三氧化二砷对人结肠癌细胞增殖及凋亡影响的研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）对人结肠腺癌LS-174T细胞增殖的抑制及凋亡的诱导作用。方法：应用MTT法、细胞集落形成试验、流式细胞仪技术和TUNEL法观察不同浓度的As2O3(1.0μmol,2.0μmol，4.0μmol，8.0μmol，16.0μmol/L）对LS-174T细胞增殖和凋亡的影响。免疫组化技术观察As2O3对bcl-2基因表达的影响。结果：LS-174T细胞经As2o3作用后，细胞生长抑制率上升，细胞集落形成率下降，细胞周期中G1期细胞比例上升，S期和G2/M期细胞比例下降，TUNEL法显示凋亡细胞数增加，免疫组化结果显示bcl-2的表达明显减弱。结论：As2O3能抑LS-174T细胞增殖并诱导该细胞株凋亡，其机理可能与下调bcl-2表达有关。     

二硫代氨基甲酸吡咯烷诱导人肝癌细胞凋亡的铜离子依赖性机制

目的：测定二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）处理对人肝癌细胞Hep3B凋亡的诱导作用及Cu^2 对这种作用的影响。方法：运用细胞增殖力、膜损伤、DNA片断化、细胞周期DNA含量测定分析PDTC对人肝癌细胞株Hep3B细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用及Cu^2 在其中发挥的作用。结果：PDTC处理后，细胞增殖能力显著下降。乳酸脱氢酶（LDH）分析显示细胞膜并没有被破坏，DNA凝胶电泳及细胞周期DNA含量测定发现明显的凋亡特征性DNA片断及亚G1峰，显示细胞增殖能力的降低源于细胞凋亡的发生。低浓度Cu^2 显著加强了PDTC的细胞增殖抑制及凋亡诱导作用，而Cu^2 络合剂Bathocuproine disulfonate(BCS)显著抑制PDTC的两种作用。结论：PDTC铜离子依赖性地抑制人肝癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

土茯苓提取物对消化道肿瘤细胞的体外作用

目的 探讨土茯苓提取物对消化道肿瘤细胞的体外作用.方法 采用MTS法,观察不同浓度的土茯苓提取物对4种消化道肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞调亡率.结果 土茯苓提取物对Eca-109、SGC-7901和COLO205细胞有增殖抑制作用,抑制率与药物浓度呈正比,对JF305细胞无明显增殖抑制作用.其可诱导Eca-109、SGC-7901细胞S期细胞明显增加,细胞凋亡率随药物浓度的增加而增加.结论 土茯苓提取物对Eca-109和SGC-7901细胞具有抑制增殖、诱导S期细胞增加和诱导细胞凋亡的作用;对COLO205细胞增殖也有一定抑制作用,但对JF305无明显增殖抑制作用.     

白介素-6对马法兰诱导多发性骨髓瘤细胞KM3凋亡的影响

目的探讨白介素-6（IL-6）在马法兰诱导人多发性骨髓瘤细胞株KM。凋亡效应中的作用及其可能的分子机制。方法运用流式细胞仪技术（FACS）、DNA片段化百分率、凋亡细胞的原位检测（TUNEL法）和Western blot分析，观察II；6对马法兰诱导KM。细胞凋亡的影响及其caspase-3、caspase-8蛋白表达的变化。结果IL-6作用可使马法兰诱导的KM3细胞凋亡减少，同时caspase-3蛋白表达降低。结论1176可通过调节caspase-3、caspase-8表达保护马法兰诱导的KM3细胞凋亡。     

