hepaCAM基因对膀胱癌细胞体外生物学的影响

目的 研究野生型hepaCAM基因对人类膀胱癌T24细胞体外生物学影响.方法 脂质体法转染pEGFP-N2-hepaCAM质粒入T24细胞,激光共聚焦显微镜检测其蛋白定位;筛选稳定表达细胞株,Western blot检测蛋白表达.细胞黏附、基质胶侵袭实验及MTT实验研究该基因对细胞黏附力、活动力及增殖力的影响.结果 hepaCAM在单个细胞中分布在细胞核周边区域,相互连接细胞中主要分布于细胞间相互接触区域.获得稳定表达hepaCAM基因的T24细胞.体外黏附实验、基质胶侵袭实验证明实验组细胞黏附力及活动力明显高于空白组及阴性对照组(P＜0.01).MTT法检测转染hepaCAM基因细胞增殖力明显低于空白组及阴性对照组(P＜0.01).结论 hepaCAM基因可显著抑制人类膀胱癌T24细胞恶性行为,可能是通过增强细胞-基质间黏附及抑制细胞增殖力,从而对抗肿瘤细胞的浸润和转移.     

姜黄素对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

日的探讨姜黄素对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响。方法培养人膀胱癌T24细胞,施加不同浓度姜黄素,观察对细胞凋亡的影响;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率（碘化丙啶染色）。结果姜黄素各组较对照组凋亡率升高,存在剂量-效应关系。结论姜黄素促进人膀胱癌T24细胞凋亡。     

沉默ABCG2增强膀胱癌T24对X线的敏感性研究

目的明确沉默ABCG2后膀胱癌T24对X线的敏感性是否增强。方法常规培养T24,经4 Gy X线照射后,从存活能力、克隆形成、迁移和侵袭能力四个方面评价了沉默ABCG2后T24对X线敏感性的变化。结果经X线照射,沉默ABCG2后,T24的存活能力、克隆形成、迁移、侵袭能力显著减弱(P<0.05)。结论沉默ABCG2增强了膀胱癌T24对X线的敏感性,ABCG2的抑制剂可能成为膀胱癌的放疗增敏剂。     

瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌T24细胞Survivin表达的影响

目的研究瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌T24细胞的抑制作用及生存素(Survivin)表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物处理T24细胞,分别用MTT法检测膀胱癌细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测药物作用后细胞中Survivin蛋白的表达。结果瑞香狼毒水提取物干预细胞后,①膀胱癌T24细胞增殖受到抑制,抑制效应呈剂量依赖性并随时间的延长逐渐升高;②瑞香狼毒水提取物可以促进膀胱癌T24细胞的凋亡;③膀胱癌T24细胞中的Survivin蛋白表达下降。结论瑞香狼毒水提取物可以通过下调Survivin蛋白的表达从而抑制膀胱癌T24细胞增殖,促进其凋亡,并具有浓度和时间依赖性。     

HepaCAM基因对人膀胱癌细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究hepaCAM基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响.方法:运用脂质体转染方法,将pEGFP-N2-hepaCAM质粒转入T24细胞株,经G418筛选获得稳定表达的细胞株;RT-PCR及Western blot方法检测目的基因和蛋白表达;MTT法及克隆形成实验研究hepaCAM基因对T24细胞体外生长的作用;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR技术测定周期调控蛋白CyclinD1的mRNA表达变化.结果:RT-PCR和Western blot方法分别检测到hepaCAM的基因表达和蛋白表达,MTT检测转染hepaCAM基因的细胞生长速度较对照组和空载体组明显减慢(P<0.01),克隆形成率明显小于对照组和空载体组(P<0.01).细胞周期中G0/G1期比例明显增高(P<0.05),而S期比例减少;CyclinD1 mRNA表达明显下调(P<0.05).结论:HepaCAM基因通过阻滞细胞于G0/G1期,减少CyclinD1 mRNA表达,抑制T24细胞的增殖.     

