激活α7烟碱型乙酰胆碱受体减轻大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤

目的 研究激活α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAchR)对大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤的作用及可能机制.方法 取体外培养7d的原代大脑皮质神经元,随机分为3组:对照组、氧糖剥夺组、PNU-282987(α7nAchR激动剂)组.氧糖剥夺组细胞氧糖剥夺12 h;PNU-282987组用PNU-282987预处理细胞24 h,然后氧糖剥夺12h.采用CCK-8测定3组大脑皮质神经元存活率,比色法检测上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenate,LDH)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧(reactive oxygen species,ROS)产量,蛋白质印迹法检测血红素氧化酶(hemeoxygenase-1,HO-1)、缺氧诱导因子1α (hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达量.结果 与氧糖剥夺组相比,PNU-282987可提高大脑皮质神经元存活率(P＜0.05),降低LDH含量(P＜0.05),抑制细胞凋亡(P＜0.05),降低ROS产量(P＜0.05),同时使HO-1蛋白表达升高、HIF-1α蛋白表达减少(P＜0.05).结论 激活α7nAchR具有抗大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤作用,该作用可能与抗氧化应激有关.     

TRPM7在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡和炎症反应中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道M7 (TRPM7)在七氟烷(Sev)预处理抑制大鼠氧糖剥夺(OGD)海马神经元凋亡和炎症反应中的作用.方法选择出生1d的SD大鼠50只,提取海马神经元,将其分为5组,包括对照组、Sev预处理组(Sev组)、OGD组、Sev预处理+OGD组(Sev+OGD组)和Sev预处理十缓激肽+OGD组(联合组).缺糖缺氧1.5h后复糖复氧,再正常培养24 h后制备OGD模型.对照组海马神经元仅做正常培养;Sev组海马神经元行2％ Sev预处理1 h;OGD组海马神经元仅制备OGD模型;Sev+OGD组神经元行2％ Sev预处理1h,24 h后制备OGD模型;联合组神经元Sev预处理同时在培养基中加入缓激肽(终浓度200 μmol/L),其余处理同Sev+OGD组.正常培养24 h时后,检测海马神经元TRPM7 mRNA和蛋白表达水平、存活率和凋亡率、IL-1β、TNF-α的mRNA及上清蛋白表达水平.结果 与对照组比较,OGD组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),而存活率明显降低(P＜0.05).与OGD组比较,Sev组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而存活率明显升高(P＜0.05).与Sev组比较,联合组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),而存活率显著降低(P＜0.05).结论 Sev预处理可通过缓解神经元TRPM7过度表达,减轻OGD后海马神经元凋亡和炎症反应.     

线粒体生物合成的改变对高糖诱导的活性氧类生成的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖激活受体γ辅助激活因子1α(PGC-1α)对血管内皮细胞内线粒体生物合成的影响,明确线粒体的生物合成对葡萄糖诱导的活性氧类(ROS)生成的影响。方法将原代培养的人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)及小牛主动脉内皮细胞(BAECs)分成四大组,并分别将四组细胞模拟人体正常糖及高糖环境,浓度为5、30 mmol/L进行培养,测量细胞内ROS浓度。结果对BAECs和HUVECs分别进行协方差分析结果显示,在两种细胞中,不同组别之间差异均有统计学意义(P<0.01),不同糖水平对ROS浓度有影响(P<0.05);对BAECs单独进行分析发现,PGC-1α抑制表达组的ROS浓度在正常糖水平下显著低于对照组及空质粒组(P<0.01),高糖水平下也低于对照组及空质粒组(P<0.05);PGC-1α过度表达组的ROS浓度正常糖水平显著高于对照组(P<0.01),与空质粒组相比差异无统计学意义(P>0.05);对HUVECs分析发现,PGC-1α抑制表达组ROS浓度在正常糖水平和高糖水平下均低于空病毒Ad组和对照组(P<0.01);PGC-1αsiRNA转染组的ROS浓度正常糖水平显著高于对照组(P<0.01),与空质粒组差异无统计学意义(P>0.05)。结论高糖组较正常糖组血管内皮细胞产生更多ROS,过度表达PGC-1α后,细胞内ROS浓度显著降低;反之,ROS浓度显著升高。     

