚的作用机制。方法通过转染携带野生型Resistin基因的腺病毒载体（Ad—Resistin）构建过度表达Resistin的人巨噬细胞模型,并与高糖刺激后的人肾小球系膜细胞共培养,^3H-氚标胸腺嘧啶掺入实验检测肾小球系膜细胞增殖,免疫细胞化学检测系膜细胞增殖相关基因（AP-1）的表达,免疫荧光检测细胞外基质蛋白（Laminin）的蛋白表达,Western blot检测系膜细胞内p38MAPK、TGF-β的表达并测定Smad2的磷酸化水平。结果Ad—Resistin感染后,人巨噬细胞Resistin mRNA水平及蛋白表达明显升高（P〈0．01）。同过度表达Resistin的人巨噬细胞共培养后,与对照组比较,人肾小球系膜细胞p38MAPK、TGF-β的蛋白表达明显增强,细胞内Smad2的磷酸化水平显著升高（p〈0．05）,肾小球系膜细胞出现明显的增殖,细胞外基质的合成增多（P〈0．05）。结论巨噬细胞因子Resistin的过度表达可能通过p38MAPK信号通路,调控高糖刺激作用下肾小球系膜细胞的增殖及细胞外基质的异常积聚。     

螺内酯和缬沙坦对高血压大鼠心肌肥大信号通路的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦和盐皮质激素受体拮抗剂螺内酯对自发性高血压大鼠(spontane-ously hypertensive rats,SHR)心肌中活化的丝裂原活化蛋白激酶家族(m itogen-activated protein kinase fam ily,MAPK)(细胞外信号调节激酶[ERK]、c-Jun NH2-末端激酶[JNK]和p38)的影响。方法将18只雄性SHR随机分为3组,每组6只。其中两组分别用缬沙坦30 mg.kg-1.d-1、螺内酯20 mg.kg-1.d-1溶于饮水灌胃,连续治疗13周;对照组给正常饮水,并与W istar-kyoto大鼠(WKY)比较。用W estern-blot方法检测大鼠心肌磷酸化MAPK的表达。结果SHR对照组心肌磷酸化JNK/actin值高于其余3组(P<0.01),缬沙坦组高于螺内酯组和WKY组(P<0.01),螺内酯组与WKY水平接近;SHR对照组心肌磷酸化ERK/actin值高于其余3组(P<0.01),螺内酯和缬沙坦组高于WKY组(P<0.01),两用药组之间无差异;缬沙坦组磷酸化p38/actin值高于WKY组(P<0.01),低于SHR对照组和螺内酯组(P<0.01)。结论醛固酮能促进SHR的心肌肥厚和心肌纤维化,盐皮质激素受体拮抗剂能通过抑制MAPK途径而抑制左室肥厚和心肌纤维化。     

MAPKs通路在转化生长因子β1诱导气道上皮细胞转化中的作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导气道上皮细胞表型向肌成纤维细胞转化中的作用。方法TGF-β1(10μg/L)刺激气道上皮细胞株16HBE-14o,采用Westernblot方法检测刺激5min,15min,30min,1h和24h后细胞内磷酸化p38、Erk1/2和JNK的表达。分别预先加入p38MAPK、ERK1/2和JNK的特异性抑制剂孵育1h,再加入TGF-β1刺激16HBE-14o48h,免疫荧光方法检测E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达。结果TGF-β1刺激5min后磷酸化p38、Erk1/2表达量较未予TGF-β1刺激的正常对照组明显增加,刺激15min,30min和1h后表达量稍有下降但仍较正常对照组明显增加,刺激24h后表达量恢复至基础水平。正常对照组与TGF-β1刺激组均有极微弱的磷酸化JNK表达,表达量无显著差别。加入p38MAPK和ERK1/2特异性抑制剂组,绝大多数细胞F-actin和E-cadherin仍定位在细胞边缘,表达α-SMA的阳性细胞数显著减少;加入JNK特异性抑制剂组E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达与单纯TGF-β1刺激组相似。结论TGF-β1活化了16HBE-14o细胞内MAPKs信号通路,MAPKs(p38MAPK和ERK1/2)信号通路参与了TGF-β1诱导的16HBE-14o向肌成纤维细胞的转化过程。     