β辐射致大鼠血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的 观察放射性核素^188Re辐射对平滑肌细胞凋亡的影响及其机制，探讨辐射所致平滑肌细胞凋亡在预防再狭窄中的作用。方法 ^188Re进行培养平滑肌细胞的内辐射。通过台盼蓝染色计数、流式细胞术、JAM法DNA碎裂量测定、透射电镜及免疫细胞化学检测等方法，研究辐射后平滑肌细胞的存活率、细胞凋亡率、DNA断裂量、细胞超微结构改变及相关基因表达。结果 放射性浓度＜2.96GBq/L辐射，平滑肌细胞存活率、细胞凋亡率、DNA断裂量及细胞超微结构等未发生明显改变；高剂量辐射下（放射性浓度＞2.96GBq/L），平滑肌细胞存活率显著下降，细胞凋亡率明显上升，细胞DNA断裂量增加，细胞超微结构明显破坏。辐射诱导细胞凋亡过程中，p53、bax表达上调，bcl-2/bax比值下调。结论 能够明显抑制平滑肌细胞增殖的低剂量辐射对细胞存活及细胞凋亡无明显影响，未见细胞超微结构改变及DNA的严重破坏；吸收剂量大于20Gy可导致平滑肌细胞大量凋亡；相关基因p53、bcl-2及bax参与调控辐射诱导细胞凋亡过程。低剂量及低剂量率辐射既能有效抑制细胞增殖，又不明显损伤细胞存活，是临床血管内放射治疗预防再狭窄的理想方法。     

洛铂抑制胃癌SGC-7901细胞增殖及其机制的初步研究

目的观察洛铂对胃癌细胞SGC-7901细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法将对数生长期的SGC-7901细胞分阴性对照组（不加药物）和实验组（加入不同浓度洛铂）,采用倒置显微镜观察不同浓度下细胞生长状态;MTT法观察对细胞的增殖抑制;Western印迹方法分析不同浓度洛铂对SGC-7901细胞内Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果倒置显微镜下观察,洛铂能抑制细胞增殖,出现明显的凋亡学形态特征。MTT法显示洛铂能抑制细胞增殖,并呈浓度及时间依赖关系。Western印迹结果显示洛铂能使SGC-7901细胞Bcl-2蛋白表达水平下降。结论洛铂能明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导凋亡,可能与调节SGC-7901细胞Bcl-2蛋白表达水平相关。     

白花蛇舌草多糖诱导人胃癌细胞凋亡作用的研究

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养人胃癌7901细胞增殖抑制的影响及其作用机理。方法采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草多糖对人胃癌7901细胞增殖的影响;流式细胞技术检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;RT-PCR方法检测药物对人胃癌7901细胞P53和Bcl-2基因表达的影响。结果白花蛇舌草多糖能明显抑制人胃癌7901细胞的增殖,其作用48 h的IC50约为116.52 mg·L-1;流式细胞检测显示40 mg·L-1白花蛇舌草多糖联合5.0 mg·L-1顺铂组总凋亡率为69.42%,明显优于顺铂组的50.85%（P〈0.01）和40 mg·L-1白花蛇舌草多糖组的26.41%（P〈0.01）;PCR结果显示高、中浓度白花蛇舌草多糖可使人胃癌7901细胞的bcl-2 mRNA表达量降低,P53 mRNA表达量增加。结论白花蛇舌草多糖能明显诱导人胃癌7901细胞的凋亡,与顺铂联合可产生协同作用,其作用机制可能与降低细胞bcl-2和增加P53基因表达量有关。     

半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察半胱氨酸（Cys）对人血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和凋亡的影响。方法采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡,RT-PCR法检测bax mRNA的表达。结果体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和1000μmol/LCys的培养液中孵育24h后的吸光度（A）值均高于对照组（P〈0.05）,表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时,VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组（P〈0.05）,bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡。结论浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡。     

99Tc-MDP与帕米膦酸二钠对MDA-MB-231细胞增殖及凋亡作用的对比研究

目的观察^99Tc-亚甲基二膦酸盐（MDP）与帕米膦酸二钠对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长和凋亡的影响及其作用差异.方法不同剂量^99Tc-MDP与帕米膦酸二钠注射液处理细胞,采用细胞计数及四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测MDA-MB-231细胞增殖;流式细胞仪观察细胞凋亡、检测细胞周期及凋亡相关基因bcl-2与bax的表达.结果50 μmol/L ^99Tc-MDP与帕米膦酸二钠处理MDA-MB-231细胞48 h即可抑制其增殖,细胞存活率分别为45.9%和64.0%,差异有显著性（P＜0.05）;50μmol/L^99Tc-MDP与帕米膦酸二钠均可诱导细胞凋亡,用药后大量MDA-MB-231细胞被阻滞于G0/G1期和S期,细胞凋亡率分别为9.59%和5.96%,差异有显著性（P＜0.05）;50 μmol/L^99Tc-MDP即可使MDA-MB-231细胞凋亡相关基因bcl-2表达明显减弱,200 μmol/L帕米膦酸二钠可使bcl-2表达明显减弱,二者对bax表达无影响.结论^99Tc-MDP及帕米膦酸二钠均可抑制MDA-MB-231细胞增殖及诱导MDA-MB-231细胞凋亡,并调控bcl-2的表达;^99Tc-MDP作用强于帕米膦酸二钠.     