大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后NF-κB P50及c-Rel蛋白的表达

目的:探讨Wistar大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后不同时间点NF-κB亚基P50及c-Rel蛋白表达情况.方法:体外培养原代大脑皮质神经元,采用免疫细胞化学鉴定神经元,建立氧糖剥夺/复氧模型,以正常组、OGD 4 h组、OGD 4 h/R 2 h组、OGD 4 h/R 6 h组、OGD 4 h/R 12 h组、OGD 4 h/R 24 h组为实验组,采用免疫细胞化学、Western印迹检测NF-κB亚基P50及c-Rel蛋白表达.结果:(1)免疫细胞化学(神经元烯醇化酶相关抗原及β-tubulin 3)鉴定所培养的细胞为神经元;(2)免疫细胞化学、Western印迹结果显示OGD 4 h组NF-κB P50蛋白表达开始增加明显高于正常组(P<0.05),0GD 4 h/R 2 h组、OGD 4 h/R 6 h组NF-κB P50蛋白表达持续性升高,并在复氧后6 h达高峰(P<0.01),此后逐渐下降,至OGD 4 h/R 12 h时与正常组有显著差异(P<0.05),OGD 4 h/R 24 h NF-κB P50蛋白表达降低与正常组比较无统计学差异(P<0.05);(3)NF-κB c-Rel蛋白表达OGD 4 h组与正常组无差异(P>0.05),OGD 4 h/R 2 h至OGD 4 h/R 12 h表达持续增加,并在复氧后12 h达高峰(P<0.01),OGD 4 h/R 24 h仍未恢复到正常水平(P<0.05).结论:大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后激活了NF-κB P50及c-Rel蛋白的表达,并具有时间相关性.     

6-姜酚对海马神经元缺糖缺氧后SGK1表达的影响

目的观察6-姜酚对海马神经元氧糖剥夺（OGD）损伤的保护作用,并对其作用机制进行初步的探讨。方法建立原代培养的海马神经元氧糖剥夺（OGD）模型,实验分为4组：正常对照组、OGD组、6-姜酚（10μmol/L）＋OGD处理组和6-姜酚（30μmol/L）＋OGD处理组。采用MTT检测细胞活性,Western bolt方法检测SGK1蛋白表达变化。结果1~90μmol/L浓度的6-姜酚对正常条件培养海马神经元的存活率（MTT检测）无明显影响,经OGD处理后,海马神经元的存活率明显降低（P〈0.01）,给予10μmol/L和30μmol/L浓度的6-姜酚可使OGD处理的海马神经元存活率升高（P〈0.05）。Western blot显示OGD模型组SGK1蛋白表达明显减少,与正常对照组相比有明显的差异性;预先给予6-姜酚可显著提高细胞中SGK1蛋白表达,与OGD组相比有明显差异性,并且呈现剂量依赖性。结论6-姜酚对OGD所致海马神经元损伤有保护作用,并且SGK1这种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶也参与6-姜酚对OGD所致神经元损伤的保护作用过程。     

细胞外信号调节激酶对氧糖剥夺后大鼠海马神经元的作用研究

目的:研究细胞外信号调节激酶对氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)后大鼠海马神经元的作用。方法:建立培养乳鼠海马神经元OGD模型,并分为正常对照组、OGD组、PD 98059 10μmol/L、30μmol/L组。流式细胞仪Annexin V/PI双染色法检测神经元细胞凋亡率,Western blot法检测ERK1/2、pERK1/2的表达。结果:与正常对照组相比,OGD组神经元的凋亡率升高(P<0.01),pERK1/2的表达降低(P<0.01),与OGD组相比,PD98059组神经元凋亡率明显升高(P<0.01),pERK1/2的表达明显降低(P<0.01),30μmol/L组较10μmol/L组凋亡率升高及pERK1/2表达降低更为显著(P<0.01),各组ERK含量无明显变化(P>0.05)。结论:ERK可能参与氧糖剥夺后的神经元凋亡,抑制ERK通路可促进神经元凋亡。     