α-硫辛酸对大鼠皮肤成纤维细胞高糖损伤的保护机制

目的:探讨α-硫辛酸(ALA)抑制高糖刺激大鼠皮肤成纤维细胞损伤的作用机制。方法:以不同浓度ALA干预高糖作用下的大鼠皮肤成纤维细胞,分别采用MTT比色法观察细胞活力,硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,Caspase-3活性检测以及Western blotting法检测细胞磷酸化JNK(p-JNK),磷酸化p38(p-p38)蛋白量的表达。结果:ALA能够显著改善高糖刺激对大鼠成纤维细胞细胞活力的影响(P<0.05),降低细胞内MDA含量及ROS水平并提高SOD活力,且能明显降低Caspase-3的活性以及p-JNK、p-p38蛋白量的表达(P<0.05)。结论:在体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞模型中,ALA能够通过降低氧化应激水平,抑制JNK,p38通路的激活并降低Caspase-3活性来改善高糖诱导的氧化应激损伤。     

阻断p38 MAPK信号通路对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路的阻断对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响。方法 大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells MCs）分别培养在低糖浓度（5．5mmol／L，LG组），高糖浓度（25mmol／L，HG组）及25mmol／L葡萄糖＋10μmol／L SB203580（p38抑制剂）。CCK-8测定MCs增殖，比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的变化。结果 高糖组MCs出现增殖增加，SOD、GSH下降，MDA增加，SB203580干预能抑制MCs的过度增殖，使SOD、GSH增加、MDA减少。结论 抑制p38MAPK途径能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖．并显著减少高糖诱导的氧化应激水平。     

高氧性肺损伤中MAPK信号途径的表达及其作用机制

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路三亚族ERK,p38,JNK在大鼠高氧性肺损伤动物模型中的表达及作用.方法:24只3周龄Wistar大鼠随机分成4组:空气对照组和高氧暴露3,7和14 d组,每组动物6只.高氧暴露组置于常压高氧仓中(O2≥95%),空气对照组置于常压空气中(O2=21%).光镜下观察肺组织病理学改变,采用二步法免疫组化检测磷酸化ERK,p38,JNK在肺组织中的分布.Western Blot检测磷酸化MAPK蛋白表达变化.结果:高氧暴露3,7 d组出现急性肺损伤的典型病理学特征,高氧暴露14 d组肺间质及纤维细胞增生明显.免疫组化显示空气对照组仅肺泡上皮细胞及气道上皮细胞见少量磷酸化ERK,p38,JNK阳性表达,高氧暴露组则阳性细胞明显增多,广泛分布于肺内细胞中:肺泡上皮细胞、气道上皮细胞、胸膜间皮细胞、浸润炎细胞及间质纤维细胞,p38阳性表达尤多见于炎性细胞中.Western Blot显示高氧暴露组较空气对照组磷酸化蛋白表达明显增强,ERK,JNK高氧暴露7 d组表达最强(P＜0.05),p38在高氧暴露14 d组表达最为明显(P＜0.05).结论:高浓度氧可激活MAPK信号途径,磷酸化ERK,p38,JNK在高氧损伤肺组织表达明显增加,MAPK三亚族ERK,p38,JNK活性变化在时间上并不具有同步性.     

新城疫病毒诱导结肠癌Caco2细胞株发生Caspase和p38MAPK依赖性诱凋亡

目的研究新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)毒株FMW(NDV/FMW)诱导结肠癌Caco2细胞发生凋亡及其机制。方法通过病毒滴度法测定病毒在细胞内复制情况;CCK8法检测细胞存活率;显微镜下观察细胞形态学的变化;Western印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase3、PARP及MAPK下游信号通路相关p38、JNK、Erk1/2蛋白表达水平。结果NDV/FMW在Caco2细胞内复制,降低2D及3D培养Caco2细胞存活率（P＜0.001）;NDV/FMW诱导Caco2细胞中裂解的Caspase3(cleaved-Caspase3)及PARP裂解片段(cleaved-PARP)增加,泛Caspase抑制剂预处理降低Caspase3及PARP裂解片段表达水平;NDV/FMW感染组Caco2细胞磷酸化p38和磷酸化JNK较对照组增加,磷酸化ERK1/2及总p38、JNK、ERK1/2蛋白水平无显著增加;与NDV/FMW感染组相比较,p38抑制剂预处理组凋亡相关蛋白表达水平显著减低,但JNK抑制剂预处理组凋亡相关蛋白表达水平没有显著变化。结论NDV/FMW诱导结肠癌Caco2细胞发生Caspase和p38MAPK依赖性细胞凋亡。     