甘草苷对人膀胱癌T24细胞p21、PTEN的表达影响

目的：探讨甘草苷（Liquiritin,LQ）对膀胱癌细胞T24 p21、PTEN的表达影响及其可能的抗癌机制。方法：实验分组：实验分为对照组,LQ 20μg/mL,50μg/mL,100μg/mL组。用RT-PCR和RT-qPCR检测p21、PTEN的mRNA表达,Westernblot检测LQ对T24细胞内p21、PTEN蛋白的表达影响。结果：与对照组比较,LQ 20μg/mL,50μg/mL,100μg/mL组PTENmRNA和蛋白表达均升高,LQ50μg/mL,100μg/mL组p21mRNA表达升高,LQ 20μg/mL,50μg/mL,100μg/mL组p21蛋白表达明显升高,差异有统计学意义。结论：LQ能诱导T24细胞p21、PTEN的表达,其抗癌机制可能与此相关。     

Neuritin过表达对BMSCs增殖的影响

目的：为全面了解Neuritin的功能,探讨Neuritin对细胞增殖的影响。方法：利用已构建Neuritin真核表达载体pcDNA3.1（-）A-Neuritin,转染BMSCs,通过MTT、细胞计数等观察Neuritin过表达对BMSCs增殖的影响。结果：MTT检测结果显示,BMSCsneu约在第3天进入对数生长期,第5天进入平台期;细胞计数结果显示,Neuritin过表达与BMSCs的数目呈负相关,并且在各检测点上,稳定表达Neuritin的BMSCs数目均低于对照组。结论：Neu-ritin过表达抑制了BMSCs的增殖。     

SIM2基因在膀胱癌组织中的表达及临床意义

目的 利用在线生物信息数据库,组织和细胞水平实验探究SIM2基因在膀胱癌中的表达及涉及的临床意义。方法 通过UALCAN数据库分析SIM2基因在膀胱癌患者和正常膀胱组织中的表达差异,SIM2基因表达与膀胱癌患者淋巴结转移、分期、组织亚型等临床病理参数的关系;GEPIA数据库、HPA数据库、组织芯片和定量PCR技术验证SIM2基因在膀胱癌患者中的mRNA和蛋白表达差异;利用String数据库分析SIM2基因的蛋白相互作用及调控网络;Linked Omics数据库做SIM2相关分子的富集分析;TIMER和TISIDB数据库分析SIM2基因与肿瘤微环境免疫细胞浸润的关系。结果 UALCAN、GEPIA和HPA数据库结果显示,膀胱癌组织中SIM2基因的mRNA和蛋白水平的表达明显高于正常膀胱组织(P<0.05);UALCAN在线工具分析揭示,SIM2的表达与患者的淋巴结转移、病理类型、分期密切相关;免疫组织化学及定量PCR湿实验结果显示,SIM2蛋白和mRNA表达水平在膀胱癌组织中明显升高(P<0.05),但SIM2的表达与膀胱癌患者TNM分期和病理分级无相关性;String在线分...     

干细胞转录因子Sox2和Oct4在肺癌患者中的表达及临床意义

目的：探讨干细胞关键转录因子Sox2和Oct4在肺癌患者中的表达情况及其临床意义。方法选取2010年1月~2013年12月于河北北方学院附属第一医院(以下简称“我院”)就诊的肺癌患者60例,同时以同期我院存档的20例正常肺组织作为对照,分别采用免疫组织化学法检测肺癌组织与正常肺组织中的Oct4和Sox2的表达情况。比较不同病理分期、分型、年龄、性别的肺癌患者肺组织中Sox2、Oct4的表达,分析肺癌组织中二者的关系。结果Sox2、Oct4在20例正常肺组织中表达均为阴性,在60例肺癌组织中,Sox2阳性28例,阳性表达率为46.7%,Oct4阳性43例,阳性表达率为71.7%。病理分期、病理分型与分化程度不同的患者其Sox2、Oct4的阳性表达率不同,差异均有统计学意义(P<0.05),而不同年龄、性别的患者Sox2、Oct4的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05);Sox2与Oct4在肺癌组织中的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Sox2与Oct4在肺癌组织中呈明显高水平表达,并与肿瘤的病理分型、分期及分化程度密切相关,Sox2、Oct4在肺癌的发生、发展过程中可能起着重要的作用。     

Gadd45a表达质粒的构建及在人类T细胞中的表达

目的:构建Gadd45a表达质粒,并诱导该质粒在人类T细胞中的表达.方法:采用反转录PCR法从人胚胎干细胞中扩增Gadd45a的蛋白质编码框,将之克隆至pcDNA3.1载体后,利用电穿孔方法将构建好的表达质粒pcDNA3.1-Gadd45a和空白质粒pcDNA3.1分别转染至Jurkat细胞或正常人CD4+T细胞,分别...     