血红素氧合酶-1对体外氧糖剥夺海马神经元Caspase-12表达抑制作用的研究

目的研究HO-1对氧糖剥夺海马神经元Caspase-12的影响及其机制.方法将培养7d的大鼠海马神经元随机分为4组：正常培养组（C组）、正常培养＋血晶素组（C＋H组）、氧糖剥夺组（D组）、氧糖剥夺＋血晶素组（D＋H组）.C组正常培养方法培养.C＋H组在正常培养的神经元培养液中加入血晶素使其终浓度为10μmol/L后按正常培养24h.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D＋H组神经元用10μmol/L血晶素处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.进行神经元纯度鉴定,细胞存活率的检测,HO-1、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和神经元凋亡的检测.结果C＋H组神经元HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3、神经元存活率和神经元凋亡率变化无统计学意义（P〉0.05）;D组神经元HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3高于C组（P〈0.01）,神经元存活率低于C组（P〈0.01）,神经元凋亡率高于C组（P〈0.01）;D＋H组神经元HO-1表达高于D组（P〈0.01）,Caspase-12、Caspase-3低于D组（P〈0.01）,神经元存活率高于D组（P〈0.01）,神经元凋亡率低于D组（P〈0.01）.结论HO-1可抑制氧糖剥夺海马神经元Caspase-12的表达,从而抑制神经元的凋亡.     

氧糖剥夺对小鼠小胶质细胞NKG2D受体及其配体表达的影响

目的 探究自然杀伤细胞活化受体（NKG2D）在氧糖剥夺损伤小胶质细胞中的表达变化及炎症反应中的潜在作用。方法 建立小鼠神经元细胞HT22氧糖剥夺(OGD)模型,造模19小时后复氧复糖,分别收集正常条件培养基(Control)和OGD培养基(Model)刺激小鼠BV2小胶质细胞。CCK-8法检测HT22和BV2细胞活性;qPCR检测BV2细胞中NKG2D受体信号通路及炎症因子表达;ELISA法检测BV2细胞培养上清中炎症因子含量。结果 OGD可介导HT22神经元细胞存活率明显下降（P＜0.01）,但OGD上清对BV2细胞活性无明显影响（P＞0.05）。与Control组比较, NKG2D受体及其H60配体、接头蛋白DAP10的mRNA表达水平明显上升（P＜0.01）,但RAE-1与MULT1配体未见明显变化（P＞0.05）;同时,肿瘤坏死因子（TNF-α）在Model组BV2细胞中的mRNA水平及培养基中的蛋白含量均明显上升（P＜0.01）。结论 氧糖剥夺可诱导BV2细胞H60/NKG2D、下游效应器DAP10及炎症因子表达。提示NKG2D受体信号通路可能在脑缺血后小胶质细胞的炎症反应中发挥重要作用。     

HO-1对氧糖剥夺海马神经元线粒体运动调节蛋白的影响

目的 研究HO-1对氧糖剥夺海马神经元线粒体运动调节蛋白的影响.方法 将培养7 d的大鼠海马神经元随机分为4组:正常培养组(C组)、正常培养+血晶素组(C+H组)、氧糖剥夺组(D组)、氧糖剥夺+血晶素组(D+H组).C组正常培养方法 培养.C+H组在正常培养的神经元培养液中加入血晶素使其终浓度为10μmol/L后按正常培养24 h.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D+H组神经元用10μmol/L血晶素处理24 h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.进行神经元纯度鉴定,细胞存活率,HO-1-mRNA表达,HO-1、Mirol、Miro2和Milton蛋白表达,神经元凋亡的检测.结果 C+H组神经元H0-1-mRNA和HO-1表达高于C组(P＜0.01),Mirol、Mirio2和Milton蛋白表达高于C组(P＜0.01),神经元存活率和神经元凋亡率变化无统计学差异(P＞0.05);D组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于C组(P＜0.01),Mirol、Miro2和Milton蛋白高于C组(P＜0.01),神经元存活率低于C组(P＜0.01),神经元凋亡率高于C组(P＜0.01);D+H组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于D组(P＜0.01),Mirol、Miro2和Milton蛋白高于D组(P＜0.01),神经元存活率高于D组(P＜0.01),神经元凋亡率低于D组(P＜0.01).结论 HO-1增加海马神经元线粒体运动调节蛋白Mirol、Miro2和Milton的表达,抑制神经元的凋亡.     