非小细胞肺癌介入治疗后癌细胞凋亡的研究

目的 研究支气管动脉化疗及其与以气管腔内放疗联合治疗对非小细胞肺部细胞凋亡的影响。方法 抽取1996－1998年间在我院接受手术治疗的55例非小细胞肺部。其中单纯手术切除的20例为A组（对照组）;术前2周接受过1－2次支气管动脉化疗的20例为B组;术前2－3周接受过支气管动脉化疗与支气管腔内放疗联合治疗的15例为C组。应用原位DNA断端标记法检测3组标本的癌细胞凋亡水平,以光镜下计数的每100个癌细胞的平均凋亡数（凋亡指数）表示。结果 1．A、B、C3组间凋亡指数两两比较差异均有显著性;2．3组间鳞癌凋亡指数比较差异有显著性（P＜0．05）;3．3组间腺癌凋亡指数比较,A、C两组间有统计学意义（P＜0．05）,其余两组间均无统计学意义（P＞0．05）;4．3组内鳞癌和腺癌间凋亡指数比较均无统计学意义（P＞0．05）。结论 支气管动脉化疗及其与支气管腔内放疗的联合治疗均能诱导非小细胞肺部细胞凋亡,其中以联合治疗的诱导作用较强。     

大黄素对肠上皮细胞炎症模型Caspase-3表达的影响

目的研究大黄素对肠上皮细胞炎症模型Caco-2细胞Caspase-3表达的影响。方法对LPS诱导的Caco-2炎症细胞模型,采用不同浓度的大黄素干预处理,用RT-PCR和westernblot法检测Caspase-3表达的情况。结果 LPS诱导的Caco-2细胞Caspase-3的表达升高,不同浓度大黄素作用于LPS诱导的Caco-2细胞24h后,Caspase-3mRNA和蛋白表达随大黄素浓度的增加而下降。结论大黄素抑制Caco-2炎症细胞模型凋亡因子Caspase-3的表达,抑制Caco-2细胞凋亡。     

酪氨酸代谢物对肺癌细胞增殖、周期及化疗药物敏感性的影响

目的 探讨4种酪氨酸代谢物对肺癌细胞增殖、周期及化疗药物敏感性的影响.方法 不同浓度的酪氨酸代谢物——酪氨酸、4-羟苯丙酮酸(HPPA)、尿黑酸(HGA)、延胡索酸(FA)分别处理A549细胞,通过高内涵实时监测肺癌细胞的增殖,流式细胞仪检测肺癌细胞周期的变化及对化疗药物的敏感性,Western印迹检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 4种酪氨酸代谢物对A549细胞的增殖及周期均无影响.HGA可降低吉非替尼(Gefitinib)诱导的A549细胞凋亡,抑制Bax表达,同时上调Bcl-2的表达水平;FA则可增加其诱导的A549细胞凋亡,促进Bax表达,同时下调Bcl-2的表达水平.酪氨酸和HPPA对Gefitinib诱导的细胞凋亡均无明显影响.结论HGA与FA可调节肺癌细胞化疗药物的敏感性,揭示了酪氨酸代谢通路对肺癌细胞的调控作用,为肿瘤代谢异常的研究奠定了基础.     