Expression of transcription factor Oct4 in bladder cancer cell line T24 and its effects on the biological characteristics of the cells

The expression of octamer binding factor 4 （Oct4） gene in bladder cancer cell line T24 and its effects on the biological characteristics of the cells were investigated. RT-PCR and Western blot were employed to detect the expression of Oct4 in T24 cells. The changes of biological characteristics in T24 cells were analyzed before and after gene-silencing by Boyden chamber and MTT. The results showed that the expression of Oct4 gene was detectable in T24 cells by RT-PCR and Western blot. The expression of Oct4 gene and protein was down-regulated by siRNA, and average number of transwell cells in interference group, negative control group and blank control group was 101.40±54.56, 104.20± 10.03 and 111.00±11.90, respectively. There was significant difference in the proliferation abilit,） of the cells from 48 h, 72 h to 96 h after the interference by siRNA between interference group and negative group or blank control group （P〈0.05）. It was suggested that Oct4 gene was related with proliferation ability of T24 cells, but not with invasive capability.     

siRNA沉默膀胱癌T24细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的研究

目的 研究siRNA对膀胱癌细胞T24 DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的沉默作用.方法 将筛选出的siRNA转染入膀胱癌T24细胞分为空白组、脂质体组、阴性对照组和siRNA组,分别运用RT-PCR、Western blot检测转染后不同时段DNMT1 mRNA水平、蛋白水平变化.结果 筛选出的siRNA转染膀胱癌T24细胞DNMT1 24 h开始出现mRNA减少,24 h、48 h、72 h分别降至(66.05±4.87)％、(39.36±4.53)％和(40.86±4.81)％(P＜0.05).转染后24 h、48 h、72 h蛋白水平分别降至(90.21±3.68)％、(71.45±3.44)％和(67.74±3.38)％(P＜0.05).结论 siRNA能有效地沉默膀胱癌细胞T24 DNMT1的表达.     

瑞香狼毒水提物小鼠血清对人膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的：探讨瑞香狼毒水提物（SCLA）的抗癌作用及机制。方法：以不同剂量SCLA灌胃给药后,于不同时间采集小鼠血清,处理体外培养的人膀胱癌T24细胞,用MTS比色法,于酶标仪上测定吸光度值,观察SCLA对细胞增殖的影响。结果：SCLA小鼠血清显著降低T24细胞增殖。结论：瑞香狼毒抑制人膀胱癌T24细胞增殖,可能成为膀胱癌新的治疗药物。     

靶向沉默Notch1基因对膀胱癌细胞系T24增殖的影响

目的探讨Notch1基因沉默对人膀胱癌细胞增殖的影响。方法用pGenesil质粒构建靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA1,并将其转染到膀胱癌细胞系T24中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测Notch1沉默后膀胱癌细胞生长变化、细胞周期和凋亡情况。逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记法（Western Blot）检测Notch1基因的mRNA和蛋白在转染前后表达变化。结果转染psiRNA1质粒后T24细胞的生长受到显著抑制,呈一定的时间依赖性（60?h内）,凋亡率增加,G0/G1期细胞明显增多（未转染组、空载体组、阴性对照组）,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且Notch1基因在mRNA和蛋白水平表达相对于对照组明显下调（P＜0.05）。结论沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖,Notch1在膀胱癌中可能具有癌基因的作用。     

染料木黄酮诱导膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究

目的　研究染料木黄酮对人T2 4膀胱癌细胞的抑制作用和诱导凋亡作用 ,并探讨其作用机制。方法　将不同浓度的染料木黄酮作用于人T2 4膀胱癌细胞 ,用MTT法检测其有效作用浓度 ,分别采用透射电子显微镜、瑞氏染色、Hoechest332 5 8荧光染色、流式细胞仪观察和检测T2 4细胞凋亡情况。结果　MTT法测得染料木黄酮对T2 4细胞的IC50 值为32 80mg·L-1,浓度为 2～ 80mg·L-1的染料木黄酮具有诱导人T2 4膀胱癌细胞凋亡的作用 ,且随药物作用时间延长凋亡率逐渐增加。结论　染料木黄酮具有抗膀胱癌作用 ,其重要作用机制之一是诱导人T2 4膀胱癌细胞凋亡     

维生素K3对人膀胱癌细胞株T24凋亡的诱导作用

目的 观察不同浓度的维生素K3(VK3)对人膀胱癌细胞株T24凋亡的诱导作用.方法 采用噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度VK3(0,2,5,10,20 μmol/L)对T24细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测不同浓度的VK3对细胞凋亡率的影响.结果 0,2,5,10,20 μmol/L VK3作用T24细胞48 h后,生长抑制率分别为(5.80±0.038)%,(13.30±0.036)%,(26.55±0.032)%,(42.58±0.028)%和(65.35±0.034)%,细胞凋亡率分别为(2.86±0.4)%,(5.16±0.7)%,(10.85±1.1)%,(23.01±0.8)%和(75.80±1.2)%,其中10 μmol/L,20 μmol/L VK3对T24细胞生长有明显抑制作用(P<0.05). 结论 10-20 μmol/L VK3在体外作用48 h后可明显地诱导膀胱癌T24细胞株发生凋亡.     