七氟烷后处理对原代海马神经元氧糖剥夺/复氧损伤及自噬的影响

目的 探讨七氟烷后处理对原代海马神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤、氧化应激及自噬的影响。方法 取(18±0.5)d孕鼠子宫内胎鼠海马组织,收集海马神经元进行培养,7d后培养的海马神经元随机分为3组：正常对照组(CON组)、氧糖剥夺/复氧组(OGD/R组)、七氟烷后处理组(OGD/R+SEVO组)。CON组正常培养;OGD/R组：氧糖剥夺1.5 h,复氧复糖24 h,建立OGD/R损伤模型;OGD/R+SEVO组经氧糖剥夺后即刻予2.4%七氟烷后处理1 h,复氧复糖23 h。处理结束后,比色法检测各组乳酸脱氢酶(LDH)的活性,原位末端标记法(TUNEL)检测各组神经元凋亡变化,免疫荧光法检测各组神经元线粒体活性氧和微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达,Western blot检测丝氨酸/苏氨酸激酶(PINK1)、E3泛素连接酶(Parkin)的表达。结果 与CON组比较,OGD/R组LDH释放增加(P<0.01),神经元凋亡增加,线粒体活性氧和自噬标志性蛋白LC3B表达增加(P<0.01), PINK1蛋白和Parkin蛋白表达上调(P<0.001,P<...     

胰岛素对氧糖剥夺诱导大鼠脑神经元损伤的改善作用

目的:探讨胰岛素对氧糖剥夺诱导新生大鼠脑皮质神经元损伤的改善作用.方法:将培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为3组,A组为正常对照组,B组采用氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)处理,C组采用胰岛素预处理加OGD/R处理,B、C组在OGD/R后0、1、6、12、24 h各时间点,以MTT法检测细胞活性.采用脱氧尿嘧啶缺口末端标记法检测神经元凋亡情况,采用免疫细胞化学方法检测生长相关蛋白(GAP-43)、脑源性神经营养子(BDNF)的表达.结果:①B组的神经元细胞活性较A组明显下降,C组细胞活性明显高于B组,3组比较差异有统计学意义(P<0.05).②B组凋亡神经元细胞明显多于正常对照组,OGD/R后6、12、24 h,C组凋亡细胞数日明显少于B组,3组比较差异有统计学意义(P<0.05).③B组GAP-43、BDNF的表达较正常对照组明显增加,OGD/R后6、12、24 h,C组GAP-43、BDNF表达较B组明显增加.结论:胰岛素预处理可明显提高OGD/R后神经元的存活率,抑制神经元凋亡,使GAP-43、BDNF表达增加,实现神经元损伤的改善作用.     

脱氟烷诱导神经元HO-1mRNA表达信号通路的研究

目的 研究脱氟烷(desflurane)诱导氧糖剥夺损伤神经元血红素氧合酶-1表达的信号转导通路,探讨脱氟烷脑保护机制.方法 将96孔和6孔培养板上培养7d的大鼠海马神经元随机分为6组(n=12):正常培养组(C组),神经元按正常培养方法培养;氧糖剥夺组(I/R组),神经元缺糖缺氧后复糖复氧处理;氧糖剥夺 6% desflurane组(Des组),神经元缺糖缺氧的同时接受6% desflurane麻醉;氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L tin-protoporphyrin (HO-1抑制剂)组(Tin组)、氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L LY 294002 (PI3-K抑制剂)组(LY组)、氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L Triciribin (Akt抑制剂)组(Tri组)神经元进行缺糖同时分别加入tin-protoporphyrin、 LY 294002或Triciribin使其终浓度均为10μmol/L后同D组处理.96孔培养板的神经元进行细胞存活率的检测.6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡、HO-1mRNA表达、PI3-K和Akt蛋白表达的检测.结果 Des组PI3K和Akt蛋白表达增加,HO-1mRNA表达增加,神经元存活率增加、凋亡率降低(vs I/R组,P<0.01).Tin组PI3K和Akt蛋白表达变化不明显(vs Des组,P0.05), HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加 (vs Des组,P<0.01). LY组PI3K和Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01). Tri组PI3K表达变化不明显(vs Des组,P0.05), Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01).结论 Desflurane通过PI3-K/Akt信号转导通路诱导大鼠海马神经元HO-1表达,保护了神经元.     

