供体特异性T细胞疫苗延长协调性异种移植物存活时间的作用探讨

目的探讨T细胞疫苗(TCV)延长异种移植胎肠存活时间的作用及其机制.方法将大鼠→小鼠游离胎肠移植模型分为供体特异性TCV(WTCV)免疫组、无关异种抗原TCV(LTCV)免疫组和单纯移植组.观察移植物各时相点的存活率,并用原位杂交法检测移植物内细胞因子mRNA表达,及用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定单向混合淋巴细胞反应.结果WTCV和LTCV免疫组移植物各时相点的存活率均显著高于单纯移植组,WTCV免疫组又高于LTCV免疫组(P<0.01).WTCV组对混合淋巴细胞反应(MLR)的抑制率高于LTCV组(P<0.01).WTCV免疫后,异种移植物内各细胞因子mRNA的表达均显著下调,其中以白介素-4(IL-4)mRNA表达下降最为显著(P<0.01).结论(1)供体特异性TCV能延长异种移植物存活时间,其作用具有抗原特异和非特异的双重性;(2)WTCV延长异种移植物存活时间的作用可能与诱导移植物免疫耐受以及移植物内Th2细胞功能下调有关.     

诱导免疫耐受预防大鼠肾脏移植排斥反应的研究

目的 探讨具有临床应用前景的移植耐受诱导方法。方法 以Lewis大鼠和DA大鼠分别作为肾脏移植的受体和供体,采用注射抗淋巴细胞血清（ALS）、输入供体骨髓细胞（BMT）和环磷酰胺（Cp）注射方法进行移植耐受诱导,观察肾脏移植物的存活情况及受体对供体细胞抗原免疫应答改变。结果 经耐受诱导的大鼠肾脏移植物存活时间明显延长,7只鼠中5只移植物存活73－90 d时仍无排斥反应迹象,混合淋巴细胞反应及诱导迟发型超敏反应表现为供体特异性降低。结论 诱导免疫耐受预防肾脏移植排斥反应具有重要的临床意义,此方法有一定的临床应用前景。     

供体骨髓细胞输注诱导大鼠肢体移植免疫耐受

目的 探讨环磷酰胺(CP)加供体脾细胞输注联合供体骨髓细胞(DBMC)输注诱导大鼠肢体移植免疫耐受的效果及机制.方法选择25只雄性Wistar大鼠、25只雌性SD大鼠分别作为肢体移植的供体和受体.实验分为五组:A组:无处理对照组,B组:受体在肢体移植前给予供体脾细胞输注预处理;C组:受体在肢体移植前给予CP预处理,D组:受体在肢体移植前给予供体脾细胞输注加CP预处理,E组:受体在肢体移植前给予供体脾细胞输注联合DBMC输注加CP预处理,每组5只.建立肢体移植动物模型,诱导耐受后观察大鼠一般情况,移植肢体排斥反应出现时间及存活时间,通过混合淋巴细胞培养确定耐受状态,采用PCR检测嵌合体的形成.结果 E组肢体移植物的存活时间[(27.6±1.1)d]较A组[(6.8±0.4)d]、B组[(7.2±0.8)d]、C组[(7.8±1.3)d]、D组[(17.8±0.8)d]显著延长,差异均有统计学意义(P＜0.01).混合淋巴细胞反应E组特异性抑制率[(88.00±1.06)%]显著高于B组[(36.90±1.08)%]、C组[(37.90±0.95)%]和D组[(67.20±1.12)%],差异均有统计学意义(P＜0.01).E组嵌合体呈阳性.结论联合CP加供体脾细胞输注及DBMC输注可一定程度诱导大鼠同种异体肢体移植的免疫耐受,延长移植物存活时间.嵌合体的形成可能与免疫耐受的形成及维持有关.     

同种异体大鼠外耳郭移植组织学改变的实验研究

目的研究同种异体大鼠外耳郭移植后组织形态学改变及免疫细胞的浸润情况.方法将动物分为自体、异体移植组.自体移植组以SD大鼠兼职供体与受体,进行自体移植;异体移植组以SD大鼠为供体,WISTAR大鼠为受体(SD→WISTAR),然后观察外耳郭的生存情况与组织学变化.结果异体外耳郭移植后可能存在快速排斥反应,组织中不但有T淋巴细胞的浸润而且也发现大量单核细胞的浸润.结论血管化的皮肤复合组织移植物的排斥反应机制与皮肤移植可能有着明显差异,进一步了解其排斥反应机制是解决移植物长期生存的理论基础.     