莲心碱对膀胱癌细胞T24增殖及其周期的调控

目的：通过莲心碱作用于膀胱癌细胞T24,研究其对膀胱癌细胞T24增殖的影响。方法使用不同浓度的莲心碱处理膀胱癌细胞T24,通过CCK-8实验及克隆形成实验,检测莲心碱对细胞增殖的影响;对细胞进行 PI染色后,使用流式细胞仪,检测莲心碱对T24细胞周期的影响;通过实时定量PCR,检测莲心碱作用后T24细胞的 p21基因mRNA的改变。结果莲心碱对膀胱癌细胞T24增殖有明显的抑制作用,各剂量组（1．5625、3．1250、6．2500、12．5000、25．0000μg/mL）与甲醇对照组差异有统计学意义（P＜0．05）,并呈剂量依赖性;细胞周期检测结果显示,莲心碱将 T24细胞阻滞在 S期;实时定量 PCR检测结果显示,莲心碱提高T24细胞 p21基因的mRNA。结论莲心碱对膀胱癌细胞T24具有增殖抑制并将其阻滞在 S期,该作用机制可能与 p21表达上调有关。     

siRNA沉默膀胱癌肝素酶基因对T24细胞增殖及MMP-2表达的影响

目的研究siRNA干扰沉默膀胱癌肝素酶基因对T24细胞增殖及MMP-2表达的影响 方法体外化学合成肝素酶特异性小干扰RNA（siRNA）,用脂质体2000转染至T24膀胱移行细胞癌细胞内,常规分为正常对照组、空白对照组、阴性对照组和转染实验组进行实验,用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况,反转录聚合酶链法（RT-PCR）检测肝素酶基因的表达,免疫细胞化学方法检测MMP 2的表达。结果RNA干扰沉默T24膀胱移行细胞癌细胞肝素酶基因后,T24细胞增殖活力下降,三个不同干扰组细胞活力分别下降了(28.55±3.66)%、(27.20±3.25)%和(37.29±4.82)%。肝素酶mRNA表达下降,膀胱移行细胞癌细胞中MMP-2（明胶酶A）的表达亦明显下降（P均＜0.05）。结论RNA干扰肝素酶基因后,细胞活力及肝素酶mRNA表达水平下降并且明显抑制膀胱癌细胞中MMP-2的表达。     

HSP70高表达的T24细胞克隆筛选及其生物学特性

目的 筛选耐热T24细胞亚克隆,研究其生物学特性变化。方法 用热暴露筛选,联合应用免疫荧光化学方法及流式细胞仪筛选高表达HSP70的T24细胞亚克隆,计数法测定其细胞生长曲线及细胞倍增时间,流式细胞仪分析其细胞周期的变化。分子生物学方法及细胞化学方法观察有无凋亡出现。结果 有限稀释法筛选获取耐热T24单克隆细胞株（HrT24)共26株,应用免疫荧光法筛选出HSP70阳性克隆12株,取荧光较强的两株命名为HrT24e,HrT24j,FCM（平均荧光强度为0．29）检测HSPs分子的阳性表达率T24,HrT24e,HrT24j分别为2．4％,37．6％,65．8％。细胞周期分析显示T24,HrT24e,HrT24j增殖指数（proliferation index,PI分别为44．3％,39．0％,38．5％,HrT24e与T24相比差异有显意义（Yates corrected,χ^2=5.56,P=0.0183),HrT24e与T24j相比差异无显意义（Yates corrected,χ^2=0.03,P=0.543)。HrT24e与HrT24j凋亡率分别为4．7％,5．9％。分子生物学方法观察到DNA凋亡梯带出现,细胞化学方法观察到凋亡小体。结论 HrT24细胞HSP70表达增加,出现了一定的增殖抑制现象,同时观察到细胞凋亡,推测它们有较好的免疫原性。