体外培养大鼠皮层神经元和星形胶质细胞氧糖剥夺后DDR1的表达情况

目的:探讨DDR1蛋白在氧糖剥夺后的神经元细胞及星形胶质细胞中的表达情况,推测可能机制。方法:采用SD孕鼠的胚鼠皮层培养神经元,采用新生SD大鼠皮层培养星形胶质细胞。建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型并随机分为神经元正常对照组、神经元OGD组、星形胶质细胞正常对照组和星形胶质细胞OGD组。噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性;免疫荧光染色及Western blot方法检测各组DDR1的表达情况。结果:与正常对照组相比,OGD组细胞形态发生明显改变,MTT法测得细胞活性值降低;与神经元正常对照组相比,神经元OGD组的DDR1蛋白表达水平增加(P<0.05);与星形胶质细胞正常对照组相比,星形胶质细胞OGD组的DDR1蛋白表达水平无明显增加(P>0.05)。结论:OGD处理可诱导DDR1蛋白在大鼠皮层神经元中的表达,提示DDR1蛋白可能参与OGD后细胞凋亡等病理生理过程。     

HO-1对氧糖剥夺海马神经元的保护作用及机制的研究

目的研究HO-1对氧糖剥夺海马神经元的影响及其机制.方法将培养7d的大鼠海马神经元随机分为4组：正常培养组（C组）、正常培养＋血晶素组（C＋H组）、氧糖剥夺组（D组）、氧糖剥夺＋血晶素组（D＋H组）.C组正常培养方法培养.C＋H组在正常培养的神经元培养液中加入血晶素使其终浓度为10μmol/L后按正常培养24h.D组神经元进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.D＋H组神经元用10μmol/L血晶素处理24h后进行缺糖、缺氧后复糖、复氧处理.进行神经元纯度鉴定,细胞存活率,HO-1-mRNA表达,HO-1、Apaf-1、Caspase3蛋白表达,细胞色素C和神经元凋亡的检测.结果C＋H组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Apaf-1、Caspase3、细胞色素C、神经元存活率和神经元凋亡率变化无统计学意义（P〉0.05）;D组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于C组（P〈0.01）,Apaf-1、Caspase3、细胞色素C高于C组（P〈0.01）,神经元存活率低于C组（P〈0.01）,神经元凋亡率高于C组（P〈0.01）;D＋H组神经元HO-1-mRNA和HO-1表达高于D组（P〈0.01）,Apaf-1、Caspase3、细胞色素C低于D组（P〈0.01）,神经元存活率高于D组（P〈0.01）,神经元凋亡率低于D组（P〈0.01）.结论HO-1降低细胞色素C的释放和Apaf-1、Caspase3的表达,抑制神经元的凋亡.     

大鼠原代神经元中依达拉奉对糖氧剥夺损伤的保护及对ROS/TXNIP/NLRP3通路的影响

目的 探讨依达拉奉后处理对神经元糖氧剥夺损伤的保护作用及对活性氧(ROS)/硫氧还蛋内结合蛋白（TXNIP)/NOD样受体相关蛋白3( NOD-like receptor associated protein 3, NLRP3)信号通路的影响。方法 培养新生SD大鼠皮质神经元,经免疫荧光染色鉴定后随机分为神经元组、依达拉奉组、糖氧剥夺组、糖氧剥夺+依达拉奉组4组。各组神经元在完成处理后以CCK-8试剂盒检测神经元活力;以细胞凋亡试剂盒检测神经元凋亡情况;以ELISA试剂盒检测神经元ROS产生情况;以蛋白免疫印迹法检测ROS/TXNIP/NLRP3信号通路相关蛋白的表达水平。结果 神经元缺糖缺氧后细胞活力显著降低,依达拉奉处理后又显著上升,差异有统计学意义（P＜0.01）;糖氧剥夺后,神经元凋亡水平、ROS含量、ROS/TXNIP/NLRP3通路相关IL-1β、TXNIP、IL-18、Caspase-1、ASC和NLRP3蛋白表达水平升高,依达拉奉处理后又显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 依达拉奉对神经元糖氧剥夺损伤具有保护作用,可能与其对R0S/TXN1P/NLKP3信号通路的抑制有关。     