调节性树突状细胞对大鼠异体肢体移植存活时间的影响

目的探讨输注供体、受体调节性树突状细胞对大鼠同种异体移植肢体存活时间的影响。方法在树突状细胞（Dendritic cells，DC）培养过程中加入重组大鼠白细胞介素10（rrIL-10）和转化生长因子β1（TGF-β1），诱导调节性DC。实验受体为SD大鼠，供体为Wistar大鼠，共分4组，每组7只。A组为对照组；B组为直接识别干预组，输注供体调节性DC至受体大鼠；C组为间接识别干预组，输注负载供体抗原的受体调节性DC；D组为联合干预组，同时输注供体调节性DC及负载供体抗原的受体调节性DC。1周后运用显微外科方法行大鼠同种异体肢体移植，观察移植肢体存活情况，并行受体大鼠免疫状态检测。结果B、C组通过输注调节性DC，移植肢体的存活时间得到延长，D组移植肢体的存活时间进一步延长（P〈0．01），并且D组受体的脾细胞产生了对供体细胞的抗原特异性低反应。结论通过联合输注供体调节性DC和负载供体抗原的受体调节性DC，移植肢体的存活时间明显延长。     

免疫缺陷树突状细胞诱导异种胰岛细胞移植耐受

目的　研究受体来源免疫缺陷树突状细胞(dendriticcell, DC)诱导异种胰岛细胞移植的免疫耐受作用及其机制。方法　从BALB/C小鼠骨髓干细胞诱导分化免疫缺陷DC,负载Wistar大鼠MHC抗原。将上述DC通过尾静脉回输糖尿病小鼠体内(预处理组), 7d后分别将Wistar或SD大鼠胰岛细胞移植于受体鼠肾包膜下。观察移植物存活时间,检测T细胞增殖及TH1 /TH2细胞因子的表达。结果　与对照组相比,预处理组胰岛细胞存活时间明显延长(P < 0. 0 5 ),而以SD大鼠胰岛细胞作为供体的移植物存活时间无明显改变。免疫缺陷DC预处理受体鼠T细胞增殖反应微弱,且TH1 /TH2细胞因子表达明显下降。结论　负载异种MHC抗原的免疫缺陷型DC预处理受体可诱导抗原特异性T细胞无能,以及TH1 /TH2细胞因子的低表达,从而有效地延长异种胰岛细胞存活时间。     

靶向CD40的shRNA干扰抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应的实验研究

目的 探讨靶向CD40的RNA干扰对大鼠异体肢体移植急性排斥反应的影响. 方法以纯系SD大鼠为供体,纯系Wistar大鼠为受体,行同种异体右后肢移植.27只大鼠肢体移植后随机分为三组,A组:注射入梭华.Sofast.siCD40-2/pSilencer载体复合物600 μL;B组:注射Sofast-pSilencer4.1-CMV neo空载体复合物600 μL;C组:注射生理盐水600μL,以上均通过阴茎背静脉注射.观察移植物排斥反应征象及存活情况,并于第7天对产生免疫耐受大鼠进行混合淋巴细胞反应,同时进行组织学检查. 结果与B、C组相比,A组移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著延长,差异有统计学意义(P＜0.01)(＞13 d),未见排斥反应征象;B、C组均于术后近期发牛排斥反应.A组大鼠对供体的淋巴细胞呈现低反应性,移植的供体同系大鼠的肢体得以存活. 结论术后不应用免疫抑制剂的情况下,靶向CD40的shRNA干扰可以抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应.     