二氢青蒿素抑制结肠癌细胞株HCT-116并诱导凋亡的实验研究

目的：研究二氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对人结肠癌HCT-116细胞的体外抑制并诱导凋亡,并探讨其作用机制。方法：以不同浓度的DHA作用于体外培养的HCT-116细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪进行周期分析检测细胞凋亡情况;用Western Blotting法,检测不同浓度的DHA作用于肿瘤细胞时,凋亡相关蛋白Bcl-2,bax,cleavad-PARP表达情况。结果：在DHA作用后,HCT-116细胞生长受到明显抑制,IC50（半抑制浓度）值为14.18μmol/L。并呈一定的量效和时效依赖关系。流式细胞仪检测亚二倍体（sub-G0）比例增高;Western-Blotting检测药物处理细胞后Bcl-2表达水平下调,而Bax、cleavad-PARP表达水平明显上调。结论：DHA能抑制HCT-116细胞的生长增殖并诱导细胞发生凋亡。     

RNA干扰抑制pyk2表达对大肠癌细胞凋亡和增殖的影响

 目的 探讨富含脯氨酸的酪氨酸蛋白激酶2(proline-rich tyrosin kinase-2,pyk2)对Lovo大肠癌细胞凋亡和增殖的影响.方法 利用两组构建有pyk2 shRNA(短发夹RNA,会在细胞内顺序反应而产生siRNAs)的质粒载体瞬时转染Lovo细胞系,设立空白对照组和阴性对照组,应用PCR 和western blot方法检测转染组和对照组细胞中pyk2 mRNA与蛋白表达水平的变化,通过细胞计数法来绘制细胞生长曲线,利用流式细胞技术(FCM)检测转染组与对照组细胞在凋亡和细胞周期S期分布的差异.结果 转染pyk2shRNA质粒的Lovo细胞凋亡水平明显低于对照组,S期细胞数显著增多,细胞绝对数增加,生长更加活跃.结论 pyk2能够升高Lovo大肠癌细胞的凋亡水平,降低其增殖水平.     

低频超声联合顺铂对卵巢癌细胞影响研究

目的探讨低频超声联合顺铂对人卵巢癌A2780细胞增殖和凋亡的影响。方法培养人卵巢癌A2780细胞,将其随机分为对照组、低频超声组、顺铂组和联合组。低频超声组给予超声840 k Hz,0.75 W/cm23 min辐照;顺铂组给予顺铂5 n M,培养48 h;联合组给予低频超声+顺铂处理。应用CCK-8检测各组细胞的增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞凋亡以及细胞周期。结果与单独应用低频超声或顺铂比较,低频超声联合顺铂抑制人卵巢癌A2780细胞增殖的能力更强,更明显地诱导癌细胞的凋亡以及细胞周期S期阻滞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低频超声联合顺铂可抑制人卵巢癌细胞的增殖,诱导癌细胞的凋亡以及细胞周期S期的阻滞作用。     

ING5基因对乳腺癌细胞Bcap-37恶性表型的影响

目的 研究生长抑制因子5(ING5)基因对人乳腺癌细胞Bcap-37增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响.方法 稳定转染pEGFP-N1-ING5真核表达载体和pEGFP-N1空载体至Bcap-37细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR方法筛选ING5高表达细胞株.将Bcap-37-ING5细胞作为实验组,Bcap-37-GFP细胞为空载体组,Bcap-37为空白对照组.采用MTT法检测ING5对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移情况.结果 稳定转染后获得稳定表达GFP标记的ING5蛋白的Bcap-37细胞株.ING5过表达可以抑制乳腺癌Bcap-37细胞增殖并导致G2期阻滞,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移(P<0.05).结论 ING5过表达可逆转乳腺癌Bcap-37细胞的恶性表型,可作为乳腺癌预后判断和基因治疗的分子靶标.     

小鼠钟基因Period2(Per2)抑制乳腺癌细胞生长的研究

目的 研究小鼠节律基因Period2（Per2）对小鼠乳腺癌细胞（EMT6）的生长抑制及诱导凋亡的作用。方法 将pcDNA3．1（＋）-Per2转导入EMT6细胞内,同时设立转染空质粒pcDNA3．1（＋）入细胞的对照组。以RT-PCR、Western blot、流式细胞技术来检测Per2基因和蛋白的表达;采用MTT、细胞生长曲线、细胞平板集落形成实验检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞的生长抑制作用;通过流式细胞技术、DNA梯形带、hochst33258荧光染色和电镜技术检测nr2过表达后对小鼠乳腺癌细胞凋亡的影响。结果 小鼠节律基因nr2过表达抑制EMT6细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡率增加。结论 本研究发现小鼠节律基因Per2可能通过使EMT6细胞阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡来实现对该肿瘤细胞的生长抑制作用。     