Orexin-A对缺氧状态下海马神经元的影响及其机制

目的通过建立大鼠海马神经元氧糖剥夺(OGD)模型,探讨orexin-A(OXA)对缺氧状态海马神经元的作用及其潜在机制。方法 Wistar大鼠海马神经细胞分为对照组、氧糖剥夺组(OGD组)、氧糖剥夺加OXA组(OGD+OXA组,包括OGD+OXA 1 nmol/L组、OGD+OXA 3 nmol/L组、OGD+OXA 10 nmol/L组、OGD+OXA100 nmol/L组)、氧糖剥夺加U0126组(OGD+U0126组)和氧糖剥夺加OXA、U0126组(OGD+OXA+U0126组)。取原代海马神经元培养72 h后,氧糖剥夺以建立缺氧损伤模型,后分别加入不同终浓度的OXA(1、3、10、100 nmol/L),于48 h观察OXA对海马神经元凋亡率的影响;并利用U0126阻滞ERK1/2通路,通过Western blotting及细胞凋亡率检测,探究OXA对海马神经元凋亡率影响的分子机制。结果与OGD组相比,OGD+OXA 3 nmol/L组、OGD+OXA 10 nmol/L组和OGD+OXA 100 nmol/L组的细胞凋亡率均显著增加(P<0.01);OGD+OXA10 nmol/L组和OGD+OXA 100 nmol/L组的细胞凋亡率高于OGD+OXA 3 nmol/L组(P<0.01),而二者之间无统计学差异(P>0.05)。U0126预处理后,OGD+U0126组海马神经元的凋亡率明显低于OGD组(P<0.01);OGD+U0126+OXA组的海马神经元凋亡率明显低于OGD+OXA 100 nmol/L组(P<0.01)。结论高浓度OXA对海马神经元有损害作用,并加重缺氧状态下的神经元损害,其作用机制与OXA过度激活ERK1/2信号通路有密切关系。     

NF-κB靶向性哑铃形"圈套"ODNs抑制大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后TNF-α的表达

目的 设计合成靶向哑铃形寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)圈套,检测其对大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后TNF-α表达的抑制效应.方法 原代大脑皮质神经元体外培养,建立氧糖剥夺/复氧模型,以正常组、OGD4 h/R6 h组、NF-κB decoy ODNs组、无关decoy ODNs组、脂质体组为实验组,采用Western blot检测NF-κB p65蛋白表达,分别采用免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反廊法(RT-PCR)检测FNF-α蛋白和mRNA表达.结果 Westernblot检测显示NF-κB decoy ODNs组NF-κB P65蛋白表达明显低于OGD4 h/R6 h组、脂质体组、无关decoy ODNs组(P<0.05),与OGD4 h/R6 h组、脂质体组、无关decoy组相比NF-κB decoy ODNs组TNF-α蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05);而脂质体组、无火decoy ODNs组对NF-κB P65蛋白、TNF-α蛋白和mRNA表达未见抑制(P>0.05).结论 靶向性NF-κB的哑铃形圈套ODNs可有效抑制大脑皮质神经元OGD/R后炎症因子TNF-α mRNA及蛋白的表达.     