新生猪Sertoli细胞与大鼠胰岛细胞联合移植延长大鼠移植胰岛的存活时间

目的 探讨新生猪Sertoli细胞(NPSCs)与大鼠胰岛细胞联合移植对延长大鼠同种异体胰岛移植物存活时间的作用及其主要的机制.方法 将糖尿病Wistar大鼠随机分为3组.(1)单纯移植组(n=6):单纯移植1500个胰岛当量(IEQ)的SD大鼠胰岛细胞至糖尿病大鼠的左肾包膜下;(2)分侧移植组(n=4):将1500个IEQ的SD大鼠胰岛细胞移植到糖尿病大鼠的左肾包膜下,同时将1×10~7个NPSCs移植到糖尿病大鼠的右肾包膜下;(3)混合移植组(n=6):将1500个IEQ的SD大鼠胰岛细胞和1×10~7个NPSCs混合移植到糖尿病大鼠的左肾包膜下.移植后每天监测各组的血糖水平,以了解移植物的存活时间;移植后发生排斥反应时获取移植物标本,行HE和免疫组织化学染色,观察移植物中CD3~+T淋巴细胞浸润情况及细胞凋亡调控基因(Bcl-2)和血红素氧合酶1(HO-1)基因的表达水平.结果 单纯移植组、分侧移植组和混合移植组胰岛移植物存活时间分别为(5.7±1.0)d、(5.3±0.5)d和(16.3±1.4)d,混合移植组存活时间较其他两组显著延长(P<0.05).单纯移植组移植区可见大量淋巴细胞浸润,主要为CD3+T淋巴细胞;混合移植组移植区Bcl-2基因呈高表达;各组移植区HO-1基因均有表达,差异不明显.结论 NPSCs与大鼠胰岛细胞联合移植可以延长大鼠同种异体胰岛移植物的存活时间,其机制可能与NPSCs抑制移植物淋巴细胞浸润、促进Bcl-2基因高表达的局部免疫调节作用有关.     

同种异体大鼠外耳郭移植组织学改变的实验研究

目的　研究同种异体大鼠外耳郭移植后组织形态学改变及免疫细胞的浸润情况。方法　将动物分为自体、异体移植组。自体移植组以SD大鼠兼职供体与受体 ,进行自体移植 ;异体移植组以SD大鼠为供体 ,WISTAR大鼠为受体 (SD→WISTAR) ,然后观察外耳郭的生存情况与组织学变化。结果　异体外耳郭移植后可能存在快速排斥反应 ,组织中不但有T淋巴细胞的浸润而且也发现大量单核细胞的浸润。结论　血管化的皮肤复合组织移植物的排斥反应机制与皮肤移植可能有着明显差异 ,进一步了解其排斥反应机制是解决移植物长期生存的理论基础。     

T细胞疫苗诱导大鼠同种异体肢体移植免疫耐受的实验研究

目的 探讨T细胞疫苗（TCV）诱导大鼠同种异体肢体移植特异性免疫耐受的作用。方法 制备受者Lewis大鼠针对供者DA大鼠的TCV，应用TCV，免疫正常Lewis大鼠共3次，每周1次。设TCV组和TCV未接种组，在接种前及接种后5d进行混合淋巴细胞培养（MLR）；设TCV组、CsA组和空白对照组，于接种后7d进行DA大鼠针对Lewis大鼠的同种异体肢体移植，在术后7d进行淋巴细胞毒检测，术后21d进行嵌合分析。结果 MLR显示，Lewis大鼠的脾细胞反应程度接种组显著低于未接种组（P〈0．01）；微量细胞毒测定显示，死亡细胞百分率在TCV组、CsA组、空白对照组3组比较性差异有统计学意义（P〈0．01）；嵌合分析显示经处理的Lewis大鼠脾脏，胸腺中检测出了DA大鼠源性的骨髓嵌合体。结论 T细胞疫苗可以抑制受者对供者的免疫应答；作为骨髓移植前预处理手段，T细胞疫苗接种后行吻合血管的骨髓移植成功地诱导出同种异体肢体移植嵌合耐受。     

Colonic necrosis or fistula following pancreatitis or gastric surgery.

Eight cases of extensive colonic necrosis or colonic fistula secondary to gastric surgery or surgical drainage of necrotic pancreatitis were seen over a 2-year period. Four of the patients died, and all the survivors had fistula only. Diagnosis of such lesions is often difficult, and fistulography is recommended when a pancreatic abscess is drained. Resection of the gut is not mandatory in cases of fistula.