Pioglitazone inhibits the expression of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and p38 mitogen-activated protein kinase in rat mesangial cells

Background Oxidative Stress and p38 mitogen-activated protein kinase （p38MAPK） play a vital role in renal fibrosis. Pioglitazone can protect kidney but the underlying mechanisms are less clear. The purpose of this study was to investigate the effect of pioglitazone on oxidative stress and whether the severity of oxidative stress was associated with the phosphorylation level of p38MAPK.     

p38丝裂原活化蛋白激酶与c-Jun-N末端激酶信号通路反向调控血管紧张素Ⅱ诱导的人足细胞凋亡

目的:研究不同亚型的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),即p38MAPK、细胞外信号调节激酶(ERK)和cJun-N末端激酶(JNK)在血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)诱导的培养人体足细胞凋亡中的作用.方法:体外培养条件下,分别用ANGⅡ(10-8mol/L)或ANGⅡ与不同的MAPK抑制剂(SB02190、Pl98059、SP600125)处理人体足细胞;应用H-33342和碘化丙啶双染色形态学方法和DNA片段测定法检测细胞凋亡;应用Western印迹检测ANCⅡ刺激的MAPK活性改变.结果:ANGⅡ诱导足细胞凋亡呈时间和剂量依赖性;ANGⅡ刺激p38MAPK,而抑制JNK活性;p38MAPK抑制剂(SB202190)抑制ANGⅡ诱导的足细胞凋亡和p38MAPK活性;SP600125抑制JNK活性而促进了ANGⅡ诱导的足细胞凋亡.结论:ANGⅡ通过激活p38MAPK和抑制JNK活性诱导人体足细胞凋亡.     

Study on the signalling pathway of inhibitory effect of adreno-medullin on the growth of cultured glomerular mesangial cells

A6dr0e0n0o,medu ollriingi n(aAllDyM),is aola stemdall p efrpotimde of h RumMaMnpheochromocytomas in1993,is potently hypotensive andnatriuretic.1,2Some recent studies established thatADM exerted its action by interaction with its receptorproteins complex which consists of a calcitonin receptor-like receptor(CRLR),receptor activity modifyingproteins(RAMPs)and a receptor component protein.3We have also demonstrated that CRLR and RAMPs wereexpressed on cultured rat glomerular mesangial c…     

丝裂原活化蛋白激酶通路对脂多糖诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α基因表达的协同调节作用

目的 探讨脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的协同调节作用及其分子机制。方法 用蛋白激酶活性测定分析LPS刺激RAW264．7细胞引起的激酶活性变化;用报告基因技术和反转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法研究LPS诱导的TNF－α基因转录的分子机制。结果 LPS刺激RAW264．7细胞可引起细胞外信号调节激酶1（ERK1）、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）和p38MAPK的一过性激活,用MAPK上游激酶的活性突变体分别转染RAW264．7均可不同程度地诱导TNF－α启动子转录活性;而且,这些MAPK通路激活诱导的TNF－α启动子转录活性表现出明显的协同效应;三种MPAPK的无活性突变体均显示出对LPS刺激引起的TNF－α启动子转录激活的抑制效应;RT－PCR的结果证实,ERK、JNK和p38MAPK的特异性抑制剂对TNF－αmRNA表达具有不同程度的抑制作用。结论 LPS刺激引起的TNF－α启动子转录活性增加,可能涉及了ERK、p38和JNK三条通路的激活;这些通路通过协同效应共同发挥对TNF－α基因表达的调控。     