骨髓间充质干细胞培养液对大鼠皮层神经元氧糖剥夺损伤的保护作用及机制

目的：探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）培养液对大鼠皮层神经元氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤后细胞存活的作用及其影响机制。方法：分别取清洁级6~8周60~80 g SD大鼠和孕16~18 d孕鼠进行BMSCs和皮层神经元培养。培养第5天的皮层神经元建立OGD损伤模型,实验随机分为4组：氧糖剥夺组（OGD组）;氧糖剥夺+BMSCs培养液组（OGD+CM组）,神经元OGD后培养基更换为BMSCs培养液（CM）继续培养;OGD+CM+LY294002组及OGD+LY294002组,以上2组分别加入PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002。各组培养12 h后分别通过电子显微镜和光学显微镜观察神经元形态结构。各组培养2 h后分别检测AKT、pAKT（Ser473）、激活型Casepase-3蛋白表达量,在培养48 h后检测神经元的存活率。结果：OGD培养后的神经元突起断裂、缩短、溶解,线粒体、内质网细胞器肿胀。OGD+LY294002组、OGD+CM组分别与OGD组相比,OGD+LY294002组的细胞存活率和pAKT（Ser473）蛋白表达降低（t=3.679,P=0.021;t=2.938,P=0.042）,而激活型Casepase-3蛋白表达升高（t=4.733,P=0.009）;OGD+CM组的细胞存活率和pAKT（Ser473）蛋白表达升高（t=6.630,P=0.003;t=3.288,P=0.030）,而激活型Casepase-3蛋白表达降低（t=3.454,P=0.026）。与OGD+CM组相比,OGD+CM+LY294002组细胞存活率和pAKT（Ser473） 蛋白表达降低（t=14.255,P=0.000;t=3.872,P=0.018）,而激活型Casepase-3蛋白表达升高（t=6.699,P=0.003）。结论：BMSCs对OGD损伤后的神经元具有保护作用,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通道的激活相关。     

Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响

目的:探讨Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响?方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L)?Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L)?高糖组(HG组,葡萄糖浓度30mmol/L)和高糖+Resveratrol组(HG+Res组,葡萄糖浓度30 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L),各组细胞分别培养72 h,用比色法测定细胞上清液丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,蛋白含量/细胞数比值评估系膜细胞大小,Western blot法检测细胞内p27蛋白表达的变化?结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均明显上调(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均降低(P < 0.05)?②与NC组相比,HG刺激72 h后,大鼠肾小球系膜细胞肥大?p27蛋白表达明显增加(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞细胞肥大减轻?p27蛋白表达减少(P < 0.05)?Res组和NC组之间p27蛋白表达无统计学意义(P > 0.05)?结论:Resveratrol可能通过缓解高糖诱导系膜细胞的氧化应激?抑制p27蛋白高表达,减轻糖尿病肾脏疾病早期的肾脏肥大?     

体外培养的大鼠皮层神经元氧糖剥夺后Sema3A;Nrp-1 mRNA表达上调与轴突网络损伤的关系

 【目的】 研究体外培养的大鼠皮层神经元氧糖剥夺(OGD)处理后,Sema3A,Nrp-1 mRNA的表达变化及其与神经元轴突网络损伤的关系。【方法】 体外培养新生SD大鼠皮层神经元,随机分为正常对照组和OGD处理组：噻唑蓝(MTT)比色法测定神经元活性;βⅢ-tubulin免疫荧光染色观察轴突网络形态学变化,Real-time PCR 检测Sema3A及其受体Nrp-1 mRNA的表达;βⅢ-tubulin免疫荧光染色观察外源性Sema3A蛋白对神经元轴突生长的影响。【结果】 随着OGD时间的延长,神经元活性呈梯度下降(P < 0.01);OGD处理4 h可导致神经元轴突网络发生明显的崩解损伤;OGD处理4 h、6 h后,Sema3A mRNA表达水平显著上调(P < 0.01);OGD处理6 h后,Nrp-1 mRNA表达水平显著上调(P < 0.01);经外源性Sema3A(5 mg/mL)蛋白处理,可观察到神经元的轴突生长及延伸受到明显抑制(P < 0.01)。【结论】 OGD处理可诱导Sema3A;Nrp-1 mRNA表达上调,并且外源性Sema3A蛋白可在体外抑制轴突生长,提示Sema3A/Nrp-1可能参与OGD处理后轴突网络崩解,细胞凋亡等病理生理过程。