泛素代谢系统相关基因FBG2在胃癌细胞系中功能意义的研究

目的初步探讨泛素代谢系统相关基因FBG2对于胃癌细胞生长、增殖、凋亡等生物学特性及成瘤、浸润转移能力等恶性表型的影响。方法将FBG2基因插入载体pcDNA3．1构建pc-FBG2真核表达载体。以脂质体介导转染MKN45胃癌细胞并以G418压力筛选法筛出稳定表达的克隆,对稳定表达株进行鉴定,然后使用流式细胞仪、生长曲线法、平板克隆形成实验法、细胞迁徙实验法等分析稳定表达株相关生物学特性与恶性表型的变化,每种检测实验均设立pc-FBG2稳定转染细胞组、pcDNA3．1稳定转染细胞组和空白MKN45细胞组。结果与转染pcDNA3．1空载体及空白MKN45胃癌细胞相比,转染pc-FBG2载体的稳定表达细胞株生长有所加快,开始计数后第4、5、6、7天平均细胞计数显著增高（P〈0．05）,细胞周期检测显示pc-FBG2转染组G2／M期比例显著高于其他两组（P〈0．05）,而S期比例显著低于其他两组（P〈0．05）。细胞凋亡检测显示pc-FBG2转染组凋亡比例与其他两组相比无显著差异（P〉0．05）,平板克隆形成实验结果显示pc-FBG2转染组平均克隆形成率显著高于其他两组（P〈0．05）,细胞迁徙实验结果显示pc-FBG2转染组穿膜率与其他两组相比无显著差异（P〉0．05）。结论FBG2基因在一定程度上可促进细胞生长及有丝分裂,对维持细胞恶性表型具有一定意义,但对细胞凋亡及浸润转移能力可能影响较小。     

存活蛋白对胶质瘤细胞替莫唑胺敏感性的影响

目的 探讨存活蛋白(survivin)对人脑胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)敏感性的影响及其可能机制.方法 构建过表达survivin的U87/sur胶质瘤细胞,以及抑制survivin表达的U87/sur si胶质瘤细胞,经100μmol/L TMZ处理后,采用MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双标记联合流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测活化caspase-3表达水平.结果 经TMZ处理后,与亲代细胞相比,U87/sur si细胞的增殖活性明显下降,克隆形成率明显降低,凋亡率明显增加,而U87/sur细胞的增殖活性明显增强,克隆形成率明显增高,凋亡率明显下降.经TMZ处理后,与亲代细胞相比,U87/sur si细胞中活化的caspase-3蛋白水平升高,而U87/sur细胞中活化的caspase-3蛋白水平下降.结论 抑制survivin可明显提高胶质瘤细胞对TMZ的敏感性,其机制可能与survivin促进细胞凋亡有关.     

钾通道阻断剂四乙铵对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究钾通道阻断剂四乙铵(TEA)对卵巢癌细胞(SKOV3)凋亡的影响.方法 将浓度为2×104/ml的卵巢癌细胞分别设对照组和不同浓度(1、5、10、20mmol/L)TEA组.将TEA作用于卵巢癌细胞,用MTT法检测细胞活性,采用Hoechest33258染色检测细胞凋亡,同时通过碘化丙啶(PI)染色,采用流式细胞仪检测细胞凋亡比率.结果 在TEA浓度为1、5、10、20mmol/L时,对SKOV3细胞增殖的抑制率分别为8.61%、18.86%、46.63%和65.22%,表明TEA对SKOV3细胞的增殖有抑制作用并呈现明显的剂量依赖性,当TEA浓度=5mmol/L时,对SKOV3细胞增殖的抑制效应明显;Hoechst33258染色结果显示,TEA能诱导SKOV3细胞凋亡;流式细胞仪检测结果表明,SKOV3细胞经TEA浓度为1、5、10、20mmol/L处理后48h,其细胞凋亡率分别为9.23%、21.57%、54.22%和71.06%,与对照组(2.08%)比较,差异有显著性(P＜0.01),提示TEA可诱导SKOV3细胞凋亡,且TEA促进SKOV3细胞凋亡作用具有一定的剂量依赖性.结论 钾通道对SKOV3细胞增殖具有重要调控作用,钾通道阻断剂TEA阻断钾通道后可促进细胞凋亡.