IgA肾病患者肾组织中丝裂素活化蛋白活化与肾小管上皮细胞转分化的关系

目的　检测IgA肾病患者肾小管上皮细胞中丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)不同亚类蛋白质表达及磷酸化水平的变化 ,初步探讨MAPK各亚类在体内对肾小管上皮细胞转分化的调控作用。方法　 36例住院IgA肾病患者的肾活检标本 ,分为轻度系膜增生组、局灶增生组和增生硬化组。采用普通病理染色和免疫组织化学技术 ,观察各组肾组织中肾小管和间质的病理改变、肾小管间质损伤指数、增殖细胞核抗原 (PCNA)和纤连蛋白 (FN)在肾小管、α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)在肾小管和间质表达的变化 ,并应用非磷酸化和磷酸化激酶的特异抗体检测肾组织内MAPK(包括ERK、JNK和p38)的表达及活化情况。结果　随着肾小球病变程度的加重 ,肾小管间质损伤指数增加。肾小管上皮细胞的PCNA阳性率逐渐增高 ;其中增生硬化组的PCNA阳性率是正常对照组的 2 38倍 (P <0 0 1) ,α SMA表达阳性的肾小管上皮细胞明显增多 ,局灶增生组和增生硬化组的肾小管α SMA表达阳性率均显著增高 (P <0 0 5 )。FN在肾间质的表达增加 ,α SMA表达阳性率与FN表达阳性率和肾间质纤维化程度呈正相关。正常人肾组织中MAPK各亚类均有基础表达 ,IgA肾病患者肾组织中MAPK各亚类的表达部位与正常人相似 ,肾小管ERK和JNK活化程度随肾小球病变程度的加重而逐渐增加 ,以增生     

阿魏酸钠抑制高糖诱导系膜细胞表达PAI-1和p38MAPK

目的：观察阿魏酸钠（SF）对高糖诱导系膜细胞（GMC）表达PAI-1蛋白和细胞信号转导分子p38MAPK的影响。方法：原代培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组,分别于处理后24h、48h收集细胞。用免疫细胞化学检测各组细胞p38MAPK的表达,流式细胞术检测PAI-1蛋白。结果：48h内,高糖促进PAI-1和p38MAPK蛋白的表达,而SF能明届抑制高糖的这种作用,其作用随SF浓度的增加和作用时间的延长而加强。结论：SF能拈抗高糖诱导的GMC表达PAI-1增多和抑制p38MAPK信号通路     

花旗松素对H9C2细胞氧化应激保护作用机制研究

背景　氧化应激（OS）与缺血性心脏病（IHD）的发生发展密切相关,抗OS损伤在IHD防治中至关重要。花旗松素（Tax）具有抗炎、抗肿瘤、抗OS作用,但其抗OS机制尚未完全明了。目的　探讨Tax对过氧化氢（H2O2）诱导的H9C2心肌细胞OS损伤的保护机制,为OS损伤性疾病的新药研发提供基础依据。方法　2017年3月—2018年3月,将H9C2细胞随机分为对照组〔仅加入0.1%二甲基亚砜（DMSO）〕、H2O2处理组（加入200 μmol/ml H2O2处理12 h）、Tax+H2O2处理组（加入100 μmol/ml Tax预处理6 h,换液后加入200 μmol/ml H2O2处理12 h）、Tax处理组（加入100 μmol/ml Tax处理6 h）。对于对照组、H2O2处理组、Tax+H2O2处理组,采用光学显微镜观察细胞形态,荧光倒置显微镜观察细胞染色情况,RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、骨桥蛋白（OPN）、高迁移率族蛋白1（HMGB1）mRNA表达水平。采用Western blotting法检测对照组、Tax处理组丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路p38、磷酸化p38（p-p38）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）1/2、磷酸化ERK（p-ERK）1/2、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）表达水平。结果　与对照组相比,H2O2处理组细胞出现肥大,呈圆形及不规则形状,而Tax+H2O2处理组细胞形态接近梭形,细胞变圆及肥大程度较H2O2处理组轻,不规则形态细胞数量减少。H2O2处理组绿色荧光量较对照组明显增多且亮度增强,而Tax+H2O2处理组较H2O2处理组绿色荧光量及亮度减弱。Tax+H2O2处理组iNOS mRNA、OPN mRNA表达水平低于对照组、H2O2处理组（P<0.05）;Tax+H2O2处理组HMGB1 mRNA表达水平高于对照组、H2O2处理组（P<0.05）。Tax处理组MAPK信号通路p38表达水平低于对照组,p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK表达水平高于对照组（P<0.05）。结论　Tax可以改善H2O2对细胞造成的形态学改变并减少细胞内OS水平,其机制可能通过激活MAPK信号通路,激活HMGB1表达,抑制OS相关基因iNOS、OPN的表达来发挥抗OS作用。